金銀花尺蠖蛹粗多糖體外抗氧化活性

向玉勇，章志堅(jiān)，殷培峰，張?jiān)?/p>

（滁州學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院，安徽 滁州 239000）

金銀花尺蠖蛹粗多糖體外抗氧化活性

向玉勇，章志堅(jiān)，殷培峰，張?jiān)?/p>

（滁州學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院，安徽 滁州 239000）

為了解金銀花尺蠖Heterolocha jinyinhuaphaga蛹粗多糖的抗氧化活性，采用熱水浸提法提取了金銀花尺蠖蛹粗多糖，并測(cè)定其體外抗氧化活性。結(jié)果表明：金銀花尺蠖蛹粗多糖對(duì)二苯代苦味酰自由基（DPPH），羥基自由基（·OH）以及超氧陰離子自由基（O2-·）具有一定的清除作用，在其質(zhì)量濃度為0.2 g·L-1時(shí)的清除率分別為39.32%，35.62%和26.75%。隨著多糖質(zhì)量濃度的增大，對(duì)自由基的清除率也逐漸增加，當(dāng)質(zhì)量濃度上升到1.2 g·L-1時(shí)，清除率分別為74.93%，61.59%和47.84%，分別增加了35.61%，25.97%和21.09%，差異達(dá)顯著水平（P＜0.05）。在0.2～1.2 g·L-1的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，清除率與粗多糖質(zhì)量濃度之間呈顯著的線(xiàn)性關(guān)系。金銀花尺蠖蛹粗多糖具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性，具有開(kāi)發(fā)為抗氧化劑的潛力。圖4參20

昆蟲(chóng)學(xué)；金銀花尺蠖；蛹粗多糖；自由基；抗氧化活性

生物體在有氧代謝過(guò)程中會(huì)不斷地產(chǎn)生自由基。自由基的產(chǎn)生和清除在正常情況下是動(dòng)態(tài)平衡的，對(duì)機(jī)體傷害小，如果自由基的產(chǎn)生量超過(guò)生物體的清除能力，生物體就會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的疾病［1］。如人體內(nèi)主要的活性氧自由基，即羥自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2-·）可經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)生成其他氧自由基，累積過(guò)多就會(huì)損傷生物膜中的不飽和脂肪酸，引起脂質(zhì)過(guò)氧化，從而導(dǎo)致機(jī)體衰老、心血管疾病及腫瘤的發(fā)生［2］，嚴(yán)重危害人體健康。因此，尋找合適的抗氧化劑來(lái)清除活性氧自由基，使機(jī)體免受損傷就顯得非常重要。多糖是由多個(gè)單糖分子失水、縮合而成的一類(lèi)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的生物大分子，在動(dòng)物、植物、微生物和海藻中普遍存在［3］。許多研究表明：多糖具有特殊的生物活性和藥理特性，能夠清除自由基，減少慢性疾病的發(fā)生，并且基本無(wú)毒副作用［4-7］，在醫(yī)藥衛(wèi)生和食品行業(yè)具有很好應(yīng)用價(jià)值，受到了人們的廣泛關(guān)注。因此，從生物體內(nèi)篩選出具有很強(qiáng)抗氧化能力的多糖成分已成為當(dāng)今的一個(gè)研究熱點(diǎn)。近年來(lái)，許多學(xué)者從植物和真菌中提取了多糖，并進(jìn)行了抗氧化研究。對(duì)動(dòng)物，特別是昆蟲(chóng)源多糖的提取及抗氧化活性研究的報(bào)道也較多，如何釗等［8］研究了黃粉蟲(chóng)Tenebrio molitor多糖體外抗氧化活性，結(jié)果表明：黃粉蟲(chóng)多糖對(duì)二苯代苦味酰自由基（DPPH）清除率為50%時(shí)的質(zhì)量濃度（IC50值）為0.65 g·L-1，在質(zhì)量濃度為1.76 g·L-1時(shí)，對(duì)羥基自由基（·OH）的清除率達(dá)到99.3%，但在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）的清除率均在50%以下，效果較不顯著；武忠偉等［9］研究了冬蟲(chóng)夏草Cordyceps sinensis與富硒蟲(chóng)草多糖的抗氧化活性，認(rèn)為冬蟲(chóng)夏草和富硒蟲(chóng)草多糖對(duì)羥基自由基（·OH），超氧陰離子自由基（O2-·）和 H2O2具有較好的清除作用，當(dāng) 100 mg·L-1多糖溶液添加量分別高于 80，40，90 μL時(shí)，各組多糖對(duì)3種自由基的抑制率均高于50%；趙秋蓉等［10］對(duì)冬蟲(chóng)夏草多糖進(jìn)行純化和抗氧化活性研究，認(rèn)為冬蟲(chóng)夏草多糖質(zhì)量濃度為0.5 g·L-1時(shí)，對(duì)羥基自由基（·OH）的清除率已經(jīng)達(dá)55.56%，當(dāng)質(zhì)量濃度為3.0 g·L-1時(shí)，清除率為65.74%，在質(zhì)量濃度為0.5 g·L-1時(shí)，對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）的抑制率為20.99%，當(dāng)質(zhì)量濃度為1.0 g·L-1時(shí)，抑制率為25.62%。這些研究結(jié)果表明：昆蟲(chóng)種類(lèi)不同以及多糖的提取方法不同，其多糖的抗氧化活性均存在一定差異。昆蟲(chóng)是自然界中種類(lèi)最多、數(shù)量最大的類(lèi)群，是地球上尚未被充分開(kāi)發(fā)利用的巨大生物資源。中國(guó)昆蟲(chóng)種類(lèi)繁多，占世界種類(lèi)總量的10%［11］，尚有很多種類(lèi)未進(jìn)行相關(guān)研究。因此，進(jìn)行昆蟲(chóng)多糖的抗氧化活性研究對(duì)開(kāi)發(fā)新藥源具有非常重要的意義。金銀花尺蠖Heterolocha jinyinhuaphaga屬鱗翅目Lepidoptera尺蛾科Geometridae昆蟲(chóng)，別名拱腰蟲(chóng)，是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的金銀花Lonicera japonica主要食葉害蟲(chóng)之一，在河南、山東、安徽等地已有報(bào)道［12-15］。該蟲(chóng)常將金銀花葉片咬成缺刻或孔洞，甚至將葉片全部吃光，造成金銀花的大面積減產(chǎn)，給金銀花生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)金銀花尺蠖的生物學(xué)特性及防治方面已有一些研究［12-16］，而有關(guān)其多糖抗氧化活性研究還未見(jiàn)報(bào)道。筆者已研究了金銀花尺蠖的一些生物學(xué)特性，初步建立了實(shí)驗(yàn)室種群，現(xiàn)在前期研究的基礎(chǔ)上提取金銀花尺蠖蛹粗多糖，進(jìn)行體外抗氧化活性研究，以期為從昆蟲(chóng)中開(kāi)發(fā)天然抗氧化藥物和功能食品提供科學(xué)參考，從而達(dá)到變害為寶的目的。

1　材料與方法

1.1試劑

石油醚（60～90℃），正丁醇，氯仿，體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇，丙酮，葡萄糖，無(wú)水乙醇，苯酚，濃硫酸，碳酸氫鈉，三氯乙酸，三氯化鐵，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉，鐵氰化鉀，二苯代苦味酰自由基（DPPH），鄰菲羅啉，硫酸亞鐵，過(guò)氧化氫，二乙基三胺五乙酸（DTPA），三羥甲基胺基甲烷，鹽酸，鄰苯三酚，標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸（Vc），均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2主要儀器

人工氣候箱（RXZ-288A型，寧波江南儀器制造廠(chǎng)），索氏提取器（鄭州興華玻璃儀器廠(chǎng)），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-52AA型，上海亞榮生化儀器廠(chǎng)），循環(huán)水式多用真空泵（SHB-Ⅲ型，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司），800B型臺(tái)式離心機(jī)（上海市安亭科學(xué)儀器制造廠(chǎng)），高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（FW80型，天津市泰斯特儀器有限公司），HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造廠(chǎng)），精密烘箱（20011243型，西班牙Selecta公司），85-2磁力加熱攪拌器（江蘇金壇紅凱儀器廠(chǎng)），723C可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海欣茂儀器有限公司）。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1供試?yán)ハx(chóng)的飼養(yǎng)從安徽省明光市三界鎮(zhèn)野生金銀花上采集金銀花尺蠖幼蟲(chóng)，放入罐頭瓶?jī)?nèi)，10 頭·瓶-1，然后放在人工氣候箱中用新鮮的金銀花葉片飼養(yǎng)，每天更換葉片，直至化蛹。人工氣候箱的光周期設(shè)置為光照期（L）∶暗期（D）=14∶10，相對(duì)濕度設(shè)置為（75±7）%，溫度設(shè)置為（25±1）℃。

1.3.2金銀花尺蠖蛹粗多糖的制備采用熱水浸提法［2］。取金銀花尺蠖蛹，經(jīng)烘箱（45℃）干燥后粉碎，過(guò)40目篩。稱(chēng)取金銀花尺蠖蛹粉末10.0 g，置于索氏提取器中，加入石油醚（沸點(diǎn)60～90℃）100.0 mL，70℃回流提取1 h脫脂，抽濾，濃縮回收溶劑，重復(fù)2次。將濾渣經(jīng)45℃烘干后置于燒瓶中，加入10倍量的蒸餾水，在沸水浴中提取1 h，過(guò)濾，濾渣再用蒸餾水重復(fù)提取1次，將2次濾液合并。將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（60℃）縮濃至一定體積，Sevage法除蛋白［17］，流動(dòng)自來(lái)水透析24 h，再次濃縮，加入4倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇，在4℃冰箱中過(guò)夜醇沉，離心10 min（4 000 r·min-1），沉淀用無(wú)水乙醇、丙酮各洗滌2次，低溫干燥至恒量，即得金銀花尺蠖蛹粗多糖。稱(chēng)取一定量的粗多糖，用重蒸餾水溶解，并配制成不同濃度的試樣，待用。

1.3.3金銀花尺蠖蛹粗多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定蛹粗多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定采用苯酚-硫酸比色法［18］。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的測(cè)定：取分析純葡萄糖于105℃烘箱中干燥至恒量，精密稱(chēng)取50.0 mg，置于100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，即配制成0.5 g·L-1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。用移液管精密移取0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于50.0 mL容量瓶中，加蒸餾水定容，并搖勻。精確吸取上述溶液2.0 mL，置于具塞試管中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的苯酚1.0 mL，搖勻，快速滴加濃硫酸5 mL，搖勻，放置10 min，置沸水浴中加熱20 min后取出冷卻，以蒸餾水作空白對(duì)照，在490 nm處測(cè)定吸光度值。以葡萄糖質(zhì)量濃度（mg·L-1）為橫坐標(biāo)，吸光度值D（490）為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并回歸出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程。樣品中粗多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定：稱(chēng)取干燥至恒量的蛹粗多糖樣品100.0 mg，置于100 mL容量瓶中，加水溶解，搖勻，定容。精確吸取該溶液4.0 mL至50 mL容量瓶中，加水稀釋?zhuān)瑩u勻，定容。按照葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的測(cè)定方法測(cè)定吸光度值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，采用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性回歸方程算出樣品中粗多糖的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.3.4金銀花尺蠖蛹粗多糖總還原力測(cè)定參考李潤(rùn)豐等［6］的方法。取各質(zhì)量濃度粗多糖樣品液2.5 mL置于具塞試管中，然后加入0.2 mol·L-1磷酸鹽緩沖液（pH 6.6）2.5 mL和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%鐵氰化鉀溶液2.5 mL，蓋上塞子充分搖勻，在50℃水浴鍋中保溫20 min，取出后快速冷卻，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%三氯乙酸2.5 mL，充分搖勻后離心10 min（4 000 r·min-1），取上清液2.5 mL，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%三氯化鐵0.5 mL和蒸餾水2.5 mL，充分搖勻后靜止10 min，在700 nm處測(cè)定吸光度值D（700），將樣品液換成蒸餾水進(jìn)行參比測(cè)定實(shí)驗(yàn)，用同濃度的維生素C作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3.5金銀花尺蠖蛹粗多糖清除二苯代苦味酰自由基（DPPH）試驗(yàn)參照趙愛(ài)云等［7］的方法，稱(chēng)取金銀花尺蠖蛹粗多糖，用蒸餾水配制成0.2，0.4，0.6，0.8，1.0和1.2 g·L-1等6種質(zhì)量濃度。稱(chēng)取20.0 mg 的DPPH置于500 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解，并定容為0.1 mmol·L-1的溶液。精確量取2.0 mL DPPH溶液放入10 mL具塞試管中，分別加入2.0 mL各質(zhì)量濃度的樣品溶液，充分混勻并靜置30 min，在517 nm處測(cè)定溶液吸光度值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以蒸餾水作空白對(duì)照，以維生素C作陽(yáng)性對(duì)照。按下面公式計(jì)算蛹粗多糖清除DPPH自由基的能力：DPPH自由基清除率（%）=［D0-（D2-D1）/D0］×100。其中：D0為2.0 mL DPPH溶液+2.0 mL蒸餾水的吸光度值；D1為2.0 mL乙醇+2.0 mL樣品溶液的吸光度值；D2為2.0 mL DPPH溶液+2.0 mL粗多糖溶液的吸光度值。

1.3.6金銀花尺蠖蛹粗多糖清除羥自由基（·OH）試驗(yàn)參照單斌等［2］的方法，設(shè)空白組、對(duì)照組和樣品組。在各樣品管中分別依次加入1.0 mL不同質(zhì)量濃度（0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 g·L-1）蛹粗多糖溶液，再依次分別加入0.4 mol·L-1PBS緩沖溶液（pH 7.4）1.0 mL，2.5 mmol·L-1鄰菲羅啉溶液1.0 mL，2.5 mmol·L-1硫酸亞鐵溶液1.0 mL，20.0 mmol·L-1過(guò)氧化氫溶液0.5 mL；空白組中把樣品溶液換成1.0 mL蒸餾水；對(duì)照組中用1.5 mL蒸餾水代替過(guò)氧化氫溶液和樣品溶液。各管搖勻，在37℃恒溫水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)1 h后，迅速在536 nm處測(cè)定吸光度值。以等質(zhì)量濃度的維生素C為陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。根據(jù)下列公式計(jì)算粗多糖樣品對(duì)羥自由基（·OH）的清除率［2］：羥自由基（·OH）清除率（%）=［（D2-D1）/（D0-D1）］×100。其中：D0，D1，D2分別為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組吸光度值、空白組吸光度值和樣品組吸光度值。

1.3.7金銀花尺蠖蛹粗多糖清除超氧陰離子自由基（O2-·）試驗(yàn)采用鄰苯三酚自氧化法［2］，取3 mmol·L-1DTPA溶液2.0 mL和150 mmol·L-1Tris-HCl緩沖液2.0 mL（pH 8.2）放入10 mL具塞試管中，分別加入0.5 mL各質(zhì)量濃度（0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 g·L-1）待測(cè)粗多糖溶液，經(jīng)25℃恒溫水浴保溫20 min后，立即加入經(jīng)25℃預(yù)熱的45 mmol·L-1鄰苯三酚溶液0.1 mL，迅速搖勻，在3.5 min內(nèi)，隔30 s在325 nm處測(cè)定1次溶液的吸光度值，計(jì)算吸光度值隨時(shí)間的變化率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以等質(zhì)量濃度的維生素C為陽(yáng)性對(duì)照，并與空白溶液比較。根據(jù)下列公式計(jì)算粗多糖樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除率。超氧陰離子自由基清除率（%）=［（F0-Fx）/F0］×100。其中：F0為空白溶液吸光度值隨時(shí)間的變化率；Fx為被測(cè)溶液吸光度值隨時(shí)間的變化率。

2　數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用Duncan氏新復(fù)極差法在P＜0.05水平上進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

3　結(jié)果與分析

3.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及粗多糖含量

將所測(cè)定各質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的吸光度值D（490）為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的葡萄糖質(zhì)量濃度C（mg· L-1）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得出吸光度D（490）與葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度 C關(guān)系的線(xiàn)性回歸方程為D （490）=0.069 3C-0.050 9，相關(guān)系數(shù)R2為0.992 2，說(shuō)明葡萄糖在2.5～15.0 mg·L-1范圍內(nèi)，其質(zhì)量濃度與吸光度線(xiàn)性關(guān)系良好。此回歸方程可以很好地?cái)M合試驗(yàn)數(shù)據(jù)。按1.3.3方法步驟測(cè)得金銀花尺蠖蛹中粗多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)（干質(zhì)量）為34.6 g·kg-1。

3.2金銀花尺蠖蛹粗多糖總還原力

在反應(yīng)體系中，鐵氰化鉀與還原物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)生成亞鐵氰化鉀，再與Fe3+反應(yīng)生成普魯士藍(lán)，在700 nm處有特異性吸收，吸光度值越大，說(shuō)明樣品的還原能力就越強(qiáng)。一般情況下，物質(zhì)的還原能力越強(qiáng)，其抗氧化活性就越強(qiáng)。圖1顯示：金銀花尺蠖蛹粗多糖具有較強(qiáng)的還原能力，在2.0 g·L-1時(shí)的吸光度值為0.67，隨質(zhì)量濃度的增加吸光度值也在增加。當(dāng)質(zhì)量濃度上升到10.0 g·L-1時(shí)，吸光度值增加到1.72，差異達(dá)顯著水平（P＜0.05），說(shuō)明還原力隨粗多糖質(zhì)量濃度的增加而增大，但各質(zhì)量濃度下的還原力均低于維生素C，差異達(dá)顯著水平（P＜0.05）。在2.0～10.0 g·L-1的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，多糖的總還原力（y）與質(zhì)量濃度（x）之間呈顯著的線(xiàn)性關(guān)系，擬合方程為y=0.133x+0.372，R2=0.994 0。

3.3金銀花尺蠖蛹粗多糖對(duì)二苯代苦味酰自由基（DPPH）自由基的清除作用

由圖2可知：金銀花尺蠖蛹粗多糖對(duì)DPPH自由基具有較強(qiáng)的清除作用，在0.2 g·L-1時(shí)的清除率為39.32%，隨著粗多糖質(zhì)量濃度的增加，對(duì)DPPH自由基的清除率也逐漸增加。當(dāng)質(zhì)量濃度上升到1.2 g· L-1時(shí)，清除率已達(dá)到74.93%，增加了35.61%，差異達(dá)顯著水平（P＜0.05）。各質(zhì)量濃度下的清除率均低于維生素C，差異達(dá)顯著水平（P＜0.05）。在0.2～1.2 g·L-1的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，粗多糖對(duì)DPPH自由基的清除率（y）與質(zhì)量濃度（x）之間呈顯著的線(xiàn)性關(guān)系，擬合方程為y=35.381x+32.215，R2=0.999 8。

3.4金銀花尺蠖蛹粗多糖對(duì)羥自由基（·OH）的清除作用

圖1　蛹粗多糖的總還原力Figure 1　General reducing ability of pupae raw polysaccharide

圖2　蛹粗多糖對(duì)DPPH的清除作用Figure 2　Clearing effects of pupae raw polysaccharide on DPPH

由圖3可知：在體外，金銀花尺蠖蛹粗多糖能明顯地清除羥自由基（·OH），在0.2 g·L-1時(shí)，即顯示較強(qiáng)清除能力，清除率達(dá)35.62%，其清除作用隨著粗多糖質(zhì)量濃度的升高而逐漸加強(qiáng)，當(dāng)質(zhì)量濃度上升到1.2 g·L-1時(shí)，清除率已達(dá)到61.59%，增加了25.97%，差異達(dá)顯著水平（P＜0.05），各質(zhì)量濃度下的清除率均低于維生素C，差異達(dá)顯著水平（P＜0.05）。在0.2～1.2 g·L-1的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，粗多糖對(duì)羥自由基（·OH）的清除率（y）與質(zhì)量濃度（x）之間呈顯著的線(xiàn)性關(guān)系，擬合方程為y=26.787x+29.907，R2=0.995 9。

3.5金銀花尺蠖蛹粗多糖對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）的清除作用

由圖4可知：金銀花尺蠖蛹粗多糖在體外對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）具有一定的清除作用，具有直接清除超氧陰離子自由基的抗氧化活性。在0.2 g·L-1時(shí)，對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）的清除率為26.75%，隨著多糖質(zhì)量濃度的增加，對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）的清除率也逐漸增加，當(dāng)質(zhì)量濃度上升到1.2 g·L-1時(shí)，清除率達(dá)47.84%，增加了21.09%，差異達(dá)顯著水平（P＜0.05），各質(zhì)量濃度下的清除率均低于維生素C，差異達(dá)顯著水平（P＜0.05）。在0.2～1.2 g·L-1的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，粗多糖對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）的清除率（y）與質(zhì)量濃度（x）之間呈顯著的線(xiàn)性關(guān)系，擬合方程為y=21.037x+23.101，R2= 0.986 4。

圖3　蛹粗多糖對(duì)羥自由基（·OH）的清除作用Figure 3　Clearing effects of pupae raw polysaccharide on hydroxy radical

圖4　蛹粗多糖對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）的清除作用Figure 4　Clearing effects of pupae raw polysaccharide on superoxide anion radical

4　討論

昆蟲(chóng)體內(nèi)多糖豐富，是開(kāi)發(fā)多糖資源的良好材料。目前，有關(guān)昆蟲(chóng)多糖抗氧化活性研究已有較多的報(bào)道［8-10］。筆者在室內(nèi)提取了金銀花尺蠖蛹粗多糖，并測(cè)定了其體外抗氧化活性。結(jié)果表明：金銀花尺蠖蛹粗多糖在體外均能明顯地清除DPPH自由基、羥自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2-·），并且清除作用隨著多糖質(zhì)量濃度的增加而不斷增強(qiáng)，呈明顯的線(xiàn)性關(guān)系。這表明金銀花尺蠖蛹粗多糖具有較強(qiáng)的抗氧化作用，能夠清除機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基，因而在抗氧化、防衰老方面具有一定的作用，是一種很有開(kāi)發(fā)潛力的資源昆蟲(chóng)，在醫(yī)學(xué)及人類(lèi)保健事業(yè)上具有潛在的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

何釗等［8］的研究表明：在試驗(yàn)范圍內(nèi)，黃粉蟲(chóng)多糖對(duì)DPPH自由基、羥自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2-·）的清除能力隨質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)，存在一定的量效關(guān)系，但沒(méi)有呈線(xiàn)形關(guān)系，當(dāng)上升到一定質(zhì)量濃度時(shí)，清除率趨于穩(wěn)定。筆者的研究則表明：在試驗(yàn)范圍內(nèi)，金銀花尺蠖蛹粗多糖對(duì)這3種自由基的清除作用與多糖質(zhì)量濃度之間呈明顯的線(xiàn)性關(guān)系。這說(shuō)明金銀花尺蠖蛹粗多糖對(duì)自由基的清除能力比較穩(wěn)定，顯示了持續(xù)的抗氧化效果。武忠偉等［9］和趙秋蓉等［10］的研究也顯示：冬蟲(chóng)夏草對(duì)自由基具有一定的清除作用，但都沒(méi)有做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。筆者的研究表明：金銀花尺蠖蛹粗多糖對(duì)3種自由基的清除作用均低于維生素C，這與何釗等［8］的研究結(jié)果一致。作為一種酸性多羥化合物，維生素C是通過(guò)逐級(jí)供給電子來(lái)清除活性氧自由基的［19］，可能由于金銀花尺蠖蛹粗多糖供電子能力不及維生素C，所以對(duì)自由基的清除作用低于維生素C。

本試驗(yàn)只是研究金銀花尺蠖蛹粗多糖的體外抗氧化活性，不能代表其體內(nèi)清除自由基的實(shí)際情況，今后還需進(jìn)行動(dòng)物活體試驗(yàn)，以進(jìn)一步明確其粗多糖抗氧化活性。本試驗(yàn)中金銀花尺蠖蛹粗多糖對(duì)3種自由基的清除活性不同，這可能與多糖中不同組分所起的作用不同有關(guān)［20］。今后還需對(duì)金銀花尺蠖蛹粗多糖的各組分進(jìn)行分離純化，研究其分子結(jié)構(gòu)與生物活性之間的構(gòu)效關(guān)系，探討其抗氧化的藥理作用，并且還需研究金銀花尺蠖人工大量繁殖技術(shù)，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

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Antioxidant activity of raw polysaccharides from Heterolocha jinyinhuaphaga pupae in vitro

XIANG Yuyong，ZHANG Zhijian，YIN Peifeng，ZHANG Yuanchang
（School of Biology and Food Engineering，Chuzhou University，Chuzhou 239000，Anhui，China）

To understand the antioxidant activity of raw polysaccharides from the Heterolocha jinyinhuaphaga pupae，and provide scientific reference for development of natural antioxidant drugs and performance foods，raw polysaccharides from the pupae was extracted in the laboratory by the hot water extraction method.Then，its antioxidant activity was studied in vitro by spectrophotometric method.Its clearing rate on 2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl（DPPH），·OH and O2-.was tested with 3 replications，and vitamin C was used as control.Results showed that with a dosage of 0.2 g·L-1，the clearing rate of raw polysaccharide was 39.3%on DPPH，35.6%on·OH，and 26.8%on O2-.With a 1.2 g·L-1dosage，the clearing rate increased to 74.9%for DPPH，61.6%for·OH，and 47.8%for O2-.From 0.2 to 1.2 g·L-1，the clearing rate showed a linear connection to the dosages.Thus，the pupae polysaccharide of H.jinyinhuaphaga had a high antioxidant activity，which could potentially be exploited.［Ch，4 fig.20 ref.］

entomology；Heterolocha jinyinhuaphaga；raw polysaccharides of pupae；free radicals；antioxidant activity

S763.42；Q964

A

2095-0756（2016）05-0862-07

10.11833/j.issn.2095-0756.2016.05.019

2015-10-28；

2015-11-20

安徽高等學(xué)校自然科學(xué)研究項(xiàng)目（KJ2012B123）；安徽省高等學(xué)校優(yōu)秀青年人才基金資助項(xiàng)目（2009SQRZ147）；國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201210377006）

向玉勇，副教授，博士，從事資源昆蟲(chóng)學(xué)及害蟲(chóng)防治研究。E-mail：xyy10657@sohu.com

浙 江 農(nóng) 林 大 學(xué) 學(xué) 報(bào)，2016，33（5）：862-868

Journal of Zhejiang A＆F University