• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    大黃 蟲(chóng)丸加味對(duì)免疫性肝纖維化大鼠肝組織PDGF及PDGFR的影響

    2016-10-24 07:38:50王金光車念聰李文新杜宇瓊司遠(yuǎn)劉曄趙暉
    環(huán)球中醫(yī)藥 2016年10期
    關(guān)鍵詞:羥脯氨酸秋水仙堿免疫性

    王金光 車念聰 李文新 杜宇瓊 司遠(yuǎn) 劉曄 趙暉

    ?

    大黃蟲(chóng)丸加味對(duì)免疫性肝纖維化大鼠肝組織PDGF及PDGFR的影響

    王金光車念聰李文新杜宇瓊司遠(yuǎn)劉曄趙暉

    目的觀察大黃蟲(chóng)丸配伍黃芪、水紅花子湯劑對(duì)免疫性肝纖維化大鼠肝組織血小板源性生長(zhǎng)因子(platelet derived growth factor,PDGF)及血小板源性生長(zhǎng)因子受體(platelet derived growth factor receptor,PDGFR)的影響。 方法將SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、中藥組和秋水仙堿組。除了正常組外的3組均建立豬血清腹腔注射誘導(dǎo)的免疫性肝纖維化模型。灌胃治療6周后,取大鼠肝臟進(jìn)行病理HE染色及通過(guò)堿水解法檢測(cè)羥脯氨酸含量,并通過(guò)蛋白免疫印跡法檢測(cè)肝組織PDGF-BB蛋白及PDGFR蛋白的表達(dá)。 結(jié)果與正常組相比,模型組羥脯氨酸含量、PDGF-BB蛋白及PDGFR蛋白的表達(dá)均明顯增加(P<0.01);與模型組相比,中藥組及秋水仙堿組羥脯氨酸含量減少(P<0.05),PDGF-BB蛋白及PDGFR蛋白的表達(dá)明顯減少(P<0.01);中藥組與秋水仙堿組羥脯氨酸含量、PDGF-BB蛋白及PDGFR蛋白的表達(dá)均未見(jiàn)明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論大黃蟲(chóng)丸配伍黃芪、水紅花子能有效拮抗豬血清誘導(dǎo)的大鼠免疫性肝纖維化,其機(jī)制可能與抑制PDGF-BB及受體PDGFR蛋白的表達(dá),進(jìn)而抑制肝星狀細(xì)胞的增殖活化有關(guān)。

    大黃蟲(chóng)丸;免疫性肝纖維化;血小板源性生長(zhǎng)因子; 血小板源性生長(zhǎng)因子受體

    肝纖維化是指由于肝炎病毒、酒精、藥物或其他因素導(dǎo)致肝臟的損害,肝臟內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的合成大于降解,并在肝臟內(nèi)過(guò)度沉積的病理生理過(guò)程,是各種慢性肝病病情進(jìn)展的重要病理階段,也是形成肝硬化、肝癌的必經(jīng)過(guò)程[1]。肝臟發(fā)生損傷時(shí),肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)是合成ECM的主要細(xì)胞。HSC的激活和增殖對(duì)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展起著至關(guān)重要的作用,而血小板源性生長(zhǎng)因子(platelet derived growth factor,PDGF)是刺激HSC增殖和相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)最為有效的有絲分裂因子,分為AA、BB、AB、CC、DD 5種亞型,其中PDGF-BB在促使HSC增殖活化從而促進(jìn)膠原合成、抑制膠原降解中發(fā)揮最為重要的作用。有研究表明[2],PDGF-BB及其受體在慢性肝炎或肝硬化患者肝組織表達(dá)過(guò)度,并與膠原纖維沉積成正相關(guān)。本研究擬通過(guò)建立豬血清誘導(dǎo)的大鼠免疫性肝纖維化模型,觀察經(jīng)大黃蟲(chóng)丸加味湯劑干預(yù)后,肝組織PDGF-BB蛋白及PDGFR蛋白的變化,探討大黃蟲(chóng)丸加味湯劑拮抗免疫性肝纖維化的作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    選用雄性SD大鼠,體質(zhì)量180~200 g,鼠齡8周,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,合格證號(hào):SCXK (京) 2013-0004,共28只,飼養(yǎng)在首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部 SPF級(jí)動(dòng)物室。

    1.2試劑和儀器

    大黃蟲(chóng)丸配伍黃芪、水紅花子湯劑:大黃蟲(chóng)丸購(gòu)自北京同仁堂藥店(批號(hào):15013317),從北京同仁堂選購(gòu)標(biāo)準(zhǔn)中藥材黃芪、水紅花子。根據(jù)等效藥量關(guān)系,按照每100 g大鼠每天灌胃1 mL的量,經(jīng)過(guò)計(jì)算得出每1 mL中藥湯劑中含有大黃蟲(chóng)丸0.14 g、黃芪水紅花子(黃芪∶水紅花子=3∶1)生藥量為0.47 g,依此要求煎成湯劑備用。

    豬血清(北京百代商貿(mào)技術(shù)有限公司,批號(hào):150418);生理鹽水(北京市普京康利科技有限公司,批號(hào):150526);秋水仙堿(北京市普京康利科技有限公司,批號(hào):151008),使用時(shí)以蒸餾水調(diào)制藥液成0.025 g/L;羥脯氨酸測(cè)試盒(A030-2,南京建成生物科技有限公司,批號(hào):20160112);蛋白定量試劑盒(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司),一抗: Anti-Collagen I antibody ab23914(美國(guó)Abcam)、一抗:Anti-Collagen I antibody ab19481(美國(guó)Abcam);蛋白質(zhì)印跡法二抗:goat anti rabbit IgG(H+L),HRP(美國(guó)Jackson 111-035-003)、二抗: goat anti mous IgG(H+L)、HRP(美國(guó) Jackson 115-035-003)。

    酶標(biāo)儀(Thermo,美國(guó))垂直電泳槽(Bio-Rad,美國(guó));小型電泳儀(Tanon,美國(guó));Od-yssey雙色紅外熒光成像系統(tǒng)(Li-Cor,美國(guó));全波長(zhǎng)分光度計(jì)(上海菁華有限公司,UV2000);熒光顯微鏡(Nikon Eclipse 80i);恒溫箱(Sanyo);高速攪拌器(Fluka,美國(guó))。

    1.3造模

    將SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,然后隨機(jī)分成正常組、模型組、中藥組和秋水仙堿組,每組各7只。正常組腹腔注射生理鹽水每只0.5 mL/天,其余3組大鼠腹腔注射豬血清每只0.5 mL/天。每周兩次,共注射12周。

    1.4治療

    腹腔注射6周后,在保持造模不變情況下,進(jìn)行藥物灌胃治療,灌胃量為1 mL/100 g大鼠體質(zhì)量。中藥組給予大黃蟲(chóng)丸加味湯劑;正常組及模型組予生理鹽水;秋水仙堿組予以秋水仙堿溶液。治療1次/天,共6周。每周一稱量大鼠體質(zhì)量,隨體質(zhì)量的變化更改造模及治療的藥量。

    1.5樣本采集及處理

    1.5.1肝組織病理HE染色 治療6周后,以10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)腹腔注射麻醉大鼠,固定,打開(kāi)腹腔并迅速分離出肝臟,切取左葉肝臟相同部位,常規(guī)脫水后用3%福爾馬林溶液固定,石蠟包埋,4 μm切片。切片用二甲苯脫蠟,經(jīng)各級(jí)乙醇至水洗;蘇木素染色浸泡2~5分鐘,自來(lái)水沖洗;鹽酸乙醇分化30秒鐘;自來(lái)水浸泡15分鐘;0.5%伊紅染液浸泡2分鐘,自來(lái)水沖洗;常規(guī)脫水,透明,封片。

    1.5.3蛋白免疫印跡法檢測(cè)肝組織PDGF-BB蛋白及PDGFR蛋白的表達(dá) 每組隨機(jī)選取3個(gè)樣本肝臟50~100 g,剪碎勻漿,5%濃縮膠80 V電泳約30分鐘,10%分離膠120 V電泳至溴酚藍(lán)到底,60 mA冰浴過(guò)夜轉(zhuǎn)膜,封閉后一抗(1∶10000)室溫?fù)u床孵育1小時(shí),洗膜后二抗(1∶10000)室溫?fù)u床孵育1小時(shí),洗膜后掃描成像,采用軟件Image J2x對(duì)圖像進(jìn)行灰度分析。

    1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2 結(jié)果

    2.1各組大鼠肝組織病理染色比較

    如圖1所示,正常組大鼠肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)正常,肝細(xì)胞索排列整齊,以中央靜脈為中心呈放射狀排列,肝細(xì)胞無(wú)變性、壞死,無(wú)膠原纖維增生;模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)破壞,肝細(xì)胞排列紊亂,匯管區(qū)擴(kuò)大伴炎性細(xì)胞浸潤(rùn),伴有膠原纖維增粗增厚。中藥組與秋水仙堿組肝細(xì)胞排列較為整齊,肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常少見(jiàn),有少量膠原纖維增生沉積,肝臟炎癥及纖維化程度較模型組有所減輕。

    2.2各組大鼠肝組織羥脯氨酸含量比較

    與正常組相比,模型組、中藥組、秋水仙堿組羥脯氨酸含量明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組相比,中藥組、秋水仙堿組羥脯氨酸含量下降(P<0.05),但中藥組與秋水仙堿組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    注:A:正常組;B:模型組;C:中藥組;D:水仙堿組

    表1 各組大鼠肝組織羥脯氨酸含量±s,μg/mL)

    注: 與正常組相比,aP<0.01;與模型組相比,bP<0.05。剔除造模失敗大鼠,故每組選取3只。

    2.3各組大鼠肝組織PDGF-BB及受體PDGFR蛋白表達(dá)結(jié)果

    與正常組相比,模型組、中藥組、秋水仙堿組PDGF-BB及受體PDGFR蛋白表達(dá)有顯著差異(P<0.01);與模型組相比,中藥組、秋水仙堿組含量下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);中藥組與秋水仙堿組組間比較無(wú)差異(P>0.05)。

    表2 各組大鼠PDGF、PDGFR蛋白表達(dá)情況

    注: 與正常組相比,aP<0.01;與模型組相比,bP<0.01。剔除造模失敗大鼠,故每組選取3只。

    圖2 各組大鼠肝組織PDGF-BB蛋白的表達(dá)

    圖3 各組大鼠肝組織PDGFR蛋白的表達(dá)

    3 討論

    大黃蟲(chóng)丸是《金匱要略》中的名方,見(jiàn)于《金匱·血痹虛勞》:“五勞虛極羸瘦,腹?jié)M不能飲食、食傷、憂傷、飲傷、房室傷、饑傷、勞傷、經(jīng)絡(luò)營(yíng)衛(wèi)氣傷,內(nèi)有干血,肌膚甲錯(cuò),兩目黯黑,緩中補(bǔ)虛,大黃蟲(chóng)丸主之?!北痉接墒齑簏S、土鱉蟲(chóng)、虻蟲(chóng)、蠐螬、水蛭、苦杏仁、黃芩、生地黃、干漆、桃仁、白芍、甘草組成,全方共奏活血化瘀、清熱潤(rùn)燥、滋陰養(yǎng)血之功效。據(jù)報(bào)道[3],大黃蟲(chóng)丸臨床運(yùn)用較為廣泛,涉及40余種疾病的治療,常用于治療慢性肝炎、肝纖維化及肝硬化[4,7],取得了不錯(cuò)的療效。黃芪、水紅花子是中醫(yī)藥治療肝病的常用中藥,本課題組在前期的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)二者均能對(duì)免疫性肝纖維化大鼠的肝纖維化指標(biāo)及肝臟病理都有不同程度的改善[5-6]。本課題實(shí)驗(yàn)將經(jīng)方大黃蟲(chóng)丸與黃芪、水紅花子配伍結(jié)合使用,在臨床經(jīng)驗(yàn)取得一定療效的基礎(chǔ)上,探討此中藥復(fù)方對(duì)免疫性肝纖維化大鼠的拮抗作用機(jī)制。

    中醫(yī)學(xué)無(wú)免疫性肝纖維化這一病名,根據(jù)其臨床特點(diǎn)及癥狀可參考“脅痛” “肝積” “臌脹” “黃疸”等病證范疇,其病因多為飲食失節(jié)、情志失常、勞傷虛損、感染蟲(chóng)毒等,致濕熱邪毒內(nèi)蘊(yùn)、傷陰耗氣、痰凝血瘀、損傷肝絡(luò),發(fā)為此病[7]。根據(jù)“久病入絡(luò)”理論,免疫性肝纖維化的主要病機(jī)往往為正氣虛弱,肝絡(luò)瘀阻。大黃蟲(chóng)丸重在活血化瘀通絡(luò),配伍水紅花子增強(qiáng)化瘀之力,然血行有賴于氣的運(yùn)行,氣為血之帥,氣行則血行,再配伍黃芪以益氣通絡(luò),全方合用起到益氣化瘀通絡(luò)之功效。

    現(xiàn)代研究表明,在免疫性肝纖維化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中,羥脯氨酸在肝臟中的含量能反映肝纖維化膠原代謝情況,作為肝星狀細(xì)胞的強(qiáng)烈有絲分裂原的PDGF,能夠刺激HSC的增殖從而造成膠原纖維的增生和沉積,同時(shí)PDGF能以自分泌和旁分泌的方式發(fā)揮作用[8]。在對(duì)肝纖維化患者的研究中發(fā)現(xiàn),對(duì)HSC增殖活化起重要作用的PDGF和其受體PDGF-R的表達(dá)均上調(diào)[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,模型組大鼠肝組織病理HE及羥脯氨酸含量增高顯示肝纖維化模型成立;經(jīng)大黃蟲(chóng)丸加味湯劑治療后,肝臟病理反映肝纖維化程度的改善,肝組織羥脯氨酸含量較模型組減少,PDGF-BB蛋白和PDGFR蛋白表達(dá)明顯下降。筆者認(rèn)為,大黃蟲(chóng)丸加味湯劑能降低肝組織羥脯氨酸含量,能抑制肝組織中PDGF-BB蛋白及PDGFR蛋白的表達(dá),提示大黃蟲(chóng)丸加味黃芪、水紅花子抗肝纖維化作用可能與其抑制肝星狀細(xì)胞增殖活化,進(jìn)而減少膠原沉積有關(guān)?,F(xiàn)代藥物抗肝纖維化的研究大部分仍處于臨床前研究階段[10],中藥復(fù)方制劑具有多層次、多途徑、多靶點(diǎn)抗肝纖維化的整體治療優(yōu)勢(shì)[2]。本實(shí)驗(yàn)為闡釋大黃蟲(chóng)丸配伍黃芪、水紅花子對(duì)免疫性肝纖維化的拮抗作用機(jī)制提供了一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),同時(shí)為臨床上更好地使用大黃蟲(chóng)丸配伍黃芪、水紅花子抗免疫性肝纖維化提供了理論依據(jù)和思路。

    [1]劉瑤. 早期乙肝肝硬化中醫(yī)證素特征及其與血漿CTGF、PDGF的相關(guān)性研究[D]. 福州:福建中醫(yī)藥大學(xué), 2014.

    [2]李川, 呂文良. 常見(jiàn)中藥復(fù)方制劑抗肝纖維化機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 環(huán)球中醫(yī)藥, 2013, 6(1): 70-73.

    [3]李康, 黨誠(chéng)學(xué).大黃蟄蟲(chóng)丸藥理作用及臨床應(yīng)用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2004,13(11):1440.

    [4]陳紅. 中西醫(yī)結(jié)合治療肝硬化腹水近況[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005, 8(1): 65.

    [5]杜宇瓊,車念聰. 黃芪對(duì)肝纖維化大鼠肝組織TIMP-1及MMP-1表達(dá)的影響[J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 36(11): 775-778.

    [6]杜宇瓊,車念聰. 水紅花子對(duì)免疫肝纖維化大鼠肝功能及血清肝纖維化標(biāo)志物的影響 [J].中國(guó)中醫(yī)急癥, 2011, 20(9):1433-1434.

    [7]翟延君, 張淑榮, 郝寧. 水紅花子研究概況[J].遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2005, 7(3): 226.

    [8]Nagashio Y, Ueno H, Imamura M. Inhibition of transforming growth factor beta decreases pancreatic fibrosis and protects the pancreas against chronic injury inmice[J]. Lab Invest, 2004, 84(12) :1610-1618.

    [9]Bonner JC. Regulation of PDGF and its receptors in fibrotic diseases[J].Cytokine Growth Factor Rev,2004,15(4):255-273.

    [10]白辰,車念聰,劉文蘭.一貫煎湯劑對(duì)肝纖維化大鼠肝臟1型膠原的影響[J]. 環(huán)球中醫(yī)藥, 2015, 8(8): 901-903.

    (本文編輯: 韓虹娟)

    Influence of variation on Dahuang Zhechong pill on PDGF protein and PDGFR protein in liver of rats with immune hepatic fibrosis

    WANGJin-guang,CHENian-cong,LIWen-xin,etal.

    SchoolofTraditionalChineseMedicine,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China

    CHENian-cong,E-mail:cnc088@sohu.com

    ObjectiveTo investigate the influence ofvariationonDahuangZhechongpill combine with mikvetch root and prince’s-feather fruit decoction on PDGF protein and PDGFR protein of rats with hepatic fibrosis. MethodsSD rats were randomly divided into normal group, model group and western medicine, Chinese medicine group. Except the normal group, the other 3 groups were induced liver fibrosis model by intraperitoneal injection of porcine serum, after six weeks of treatment,pathology HE of rat liver was conducted and alkali hydrolysis method was used to decect hydroxyproline content, the expression of PDGF - BB protein and PDGFR protein was detected by protein immunoblot method. ResultsCompared with the normal group, hydroxyproline content ,PDGF-BB proteins and PDGFR protein expression of model group was significantly increased (P<0.01); Compared with model group, the hydroxyproline content in Chinese medicine group and colchicine group was decreased (P<0.05), the expression of PDGF-BB protein and PDGFR protein was decreased significantly (P<0.01); the hydroxyproline content, the expression of PDGF-BB protein and PDGFR protein between Chinese medicine group and colchicine group had no significant difference (P>0.05). ConclusionvariationonDahuangZhechongpill combine with mikvrtch root and prince’s-feather fruit decoction can antagonism liver fibrosis induced by porcine serum, the mechanism may be related to the inhibition of PDGF-BB and PDGFR protein expression, and the inhibition of the hepatic stellate cell activation.

    variationonDahuangZhechongpill;Immune hepatic fibrosis;PDGF;PDGFR

    2015年度首都中醫(yī)藥研究專項(xiàng)(15ZY01);2015年度首都醫(yī)科大學(xué)校自然基金(2015ZR25)

    100069北京,首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中醫(yī)臨床基礎(chǔ)學(xué)系[王金光(碩士研究生) 、車念聰、李文新(碩士研究生)、杜宇瓊、司遠(yuǎn)(碩士研究生)、劉曄(碩士研究生)、趙暉]

    王金光(1987- ),2014 級(jí)在讀碩士研究生。研究方向:中醫(yī)肝病的證治規(guī)律研究。E-mail:jinguang1213@163.com

    車念聰(1957- ),教授,博士生導(dǎo)師,主任醫(yī)師。研究方向:中醫(yī)肝病。E-mail: cnc088@ sohu.com

    R249

    Adoi:10.3969/j.issn.1674-1749.2016.10.007

    2016-05-15)

    猜你喜歡
    羥脯氨酸秋水仙堿免疫性
    秋水仙堿,痛風(fēng)的你吃對(duì)了嗎?
    高效液相色譜法測(cè)定紡織品中的羥脯氨酸含量
    從扶正祛邪法探討免疫性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的防治
    胸腺瘤與自身免疫性疾病的研究進(jìn)展
    Atg5和Atg7在自身免疫性疾病中的研究進(jìn)展
    α-酮戊二酸對(duì)L-羥脯氨酸產(chǎn)量的影響
    高效液相色譜法檢測(cè)醬油中羥脯氨酸的含量研究
    秋水仙堿治療白塞病療效分析
    謹(jǐn)吃半熟的金針菇
    女士(2015年6期)2015-05-30 20:22:32
    小心,半熟的金針菇有毒!
    黑人高潮一二区| 黄色日韩在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 乱码一卡2卡4卡精品| 在线播放无遮挡| 我的老师免费观看完整版| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产色婷婷99| 91久久精品电影网| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 中文字幕av在线有码专区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲欧美清纯卡通| 午夜久久久久精精品| 成年版毛片免费区| 婷婷六月久久综合丁香| 天天躁日日操中文字幕| 午夜久久久久精精品| 一个人看的www免费观看视频| 成人三级黄色视频| 超碰av人人做人人爽久久| 午夜激情福利司机影院| 午夜视频国产福利| 久久精品人妻少妇| 天堂√8在线中文| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产精品永久免费网站| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲美女视频黄频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 高清毛片免费看| 九草在线视频观看| 亚洲美女视频黄频| 禁无遮挡网站| 国产一区有黄有色的免费视频 | 男女啪啪激烈高潮av片| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 中文字幕av在线有码专区| 日韩一本色道免费dvd| 高清av免费在线| 久久久色成人| 国产成人午夜福利电影在线观看| 午夜福利在线在线| 乱人视频在线观看| 成人二区视频| 国产黄片美女视频| 97超视频在线观看视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久亚洲国产成人精品v| 蜜臀久久99精品久久宅男| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 在线播放无遮挡| 日本五十路高清| 国产精品三级大全| 久久精品久久久久久久性| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲精品成人久久久久久| 天美传媒精品一区二区| 国产久久久一区二区三区| 国产精品1区2区在线观看.| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产乱人偷精品视频| 最近中文字幕2019免费版| www.色视频.com| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品久久电影中文字幕| 在线天堂最新版资源| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 日韩欧美在线乱码| 哪个播放器可以免费观看大片| 一个人免费在线观看电影| 久久久国产成人精品二区| 国产免费男女视频| 1000部很黄的大片| 欧美精品一区二区大全| 九九在线视频观看精品| 赤兔流量卡办理| 一级毛片久久久久久久久女| av在线天堂中文字幕| 丝袜美腿在线中文| 男插女下体视频免费在线播放| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲成人久久爱视频| 午夜福利视频1000在线观看| 久久午夜福利片| av国产久精品久网站免费入址| 欧美成人a在线观看| 日本一二三区视频观看| 99久久九九国产精品国产免费| 岛国毛片在线播放| 亚洲电影在线观看av| 国产精品国产三级专区第一集| 最新中文字幕久久久久| 国产av不卡久久| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产麻豆成人av免费视频| 九九爱精品视频在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频 | 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲成人精品中文字幕电影| 一区二区三区免费毛片| 日韩一区二区视频免费看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 色网站视频免费| 久久久久久久久久黄片| 久久久色成人| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 午夜精品国产一区二区电影 | 欧美成人精品欧美一级黄| 伦理电影大哥的女人| 亚洲欧洲国产日韩| 国产真实乱freesex| av专区在线播放| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲内射少妇av| 少妇熟女欧美另类| 久久久久国产网址| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲欧美日韩高清专用| 欧美+日韩+精品| 26uuu在线亚洲综合色| 好男人视频免费观看在线| 丝袜喷水一区| 国产av在哪里看| 一区二区三区四区激情视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲真实伦在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 99久久成人亚洲精品观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 长腿黑丝高跟| 嘟嘟电影网在线观看| .国产精品久久| 亚洲av成人av| a级毛色黄片| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚州av有码| 久久精品夜色国产| 伦理电影大哥的女人| 黑人高潮一二区| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲最大成人中文| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美成人精品欧美一级黄| 人体艺术视频欧美日本| 舔av片在线| 18禁动态无遮挡网站| 欧美日韩综合久久久久久| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 青春草国产在线视频| 岛国毛片在线播放| 久久久精品94久久精品| 午夜精品国产一区二区电影 | 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 欧美成人a在线观看| 青春草视频在线免费观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 天天躁日日操中文字幕| 97超碰精品成人国产| 久久精品国产自在天天线| 97热精品久久久久久| 国产淫语在线视频| 热99在线观看视频| 精品无人区乱码1区二区| 伦理电影大哥的女人| 欧美精品国产亚洲| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| av.在线天堂| 久久久久久久午夜电影| 亚洲图色成人| 久久久午夜欧美精品| 欧美激情在线99| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产精品无大码| 亚洲综合精品二区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久99热这里只有精品18| 亚洲国产精品成人久久小说| 看十八女毛片水多多多| 日韩强制内射视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 色吧在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 精品国产露脸久久av麻豆 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久久久久久久久久丰满| 国产爱豆传媒在线观看| 午夜福利在线观看吧| 亚洲人成网站在线观看播放| 在线免费观看的www视频| 99热全是精品| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 精品久久国产蜜桃| 九九爱精品视频在线观看| ponron亚洲| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲精品色激情综合| 又爽又黄无遮挡网站| 全区人妻精品视频| 久久久久久久午夜电影| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久99热这里只频精品6学生 | 国产精品1区2区在线观看.| 国产av不卡久久| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产av码专区亚洲av| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品久久久久久久电影| 久久久久久久午夜电影| 午夜精品国产一区二区电影 | 极品教师在线视频| 精品国产露脸久久av麻豆 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久热久热在线精品观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久久久久久久久久免费av| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久久久久久午夜电影| 久久精品夜色国产| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 国产精品1区2区在线观看.| 国产亚洲最大av| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 精品人妻偷拍中文字幕| 美女cb高潮喷水在线观看| 日本熟妇午夜| 嫩草影院精品99| 男女那种视频在线观看| 国产 一区精品| 成人性生交大片免费视频hd| 国产熟女欧美一区二区| 搡老妇女老女人老熟妇| kizo精华| 一级毛片电影观看 | 26uuu在线亚洲综合色| 国产麻豆成人av免费视频| 成人亚洲欧美一区二区av| 18禁在线播放成人免费| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久久成人免费电影| 桃色一区二区三区在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 99久久精品国产国产毛片| 伊人久久精品亚洲午夜| 偷拍熟女少妇极品色| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲国产精品专区欧美| 国产精品久久电影中文字幕| 五月伊人婷婷丁香| 韩国高清视频一区二区三区| 中文字幕av成人在线电影| 好男人视频免费观看在线| 高清视频免费观看一区二区 | 国产美女午夜福利| 免费观看在线日韩| 一边摸一边抽搐一进一小说| 黄色配什么色好看| 成人漫画全彩无遮挡| 成人一区二区视频在线观看| 在线免费观看的www视频| 国产v大片淫在线免费观看| 国产高潮美女av| av卡一久久| 国产伦理片在线播放av一区| 激情 狠狠 欧美| 99热这里只有是精品50| 七月丁香在线播放| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 18禁动态无遮挡网站| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产片特级美女逼逼视频| 国产黄片美女视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 嫩草影院精品99| 午夜精品一区二区三区免费看| 99久久精品热视频| 国产久久久一区二区三区| 成人三级黄色视频| 干丝袜人妻中文字幕| 日韩人妻高清精品专区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 免费大片18禁| 国产精品伦人一区二区| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲怡红院男人天堂| 精品久久久久久久末码| 国产精品国产高清国产av| 欧美一区二区亚洲| 中文资源天堂在线| 中国国产av一级| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产黄a三级三级三级人| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲美女视频黄频| 99热这里只有精品一区| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产av在哪里看| 国产成人aa在线观看| 日本黄大片高清| 能在线免费看毛片的网站| 国产精品.久久久| 日韩成人av中文字幕在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 青春草亚洲视频在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 有码 亚洲区| 国产一区有黄有色的免费视频 | 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产日韩欧美在线精品| 国产高清视频在线观看网站| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产成人免费观看mmmm| 最近最新中文字幕大全电影3| 热99在线观看视频| 亚洲国产精品国产精品| 久久亚洲精品不卡| 亚洲久久久久久中文字幕| 婷婷色综合大香蕉| 精品久久久久久成人av| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 欧美高清成人免费视频www| 变态另类丝袜制服| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 我要搜黄色片| 不卡视频在线观看欧美| 免费观看性生交大片5| 尾随美女入室| 青青草视频在线视频观看| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲国产欧美人成| a级一级毛片免费在线观看| 长腿黑丝高跟| 麻豆一二三区av精品| 色哟哟·www| 久久久精品大字幕| 国产男人的电影天堂91| 亚洲在线观看片| 免费电影在线观看免费观看| 真实男女啪啪啪动态图| 国产一区亚洲一区在线观看| 精品久久久噜噜| 日韩欧美三级三区| 中文字幕久久专区| 久久久久久国产a免费观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 麻豆国产97在线/欧美| 美女被艹到高潮喷水动态| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲三级黄色毛片| 久久久久久久午夜电影| 中文资源天堂在线| 国产黄片视频在线免费观看| 精品酒店卫生间| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 老司机影院毛片| 日韩高清综合在线| 身体一侧抽搐| 欧美xxxx性猛交bbbb| 男人舔奶头视频| 久久人人爽人人片av| 国产极品精品免费视频能看的| 免费观看的影片在线观看| 在线天堂最新版资源| 国产精华一区二区三区| av在线蜜桃| 国产淫片久久久久久久久| av在线蜜桃| 国产人妻一区二区三区在| 中文字幕av成人在线电影| 秋霞在线观看毛片| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品伦人一区二区| 热99在线观看视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产一区二区在线av高清观看| 麻豆一二三区av精品| 国产高清国产精品国产三级 | 国产av码专区亚洲av| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久久久久久亚洲中文字幕| 美女大奶头视频| 久久国内精品自在自线图片| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产爱豆传媒在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 久久久精品欧美日韩精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 内地一区二区视频在线| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久久精品大字幕| 亚洲精品国产成人久久av| 国产伦理片在线播放av一区| 久久精品久久精品一区二区三区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精品aⅴ在线观看| 热99re8久久精品国产| 久久久午夜欧美精品| 婷婷色av中文字幕| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | av女优亚洲男人天堂| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲欧洲国产日韩| 天堂网av新在线| 精品久久国产蜜桃| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产午夜福利久久久久久| 简卡轻食公司| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产在线一区二区三区精 | 国产91av在线免费观看| 美女国产视频在线观看| 欧美97在线视频| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲性久久影院| 日本免费a在线| 国语自产精品视频在线第100页| av国产久精品久网站免费入址| 身体一侧抽搐| 国产亚洲一区二区精品| 国产精品av视频在线免费观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 日韩欧美国产在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 久久亚洲国产成人精品v| 成人午夜高清在线视频| 成年女人看的毛片在线观看| 久久精品夜色国产| 久久精品国产自在天天线| 国产综合懂色| 丰满乱子伦码专区| 国产毛片a区久久久久| 欧美成人一区二区免费高清观看| 两个人的视频大全免费| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产精品人妻久久久久久| 嫩草影院精品99| 少妇熟女aⅴ在线视频| 精品久久久久久久末码| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 三级国产精品片| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产大屁股一区二区在线视频| 床上黄色一级片| 高清视频免费观看一区二区 | 国产av一区在线观看免费| 一边亲一边摸免费视频| 国产免费男女视频| 男人的好看免费观看在线视频| 久久久亚洲精品成人影院| 如何舔出高潮| 精品午夜福利在线看| 欧美日本视频| 亚洲精品影视一区二区三区av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产精品伦人一区二区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 91精品伊人久久大香线蕉| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 热99re8久久精品国产| 欧美bdsm另类| 青春草视频在线免费观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 婷婷色综合大香蕉| 黄色欧美视频在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 小说图片视频综合网站| 免费黄色在线免费观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 91在线精品国自产拍蜜月| 99视频精品全部免费 在线| 午夜激情福利司机影院| 婷婷六月久久综合丁香| 免费一级毛片在线播放高清视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 日本黄大片高清| 女人被狂操c到高潮| 免费av毛片视频| 国产午夜精品一二区理论片| 色播亚洲综合网| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 在线播放国产精品三级| 国国产精品蜜臀av免费| 精品酒店卫生间| 久久久国产成人免费| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 亚洲五月天丁香| 永久免费av网站大全| 如何舔出高潮| 九色成人免费人妻av| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产亚洲av嫩草精品影院| 日本与韩国留学比较| 又爽又黄a免费视频| or卡值多少钱| 九九在线视频观看精品| 久久精品久久久久久久性| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久亚洲国产成人精品v| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产极品天堂在线| 级片在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产精品久久久久久久久免| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 1024手机看黄色片| 亚洲精品成人久久久久久| 国产淫语在线视频| 久久韩国三级中文字幕| 波多野结衣高清无吗| 高清在线视频一区二区三区 | 欧美潮喷喷水| 国产精品久久久久久av不卡| 波多野结衣高清无吗| 又爽又黄a免费视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | videos熟女内射| 嫩草影院精品99| 亚洲中文字幕日韩| 免费看日本二区| 九色成人免费人妻av| 看十八女毛片水多多多| 国产中年淑女户外野战色| 日本wwww免费看| 日韩欧美在线乱码| 最近手机中文字幕大全| 亚洲欧美日韩无卡精品| 联通29元200g的流量卡| 国产成人a∨麻豆精品| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 校园人妻丝袜中文字幕| ponron亚洲| 在线播放国产精品三级| 免费大片18禁| 国产高潮美女av| 日本三级黄在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 天堂中文最新版在线下载 | 99久久无色码亚洲精品果冻| 婷婷色麻豆天堂久久 | 我要看日韩黄色一级片| 免费观看在线日韩| 老司机福利观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 人体艺术视频欧美日本| 一级av片app| 色哟哟·www| 最近中文字幕2019免费版| 成人二区视频| 男女边吃奶边做爰视频| av天堂中文字幕网| 女人被狂操c到高潮| 国产成人福利小说| 色网站视频免费| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲国产欧美人成| 国产熟女欧美一区二区| 欧美成人免费av一区二区三区| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 久久精品91蜜桃| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品爽爽va在线观看网站| 欧美三级亚洲精品| 久久久久久久国产电影| 我要看日韩黄色一级片| 国产免费一级a男人的天堂| 久久久久久久久久久丰满| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久亚洲精品成人影院| 秋霞在线观看毛片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲成色77777| 成人二区视频| 久久久久久大精品| 永久网站在线|