HPLC法同時測定復方金思維中3種有效成分的含量

張晴　杜守穎　白潔　陸洋　鄭夢成　李鵬躍　武慧超

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HPLC法同時測定復方金思維中3種有效成分的含量

張晴杜守穎白潔陸洋鄭夢成李鵬躍武慧超

目的建立復方金思維中松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽堑暮繙y定方法。方法采用高效液相色譜法對制劑中的松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽沁M行定量測定。結果松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖分別在2.5～50.0 μg/mL、1.3～25.9 μg/mL、2.0～40.7 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好，3種成分樣品回收率分別為101.37%、99.86%和98.44%，RSD均在3.00%以內。結論所建立的方法簡便，重復性良好，可用于金思維復方中松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖的含量測定。

復方金思維；高效液相色譜法；含量測定

復方金思維是由肉蓯蓉、熟地黃、遠志、茯苓等藥物組合而成，具有補氣益腎、化痰活血之功效，可用于老年性癡呆的治療[1-4]。肉蓯蓉、熟地黃和遠志為方中主要藥物，為保證臨床療效，本實驗采用高效液相色譜法對肉蓯蓉和熟地黃中松果菊苷和毛蕊花糖苷、遠志中3,6′-二芥子?；崽沁M行定量測定，以控制本品的內在質量,此方法測定結果準確靈敏、簡便可靠。

1　材料

1.1藥品與試劑

乙腈(邁瑞達，色譜純)，磷酸(邁瑞達，色譜純)，娃哈哈純凈水，其他試劑為分析純；松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽菍φ掌?均為中國食品藥品檢定研究院，批號分別為111670-201505、111530-201310、111848-201303)；肉蓯蓉、熟地黃、遠志等飲片(北京本草方源藥業(yè)有限公司)；金思維為實驗室自制(肉蓯蓉16 g、熟地黃16 g、遠志12 g、茯苓6 g、人參3 g、石菖蒲6 g等，加水煎煮2次，濾液濃縮至近干，50℃減壓干燥，干膏粉碎，混勻)。

1.2儀器

LC-20AD高效液相色譜儀(日本島津公司，SPD-M20A，PDA檢測器，LC Solution色譜工作站)；CX-100型超聲波清洗器(北京醫(yī)療設備廠)；電熱恒溫水浴箱(北京醫(yī)療設備廠)；賽多利斯BT 25S型電子分析天平(北京賽多利斯公司)；賽多利斯BSA 224S型電子分析天平(北京賽多利斯公司)。

2　方法

2.1色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK-C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，流動相乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～12分鐘，87%～83%B；12～25分鐘，83%B；25～45分鐘，83%～73%B；45～50分鐘，73%～10%B；50～55分鐘，10%B)；柱溫30 ℃；檢測波長330 nm；流速1.0 mL/min。對照品溶液及溶出供試品溶液的色譜圖見圖1。

A. 對照品溶液；B. 溶出供試品溶液；C.空白溶出液；

2.2對照品溶液的制備

精密稱取對照品松果菊苷25 mg、毛蕊花糖苷12.5 mg、3,6′-二芥子酰基蔗糖20 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得。

2.3供試品溶液的制備

精密稱取樣品約0.1 g置10 mL容量瓶中，加入50%甲醇適量，超聲15分鐘，放冷，定容至刻線，取上清液，0.45 μm微孔濾膜濾過，得供試品溶液。

2.4方法學考察

2.4.1線性關系考察精密吸取對照品儲備液，依次稀釋得到6個不同濃度的對照品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標(Y)，濃度為橫坐標(X)，進行線性回歸，松果菊苷回歸方程為Y=12729X-4090.2，r=0.9999；毛蕊花糖苷回歸方程為Y=13842X-2892.8，r=0.9999；3,6′-二芥子?；崽腔貧w方程為Y=25091X+821.1，r=0.9999。松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖分別在2.5～50.0、1.3～25.9、2.0～40.7 μg/mL與峰面積線性關系良好。

2.4.2精密度實驗精密吸取上述對照品溶液10 μL，重復進樣6次，結果松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖6次進樣的峰面積積分值相對標準偏差(relative stardard deviation,RSD)分別為0.79%、2.63%、0.51%，表明儀器精密度良好。

2.4.3穩(wěn)定性實驗精密吸取上述供試品溶液分別于0、2、4、6、8、12、24小時進樣測定，結果松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽呛康腞SD分別為0.49%、2.70%、0.74%，表明樣品在24小時內穩(wěn)定。

2.4.4重復性實驗取同一批樣品，平行制備6份供試品溶液，測得峰面積并計算3種成分含量，結果樣品中松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖平均含量分別為3.22 mg/g、0.77 mg/g、1.27 mg/g，RSD分別為0.8%、2.2%、1.1%，表明本方法重復性良好。

2.4.5加樣回收率實驗精密稱取已知含量的同一批樣品0.05 g，分別精密加入一定量的松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽菍φ掌罚凑铡?.3”項下方法制備，平行操作6份，按上述條件進行分析測定，計算回收率，結果見表1。

表1　加樣回收率實驗結果

3　結果

分別取三批樣品，每批樣品按“2.3”項下方法平行制得3份供試品溶液，按照上述色譜條件進樣測定，結果見表2。

表2　樣品含量測定結果

4　討論

4.1測定成分的選擇

肉蓯蓉、熟地黃和遠志為方中主要藥物，肉蓯蓉和熟地黃中主要成分為苯乙醇苷類化合物，其中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量較高，具有保護腦部和神經組織、抗衰老、改善記憶力的作用[5-6]，是其藥理作用的化學物質基礎。3,6′-二芥子?；崽菫檫h志中的指標性成分，具有抗抑郁、神經保護和改善記憶力等作用[7-8]。故對復方金思維中此三個具有代表性的成分進行了含量測定方法的研究，以控制本品的內在質量，保證臨床療效。

4.2流動相的選擇

松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖的測定曾使用2015版《中華人民共和國藥典》(一部)肉蓯蓉及熟地黃藥材含量測定項下的甲醇-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.1%醋酸溶液作為流動相，但松果菊苷、毛蕊花糖苷結構中存在多個酚羥基，呈弱酸性，拖尾情況嚴重，考慮藥典中流動相的酸性不夠，且當流動相大比例變化時有基線漂移現象，故調整為乙腈-0.05%磷酸溶液作為流動相進行洗脫，結果所測定的三個成分分離度、對稱因子均符合要求。

4.3檢測波長的選擇

分別取松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽菍φ掌愤m量，加甲醇適量制成每1 mL含0.10 mg的溶液，在200～400 nm波長進行全波長掃描，結果三者對照品均在330 nm處有最大吸收，故選擇330 nm作為檢測波長[9-12]。

4.4供試品溶液的制備

提取方式的選擇考慮到檢驗的便捷性，采用超聲(100 kHz)提取進行試驗。提取溶劑的選擇參考2015版《中華人民共和國藥典》(一部)肉蓯蓉、熟地黃、遠志藥材含量測定，分別選用50%、80%和100%甲醇作為提取溶劑進行試驗，結果表明三者沒有顯著性差異，故選擇50%甲醇作為松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖的提取溶劑。提取時間分別采用15分鐘、30分鐘和45分鐘進行考察，結果顯示15分鐘松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖就能完全溶出，因此最終選擇加入50%甲醇超聲(100 kHz)15分鐘作為供試品提取條件。

本研究采用超聲法提取，樣品處理方法簡單，使用有機試劑量較小，且HPLC梯度洗脫可以同時分離3種成分，雜質峰無干擾，靈敏度高，結果可靠，該方法可以作為復方金思維的質量控制方法。

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(本文編輯： 董歷華)

Simulatneous determination of three active components in compound JSW prescription by HPLC

ZHANGQing，DUShou-ying，BAIJie，etal.

BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China

DUShou-ying，E-mail：dushouying@263.net

ObjectiveTo establish a method for determination of 3 effective components in Compound JSW prescription. MethodsThe contents of Echinacoside, Acteoside, 3,6′-Disinapoyl sucrose in Compound JSW prescription were determined by HPLC. ResultsEchinacoside, acteoside, 3,6′ -Disinapoyl sucrose showed good linear correlation within 2.5～50.0 μg/ml, 1.3～25.9 μg·ml-1and 2.0～40.7 μg/ml(r≥0.9999)，respectively. The average recoveries were within 101.37%, 99.86% and 98.44%, respectively. And RSD were less than 3.00%. ConclusionThe quantitative method for determining the components of Compound JSW prescription is simple, feasible and repeatable.

Compound JSW prescription；HPLC；Content determination

國家科技重大專項(2014ZX09301306-009)；北京市科技新星計劃(xx2015A048)

100102北京中醫(yī)藥大學中藥學院[張晴(碩士研究生)、杜守穎、白潔、陸洋、鄭夢成、李鵬躍、武慧超]

張晴(1991- )，女，2015級在讀碩士研究生。研究方向：中藥新劑型與新技術研究。E-mail:zhangqing811@163.com

杜守穎(1960- )，女，博士，教授，博士生導師。研究方向：中藥新劑型與制劑關鍵技術研究。E-mail: dushouying@263.net

R285.5

Adoi：10.3969/j.issn.1674-1749.2016.10.008

2016-03-01)