CCR5在炎癥性腸病患者腸黏膜的表達及其與β-arrestin 2表達的關(guān)系*

葉小研，　劉思雪，　胡　梅，　沈溪明，　黃花榮，　鐘英強△

(中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院 1消化內(nèi)科， 3病理科， 4兒科，廣東 廣州510120； 2廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 廣州510080)

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CCR5在炎癥性腸病患者腸黏膜的表達及其與β-arrestin 2表達的關(guān)系*

葉小研1, 2，劉思雪1，胡梅1，沈溪明3，黃花榮4△，鐘英強1△

(中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院1消化內(nèi)科，3病理科，4兒科，廣東 廣州510120；2廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 廣州510080)

目的： 通過分析CCR5在炎癥性腸病(IBD)患者活檢腸黏膜的表達及其與β-arrestin 2表達的相關(guān)性，探討CCR5與β-arrestin 2在IBD發(fā)病中的作用。方法: IBD活動期組53例、IBD緩解期組26例和正常對照組30例納入研究，用EnVision二步免疫組化方法檢測活檢腸黏膜CCR5和β-arrestin 2的表達。結(jié)果: IBD活動期組CCR5陽性表達率及免疫組化評分均高于正常對照組和IBD緩解期組(P<0.05)，CCR5表達與IBD活動期組的臨床嚴重程度、病變范圍及內(nèi)鏡下分級無明顯關(guān)聯(lián)性；β-arrestin 2在IBD活動期組的陽性表達率均明顯低于IBD緩解期組和正常對照組(P<0.05)，并且在IBD活動期β-arrestin 2表達與CCR5表達呈負相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論: 在IBD活動期組腸黏膜CCR5呈高表達，β-arrestin 2呈明顯低表達，CCR5與β-arrestin 2表達呈負相關(guān)性。

炎癥性腸病； CCR5； β-arrestin 2

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克羅恩病(Crohn’s disease，CD)，主要病理生理改變是患者的腸黏膜有各種炎癥細胞浸潤，這些細胞可表達各種趨化因子受體(chemokine receptors，CR)，其與趨化因子、黏附分子相互作用，可誘導(dǎo)白細胞向腸道組織內(nèi)遷移、聚集、浸潤，導(dǎo)致腸黏膜發(fā)生炎癥性損害。迄今為止已發(fā)現(xiàn)至少19種CC趨化因子受體(CC chemokine receptors，CCR)，而與IBD相關(guān)的主要有10種，其中CCR5是一個關(guān)鍵性的趨化因子受體[1]。研究表明CCR5拮抗劑可以緩解實驗性IBD模型的組織病變，減少炎性細胞浸潤，繼而改善臨床癥狀[2-4]，提示CCR5在IBD的發(fā)病機制中占有重要作用，并具有作為IBD治療靶點的可能。

CCR5屬于G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein coupled receptors，GPCRs)，胞外區(qū)N末端與第2胞外環(huán)是抗原結(jié)合部位，胞內(nèi)區(qū)與G蛋白耦聯(lián)，參與磷脂依賴性蛋白激酶、JAK-STAT、NF-κB、MAPK等信號傳導(dǎo)通路[5-9]，C末端含絲氨酸/蘇氨酸，可發(fā)生磷酸化，與受體脫敏與內(nèi)化相關(guān)。β-抑制蛋白2(β-arrestin 2)為細胞內(nèi)一種可溶性蛋白質(zhì)，是GPCRs信號通路的重要負調(diào)節(jié)因子，可與磷酸化活化的CCR5結(jié)合，使下游的G蛋白解偶聯(lián)，并與網(wǎng)格蛋白包被小體聯(lián)合作用，介導(dǎo)CCR5的脫敏與內(nèi)化，參與腸道免疫反應(yīng)過程。本研究通過分析CCR5在IBD活檢腸黏膜的表達及其與β-arrestin 2表達的相關(guān)性，了解CCR5與β-arrestin 2在IBD發(fā)病中的作用，以探討IBD的部分調(diào)節(jié)機制。

材　料　和　方　法

1研究對象

2010年10月～2013年10月(其中CD入選日期為：2012年10月～2013年10月)，IBD活動期53例，來自中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院，均符合我國制定的UC或CD診斷標準[10]，男25例，女28例，男女比為1∶1.12，年齡為14～74歲。IBD緩解期26例：男12例，女14例，男女比為1∶1.17，年齡為18～65歲。正常對照組：2013年9月至2013年11月，我院行電子結(jié)腸鏡檢查全結(jié)腸未發(fā)現(xiàn)有腸道病變、無消化道癥狀、無IBD家族史、無自身免疫性疾病的體檢者30例，男14例，女16例，男女比為1∶1.14，年齡為17～62歲?；顒悠贗BD、緩解期IBD和正常對照組3組之間的性別構(gòu)成和年齡分布無統(tǒng)計學(xué)差異?；颊呔橥?，并得到中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院倫理委員會的批準。

2主要試劑

兔抗人CCR5多克隆抗體購自Abcam；兔抗人β-arrestin 2單克隆抗體購自CST；二步法抗兔/鼠通用型免疫組化檢測試劑盒(含羊抗兔IgG-HRP多聚體和DAB試劑盒)購自上?；蚩萍加邢薰尽?/p>

3方法

3.1腸鏡檢查前的準備無渣半流飲食3 d，腸鏡檢查前1 d晚上，復(fù)方聚乙二醇電解質(zhì)散1包137.15 g溶于2 L水中，1 h內(nèi)喝完，隨后1～2 h飲水500～1 000 mL清潔腸道，術(shù)前0.5 h肌注安定注射液10 mg、山莨菪堿注射液10 mg。

3.2活檢要求應(yīng)用電子結(jié)腸鏡進行全結(jié)腸檢查，退鏡時取活檢。IBD活動期患者在炎癥最明顯處取活檢黏膜3～5塊，10%甲醛固定；IBD緩解期患者在結(jié)腸黏膜好轉(zhuǎn)或恢復(fù)正常處取活檢黏膜3～5塊，10%甲醛固定；正常對照組于乙狀結(jié)腸處取2塊活檢組織，10%甲醛固定。所有標本進行石蠟包埋、切片。

3.3EnVision二步法檢測CCR5和β-arrestin 2的表達石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，抗原熱修復(fù)。內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑孵育15min，BSA封閉20min，滴加適當比例稀釋的 I 抗(CCR5 1∶200，β-arrestin 2 1∶50)，4 ℃冰箱過夜，37 ℃復(fù)溫45 min，滴加羊抗兔IgG-HRP多聚體，室溫孵育30 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染10～30 s．中性樹膠封片。以PBS代替 I 抗作為陰性對照．以已知陽性切片作為陽性對照。免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果判斷：CCR5或β-arrestin 2定位于細胞膜或細胞漿，以細胞膜或細胞漿內(nèi)出現(xiàn)淡黃色至棕黃色顆粒為陽性染色。免疫組化染色結(jié)果判定參照Fromowitz等[11]的方法進行，每張切片隨機觀察10個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)100個細胞，各視野中陽性細胞數(shù)的平均百分數(shù)作為該切片的陽性細胞百分比進行計分：染色陽性細胞百分率<5%計為0分，5%～25%計為1分，26%～50%計為2分，51%～75%計為3分，>75%計為4分；染色程度以多數(shù)陽性細胞呈現(xiàn)的染色特征為標準計分：細胞未著色為0分，染色呈淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。最后以陽性細胞的百分比和染色強度計分之和所得的總分進行結(jié)果判定。0～1分為陰性(-)，﹤4分為弱陽性(+)，≥4分為強陽性(++)。

3.4分級標準(1)UC內(nèi)鏡下表現(xiàn)的分級標準[12]： 0級：黏膜正?；虬毯刍?；Ⅰ級：黏膜血管充血、水腫和顆粒狀改變，血管網(wǎng)模糊；Ⅱ級：Ⅰ級基礎(chǔ)上，黏膜糜爛；Ⅲ級：Ⅱ級基礎(chǔ)上，潰瘍形成；Ⅳ級：Ⅲ級基礎(chǔ)上，黏膜明顯增厚、腸腔狹窄；Ⅴ級：發(fā)生中重度不典型增生或癌變。(2)CD內(nèi)鏡下表現(xiàn)的分級標準[12]：0級：黏膜正?；虬毯刍?；Ⅰ級：炎癥改變；Ⅱ級：潰瘍形成；Ⅲ級：黏膜明顯增厚、腸腔炎癥性狹窄；Ⅳ級：瘺管形成或疤痕性狹窄；Ⅴ級：發(fā)生中重度不典型增生或癌變。(3)UC活動程度分級：入組時，檢測血紅蛋白(hemoglobin，Hb)、血沉(erythrocyte sedimentation rate，ESR)和血清白蛋白(albumin，Alb)，每日記錄黏液血便的次數(shù)，取3 d的平均數(shù)為記分的依據(jù)：血便無或輕度者為0分，明顯血便者為1分，每天大便次數(shù)≤4次者為1分，5～7次者為2分，≥8次者為3分。根據(jù)Seo方法計算每個患者的臨床活動指數(shù)(activity index,AI)：AI=60X1+13X2+0.5X3-0.4X4-1.5X5+200，其中X1為血便的程度(X1可取0、1分，具體記分同上)，X2為每天大便的次數(shù)(X2可取1、2、3分，具體記分同上)，X3為ESR，X4為Hb，X5為Alb。臨床嚴重程度采用Seo的AI進行分級：輕度，<150分；中度，150～220分；重度，>220分。(4)CD活動程度分級：CDAI<150分為緩解期，CDAI≥150分為活動期，150～220分為輕度，221～450分為中度，>450分為重度。

4統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，多組間比較采用方差分析或Kruskal-Wallis檢驗；計數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，組間比較采用2檢驗；關(guān)聯(lián)性分析采用Pearson相關(guān)分析或Spearman等級相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)　　果

1CCR5在各組腸黏膜的表達

CCR5陽性表達主要位于腸黏膜固有層炎性細胞、固有腺體上皮細胞和血管內(nèi)皮細胞的胞漿或胞膜。IBD活動期組CCR5陽性率、強陽性率及免疫組化評分均高于正常對照組及緩解組(P<0.05)，而緩解期IBD組和正常對照組CCR5陽性表達率和免疫組化評分差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性，見表1。

表1　CCR5在各組腸黏膜的表達

*P<0.05vscontrol.

UC活動期組和CD活動期組腸道組織中CCR5的陽性表達率分別為79.3%和70.8%，強陽性表達率分別為44.8%和25.0%，免疫組化評分分別為2.97±1.78和2.55±1.80，兩組間的陽性表達率和強陽性表達率之間的差異存在統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)，而免疫組化評分的差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性，見圖1。

Figure 1.The expression of CCR5 of intestinal mucosa in the groups. A: strongly positive expression of CCR5 in active CD (×400); B: strongly positive expression of CCR5 in active UC (×200); C: weakly positive expression of CCR5 in remissive CD (×400); D: weakly positive expression of CCR5 in remissive UC (×400); E: weakly positive expression of CCR5 in the control (×400); F: negative expression of CCR5 in the control (×200).

圖1CCR5在IBD和正常對照組腸黏膜的表達

2CCR5表達與IBD活動期嚴重程度及內(nèi)鏡下分級的關(guān)系

CCR5在IBD臨床輕、中、重度的陽性表達率分別為83.3%、93.8%和38.7%，輕、中度IBD的陽性表達率高于重度IBD(P<0.05)，但三者免疫組化評分之間的差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性。IBD活動期內(nèi)鏡下分級Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級的表達陽性率分別為70.0%、72.7%和81.0%，各級IBD的陽性表達率及免疫組化評分之間差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性。CCR5表達與IBD活動期臨床嚴重程度和內(nèi)鏡下分級無明顯相關(guān)性,見表2。

3CCR5表達與UC、CD活動期嚴重程度、病變范圍及內(nèi)鏡下分級的關(guān)系

UC活動期的病變范圍分為直腸、左半結(jié)腸和廣泛結(jié)腸， CD活動期的病變范圍分為回腸末段、結(jié)腸和回結(jié)腸，CCR5表達與活動期UC和CD不同臨床嚴重程度、病變范圍及內(nèi)鏡下分級無明顯關(guān)聯(lián)性。見表3～4。

4β-arrestin 2在各組活檢腸黏膜的表達

β-arrestin 2陽性細胞主要位于腸黏膜固有層和固有腺體上皮層，陽性表達主要位于胞漿或胞膜，在53例活動期IBD患者中，陽性5例，強陽性0例，陰性48例，表達陽性率為9.4%;26例緩解期IBD中，

表2CCR5與IBD活動期嚴重程度及內(nèi)鏡下分級的關(guān)系

Table 2.The correlation of expression of CCR5 with the severity and endoscopic grading of intestinal mucosa in the active IBD

ClinicalfeaturenCCR5-+++Medianofimmuno-histochemistryscoreSeverity Mild61413.00 Moderate161963.15 Severe31118123.00Endoscopicgrading Ⅱ103253.65 Ⅲ2261063.10 Ⅳ214983.00

表3CCR5表達與UC活動期嚴重程度、病變范圍及內(nèi)鏡下分級的關(guān)系

Table 3.The correlation of expression of CCR5 with the severity，lesion range and endoscopic grading of intestinal mucosa in active UC

ClinicalfeaturenCCR5-+++Medianofimmuno-histochemistryscoreSeverity Mild20202.90 Moderate123543.15 Severe164483.90Lesionrange Rectum83232.80 Lefecolon100464.24 Extensivecolon113533.10Endoscopicgrading Ⅱ61233.69 Ⅲ134632.86 Ⅳ101364.15

5例陽性，強陽性0例，陰性21例，表達陽性率19.2%;30例正常人中，β-arrestin 2表達陽性12例，強陽性1例，陰性18例，表達陽性率為40.0%。3組陽性率之間的差異存在統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.05)，見圖2、表5。

5β-arrestin 2表達與CCR5表達的關(guān)系

β-arrestin 2在IBD活動期陽性表達率均明顯低于IBD緩解期和正常對照組，在正常對照組相對呈較高表達，而CCR5在IBD活動期則呈明顯的高表達，在IBD緩解期及正常對照組則呈現(xiàn)較低表達，β-arrestin 2與CCR5存在負相關(guān)性(P<0.05，r=-0.247)，見表6。

表4CCR5表達與CD活動期嚴重程度、病變范圍及內(nèi)鏡下分級的關(guān)系

Table 4. The correlation of expression of CCR5 with the severity,lesion range and endoscopic grading of intestinal mucosa in active CD

ClinicalfeaturenCCR5-+++Medianofimmuno-histochemistryscoreSeverity Mild52213.00 Moderate40223.50 Severe157442.47Lesionrange Terminalileum42201.10 Colon104332.92 Ileumandcolon101543.50Endoscopicgrading Ⅱ42022.05 Ⅲ92433.60 Ⅳ113622.83

Figure 2.The expression of β-arrestin 2 in the intestinal mucosa in all groups. A: strongly positive expression of β-arrestin 2 in the control (×400); B: weakly positive expression of β-arrestin 2 in the control (×400); C: weakly positive expression of β-arrestin 2 in remissive CD (×400); D: negative expression of β-arrestin 2 in active UC (×200).

圖2β-arrestin 2在各組活檢腸黏膜的表達

討　　論

目前，IBD的病因與發(fā)病機制尚未完全不清楚，Thl/Th2亞群的平衡失調(diào)可能是IBD發(fā)病的重要免疫機制之一[13-14]。普遍認為主要是Th2型細胞因子

表5　β-arrestin 2在各組活檢腸黏膜的表達

*P<0.05vscontrol.

表6β-arrestin 2與CCR5在活動期IBD活檢腸黏膜表達的關(guān)系

Table 6.The correlation of expression of CCR5 with expression of β-arrestin 2 in intestinal mucosa of the active IBD

β-arrestin2CCR5-+++-323619+1452++100

參與UC的發(fā)病機制，Th2細胞表面表達CCR3、CCR4和CCR8[15]；而CD患者主要表現(xiàn)為以Th1細胞為主的免疫應(yīng)答，Th1細胞表達CCR2和CCR5[16]。Andres等[16]發(fā)現(xiàn)葡聚糖硫酸鈉(dextran sodium sulfate，DSS)誘導(dǎo)的CCR5缺失實驗性結(jié)腸炎小鼠體內(nèi)IFN-γ表達減少，而IL-4、IL-5和IL-10表達增加，提示CCR5可以促進腸道Th1型免疫反應(yīng)。Oki等[17]研究發(fā)現(xiàn)CCR5特異性表達于Th1細胞表面，CD與UC患者腸黏膜CCR5的表達無明顯差異，而CD患者肉芽腫細胞RANTES/CCL5表達陽性，肉芽腫周邊CCR5+T細胞明顯聚集，提示CCR5可能與非干酪性肉芽腫的形成相關(guān)。Ajuebor等[18]在三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS)誘導(dǎo)大鼠結(jié)腸炎的實驗中發(fā)現(xiàn)腸黏膜CCR1和CCR5表達明顯上調(diào)，CCR1/CCR5拮抗劑Met-RANTES能夠顯著減少腸黏膜單核細胞、肥大細胞和中性粒細胞的浸潤，從而減輕腸道損傷。Tokuyama 等[4]用一個非肽類受體拮抗劑TAK-779治療DSS誘導(dǎo)的實驗性結(jié)腸炎，檢測到結(jié)腸黏膜CCR5 mRNA明顯下降，單核細胞、巨噬細胞浸潤也減少。上述結(jié)果均提示CCR5對淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、肥大細胞和中性粒細胞可能有趨化作用，CCR5可能參與IBD的發(fā)病機制。

本研究結(jié)果提示CCR5在正常人、緩解期IBD患者的腸黏膜呈一種低表達，但在活動期IBD患者的表達量則明顯增加，提示CCR5可能參與IBD的發(fā)病與發(fā)展過程。CCR5在活動期IBD中的陽性表達率及免疫組化評分均高于緩解期IBD患者，由此推測，CCR5與疾病活動程度相一致，可能是因為藥物治療使炎癥細胞浸潤減少，從而下調(diào)CCR5表達有關(guān)。而CCR5表達在輕、中度IBD明顯高于重度IBD，可能與重度患者的活檢黏膜的炎癥細胞破壞較多有關(guān)；CCR5在活動期UC的表達明顯高于活動期CD，提示在UC黏膜表層的炎癥細胞浸潤較多,也提示了在本組患者中Th1與Th2細胞均可能參與UC的病理生理過程。

β-arrestin 2是一種介導(dǎo)受體脫敏與內(nèi)化的胞內(nèi)蛋白質(zhì)，在GPCR信號傳導(dǎo)通路中起著負調(diào)節(jié)作用。激活的GPCR與GRK結(jié)合發(fā)生磷酸化后，β-arrestin 2可與GPCR結(jié)合，使GRK解偶聯(lián)，阻斷GPCR與G蛋白的結(jié)合，同時β-arrestin 2可聚集磷酸二酯酶從而降解G蛋白信號傳導(dǎo)通路中產(chǎn)生的cAMP。另外，GPCR-β-arrestin 2復(fù)合物也可與網(wǎng)格蛋白聯(lián)合作用，使受體內(nèi)化。通過上述機制，β-arrestin 2介導(dǎo)GPCR的脫敏和內(nèi)化[19]。CCR5屬于GPCR家族，C末端磷酸化后CCR5第二胞內(nèi)環(huán)的DRY模序與β-arrestin 2結(jié)合，形成CCR5-β-arrestin 2復(fù)合物，復(fù)合物與網(wǎng)格蛋白(clathrin)的銜接蛋白2(adapter protein 2，AP-2)結(jié)合，使CCR5內(nèi)吞進入網(wǎng)格蛋白包被小體(clathrin-coated pits)，在動力蛋白作用下，網(wǎng)格蛋白包被小體從細胞膜上解離形成囊泡，然后逐步轉(zhuǎn)運至早期內(nèi)體到晚期內(nèi)體，最后至溶酶體。CCR5內(nèi)化后有兩種結(jié)局：一方面，CCR5脫磷酸化重新循環(huán)至細胞膜，穿過晚期內(nèi)體和高爾基體到達細胞表面；另一方面，CCR5被降解導(dǎo)致受體下調(diào)。除了參與GPCR的脫敏與內(nèi)化作用，β-arrestin 2還可以介導(dǎo)GPCR與激酶介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，例如GPCR激活的JNK3、ERK和p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[20-22]，還可以抑制促炎轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性等。通過調(diào)節(jié)CCR5的脫敏、內(nèi)化過程及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，影響免疫細胞的趨化功能和免疫反應(yīng)。

本研究結(jié)果顯示β-arrestin 2在活動期IBD呈明顯低表達，在緩解期IBD及正常人則表達相對較高，提示β-arrestin 2可能參與IBD患者的腸道免疫反應(yīng)失調(diào)和炎癥反應(yīng)過程。

目前，關(guān)于β-arrestin 2內(nèi)化CCR5的作用位點的研究[23-24]較多，但對內(nèi)化結(jié)果的研究較少。本研究主要著重β-arrestin 2對CCR5內(nèi)化的結(jié)果，對作用機制并未進一步探討。通過β-arrestin 2與CCR5的關(guān)聯(lián)性分析發(fā)現(xiàn)示兩者呈負相關(guān)性，提示β-arrestin 2作為一個上游調(diào)控蛋白，在IBD的發(fā)病機制中可能也占有一定的作用。本課題組已應(yīng)用噬菌體展示肽庫技術(shù)淘選大鼠CCR5膜外第一、二胞外環(huán)特異性結(jié)合的活性拮抗肽，并經(jīng)初步鑒定證明其具有與CCR5結(jié)合的能力[25]，可為進一步研究β-arrestin 2與CCR5的關(guān)聯(lián)性奠定了基礎(chǔ)。

[1]葉小研，鐘英強.CCR與炎癥性腸病[J].胃腸病學(xué), 2014, 19(1):50-53.

[2]Ajuebor MN, Hogaboam CM, Kunkel SL, et al. The chemokine RANTES is a crucial mediator of the progression from acute to chronic colitis in the rat[J]. J Immunol, 2001, 166 (1):552-558.

[3]Kucuk C, Sozuer E, Gursoy S, et al. Treatment with Met-RANTES decreases bacterial translocation in experimental colitis[J]. Am J Surg, 2006, 191(1): 77-83.

[4]Tokuyama H, Ueha S, Kurachi M, et al. The simultaneous blockade of chemokine receptors CCR2, CCR5 and CXCR3 by a non-peptide chemokine receptor antagonist protects mice from dextran sodium sulfate-mediated colitis[J]. Int Immunol, 2005, 17 (8):1023-1034.

[5]Mellado M, Rodríguez-Frade JM, Vila-Coro AJ, et al.Chemokine receptor homo- or heterodimerization activates distinct signaling pathways[J]. EMBO J, 2001, 20 (10):2497-2507.

[6]Sasaki S, Baba T, Shinagawa K, et al.Crucial involvement of the CCL3-CCR5 axis-mediated fibroblast accumulation in colitis-associated carcinogenesis in mice[J]. Int J Cancer,2014, 135(1):1-10.

[7]Ganju RK, Dutt P, Lijun Wu,et al.β-Chemokine receptor CCR5 signals via the novel tyrosine kinase RAFTK[J].Blood, 1998, 91(3):791-797.

[8]Chuang JY,Yang WH,Chen HT,et al.CCL5/CCR5 axis promotes the motility of human oralcancer cells[J]. J Cell Physiol,2009, 220(2):418-426.

[9]Wong M, Uddin S, Majchrzak B, et al.RANTES activates Jak2 and Jak3 to regulate engagement of multiple signaling pathways in T cells[J].J Biol Chem, 2001, 276(14):11427-11431.

[10]中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會炎癥性腸病學(xué)組.炎癥性腸病診斷與治療的共識意見[J].中華消化雜志,2012, 32(12):796-813.

[11]Fromowitz FB, Viola MV, Chao S, et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer[J].Hum Pathol, 1987, 18(12):1268-1275.

[12]鐘英強, 葉小研. 炎癥性腸病的現(xiàn)代內(nèi)科治療[J].中華臨床醫(yī)師雜志:電子版,2013,7(16):7354- 7357.

[13]Van Damme N, De Keyser F, Demetter P, et al.The proportion of Th1 cells, which prevail in gut mucosa, is decreased in inflammatory bowel syndrome[J].Clin Exp Immunol, 2001, 125(3):383-390.

[14]Macdonald T, Monteleone G,Pender S.Recent developments in the immunology of inflammatory bowel disease[J].Scand J Immunol, 2000, 51(1):2-9.

[15]Sallusto F, Lanzavecchia A, Mackay CR. Chemokines and chemokine receptors in T-cell priming and Th1/Th2-mediated responses[J]. Immunol Today, 1998, 19 (12): 568-574.

[16]Andres PG, Beck PL, Mizoguchi E, et al. Mice with a selective deletion of the CC chemokine receptors 5 or 2 are protected from dextran sodium sulfate-mediated colitis: lack of CC chemokine receptor 5 expression results in a NK1.1+lymphocyte-associated Th2-type immune response in the intestine[J]. J Immunol, 2000, 164(12):6303-6312.

[17]Oki M, Ohtani H, Kinouchi Y, et al. Accumulation of CCR5+T cells around RANTES+granulomas in Crohn’s disease: a pivotal site of Th1-shifted immune response?[J]. Lab Invest, 2005, 85(1):137-145.

[18]Ajuebor MN, Hogaboam CM, Kunkel SL, et al. The chemokine RANTES is a crucial mediator of the progression from acute to chronic colitis in the rat[J]. J Immunol, 2001,166(1):552-558.

[19]Whalen EJ,Rajagopal S, Robert J, et al. Potential of β-arrestin- and G protein-biased agonists[J].Trends Mol Med, 2011, 17(3):126-139.

[20]DeWire SM, Ahn S, Lefkowitz RJ, et al. Beta-arrestins and cell signaling[J]. Annu Rev Physiol, 2007, 69:483-510.

[21]Brown MD, Sacks DB. Protein scaffolds in MAP kinase signalling[J]. Cell Signal, 2009, 21(4):462- 469.

[22]Kendall RT, Luttrell LM. Diversity in arrestin function[J].Cell Mol Life Sci, 2009, 66 (18):2953-2973.

[23]Hüttenrauch F, Pollok-Kopp B, Oppermann M. G protein-coupled receptor kinases promote-phosphorylation and beta-arrestin-mediated internalization of CCR5 homo- and hetero-oligomers [J]. J Biol Chem,2005, 280(45):37503-37515.

[24]Lagane B, Ballet S, Planchenault T, et al. Mutation of the DRY motif reveals different structural requirements for the CC chemokine receptor 5-mediated signaling and receptor endocytosis[J].Mol Pharmacol, 2005, 167(6):1966-1976.

[25]劉思雪，胡梅，葉小研，等.應(yīng)用噬菌體展示肽庫技術(shù)淘選大鼠CCR5膜外第一、二胞外環(huán)特異性結(jié)合的活性拮抗肽與初步鑒定[J]. 中國病理生理雜志, 2015, 31(7):1225-1230.

(責任編輯： 林白霜， 羅森)

Correlation of CCR5 expression with β-arrestin 2 expression in colonic mucosa of patients with inflammatory bowel disease

YE Xiao-yan1, 2, LIU Si-xue1, HU Mei1, SHEN Xi-ming3, HUANG Hua-rong4, ZHONG Ying-qiang1

(1DepartmentofGastroenterology, 3DepartmentofPathology,4DepartmentofPediatrics,SunYat-senMemorialHospital,SunYat-senUniversity,Guangzhou510120,China;2DepartmentofGastroenterology,TheFirstAffiliatedHospitalofGuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510080,China.E-mail:zhongyingqiang@21cn.com;hhrvivi@21cn.com)

AIM: To analyze the expression of CCR5 and correlation with the expression of β-arrestin 2 in the intestinal mucosa of the patients with inflammatory bowel disease (IBD), so as to study the role of CCR5 and β-arrestin 2 in the pathogenesis of IBD. METHODS: Paraffin sections of the colonic mucosa were prepared from 53 patients with active IBD, 26 patients with remissive IBD and 30 healthy people. Immunohistochemical EnVision two-step method was used to test the expression of CCR5 and β-arrestin 2 in the biopsic intestinal mucosa.RESULTS: The positive rate, strongly positive rate and immunohistochemical score of CCR5 expression in active IBD were significantly higher than those in normal controls or remissive IBD (P<0.05). No correlation of CCR5 expression with clinical severity, lesion distribution, and endoscopic grade in active IBD was observed. The expression of β-arrestin 2 was significantly lower in active IBD than that in the remissive IBD and normal controls, and there was a negative correlation of β-arrestin 2 expression with CCR5 expression (P<0.05). CONCLUSION: The expression of CCR5 is higher, and expression of β-arrestin 2 is lower, and there is a negative correlation of expression of CCR5 with expression of β-arrestin 2 in intestinal mucosa of the active IBD.

Inflammatory bowel disease; CCR5; β-arrestin 2

1000- 4718(2016)04- 0713- 06

2015- 11- 18

2016- 02- 15

國家自然科學(xué)基金資助項目(No. 81370499)； 廣東省自然科學(xué)基金資助項目(No. 2014A030313020)

鐘英強 Tel: 020-81332598; E-mail: zhongyingqiang@21cn.com； 黃花榮Tel: 020-81332446; E-mail: hhrvivi@21cn.com

R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.04.022

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