GC-MS檢測生物檢材中的敵敵畏

解潤芳，李玉雯，解繼明，楊凱潤，王欣，董繼攀

1.昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，云南昆明650500；2.云南省第三人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，云南昆明650011；3.云南省第三人民醫(yī)院心胸外科，云南昆明650011

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GC-MS檢測生物檢材中的敵敵畏

解潤芳1，李玉雯2，解繼明3，楊凱潤1，王欣1，董繼攀1

1.昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，云南昆明650500；2.云南省第三人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，云南昆明650011；3.云南省第三人民醫(yī)院心胸外科，云南昆明650011

目的建立一種簡便、快速、準(zhǔn)確、可靠的GC-MS檢測生物檢材中敵敵畏的方法。方法用無水Na2SO4把生物檢材拌成干沙狀以后，用氯仿-丙酮（6：1）進(jìn)行提取分離，GC-MS對樣品進(jìn)行分離分析，用總離子流圖（TIC圖）中敵敵畏的保留時間及質(zhì)譜圖中對應(yīng)的特征離子碎片定性。結(jié)果該方法簡單易操作，背景干擾小，分離效果好，分析速度快，敵敵畏的保留時間為4.895 min、特征離子碎片（m/z）為79，109及185。結(jié)論該方法可用于法醫(yī)毒物分析生物檢材中敵敵畏的檢測，結(jié)果令人滿意。

法醫(yī)毒物分析；GC-MS；生物檢材；敵敵畏

敵敵畏（Dichlorovos）屬于有機(jī)磷酸酯類殺蟲劑，在水溶液中容易分解，隨著敵敵畏的廣泛使用［1-2］，涉及到敵敵畏中毒的案（事）件越來越多，建立一種簡單、靈敏、快速、可靠，滿足法醫(yī)毒物分析對生物檢材中敵敵畏檢驗的方法具有較好的現(xiàn)實意義。該文基于敵敵畏的理化性質(zhì)及參考文獻(xiàn)［3-7］的基礎(chǔ)上，提出采用無水Na2SO4把生物檢材拌成干沙狀以后，用氯仿-丙酮（6：1）進(jìn)行提取分離的樣品前處理方法，經(jīng)過探究取得滿意的結(jié)果。

1　材料與方法

1.1主要儀器和試劑

GC/MS：Agilent7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；配有電子轟擊離子源（EI）及Nest11.0化學(xué)圖譜庫敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL，購自司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所）20 μg/mL敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)工作對照溶液：準(zhǔn)確移取適量的0.2 mL上述1.0 mg/mL的敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后用色譜純甲醇定容在10 mL的容量瓶，甲醇（色譜純）、氯仿（分析純）、丙酮（分析純）。

1.2檢材

待測樣品：某男性心血、肝臟、胃及胃內(nèi)容物。

1.3實驗方法

1.3.1GC/MS儀器條件離子源：EI源，離子化能量：70 eV，離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；色譜柱：HP-5 ms 30 m×0.25 mm×0.25 μm。進(jìn)樣口溫度：280℃；傳輸線溫度：250℃；程序升溫：初溫80℃保持3 min，以30℃/min的速率升溫到300℃，保持8 min；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比：10：1；載氣：氦氣，純度：＞99.99%，流速：1.0 mL/min。

1.3.2樣品前處理分別取送檢該男性心血5 mL，該男性肝臟10 g（剪碎），該男性胃及胃內(nèi)容物10 g（剪碎），分別置于3個瓷坩堝中，均加入適量的無水Na2SO4把生物檢材拌成干沙狀以后，均用20 mL的氯仿-丙酮（6：1）進(jìn)行提取分離，把提取液分別放置于3個瓷坩堝中，殘渣仍然用20 mL的氯仿-丙酮（6：1）進(jìn)行第2次提取分離，并把第2次的提取液合并于同一個瓷坩堝中，把瓷坩堝放在55℃水浴鍋上揮干，取下瓷坩堝，冷卻至室溫。

用約1 mL色譜純甲醇少量多次地洗滌上述瓷坩堝中的萃取物質(zhì)，并把洗滌液置于進(jìn)樣瓶中，分別得到待測心血、待測肝臟、待測胃及胃內(nèi)容物。

1.3.3分析檢測將空白對照樣品（色譜純甲醇），20 μg/ mL敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)工作對照溶液，該男性的待測心血，待測肝臟、待測胃及胃內(nèi)容物，分別進(jìn)樣1 μL，用GC/MS在1.3.1條件進(jìn)行分離分析。

2　結(jié)果與討論

2.1對照樣品的檢驗及討論

經(jīng)檢測空白對照樣品TIC圖中4.895 min處未出峰，說明色譜純甲醇可以作為空白試劑使用，不影響測定，可排除假陽性干擾的可能。圖1所示，敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)工作對照液的TIC圖中，4.895 min出現(xiàn)敵敵畏的色譜峰，而且峰形很好基本成正態(tài)分布，說明所建立的分離分析方法適用于敵敵畏的檢測。圖2為敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)工作液TIC圖中色譜峰所對應(yīng)的質(zhì)譜圖（MS圖），MS圖中顯示了敵敵畏的特征離子碎片為：79，109及185，與Nest11.0化學(xué)圖譜庫中敵敵畏的匹配度很高＞95%，進(jìn)一步確證為敵敵畏，而且GC/MS分離分析方法還給出了敵敵畏的分子結(jié)構(gòu)，使定性更加準(zhǔn)確、可靠。

圖1　敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)工作對照液的TIC圖

圖2　敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)工作對照液的MS圖

2.2待測樣品檢測及討論

圖3所示為該男生待測心血的TIC圖，在TIC圖中4.904 min出現(xiàn)敵敵畏的色譜峰，圖4為該男生待測心血TIC圖中色譜峰所對應(yīng)的質(zhì)譜圖（MS圖），MS圖中顯示了敵敵畏的特征離子碎片為：79，109及185，與Nest11.0化學(xué)圖譜庫中敵敵畏的匹配度很高＞95%，可以得出該男生心血中檢出敵敵畏的結(jié)論。圖5、圖6、圖7、圖8、分別為該男生待測肝臟及待測胃及胃內(nèi)容物的TIC圖及所對應(yīng)的MS圖，待測肝臟在4.895 min處出現(xiàn)敵敵畏的色譜峰，待測胃及胃內(nèi)容物在4.93 min處也出現(xiàn)敵敵畏的色譜峰；在MS圖中待測肝臟及待測胃及胃內(nèi)容物都顯示敵敵畏的特征離子碎片為：79，109及185，與Nest11.0化學(xué)圖譜庫中苯巴比妥的匹配度很高＞95%，這都能成為該男性待測肝臟及待測胃及胃內(nèi)容物中檢出敵敵畏的直接依據(jù)。

圖3　該男生待測心血的TIC圖

圖4　該男生待測心血的MS圖

圖5　待測肝臟的TIC圖

圖6　待測肝臟的MS圖

圖7　待測胃及胃內(nèi)容物的TIC圖

圖8　待測胃及胃內(nèi)容物的MS圖

2.3檢測結(jié)果的討論

經(jīng)案情調(diào)查，該男生（男，43歲）某企業(yè)工人，性格內(nèi)向，不擅長與人交流，2016年3月因企業(yè)不景氣，被告知下崗，在家里閑著整天悶悶不樂，2016年3月20日，因家庭瑣事與其妻發(fā)生了口角，因此產(chǎn)生了輕生的念頭，就到市場上買來農(nóng)藥敵敵畏服下，經(jīng)搶救無效死亡。檢測結(jié)果與案情相符，進(jìn)一步說明檢測結(jié)果真實、可靠，所建立的方法可用于法醫(yī)毒物分析的檢案鑒定。

3　結(jié)論

敵敵畏屬于有機(jī)磷酸酯類殺蟲劑，由于分子結(jié)構(gòu)中磷酸酯不穩(wěn)定，在水溶液中容易分解，因此不適于用液-液萃取法來對生物檢材進(jìn)行前處理。該文采用無水Na2SO4把生物檢材拌成干沙狀以后，用氯仿-丙酮（6：1）進(jìn)行提取分離，克服了液-液萃取會造成敵敵畏水解的問題。另一方面，該文建立的生物樣品前處理方法操作簡單，耗時少，檢測結(jié)果顯示基質(zhì)干擾小，分離效果好，特別適用于臨床及司法鑒定中快速檢測的要求，期望所建方法能為同行提供一定的參考。

［1］王吉祥，向文娟，王亞琴，等.GPC-GC/MS測定火腿中多種有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留［J］.食品研究與開發(fā)，2014，35（2）：77-80.

［2］廖林川，王玉瑾.法醫(yī)毒物分析［M］.4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：174-190.

［3］李晶玉，劉慶功.有機(jī)磷農(nóng)藥分析檢測方法進(jìn)展.［J］.安徽農(nóng)學(xué)通報，2008，14（13）：184-185.

［4］馮翠玲，周永新，吳鶴松，等.血漿中有機(jī)磷農(nóng)藥的固相萃取-氣相色譜法測定［J］.分析測試學(xué)報，2001，20（3）：78-80.

［5］趙維良，祝明，陳碧蓮，等.PSA-LC-MS/MS法測定菊花藥材中12種農(nóng)藥殘留［J］.藥物分析雜志，2014，34（3）：447-452.

［6］頓咪娜，劉莉，王永朝，等.固相萃取-氣相色譜法測定飲用水中5種有機(jī)磷農(nóng)藥［J］.化學(xué)分析計量，2016，25（2）：12-15.

［7］王駿，胡梅，祝建華.毛細(xì)管氣相色譜法測定十八種農(nóng)藥的有效成分［J］.山東輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報，2006，20（3）：59-61.

Method of GC-MS in Detecting the Dichlorvos in the Biological Samples

XIE Run-fang1，LI Yu-wen2，XIE Ji-ming3，YANG Kai-run1，WANG Xin1，DONG Ji-pan1
1.School of Forensic Medicine，Kunming Medical University，Kunming，Yunnan Province，650500 China；2.Department of Endocrinology，Third People's Hospital of Yunnan Province，Kunming，Yunnan Province，650011 China；3.Department of Cardio-Thoracic Surgery，Third People's Hospital of Yunnan Province，Kunming，Yunnan Province，650011 China

Objective To establish a simple，rapid，accurate and reliable method of detecting the dichlorvos in the biological samples by GC-MS.Methods The biological samples were given extraction and isolation by chloroform-acetone（6：1）after they were mixed in the dry sand shape，the samples were given isolation and analysis by GC-MS，and were given qualitative analysis by the dichlorvos retention time in the total ion current chromatogram（TIC picture）and corresponding characteristic ion fragments in the mass spectrum picture.Results The method is easy to operate with small background interference，good isolation effect and rapid analysis speed，and the retention time of dichlorvos was 4.895min and the characteristic ion fragments（m/z）were 79，109 and 185.Conclusion The result of the method in detecting the dichlorvos in the biological samples in the forensic toxicological analysis is satisfactory.

Forensic toxicological analysis；GC-MS；Biological samples；Dichlorvos

R446.1

A

1672-5654（2016）09（a）-0105-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.25.105

2016-06-06）

云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學(xué)應(yīng)用基礎(chǔ)研究聯(lián)合專項資金項目（2014FB013；2016FZ007）。

解潤芳（1974-），女，云南玉溪人，碩士，講師研究方向：毒藥物分析。

解繼明（1980-），男，云南玉溪人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：心胸外科學(xué)，E-mail：1196531552@qq.com。