電針治療對(duì)顳下頜關(guān)節(jié)紊亂綜合征大鼠顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子TNF-α、IL-1β的影響

王晶，劉明，唐純志.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 50405 .廣州中醫(yī)藥大學(xué)針灸康復(fù)臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 50405

電針治療對(duì)顳下頜關(guān)節(jié)紊亂綜合征大鼠顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子TNF-α、IL-1β的影響

王晶1，劉明2，唐純志2
1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)針灸康復(fù)臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405

目的：觀察電針治療對(duì)顳下頜關(guān)節(jié)紊亂綜合征大鼠顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）的影響。方法：通過(guò)拔除大鼠右上頜磨牙，人為造成大鼠偏側(cè)咀嚼，建立大鼠顳下頜關(guān)節(jié)紊亂綜合征（TMD）模型。實(shí)驗(yàn)分電針組、空白組、模型組3組，按組進(jìn)行相應(yīng)的干預(yù)然后收集血清和組織勻漿采用酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)（ELISA）法檢測(cè)TNF-α、IL-1β水平。結(jié)果：與空白組血清炎癥因子含量進(jìn)行比較，模型組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量大幅升高（P＜0.05）；與模型組比較，電針組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量降低（P＜0.05）。與空白組顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中炎癥因子的含量進(jìn)行比較，模型組中IL-1β、TNF-α的含量升高（P＜0.05）；與模型組比較，電針組顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中IL-1β、TNF-α含量降低（P＜0.05）。結(jié)論：電針能夠有效降低大鼠血清中IL-1β、TNF-α等促炎因子的表達(dá)水平，抑制模型大鼠顳下頜關(guān)節(jié)炎的指數(shù)，具有一定抗炎消腫鎮(zhèn)痛作用。

顳下頜關(guān)節(jié)綜合征；電針治療；炎癥因子；大鼠

顳下頜關(guān)節(jié)紊亂綜合征（temporomandibularjoint dysfunction syndrome，TMJDS），又稱(chēng)顳下頜功能紊亂病（temporomandibular disorders，TMD），該疾病包括了顳下頜關(guān)節(jié)和頜面肌肉的癥狀，主要有顳下頜關(guān)節(jié)彈響、頜面部疼痛與下頜運(yùn)動(dòng)障礙，同時(shí)可伴有耳部、肩頸部和頭部的疼痛。TMJDS目前已被世界衛(wèi)生組織（WHO）列為影響人類(lèi)健康的第四位口腔流行病，診斷的依據(jù)是患者的臨床癥狀或體征，發(fā)病較為隱匿，其癥狀可以輕到患者意識(shí)不到這是一種疾病，也可以重到疼痛難忍，張口受限，不能正常咀嚼。TMJDS的人群發(fā)病率約為25%～60%［1］，對(duì)人類(lèi)正常生活的影響與日俱增。TMJDS可在其血清和關(guān)節(jié)液中發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子 -α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）的存在，作為炎癥因子參與的關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)和髁上組織的分解破壞的過(guò)程已被多數(shù)學(xué)者認(rèn)可［2～4］。TMJDS多為各種原因引起顳下頜關(guān)節(jié)周?chē)∪函d攣而造成局部疼痛，張口運(yùn)動(dòng)障礙，通過(guò)電針的電流刺激可以明顯解除咀嚼肌痙攣，調(diào)節(jié)神經(jīng)興奮性，改善韌帶和關(guān)節(jié)的緊張度，使癥狀消除。為探討電針治療與血清及關(guān)節(jié)組織勻漿中TNF-α、IL-1β含量之間的關(guān)系，本研究提取實(shí)驗(yàn)大鼠血清和顳下頜關(guān)節(jié)及組織勻漿采用血清酶聯(lián)免疫吸附法（ELSA）進(jìn)行炎癥因子檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料選用SPF級(jí)SD大鼠共30只，雌雄各半，體重180～220 g，大鼠身體狀況良好，牙列完整，無(wú)牙齒磨耗以及牙頜畸形。動(dòng)物合格證號(hào)：44005800000881，許可證號(hào)：SYXK（粵）2013-0001，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。飼養(yǎng)期間給予嚙齒類(lèi)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料（由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）及自由飲水。

1.2藥物及試劑注射用頭孢拉定（由廣州中醫(yī)藥大學(xué)衛(wèi)生所提供，規(guī)格1.0 g，10瓶裝，批號(hào)：31001202）；IL-1β、TNF-α ELISA試劑盒，武漢新啟迪生物科技有限公司，批號(hào)分別為：EIA05874r、EIA06460r。

1.3主要儀器電針治療儀（青島鑫升實(shí)業(yè)有限公司）；SPX型智能生化培養(yǎng)箱（寧波江南儀器有限公司）；MultifugellR酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司）；Wellwash 4MK2自動(dòng)洗板機(jī)（美國(guó)Thermo公司）；Ascent高速離心機(jī)（美國(guó)Thermo公司）、勻漿機(jī)IKA-WERKE（德國(guó)GMBH責(zé)任有限公司）；超低溫冰箱702（美國(guó)Thermo公司）。

1.4實(shí)驗(yàn)分組與TMJDS模型制備30只大鼠隨機(jī)分為電針組、空白組、模型組各10只。模型組和電針組參照張娟等［5］拔牙造成咬合紊亂，從而改變關(guān)節(jié)負(fù)荷造成TMJ損傷，和付斌等［6］拔牙創(chuàng)愈合模型的實(shí)驗(yàn)方法，建立大鼠TMJDS模型。肌肉注射10%水合氯醛（0.35 mL/100 g）麻醉后，仰臥固定四肢，另用固定繩勾住大鼠的上下切牙并往上下方向拉開(kāi)暴露大鼠口腔，進(jìn)行口腔消毒，用拔牙挺作為拔牙工具。拔牙方法為首先用探針?lè)蛛x大鼠牙齦然后用止血鉗和鑷子尋找并固定磨牙位置，確定位置后用微創(chuàng)拔牙挺挺松右上頜3顆磨牙，然后用鑷子和止血鉗將磨牙分別拔出。肌肉注射頭孢拉定防止感染。上述處置完成后大鼠全部蘇醒，從實(shí)驗(yàn)當(dāng)天起即喂食常規(guī)鼠料和水。

1.5電針治療造模2周后進(jìn)行電針治療，針刺取穴為“下關(guān)”、“太陽(yáng)”穴，穴位定位參照李忠仁主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》，太陽(yáng)穴位于外眼角后方顳窩中，下關(guān)穴位于顳下頜關(guān)節(jié)下方，用30號(hào)0.5寸華佗牌毫針針尖向下斜刺0.5～1.0 cm。導(dǎo)線連接雙側(cè)“太陽(yáng)”和“下關(guān)”穴，治療強(qiáng)度1 mA，頻率10 Hz，脈寬1 ms，刺激15 min，每天1次，治療時(shí)間為2周，模型組和空白組大鼠每天抓握5min，抓握方式同電針組治療時(shí)的抓握方式，抓握方式為常規(guī)抓取方法，主要作用為排除治療組的抓握干擾。

1.6血清樣本制備末次治療后禁食不禁水24 h，用眼眶后靜脈叢真空采血管采血法進(jìn)行采血，每只大鼠采血1.5 mL。真空采血管配樣分離血清，離心速度3000 r/min。采集完血清后放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.7組織勻漿樣本制備采血后斷頸處死大鼠，剪頭取出顳下頜關(guān)節(jié)及組織，按組織重量與生理鹽水1∶9的質(zhì)量分?jǐn)?shù)混合用勻漿機(jī)進(jìn)行研磨后制成勻漿液，3000 r/min離心15 min，溫度4℃，取上清液1mL凍存于-80℃冰箱內(nèi)備用。

1.8炎癥因子TNF-α、IL-1β的采集和檢測(cè)取出血清和組織勻漿待測(cè)樣本和ELISA試劑常溫解凍，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0 for Windows軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，根據(jù)對(duì)資料的分析，多組均數(shù)的比較采用單因素方差分析，計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較方差齊時(shí)選擇LSD法，方差不齊時(shí)選擇Dunnetts T3法；檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)比較見(jiàn)表1。與空白組血清炎癥因子含量進(jìn)行比較，模型組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量大幅升高（P＜0.05）；與模型組比較，電針組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量降低（P＜0.05）。

2.2各組大鼠組織勻漿IL-1β、TNF-α表達(dá)比較見(jiàn)表2。與空白組顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中炎癥因子的含量進(jìn)行比較，模型組中IL-1β、TNF-α的含量升高（P＜0.05）；與模型組比較，電針組顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中IL-1β、TNF-α含量降低（P＜0.05）。

表1　各組大鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)比較（±s）　mmol/L

表1　各組大鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)比較（±s）　mmol/L

與空白對(duì)照組比較，①P＜0.05；與模型組比較，②P＜0.05

組別空白組模型組電針組n 10 10 10 IL-1β 39.45±27.44 259.60±64.55①130.50±31.52①②TN F-α 113.50±24.07 390.75±7.79①238.62±13.84①②

表2　各組大鼠組織勻漿IL-1β、TNF-α表達(dá)比較（±s）mmol/L

表2　各組大鼠組織勻漿IL-1β、TNF-α表達(dá)比較（±s）mmol/L

與空白對(duì)照組比較，①P＜0.05；與模型組比較，②P＜0.05

3　討論

近年來(lái)，對(duì)TMJDS病因機(jī)制的研究已集中在神經(jīng)免疫學(xué)尤其是各種促炎細(xì)胞因子的解釋?zhuān)鳬L-1β、TNF-α是TMJDS病因和發(fā)展中最主要的致炎細(xì)胞因子［7］。電針治療對(duì)TMD模型大鼠血清和顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中炎性因子的影響，通過(guò)檢測(cè)3組大鼠血清發(fā)現(xiàn)，電針治療能有效降低TMD模型大鼠血清中炎性因子IL-1β和TNF-α的含量，抑制局部炎癥反應(yīng)，進(jìn)而控制TMJDS的病變過(guò)程。

TMJDS患者可引起顳下頜關(guān)節(jié)非特異性炎癥反應(yīng)，關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子高表達(dá)是TMJDS的一個(gè)主要病理變化，抑制炎癥因子的表達(dá)在緩解和治療炎癥反應(yīng)的過(guò)程中起關(guān)鍵作用。各種傷害性刺激均可引發(fā)關(guān)節(jié)組織內(nèi)感覺(jué)神經(jīng)元合成和釋放多種炎性神經(jīng)肽，從而刺激周?chē)M織的多種細(xì)胞合成釋放IL-1β、TNF-α為主的多種致炎細(xì)胞因子加重局部炎癥反應(yīng)。中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為T(mén)MJDS屬于痹癥、頰痛、頷痛等范疇，臨床主要表現(xiàn)為疼痛，而治療痛癥乃中醫(yī)傳統(tǒng)針灸之強(qiáng)項(xiàng)，臨床常用電針療法來(lái)針對(duì)性治療TMJDS，電針治療能夠發(fā)揮其通經(jīng)活絡(luò)、鎮(zhèn)靜止痛的優(yōu)勢(shì)，電針對(duì)TMJDS的治療效果已得到臨床的廣泛認(rèn)可［8］。綜上所述，電針治療能夠有效降低TMJDS大鼠血清和顳下頜關(guān)節(jié)中IL-1β、TNF-α的含量，降低促炎因子的表達(dá)水平，從而提高大鼠抗炎因子的表達(dá)水平。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明電針治療干預(yù)后電針組大鼠的炎癥因子IL-1β、TNF-α含量明顯降低（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。電針治療能夠降低TMJDS大鼠顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)的炎癥因子IL-1β、TNF-α的含量，從而有效降低IL-1β、TNF-α等促炎因子的表達(dá)水平，提高IL-1β、TNF-α等抗炎因子的表達(dá)水平。由炎癥因子的對(duì)比可見(jiàn)，電針治療可明顯抑制大鼠顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)的炎癥指數(shù)，具有一定的抗炎消腫、鎮(zhèn)靜止痛的作用。降低顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)血清中IL-1β、TNF-α的含量可能是電針治療TMJDS抗炎鎮(zhèn)痛的作用機(jī)理之一。

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（責(zé)任編輯：駱歡歡，李海霞）

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0256-7415（2016）07-0290-03

10.13457/j.cnki.jncm.2016.07.123

2016-02-11

王晶（1970-），女，副主任醫(yī)師，主要從事急危重癥工作。

唐純志，E-mail：jordan664@163.com。