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    植物組織培養(yǎng)中褐變的影響因素及防止措施

    2016-10-20 22:35:06周亞輝
    現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技 2016年5期
    關(guān)鍵詞:植物組織培養(yǎng)防止措施褐變

    周亞輝

    摘要 褐變問題在植物組織培養(yǎng)過程中普遍存在,嚴重影響了外植體的生長與分化,結(jié)合國內(nèi)外研究褐變的相關(guān)報道,綜述了植物組織培養(yǎng)中褐變的影響因素和防止措施。

    關(guān)鍵詞 植物組織培養(yǎng);褐變;影響因素;防止措施

    中圖分類號 Q813.1+2 文獻標識碼 B 文章編號 1007-5739(2016)05-0117-02

    近年來,隨著科學技術(shù)的迅猛發(fā)展,植物組織培養(yǎng)已成為生物學科中的重要研究技術(shù)和手段之一,其被廣泛應用于科研和生產(chǎn),在農(nóng)學、花卉、林業(yè)、醫(yī)藥業(yè)等領(lǐng)域中取得了巨大的經(jīng)濟、社會效益。但是,植物組織培養(yǎng)過程中褐變問題普遍存在,褐變的發(fā)生會嚴重影響外植體的生長與分化,甚至導致培養(yǎng)材料的死亡,褐變問題已成為組織培養(yǎng)中的一大難題。褐變的影響因素是復雜的,隨外植體種類、基因型、取材部位及生理狀況等的不同而危害程度有所區(qū)別,國內(nèi)外也研究報道了一些減少或防止褐變的方法。本文系統(tǒng)歸納了植物組織培養(yǎng)褐變的影響因素和防止措施,對深入研究褐變問題和組織培養(yǎng)技術(shù)都有著非常重要的意義。

    1 褐變的影響因素

    1.1 外植體基因型

    在植物組織培養(yǎng)中,有些品系容易褐變,誘導困難,而有些品系褐變較少,愈傷組織化容易些,組培容易成功,其原因之一可能是酚類物質(zhì)含量及多酚氧化酶活性上的差異。

    1.2 外植體的生理狀態(tài)

    外植體本身的生理狀態(tài)不同,接種后褐變的程度也不同。致褐物質(zhì)的含量會因生理年齡、季節(jié)、取材時間及部位的不同而不同。

    1.3 培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件

    無機鹽濃度、培養(yǎng)基pH值、培養(yǎng)基狀態(tài)及植物激素等不適宜,均會引起褐變的產(chǎn)生。此外,培養(yǎng)過程中溫度過高或光照過強,也會加速褐變的產(chǎn)生。

    1.4 培養(yǎng)時間

    接種后轉(zhuǎn)瓶時間的早晚也是影響褐變的因素,接種后外植體培養(yǎng)時間過長,未及時轉(zhuǎn)瓶,會使培養(yǎng)材料傷口積累過多酚類物質(zhì),導致褐變。

    2 褐變的防止措施

    2.1 外植體的選擇

    2.1.1 基因型。在相同培養(yǎng)條件下,甜菜二倍體品系外植體發(fā)生褐變的頻率低于四倍體品系。Dalal等[1]比較2個葡萄品種“Pusa Seedless”和“Beauty Seedless”的褐變時,發(fā)現(xiàn)后者比前者嚴重,酚類化合物含量也是后者明顯高。因此,在組織培養(yǎng)中應注意不同基因型的篩選,選擇褐變程度較小的材料來進行培養(yǎng)。

    2.1.2 生理年齡。外植體年齡對褐變有較大影響,Chevre分析表明歐洲栗幼齡材料酚類化合物含量少,而成齡材料比較多。周 艷等[2]研究發(fā)現(xiàn)馬纓杜鵑的二年生莖段在組織培養(yǎng)過程中的褐變率最低。

    2.1.3 取材時期。致褐物質(zhì)的含量會因季節(jié)的不同而不同,冬季褐變少,夏秋季褐變最嚴重,存活率最低。對柿樹離體繁殖中外植體的褐變研究結(jié)果表明,2月取即將萌動的休眠芽進行培養(yǎng),褐變死亡率低,4月取嫩枝莖尖進行培養(yǎng),褐變死亡率高[3]。紫葉黃櫨在1月取休眠枝條組織培養(yǎng)后外植體褐變程度最輕。

    2.1.4 取材部位。平陰玫瑰不同品種、同一品種不同芽位的外植體在組培中褐變發(fā)生情況不同,但5個品種各芽位的平均褐變度均呈單峰型變化,且峰值均在第4芽。張素勤等[4]研究報道,非洲菊幼嫩葉片、花蕾、花托和花梗不同外植體中葉片的褐變程度最重,花蕾的褐變程度最輕。

    2.2 外植體的預處理

    在非洲菊葉片組織培養(yǎng)接種前將外植體用100 mg/L VC溶液浸泡1 h,使褐變現(xiàn)象得到有效控制[4]。青錢柳外植體先于4 ℃低溫預處理5 d和直接用燒紅的手術(shù)刀快速切割外植體后再進行接種可有效減少外植體的褐變。紫葉黃櫨嫩莖組織培養(yǎng)前經(jīng)0.1% HgCl2滅菌2~3 min,外植體褐變程度最輕。

    2.3 適當?shù)呐囵B(yǎng)基狀態(tài)和成分

    2.3.1 培養(yǎng)基狀態(tài)。液體培養(yǎng)基可有效克服外植體褐變,因為在液體培養(yǎng)基中,外植體溢出的有害物質(zhì)可以很快擴散,對外植體傷害較輕。潘 梅等[5]在淮山組織培養(yǎng)抑制褐變的研究中發(fā)現(xiàn)液體培養(yǎng)淮山組織褐變程度較固體培養(yǎng)輕。尚旭嵐等[6]研究報道,鶴望蘭紙橋液體培養(yǎng)可以有效降低外植體的褐變度。

    2.3.2 培養(yǎng)基成分。選擇適宜的無機鹽成分、蔗糖濃度和激素水平也是十分重要的。牛尾菜組織在不同激素配比的培養(yǎng)基中,隨著6-BA和NAA濃度的提高,外植體發(fā)生褐化時間呈現(xiàn)提前的趨勢。此外,相對于基本培養(yǎng)基MS、1/2MS,在低無機鹽離子濃度WPM基本培養(yǎng)基中,可減緩外植體褐化程度。銀杏組織培養(yǎng)在蔗糖濃度為5%的培養(yǎng)基上,愈傷組織增長倍數(shù)最高。

    2.3.3 添加抗氧化劑和吸附劑。在植物組培中常用于抑制褐變的抗氧化劑有抗壞血酸、硫代硫酸鈉、多胺等,常用的吸附劑有聚乙烯吡咯烷酮、活性炭等。鄭曉丹等[7]發(fā)現(xiàn)海南龍血樹組織培養(yǎng)抗褐變的最適處理是培養(yǎng)基里加入維生素C然后泡半胱氨酸。魔芋組織培養(yǎng)中在培養(yǎng)基中分別添加活性炭、半胱氨酸、二氧化硫、聚乙烯吡咯烷酮或抗壞血酸等都能有效降低魔芋組織培養(yǎng)中的褐變率[8]。

    2.4 合適的培養(yǎng)條件

    溫度過高或光照過強,可使多酚氧化酶的活性提高,從而加速培養(yǎng)材料的褐變,尤其是初期暗培養(yǎng)及保持較低溫度(15~20 ℃)有降低褐變的作用[9]??ㄌ靥m在10~20 ℃時褐變程度要比20 ℃以上時輕。魔芋組織培養(yǎng)中溫度25~30 ℃、光照1 500 lx的條件下培養(yǎng)物褐變率僅為6%,愈傷組織誘導率達94%,成功率最高。

    2.5 縮短轉(zhuǎn)瓶時間

    及時轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物可減輕醌類物質(zhì)對培養(yǎng)物的毒害作用,顯著減少材料的褐變。在山月桂樹的莖尖培養(yǎng)中,接種后12~24 h便轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基中,然后每天轉(zhuǎn)移1次,連續(xù)1個星期,褐變便得到完全控制[9]。軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)過程中每隔10~15 d轉(zhuǎn)換1次培養(yǎng)基可有效控制褐變并保持植株正常生長。

    3 參考文獻

    [1] DALAL MA,SHANNA BB,RAO MS.Studies on stock plant treatment and initiation culture mode in control of oxidative browning cultures of grapevine[J].Sci Hort,1992(51):35-41.

    [2] 周艷,陳訓.馬纓杜鵑組織培養(yǎng)過程中外植體褐變與多酚氧化酶及酚類物質(zhì)的關(guān)系[J].種子,2009,28(7):61-63.

    [3] 張妙霞,孔祥生,郭秀璞,等.柿樹組織培養(yǎng)防止外植體褐變的研究[J].河南農(nóng)業(yè)大學學報,1999,33(1):89-93.

    [4] 張素勤,鄒志榮,耿廣東,等.非洲菊組織培養(yǎng)抑制褐變現(xiàn)象的研究[J].貴州農(nóng)業(yè)科學,2007,35(2):56-57.

    [5] 潘梅,王景飛,黃賽,等.淮山組織培養(yǎng)抑制褐變的研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學,2014,42(6):57-59.

    [6] 尚旭嵐,張健,夏晗.鶴望蘭組織培養(yǎng)的褐變因素及防止措施[J].四川農(nóng)業(yè)大學學報,2003,21(3):61-64.

    [7] 鄭曉丹,胡燕梅.海南龍血樹組織培養(yǎng)及抗褐變的研究[J].武漢生物工程學院學報,2011,7(4):235-237.

    [8] 李劍美,寸湘琴,謝世清.魔芋組織培養(yǎng)中的褐變機理及防控措施[J].中國農(nóng)學通報,2006,22(5):234-236.

    [9] 曹孜義,劉國民.實用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M].蘭州:甘肅科學技術(shù)出版社,2003:48-49.

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