幾種該院制劑薄層鑒別方法的改進(jìn)

許紅瑋，魯露，李學(xué)林

河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州450000

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幾種該院制劑薄層鑒別方法的改進(jìn)

許紅瑋，魯露，李學(xué)林

河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州450000

目的改進(jìn)幾種該院制劑的薄層鑒別方法。方法在原有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，對(duì)幾種制劑中薄層色譜鑒別法中的供試品前處理?xiàng)l件進(jìn)行優(yōu)化，分別以相應(yīng)的對(duì)照品為對(duì)照，采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別研究。結(jié)果供試品色譜中，檢出與對(duì)照品相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論建立的新方法色譜斑點(diǎn)清晰，展開(kāi)效果理想，重復(fù)性好?？勺鳛樵撝苿┑馁|(zhì)量控制方法。

醫(yī)院制劑；超聲提??；TLC

熱咳顆粒，龍虎鎮(zhèn)驚顆粒，消渴安膠囊，痤瘡凈丸為我院醫(yī)院制劑（批件號(hào)分別為：2012R0706、2012R0315、2012R1231、2012R0657），熱咳顆粒由麻黃、苦杏仁、石膏等5味中藥制成，具有清熱解表，止咳化痰。用于小兒風(fēng)熱咳嗽，吐黃粘痰，伴有發(fā)熱等。龍虎鎮(zhèn)驚顆粒由龍齒、琥珀、鉤藤、僵蠶、朱砂等8味中藥制成，具有鎮(zhèn)驚熄風(fēng)，安魂定魄，豁痰開(kāi)竅，清神醒腦。用于驚厥抽搐，癲癇。消渴安膠囊由三七、黃芪、生地、水蛭粉等5味中藥制成，具有益氣養(yǎng)血止渴，活血化瘀通絡(luò)的功效，用于糖尿病并發(fā)血管神經(jīng)病變。痤瘡凈丸由金銀花、黃芩、槐花、枇杷葉、天花粉、白花蛇舌草、浙貝母、薏苡仁、地黃等16味中藥制成，具有清熱解毒，祛濕散結(jié)。用于尋常痤瘡，粉刺，溢脂性皮炎等屬肺胃濕熱者。以4上種制劑原標(biāo)準(zhǔn)的薄層色譜鑒別中供試品處理操作步驟繁瑣，費(fèi)時(shí)。該文通過(guò)實(shí)驗(yàn)，建立的新處理方法-超聲方法既簡(jiǎn)化了操作，降低了檢驗(yàn)物料的使用，又節(jié)省了檢驗(yàn)時(shí)間，分離效果好、陰性無(wú)干擾?？勺鳛?個(gè)該院制劑質(zhì)量控制的定性指標(biāo)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

全自動(dòng)薄層鋪板器（M183507，北京克格儀器有限公司）、恒溫水浴鍋（HH-4，常州恒隆器有限公司）、科導(dǎo)臺(tái)式超聲波清洗器（SK250，上海漢克科學(xué)儀器有限公司）、Sartorius CP225D電子分析天平（德國(guó)）。熱咳顆粒（130913），龍虎鎮(zhèn)驚顆粒（131205），消渴安膠囊（130925），痤瘡凈丸（141210）及實(shí)驗(yàn)所用藥材由醫(yī)院制劑室提供，鹽酸麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供鑒別用10767-171241），鉤藤對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供鑒別用2051-121190），三七皂苷R1對(duì)照品（維克奇，供鑒別用），人參皂苷Rg1對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供鑒別用，110703-200322），綠原酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供鑒別用，110753-201314），硅膠G（青島海洋化工有限公司），乙醚、甲醇、氯仿、正丁醇、甲酸等試劑均為分析純，水為純化水。

2　方法和結(jié)果

2.1熱咳顆粒中麻黃的鑒別

2.1.1供試品溶液的制備a.樣品原處理方法：本品研細(xì)取10 g，加乙醚30 mL，濃氨試液2 mL，冷浸2 h，濾過(guò)，濾液加酸性乙醇（5%鹽酸乙醇溶液）1 mL，揮干，加1 mL甲醇使殘?jiān)芙猓鳛楣┰嚻啡芤?。b.超聲處理法［1］：本品研細(xì)取10 g，加乙醚30 mL，濃氨試液2 mL，加冰超聲處理20 min，濾過(guò)后濾液揮干，加甲醇1 mL使殘?jiān)芙?，作為供試品溶液?/p>

2.1.2陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例（飲片麻黃除外）及制法，制成麻黃陰性樣品，取10 g，同“2.1.1”b項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，制成陰性溶液。

2.1.3對(duì)照品溶液制備取鹽酸麻黃堿對(duì)照品5.0 mg，加甲醇5 mL制成每1 mL含1 mg的溶液，得對(duì)照品溶液。

2.1.4薄層色譜條件按中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，在同一硅膠G薄層板上分別點(diǎn)上述溶液各5 μL，以氯仿-甲醇-濃氨試液（20：5：0.3）為展開(kāi)劑，展開(kāi)8 cm，取出晾干后噴以茚三酮試液，在105℃烘約5 min。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾；見(jiàn)圖1。

圖1　麻黃薄層圖譜

2.2龍虎鎮(zhèn)驚顆粒中鉤藤的鑒別

2.2.1供試品溶液的制備a.樣品原處理方法：本品研細(xì)取10 g加濃氨試液使?jié)駶?rùn)，加氯仿30 mL，冷浸24 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。b.超聲處理法［2］：本品研細(xì)取10 g加濃氨試液使?jié)駶?rùn)，加氯仿30 mL，加冰超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例（飲片鉤藤除外）及制法，制成鉤藤陰性樣品，取10 g，同“2.2.1”b項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，制成陰性溶液。

2.2.3對(duì)照品溶液制備取鉤藤對(duì)照藥材5 g，同2.2.1供試品溶液的制備a.樣品原處理方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.2.4薄層色譜條件按中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，在同一硅膠G薄層板上分別點(diǎn)上述溶液各10 μL，在氯仿-丙酮-三乙胺（50∶30∶2）中展開(kāi)，取出晾干，置紫外燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性則無(wú)干擾，見(jiàn)圖2。

圖2　鉤藤薄層圖譜

2.3消渴安膠囊中三七的鑒別

2.3.1供試品溶液的制備a.樣品原處理方法：取樣品1.25 g，置索氏提取器中，加乙醚60 mL，加熱回流2 h，棄去乙醚液，藥渣晾干，再加入甲醇60 mL，加熱回流至提取液無(wú)色，提取液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和正丁醇提取2次（20 mL、20 mL），合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次20 mL，棄去水液，正丁醇液揮干，殘?jiān)蛹状歼m量溶解，移置10 mL量瓶中作為供試品溶液。

b.超聲處理法［3］：取樣品1.25 g，加水20滴，加水飽和正丁醇20 mL，超聲30 min，濾過(guò)，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次20 mL，棄去水液，正丁醇液揮干，殘?jiān)蛹状歼m量溶解，移置10 mL量瓶中作為供試品溶液。

2.3.2陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例（飲片三七除外）及制法，制成三七陰性樣品，取1.25 g，同“2.3.1”b項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，制成陰性溶液。

2.3.3對(duì)照品溶液制備取9.0 mg人參皂苷Rg1，9.0 mg三七皂苷R1對(duì)照品，分別加甲醇5 mL制成每1 mL含1.4 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3.4薄層色譜條件按中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，在同一硅膠G薄層板上分別點(diǎn)供試品溶液和陰性溶液各20 μL，對(duì)照品溶液各5 μL，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）10℃放置12 h的下層溶液為展開(kāi)劑展開(kāi)10 cm，取出晾干后噴10%硫酸乙醇，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性則無(wú)干擾。（見(jiàn)圖3及圖3-1）。

圖3　三七薄層圖譜（紫外365 nm）

圖3　-1三七薄層圖譜（日光）

2.4痤瘡凈丸中金銀花的鑒別

2.4.1供試品溶液的制備a.樣品原處理方法：本品研細(xì)，取5 g加甲醇20 mL，冷浸12 h，濾過(guò)，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。

b.超聲處理法［6-7］：本品研細(xì)取5 g加甲醇20 mL，超聲處理30 min（加冰袋），濾過(guò)，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。

2.4.2陰性對(duì)照溶液的制按處方比例（飲片金銀花除外）及制法，制成金銀花陰性樣品，取5 g，同“2.4.1”b項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，制成陰性溶液。

2.4.3對(duì)照品溶液的制備取綠原酸對(duì)照品5 mg，加甲醇5 mL制成每1 mL含1 mg的溶液，得對(duì)照品溶液。

2.4.4薄層色譜條件按《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，在同一硅膠G薄層板上分別點(diǎn)上述溶液各1 μL，以醋酸丁酯-甲酸-水（65∶25∶20）上層溶液為展開(kāi)劑展開(kāi)，展距約8 cm，取出晾干后置紫外燈下（365 nm）檢視。在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品色譜中顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾；見(jiàn)圖4。

圖4　金銀花薄層圖譜

3　討論

3.1薄層色譜法是中藥制劑常用的鑒別方法之一

由于中藥制劑成分復(fù)雜，雜質(zhì)多、干擾大，供試品的制備成為關(guān)鍵。前處理的方法很多，目前，國(guó)內(nèi)外主要采用提取法：煎煮法、回流提取法、滲漉法、浸漬法，但是這些常規(guī)方法存在著需要加熱、提取時(shí)間長(zhǎng)、溶劑用量大等缺點(diǎn)。超聲提取技術(shù)作為一種藥物前處理的提取新方法，具有省時(shí)、節(jié)能、提取效率高等特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)，在中藥復(fù)方提取的研究中越來(lái)越受到廣泛應(yīng)用，在中藥領(lǐng)域中具有廣闊的應(yīng)用前景。

3.2超聲提取時(shí)間是超聲提取方法中的重要影響因素之一

該試驗(yàn)對(duì)超聲提取重要影響因素-時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果表明麻黃超聲20 min、30 min時(shí)提取效果較佳，但二者區(qū)別不明顯。故該試驗(yàn)方法確定為超聲提取20 min；鉤藤、三七、金銀花超聲30 min、40 min時(shí)提取效果較佳，但二者區(qū)別不明顯，故該試驗(yàn)方法確定為超聲提取30 min。超聲法重復(fù)3次所得結(jié)果一致，說(shuō)明改進(jìn)后的方法重復(fù)性好。

4　結(jié)語(yǔ)

熱咳顆粒中的麻黃為方中君藥，能宣肺氣，開(kāi)腠理，散風(fēng)寒，以發(fā)汗解表，散風(fēng)寒而平喘。龍虎鎮(zhèn)驚顆粒中的鉤藤為方中君藥，性苦；微寒。具有清熱平肝；熄風(fēng)止痙。主治：小兒驚風(fēng)；夜啼；熱盛動(dòng)風(fēng)；子癇等。消渴安膠囊中的三七為方中君藥，具有擴(kuò)張血管，溶解血栓，改善微循環(huán)，預(yù)防和治療高血脂、膽固醇增高、冠心病、心絞痛、腦溢血后遺癥等心腦血管疾病。痤瘡凈丸中的金銀花為方中君藥，是性能較平和、使用較廣泛的清熱解毒中藥，現(xiàn)藥理研究證實(shí)具有降溫退熱、抗菌、抗病毒和消除內(nèi)毒素的作用。該實(shí)驗(yàn)以《中國(guó)藥典》2010年版一部為依據(jù)，查閱學(xué)術(shù)期刊相關(guān)文獻(xiàn)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)，確定超聲實(shí)驗(yàn)方法，采用超聲法處理樣品，與原處理法對(duì)比，采用薄層色譜法4個(gè)該院制劑方中君藥麻黃、鉤藤、三七、金銀花四味藥進(jìn)行了定性鑒別，操作方法簡(jiǎn)便、分離效果好、陰性無(wú)干擾，可作為4個(gè)該院制劑質(zhì)量控制的定性指標(biāo)之一。

［1］鄭全，郭維霄，劉芳，等.小青龍顆粒薄層鑒別方法的改進(jìn)［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2014（3）：625-626.

［2］李欽青，郭蕾，張俊龍，等.復(fù)方天麻鉤藤口腔崩解片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2014（2）：85-87.

［3］許勇，王柯，季申.降脂靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中成藥，2010（10）：1720-1723.

Improvement of Some Preparation Thin-layer Identification Methods in Our Hospital

XU Hong-wei，LU Lu，LI Xue-lin
First Affiliated Hospital of Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou，Henan Province，450000 China

Objective To improve some preparation thin-layer identification methods in our hospital.Methods The test article pretreatment condition in the thin-layer chromatography identification method in some preparations was optimized on the basis of the primary standards，and the corresponding control articles were selected for control，and the thin-layer chromatography method was adopted for identification and research.Results The spot whose color was the same with the control article in the test article chromatogram was detected and the negative control had no interference.Conclusion The chromatogram spot of the new method is clear with ideal developing effect and good repeatability，which can be used as a quality control method of this preparation.

Hospital preparation；Supersonic extraction；TLC

R286.0

A

1672-5654（2016）09（a）-0108-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.25.108

2016-06-07）

河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（201304045）。

許紅瑋（1969.3-），女，河南許昌人，碩士研究生，副主任藥師，研究方向：藥物制劑與臨床。

李學(xué)林（1960.7-），男，河南林縣人，碩士研究生，碩導(dǎo)，主任藥師，研究方向：中藥的應(yīng)用形式和中藥合理應(yīng)用，E-mail：lixuelin450000@163.com。