• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同多糖對凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白流變性的影響

    2016-10-18 06:03:44王小紅熊光權吳文錦丁安子
    食品科學 2016年18期
    關鍵詞:肌球蛋白肌原纖維抗凍

    邵 穎,王小紅,熊光權,李 新,吳文錦,喬 宇,丁安子,廖 李,王 俊,汪 蘭,*

    (1.湖北省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術研究所,湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心農(nóng)產(chǎn)品加工研究分中心,湖北 武漢 430064;2.華中農(nóng)業(yè)大學食品科學技術學院,湖北 武漢 430070)

    不同多糖對凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白流變性的影響

    邵穎1,2,王小紅2,熊光權1,李新1,吳文錦1,喬宇1,丁安子1,廖李1,王俊1,汪蘭1,*

    (1.湖北省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術研究所,湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心農(nóng)產(chǎn)品加工研究分中心,湖北 武漢 430064;2.華中農(nóng)業(yè)大學食品科學技術學院,湖北 武漢 430070)

    以草魚肌原纖維蛋白作為研究對象,添加魔芋葡甘聚糖降解產(chǎn)物及葡聚糖(7 000 D,T7),測定草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和流變性質(zhì)的變化,比較不同多糖對凍藏過程中肌原纖維蛋白的冷凍保護效果,探討不同多糖對草魚肌原纖維蛋白結構的冷凍保護機制。研究發(fā)現(xiàn),隨凍藏時間的延長,空白、酶解魔芋葡甘聚糖、輻解魔芋葡甘聚糖、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度和流變儲能模量(G’)均下降,與凍藏過程草魚肌原纖維蛋白SDS-PAGE的變化基本吻合。同時,添加上述不同多糖各組草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度和G’均高于空白組。研究結果表明:T7、酶解魔芋葡甘聚糖及輻解魔芋葡甘聚糖通過保護副肌球蛋白和肌球蛋白輕鏈,延緩草魚肌原纖維蛋白的變性,其中,輻解魔芋葡甘聚糖效果最強,T7次之,酶解魔芋葡甘聚糖最弱,但都具有明顯的冷凍保護作用。

    肌原纖維蛋白;多糖;冷凍保護;十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳;流變

    隨著中國漁業(yè)經(jīng)濟保持良好的發(fā)展態(tài)勢,淡水魚產(chǎn)量持續(xù)升高,魚類食品加工業(yè)不斷發(fā)展。目前,為了實現(xiàn)魚糜的長期保藏,工業(yè)化生產(chǎn)通常采用冷凍貯藏的方式,而肌原纖維蛋白作為魚糜的主要功能性成分[1],極易發(fā)生冷凍變性,從而導致功能性的降低和品質(zhì)的劣化[2],嚴重影響消費者對口感和營養(yǎng)成分的需求,因而常常添加抗凍劑以降低冰點、提高抗凍能力,在一定程度上抑制蛋白質(zhì)冷凍變性。現(xiàn)代工業(yè)生產(chǎn)上廣泛采用商業(yè)抗凍劑(4%山梨糖醇+4%蔗糖),但是,該抗凍劑甜度和熱量較高,不符合現(xiàn)代生活中人們對健康飲食的追求[3],因而關于開發(fā)低甜度、低熱量抗凍劑的研究有待進一步深入。本課題組在前期研究的基礎上,篩選出β-葡聚糖酶酶解魔芋葡甘聚糖(konjac glucomannan,KGM)、輻解KGM及葡聚糖(7 000 D,T7)這3 種多糖,發(fā)現(xiàn)它們對肌原纖維蛋白具有優(yōu)良的冷凍保護作用,現(xiàn)從肌原纖維蛋白的結構角度探討上述3 種多糖的冷凍保護作用機制。

    蛋白質(zhì)作為參與生理活動和構成生物體的必要物質(zhì),其流變性及凝膠性等流變學性質(zhì)會影響食品的感官特性[4]及其在加工、運輸或貯藏過程中的理化特性。由于肌原纖維蛋白是魚糜蛋白的主要成分,因而冷凍草魚魚糜的品質(zhì)及后續(xù)加工性能高低與凍藏過程中肌原纖維蛋白發(fā)生聚集變性的程度密切相關。尤其,肌原纖維蛋白凝膠化過程中的流變特性反映蛋白質(zhì)的品質(zhì)[5],其中,儲能模量(G’)作為凝膠材料的彈性反映,反映了蛋白質(zhì)在加熱過程中形成三維彈性凝膠網(wǎng)絡結構的變化情況以及展幵和聚集過程。Liu Ru等[6]研究表明不同離子強度、蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度和溫度條件下魚肉肌球蛋白的靜態(tài)流變性質(zhì)差異顯著。Westphalen等[7]研究發(fā)現(xiàn)由于蛋白質(zhì)凝膠的逐步形成,豬肉肌原纖維蛋白在加熱至40 ℃后,G’不斷增加。

    目前,蛋白水解物、酶解物及低聚糖類等抗凍劑對魚糜的冷凍保護作用已成為近年來的研究熱點[1],且主要研究其對魚糜蛋白總巰基含量、二硫鍵含量和Ca2+-ATPase活性等理化指標及質(zhì)構特性、持水力等凝膠性能的影響。另外,許多研究探討了魚糜蛋白的變性機制,發(fā)現(xiàn)海藻糖、木糖、聚葡萄糖及乳酸鈉等對蛋白質(zhì)凝膠特性及理化性質(zhì)影響顯著,有助于抑制冷凍變性,可作為傳統(tǒng)商業(yè)抗凍劑的替代物[1,8]。但是對β-葡聚糖酶酶解KGM、輻解KGM及T7等不同多糖鮮有研究,本實驗以草魚肌原纖維蛋白為研究對象,測定草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和流變性能的變化,比較不同多糖對凍藏過程中肌原纖維蛋白的冷凍保護效果,為開發(fā)新型低甜度、低熱量抗凍劑提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1材料與試劑

    1 450~1 500 g的新鮮健康草魚(Ctenopharyngodon idellus,2 h內(nèi)致死) 湖北省武漢市武商量販農(nóng)科城店。

    pH值校正緩沖液(pH 4.00、6.86、9.18;25 ℃)邦西儀器科技(上海)有限公司;牛血清蛋白(生化試劑)、β-葡聚糖(200 000 U/g)(化學純) 美國BioSharp公司;NaCl、EDTA、MgCl2·6H2O、KH2PO4、NaOH、HCl、Na2HPO4·12H2O、KCl、雙縮脲試劑及葡聚糖T7(含鹽量0%)(均為分析純) 國藥集團化學試劑有限公司;KGM(化學純) 湖北強森魔芋科技有限公司。

    1.2儀器與設備

    AR2000ex流變儀 美國TA儀器公司;GL-21M高速冷凍離心機 湖北賽特湘儀離心機儀器有限公司;XHF-D型高速分散器 寧波新芝生物科技股份有限公司;722G可見分光光度計 上海精密科學儀器有限公司;鈷60γ射線輻照裝置、pH-5A酸度計 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;電子天平 賽多利斯科學儀器(北京)有限公司。

    1.3方法

    1.3.1原料處理

    每條魚取背部即自魚體兩側鰓蓋骨后至尾鰭前肌肉作為樣品進行測定[9]。將魚宰殺去掉魚頭、魚皮和內(nèi)臟,用水將其沖洗干凈,手工采取側線上方、背鰭附近的白肉,將其切成魚塊(2 mm×2 mm×2 mm),放于自封袋(120 mm×170 mm)中,置于4 ℃冰箱中冷藏,備用。

    1.3.2肌原纖維蛋白的提取

    參照劉紅彥[10]的方法從魚肉肌肉中提取肌原纖維蛋白,并適當修改。將新鮮魚肉切碎,加入4 倍體積的冷50 mmol/L磷酸鹽緩沖液(1 mmol/L EDTA、2 mmol/LMgCl2、0.1 mol/L NaCl,pH 7.0),高速勻漿2 min,在轉速8 000×g、溫度4 ℃條件下冷凍離心15 min,棄除上清液,收集沉淀,重復上述步驟3 次;向沉淀中加入4 倍體積的冷0.1 mol/L NaCl溶液,高速勻漿30 s,調(diào)整混合液的pH值為6.25,在轉速8 000×g、溫度4 ℃條件下冷凍離心15 min,棄除上清液,收集沉淀,重復2 次,收集的沉淀為肌原纖維蛋白。

    1.3.3KGM降解產(chǎn)物的制備

    輻解KGM(分子質(zhì)量1.209×104D[11],純度100%,含鹽量0%)的制備:取5 g KGM精粉,以料液比1∶60(g/mL)溶解于蒸餾水中,在靜態(tài)常溫條件下進行20 kGy降解,然后冷凍干燥,粉碎備用[12];β-葡聚糖酶酶解KGM(分子質(zhì)量2.093×104D[11],純度100%,含鹽量5.75×10-2.5%)的制備:取5 g KGM精粉,以料液比1∶60(g/mL)溶解于稀鹽酸溶液(pH 5.5)中,50 ℃水浴加熱,加入β-葡聚糖酶,緩慢攪拌至均勻分散,酶解100 min,然后用1 mol/L的NaOH溶液中和,干燥后粉碎備用[12]。

    1.3.4樣品制備

    稱取0.25 g酶解KGM(0.5%)、0.25 g輻解KGM(0.5%)及0.25 g T7(0.5%),分別加入25 g 50 mmol/L的磷酸鹽緩沖液(含0.6 mol/L NaCl,pH 6.25),溶解均勻,再分別加入至25 g肌原纖維蛋白沉淀中,均質(zhì),然后分裝至50 mL離心管中,共3 份,每份約15 g,放置于-18 ℃冰箱中貯藏,分別在0、10、75 d后取出進行分析。空白組不添加任何糖類,陽性對照組添加商業(yè)抗凍劑,即2.0 g山梨糖醇(4.0%)與2.0 g蔗糖(4.0%)的復配物。

    1.3.5蛋白質(zhì)量濃度測定

    向樣品中加入25 倍體積的50 mmol/L磷酸鹽緩沖液(含0.6 mol/L NaCl,pH 6.25),高速勻漿2 min,4 ℃放置1 h,得到肌原纖維蛋白溶液[10]。參照周茹等[13]的方法,采用雙縮脲法測定蛋白質(zhì)量濃度,標準蛋白為牛血清白蛋白。標準曲線為Y=0.043 7X+0.015 4,相關系數(shù)R2=0.999 4,對照標準曲線求得樣品蛋白質(zhì)量濃度。

    1.3.6SDS-PAGE測定

    參照Laermmli[14]、郭殼君[15]等的方法,并適當修改:取干凈的微量離心管,將樣品按體積比1∶1加入SDS緩沖液(2 倍配比),沸水浴5 min后取出。吸取10 μL蛋白樣品及5 μL標準分子質(zhì)量蛋白Marker,輕輕加入梳孔中,然后向內(nèi)槽中加入適量的電泳緩沖液(1 倍配比),選擇恒壓條件,積層膠(4%)中于60 V電壓跑膠,待樣品跑成一條直線且進入分離膠(10%)后,調(diào)節(jié)電壓至100 V,繼續(xù)電泳,直到溴酚藍跑出凝膠底部,關閉電源。將膠從玻璃板取出后置于干凈的玻璃培養(yǎng)皿中,加入適量的考馬斯亮藍染色液 R-250,置于搖床過夜染色。染色完畢后,回收染色液,加入適量脫色液,置于搖床脫色,換液數(shù)次,直至凝膠上的背景色完全脫去,然后置于濕潤的白板上,使用凝膠成像儀照相。

    1.3.7流變性能測定

    參照劉澤宇等[16]的方法,并適當修改:采用直徑40.00 mm、角度0 °的平行板進行測定。取2 mL樣品上樣,控制夾縫高度為1 mm,刮除四周溢出的樣品,蓋住避免外周水分的蒸發(fā)。溫度掃描條件:頻率0.1 Hz,應變1%,程序升溫范圍20~90 ℃,升溫速率1 ℃/min,在90 ℃處恒溫2 min后,以5 ℃/min的降溫速率降溫至20 ℃后結束,然后進行該樣品的頻率掃描。頻率掃描條件為:頻率0.1~10 Hz,應變1%,恒溫20 ℃。每個樣品測定4~5 次,記錄肌原纖維蛋白G’,繪制升溫和降溫過程中G’隨溫度T變化以及頻率掃描過程中G’隨頻率f變化的曲線圖。

    1.4數(shù)據(jù)分析

    數(shù)據(jù)分析采用數(shù)學軟件SAS 8.0和Microsoft Excel,結果采用±s形式表示,差異顯著性水平為P<0.05。

    2 結果與分析

    2.1肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度的變化

    表1 凍藏過程中不同多糖作用條件下的草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度Table1 Effect of different-molecular-weight polysaccharides on the concentration of grass carp myofibrillar protein during frozen storage mg/mL

    如表1所示,隨時間延長,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度均在一定程度上降低。其中,空白組、輻解KGM組和T7組凍藏0 d與凍藏10 d對應肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度變化不顯著(P>0.05),但是凍藏時間延長至75 d時,變化顯著(P<0.05);酶解KGM組凍藏0、10 d及75 d時肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度變化均顯著(P<0.05);商業(yè)抗凍劑組凍藏0、10、75 d時肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度變化顯著(P<0.05),但呈現(xiàn)微弱的波動性變化。當凍藏0 d及10 d時,酶解KGM、輻解KGM及T7各組草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度均高于空白組及商業(yè)抗凍劑組,且差異顯著(P<0.05),凍藏0 d時空白組與商業(yè)抗凍劑組相近,差異不顯著(P>0.05),而凍藏10 d時商業(yè)抗凍劑組高于空白組,差異顯著(P<0.05);當凍藏75 d時,酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度均高于空白組,差異顯著(P<0.05),酶解KGM及輻解KGM兩組均低于商業(yè)抗凍劑組,差異顯著(P<0.05),T7組與商業(yè)抗凍劑組相近,差異不顯著(P>0.05)。凍藏過程中蛋白質(zhì)量濃度的降低源于蛋白質(zhì)的冷凍變性。楊芳[17]研究指出冰晶的形成會導致蛋白質(zhì)發(fā)生冷凍變性,主要表現(xiàn)在結合水發(fā)生脫離,蛋白質(zhì)容易聚集,并且伴隨冰晶逐漸增大,細胞液外流加劇。在添加多糖后,肌原纖維蛋白最終質(zhì)量濃度高于空白組可能是由于多糖的冷凍保護作用,即多糖一方面排除蛋白質(zhì)表面的穩(wěn)定溶質(zhì),促使其優(yōu)先水合[18],另一方面與蛋白質(zhì)的功能基團以離子鍵或氫鍵結合,取代極性基團附近的水分子,避免氫鍵連接點的直接暴露,進而穩(wěn)定蛋白質(zhì)的高級結構。Macdonald[19]、Carvajal[20]等研究認為多糖可以形成玻璃態(tài)結構或固定水,從而穩(wěn)定蛋白質(zhì),發(fā)揮冷凍穩(wěn)定劑的作用。綜上,酶解KGM、輻解KGM及T7對凍藏過程中的草魚肌原纖維蛋白皆具有一定的冷凍保護作用,且T7效果最佳,與傳統(tǒng)商業(yè)抗凍劑接近。

    2.2肌原纖維蛋白SDS-PAGE結果

    圖1 添加不同多糖的草魚肌原纖維蛋白SDS-PAGE圖Fig.1 SDS-PAGE patterns of grass carp myofibrillar protein with different-molecular-weight polysaccharides added

    如圖1所示,草魚肌原纖維蛋白是一個較為復雜的蛋白體系,在SDS-PAGE圖譜上可清晰分辨出約10 條蛋白帶,其中主要條帶為肌球蛋白重鏈(220 kD)、副肌球蛋白(100 kD)、肌動蛋白(44.3 kD)、原肌球蛋白(37 kD)、肌原蛋白(33 kD)以及3 種肌球蛋白輕鏈(15、17、24 kD),結果與Lametsch[21]、Mignino[22]等研究基本一致。另外,還有一些分子質(zhì)量在72~95 kD間的明顯蛋白條帶,而肌球蛋白重鏈和肌動蛋白為最主要的蛋白條帶。電泳條帶顏色深淺在一定程度上反映肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度高低,觀察發(fā)現(xiàn)以上電泳條帶深淺與肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度相吻合。

    在凍藏0 d時,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組蛋白條帶間沒有太大差別。但是,當凍藏時間延長至10 d及75 d時,上述各組蛋白條帶間出現(xiàn)明顯差異。隨凍藏時間的延長,空白組蛋白條帶整體變窄變淺,其中,肌球蛋白重鏈、肌球蛋白輕鏈、副肌球蛋白及肌動蛋白變化明顯,最后肌球蛋白輕鏈甚至消失。肌球蛋白重鏈變窄可能是因為大分子的肌球蛋白重鏈降解為小分子的蛋白質(zhì)從而導致肌球蛋白重鏈量的減少。同時,分子質(zhì)量在72~95 kD間蛋白條帶變淺,肌動蛋白及原肌球蛋白的條帶變窄,且靠近原肌球蛋白處有新的小分子質(zhì)量條帶出現(xiàn),說明原肌球蛋白和肌動蛋白可能發(fā)生部分變性,蛋白質(zhì)在一定程度上發(fā)生降解。相比于空白組,凍藏10 d及75 d時酶解KGM組蛋白條帶整體更窄,凍藏75 d時輻解KGM及T7兩組蛋白條帶中肌球蛋白重鏈及肌動蛋白均寬于空白組,但是凍藏10 d時原肌球蛋白及肌原蛋白更窄;在凍藏過程中商業(yè)抗凍劑組蛋白條帶整體寬于空白組,且靠近原肌球蛋白處沒有新的小分子質(zhì)量條帶出現(xiàn),而酶解KGM、輻解KGM及T7各組均出現(xiàn)。另外,最為突出的是酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組副肌球蛋白及肌球蛋白輕鏈顏色均明顯深于空白組,說明酶解KGM、輻解KGM及T7對凍藏過程中的草魚肌原纖維蛋白尤其對副肌球蛋白及肌球蛋白輕鏈具有有效的冷凍保護作用。

    2.3肌原纖維蛋白流變性能變化

    2.3.1升溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’的變化

    流變學特性可以代表蛋白質(zhì)在升溫過程中的相關變化,其中,肌原纖維蛋白G’的改變表明蛋白質(zhì)彈性凝膠網(wǎng)絡形成速率的變化,反映結構的打開、折疊和凝集情況[23]。

    圖2 升溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’的變化Fig.2 Changes in G’ of grass carp myofibrillar protein in heating process

    圖2a顯示,當凍藏0 d時,隨著溫度的升高,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白G’總體變化趨勢相同。當溫度由20 ℃上升至40 ℃時,G’升高但變化平緩,其間,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應最高G’分別為618(33 ℃)、559.9(37.7 ℃)、823.1(38.7 ℃)、732.4 Pa(36 ℃)及642.05 Pa(39.7 ℃);在40~50 ℃時,G’迅速下降且在50 ℃左右到達最低值,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應最低G’分別為125(48.3 ℃)、142.75(48.3 ℃)、210.9(47.9 ℃)、159.05 Pa(47.9 ℃)及214.15 Pa(49.6 ℃),在50~65 ℃時呈現(xiàn)明顯的上升趨勢,在溫度上升至90 ℃的過程中,G’緩慢升高最終趨于平緩。

    圖2b顯示,凍藏10 d時,隨著溫度的升高,空白、酶解KGM、輻解KGM及T7各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白G’總體變化趨勢相同。當溫度由20 ℃上升至35 ℃左右時,G’基本保持不變,然后略微下降,當溫度到達36 ℃附近時,空白、酶解KGM、輻解KGM及T7各組出現(xiàn)最低G’分別為43.67(36.3 ℃)、48.17(35.6 ℃)、89.18 Pa(38.7 ℃)及69.27 Pa(36.7 ℃);當溫度升高至40 ℃時,G’上升且在40 ℃左右到達峰頂,空白、酶解KGM、輻解KGM及T7各組對應最高G’分別為76.51(40.1 ℃)、77(40.1 ℃)、122.9 Pa(40.4 ℃)及 101.85 Pa(40.1 ℃),在40~48 ℃左右時,G’下降至最低值,空白、酶解KGM、輻解KGM及T7各組對應最低G’分別為29.06(47.9 ℃)、43.1(48.6 ℃)、77.6 Pa(47.6 ℃)及54.43 Pa(47.9 ℃),當溫度上升至65 ℃前,G’迅速上升,在溫度上升至90 ℃的過程中,G’緩慢升高。在溫度上升至90 ℃的過程中,G’緩慢升高趨于平緩。但是,商業(yè)抗凍劑組在升溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’的變化與上述樣品組存在明顯差別。在20~40 ℃之間,G’基本保持不變,在溫度40~50 ℃時,G’迅速下降至最低值88.79 Pa(50 ℃),當溫度上升至65 ℃前,G’迅速上升,在溫度上升至90 ℃的過程中,G’緩慢升高。

    圖2c顯示,凍藏75 d時,隨著溫度的升高,酶解KGM、輻解KGM及T7各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白G’總體變化趨勢相同。當溫度由20 ℃上升至33 ℃左右時,G’緩慢上升至第一個峰頂,此時酶解KGM、輻解KGM及T7各組對應草魚肌原纖維蛋白G’為4.749(33.6 ℃)、37.79 Pa(32.6 ℃)及11.25 Pa(34 ℃),然后緩慢下降,當溫度接近37 ℃時出現(xiàn)峰谷,此時酶解KGM、輻解KGM及T7各組對應草魚肌原纖維蛋白G’為3.693(37 ℃)、32.14 Pa(36.7 ℃)及9.487 Pa(37 ℃),當溫度到達36 ℃附近時,空白、酶解KGM、輻解KGM及T7各組出現(xiàn)最低G’分別為43.67(36.3 ℃)、48.17(35.6 ℃)、89.18 Pa(38.7 ℃)及69.27 Pa(36.7 ℃);當溫度升高至40 ℃時出現(xiàn)第2個峰頂,此時KGM、輻解KGM及T7各組對應G’為4.569(40.1 ℃)、33.37 Pa(39.8 ℃)及12.55 Pa(40.4 ℃),然后緩慢下降,直至47 ℃左右后G’緩慢上升。但是,空白組及商業(yè)抗凍劑組在升溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’的變化與上述樣品組存在明顯差別。對于空白組,在20~33 ℃之間,G’緩慢上升至第一個峰頂,此時G’為7.683 Pa(33.6 ℃),在溫度上升至48 ℃的過程中,G’緩慢下降,最后在溫度上升至90 ℃期間G’再次緩慢上升趨于穩(wěn)定。對于商業(yè)抗凍劑組,在20~40 ℃之間,G’緩慢下降至第一個峰谷,此時G’為63.33 Pa(40.1 ℃),當溫度升高至44 ℃,G’上升至第一個峰頂78.54Pa(43.8 ℃),然后迅速下降至第2個峰谷,此時G’為37.46 Pa(49.7 ℃),之后迅速上升直至溫度到達70 ℃,最后在70~90 ℃之間,G’上升但變化微弱。

    升溫過程中肌原纖維蛋白G’的變化曲線反映了蛋白質(zhì)開始變性、發(fā)生聚集及形成空間網(wǎng)絡的過程[24]。圖2a、b中,在溫度由20 ℃上升至30 ℃左右時,G’的上升可能由于肌原纖維蛋白在低溫條件下發(fā)生的相互作用[25]。G’于40 ℃附近出現(xiàn)一個峰可能是因為肌球蛋白開始形成網(wǎng)絡結構,而圖2c中,G’于30~40 ℃之間出現(xiàn)兩個峰一方面因為變性肌球蛋白頭部與解旋肌球蛋白尾部的結合[26],另一方面歸于肌球蛋白頭部和尾部熱穩(wěn)定性不同,因此發(fā)生熱變性形成網(wǎng)絡結構的溫度存在一定差異。隨后,在40~50 ℃之間G’迅速下降一方面因為肌球蛋白發(fā)生解螺旋,從而破壞蛋白質(zhì)網(wǎng)絡結構的完整性[27]并導致流動性增強[27],另一方面因為肌動球蛋白復合物的解體[7],還可能因為加熱激活蛋白酶,肌球蛋白量降低,更容易擊破松散的凝膠網(wǎng)絡[25]。當溫度由50 ℃上升至65 ℃左右時,G’再次升高是由于超過變性溫度后分子展開,活躍基團暴露[28],解螺旋蛋白質(zhì)開始聚集、沉淀及交聯(lián),再次構建空間網(wǎng)絡結構[29],這主要依靠二硫鍵、疏水相互作用及肌球蛋白的不可逆交聯(lián)[30]。最后,溫度在上升至90 ℃過程中,G’上升意味著蛋白質(zhì)凝膠網(wǎng)絡隨著活性基團的暴露剛性增強。有研究發(fā)現(xiàn)草魚肌原纖維蛋白G’與溫度密切相關,在升溫過程中G’先上升(20~55 ℃),再下降(55~63 ℃),最后上升(63~85 ℃)[5,31],其中,G’的減小源于蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間的破壞,當?shù)鞍踪|(zhì)螺旋轉變?yōu)榫砬鸂顦嬒蠛?,半凝膠的流動性急劇增大,故而破壞蛋白質(zhì)網(wǎng)絡結構[32],與本實驗的結果基本吻合。

    當凍藏0 d時,在升溫過程(20~90 ℃)中草魚肌原纖維蛋白G’由高到低依次為:輻解KGM組>商業(yè)抗凍劑組>T7組>酶解KGM組>空白組,即加入不同相對分子質(zhì)量多糖的樣品彈性大小由高到低依次為:輻解KGM組>商業(yè)抗凍劑組>T7組>酶解KGM組>空白組;當凍藏10 d及75 d時升溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>輻解KGM組>T7組>酶解KGM組>空白組,即加入不同相對分子質(zhì)量多糖的樣品彈性大小由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>輻解KGM組>T7組>酶解KGM組>空白組。

    隨凍藏時間的延長,空白、酶解KGM、輻解KGM及T7各組對應草魚肌原纖維蛋白G’均下降,與各組凍藏過程草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度的變化基本吻合。不同樣品組在相同凍藏時間條件下,草魚肌原纖維蛋白G’大小與SDS-PAGE圖譜中蛋白條帶顏色深淺及寬度相關聯(lián)。肌球蛋白作為肌原纖維蛋白主要組成成分,其熱變性溫度在40 ℃左右,圖2中40 ℃附近各組峰值大小則與蛋白條帶中肌球蛋白條帶顏色深淺及寬度吻合;同一樣品組在不同凍藏時間下,草魚肌原纖維蛋白G’大小隨凍藏時間的延長整體逐漸減小,同時SDS-PAGE圖譜中蛋白條帶也呈現(xiàn)整體逐漸變淺變窄的趨勢,即二者相互吻合。觀察草魚肌原纖維蛋白G’發(fā)現(xiàn),商業(yè)抗凍劑作為陽性對照,效果明顯優(yōu)于酶解KGM、輻解KGM及T7這3 種多糖,這可能與商業(yè)抗凍劑的高添加量密切相關。但是,從上述現(xiàn)象中不難得出這3 種多糖對整個凍藏過程中的草魚肌原纖維蛋白皆起到一定的冷凍保護作用,且對照SDS-PAGE圖譜發(fā)現(xiàn)它們主要保護副肌球蛋白和肌球蛋白輕鏈。肌球蛋白輕鏈具有與肌動蛋白結合的能力及ATP酶活性[33-34],由于肌動蛋白無法單獨形成凝膠,只有與肌球蛋白輕鏈結合后,再與伸展的肌球蛋白形成蛋白質(zhì)凝膠網(wǎng)絡[35],故而肌球蛋白輕鏈在很大程度上決定肌原纖維蛋白凝膠的形成[33-34]。副肌球蛋白主要由α-螺旋組成,在冷凍變性時α-螺旋會部分轉化為β-折疊和無規(guī)則卷曲結構[36],蛋白質(zhì)構象的穩(wěn)定性和緊密程度大幅下降,在進一步解旋后,多肽鍵伸展,蛋白質(zhì)內(nèi)部疏水殘基暴露,疏水相互作用增強,同時巰基氧化成二硫鍵,導致蛋白質(zhì)相互聚合從而變性[37]。本課題組在前期研究的基礎上發(fā)現(xiàn),輻解KGM和酶解KGM通過穩(wěn)定α-螺旋和β-折疊保護蛋白質(zhì)二級結構從而延緩聚集變性[12]。由此,推測這3 種多糖可能保護副肌球蛋白的α-螺旋及肌球蛋白輕鏈,在一定程度上延緩副肌球蛋白的解螺旋及肌球蛋白輕鏈的重折疊,有利于保持蛋白質(zhì)結構的完整性,從而減小蛋白質(zhì)凝膠性能的損失,故而G’均高于空白組,即這3 種多糖對整個凍藏過程中的草魚肌原纖維蛋白皆起到一定的冷凍保護作用,其中,輻解KGM冷凍保護作用最強,T7次之,酶解KGM具有冷凍保護作用但是效果最弱。

    2.3.2降溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’的變化

    圖3 升溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’的變化Fig.3 Changes in G’ of grass carp myofibrillar protein in heating process

    圖3a顯示,當凍藏0 d時,隨著溫度的降低(由90 ℃下降至20 ℃),空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白G’均呈上升趨勢,說明低溫有利于肌原纖維蛋白凝膠形成,不同多糖組變化趨勢相同。在降溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’由高到低依次為:T7組>空白組>商業(yè)抗凍劑組>輻解KGM組>酶解KGM組,即加入不同相對分子質(zhì)量多糖的樣品彈性大小由高到低依次為:T7組>空白組>商業(yè)抗凍劑組>輻解KGM組>酶解KGM組。

    圖3b顯示,當凍藏10 d時,隨著溫度的降低,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白G′均呈上升趨勢,說明低溫有利于肌原纖維蛋白凝膠形成,不同多糖組變化趨勢相同。在降溫過程中草魚肌原纖維蛋白G′由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>酶解KGM組>T7組>輻解KGM組>空白組,即加入不同相對分子質(zhì)量多糖的樣品彈性大小由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>酶解KGM組>T7組>輻解KGM組>空白組。

    圖3c顯示,當凍藏75 d時,隨著溫度的降低,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白G’均呈上升趨勢,說明低溫有利于肌原纖維蛋白凝膠形成,不同多糖組變化趨勢相同。在降溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>T7組>酶解KGM組>輻解KGM組>空白組,即加入不同相對分子質(zhì)量多糖的樣品彈性大小由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>T7組>酶解KGM組>輻解KGM組>空白組。

    已有研究[25,28]發(fā)現(xiàn),在溫度由90 ℃下降至20 ℃過程中,草魚和雞肉肌原纖維蛋白G’一直上升,這意味著蛋白質(zhì)凝膠網(wǎng)絡在冷卻過程中增強。隨著凍藏時間的延長,同一樣品組在降溫過程中草魚肌原纖維蛋白G’下降,代表著蛋白質(zhì)凝膠網(wǎng)絡強度逐漸下降,但是,在相同凍藏時間條件下酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組G’均上升且基本皆高于空白組,說明酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑都能夠增強草魚肌原纖維蛋白凝膠網(wǎng)絡的強度。其中,商業(yè)抗凍劑作為陽性對照,效果明顯優(yōu)于酶解KGM、輻解KGM及T7這3 種多糖。但是,從上述現(xiàn)象中不難發(fā)現(xiàn)這3 種多糖對整個凍藏過程中的草魚肌原纖維蛋白皆起到一定的冷凍保護作用,且三者中T7冷凍保護作用最強,酶解KGM次之,輻解KGM具有冷凍保護作用但是效果最弱。

    2.3.3頻率掃描過程中草魚肌原纖維蛋白G′的變化

    圖4 頻率掃描過程中草魚肌原纖維蛋白G’的變化Fig.4 Changes in G’ of grass carp myofibrillar protein in frequency scanning process

    圖4a顯示,當凍藏0 d時,隨著頻率的升高(0.1~10 Hz),空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白G’總體變化趨勢相同且皆略有升高。在頻率掃描過程中草魚肌原纖維蛋白G′由高到低依次為:輻解KGM組>T7組>商業(yè)抗凍劑組>空白組>酶解KGM組,即加入不同相對分子質(zhì)量多糖的樣品彈性大小由高到低依次為:輻解KGM組>T7組>商業(yè)抗凍劑組>空白組>酶解KGM組。

    圖4b顯示,當凍藏10 d時,隨著頻率的升高,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白G’總體變化趨勢相同且皆略有升高。在頻率掃描過程中草魚肌原纖維蛋白G’由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>酶解KGM組>T7組>輻解KGM組>空白組,即加入不同相對分子質(zhì)量多糖的樣品彈性大小由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>酶解KGM組>T7組>輻解KGM組>空白組。

    圖4c顯示,當凍藏75 d時,隨著頻率的升高,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白G’總體變化趨勢相同且皆略有升高。在頻率掃描過程中草魚肌原纖維蛋白G’由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>T7組>酶解KGM組>輻解KGM組>空白組,即加入不同相對分子質(zhì)量多糖的樣品彈性大小由高到低依次為:商業(yè)抗凍劑組>T7組>輻解KGM組>酶解組>空白組。

    頻率掃描主要反映材料力學性能和頻率的關系,展示不明顯次級轉變的特性[38]。在相同凍藏時間條件下,各組G’在整個頻率掃描范圍內(nèi)皆呈單調(diào)性增大,與部分聚合物溶液在低頻率掃描時表現(xiàn)的黏彈性極為相似[39],很好地揭示了凝膠微觀結構的變化[40],另外,這意味著隨掃描頻率的升高,肌原纖維蛋白三維凝膠網(wǎng)絡的凝膠性能增強。隨著凍藏時間的延長,同一樣品組在頻率掃描過程中草魚肌原纖維蛋白G’下降,代表蛋白質(zhì)凝膠網(wǎng)絡強度逐漸下降,但是,酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組基本皆高于空白組,說明酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑都能夠增強草魚肌原纖維蛋白凝膠網(wǎng)絡的彈性。其中,商業(yè)抗凍劑作為陽性對照,效果明顯優(yōu)于酶解KGM、輻解KGM及T7這3 種多糖。但是,從上述現(xiàn)象中不難發(fā)現(xiàn)這3 種多糖對整個凍藏過程中的草魚肌原纖維蛋白皆起到一定的冷凍保護作用,且三者中T7冷凍保護作用最強,酶解KGM次之,輻解KGM具有冷凍保護作用但是效果最弱。

    3 結 論

    隨凍藏時間的延長,空白、酶解KGM、輻解KGM、T7及商業(yè)抗凍劑各組對應草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度和G’皆下降,與凍藏過程草魚肌原纖維蛋白SDS-PAGE條帶的變化基本吻合。同時,添加上述不同多糖各組草魚肌原纖維蛋白質(zhì)量濃度和G’均高于空白組,對照SDS-PAGE圖發(fā)現(xiàn)多糖主要保護副肌球蛋白和肌球蛋白輕鏈,延緩副肌球蛋白的解螺旋及肌球蛋白輕鏈的重折疊,減輕蛋白質(zhì)的冷凍變性,有利于保持蛋白質(zhì)結構的完整性,從而減小蛋白質(zhì)凝膠性能的損失。其中,輻解KGM、T7、酶解KGM效果依次減弱,但都對凍藏過程中的草魚肌原纖維蛋白具有一定的冷凍保護作用。

    [1] 楊振, 孔保華. 抗凍劑對冷凍魚糜蛋白理化和凝膠特性的影響綜述[J].食品科學, 2011, 32(23): 321-325.

    [2] 薛勇, 薛長湖, 李兆杰, 等. 海藻糖對凍藏過程中鳙肌原纖維蛋白冷凍變性的影響[J]. 中國水產(chǎn)科學, 2006, 13(4): 637-641. DOI:10.3321/j.issn:1005-8737.2006.04.020.

    [3] 張靜雅, 陸劍鋒, 林琳, 等. 鰱魚冷凍魚糜抗凍劑的復配研究[J]. 食品科學, 2012, 33(2): 127-132.

    [4] 陳復生, 郭興鳳. 蛋白質(zhì)化學與工藝[M]. 鄭州: 鄭州大學出版社, 2012.

    [5] XIA Xiufang, KONG Baohua, XIONG Youling, et al. Decreased gelling and emulsifying properties of myofibrillar protein from repeatedly frozen-thawed porcine longissimus muscle are due to protein denaturation and susceptibility to aggregation[J]. Meat Science,2010, 85(3): 481-486. DOI:10.1016/j.meatsci.2010.02.019.

    [6] LIU R, ZHAO S M, XIONG S B. Rheological properties of fish actomyosin and pork actomyosin solutions[J]. Journal of Food Engineering, 2008, 85(2): 173-179. DOI:10.1016/ j.jfoodeng.2007.06.031.

    [7] WESTPHALEN A, BRIGGS J, LONERGAN S. Influence of muscle type on rheological properties of porcine mypfibrillar protein during heat-induced gelation[J]. Meat Science, 2006, 72(4): 697-703.

    [8] 周愛梅, 龔翠, 曹環(huán), 等. 幾種新型抗凍劑對鯪魚魚糜蛋白抗凍效果研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2010, 31(11): 318-321.

    [9] 張延華, 馬國紅, 宋理平, 等. 4 種魚肉的基本成分及膠原蛋白含量分析[J]. 中國農(nóng)村小康科技, 2014, 4(9): 80.

    [10] 劉紅彥. 鯉魚肌肉中肌原纖維蛋白的性質(zhì)研究[D]. 天津: 天津商業(yè)大學, 2012: 10-11.

    [11] WANG L, XIONG G Q, PENG Y B , et al. The cryoprotective effect of different konjac glucomannan (KGM) hydrolysates on the glass carp (Ctenopharygodon idella) myofibrillar during frozen storage[J]. Food Bioprocess Technology, 2014, 7(12): 3398-3406. DOI:10.1007/ s11947-014-1345-3.

    [12] 汪蘭, 吳文錦, 喬宇, 等. 凍藏條件下魔芋葡甘聚糖降解產(chǎn)物對肌原纖維蛋白結構的影響[J]. 食品科學, 2015, 36(22): 244-249. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201522046.

    [13] 周茹, 倪渠峰, 林偉偉, 等. 肌原纖維蛋白溶解度對鹽離子濃度的依賴性[J]. 中國食品學報, 2015, 15(3): 32-39. DOI:10.16429/j.1009-7848.2015.03.005.

    [14] LAEMMLI U. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of the bacteriophage T4[J]. Nature, 1970, 227: 680-685. DOI:10.1038/227680a0.

    [15] 郭堯君. 蛋白質(zhì)電泳實驗技術[M]. 北京: 科學出版社, 2005.

    [16] 劉澤宇, 劉焱, 羅燦. 茶多酚對草魚魚肉蛋白質(zhì)流變學特性的影響[J].現(xiàn)代食品科技, 2015, 31(6): 50-58.

    [17] 楊芳. 阿根廷魷魚肌原纖維蛋白特性及其加工的研究[D]. 廈門: 集美大學, 2009. DOI:10.7666/d.y2164116

    [18] ARAKAWA T, TIMASHEFF S N. Stabilization of protein structure by sugars[J]. Biochemistry, 1982, 21(25): 6536-6544. DOI:10.1021/ bi00268a033.

    [19] MACDONALD G A, LANIER T. Carbohydrates as cryoprotectants for meats and surimi[J]. Food Technology, 1991, 45: 151-159.

    [20] CARVAJAL P A, MACDONALD G A, LANIER T. Cryostabilization mechanism of fish muscle proteins by maltodextrins[J]. Cryobiology,1999, 38(1): 16-26. DOI:10.1006/cryo.1998.2142 .

    [21] LAMETSCH R, ROEPSTORFF P, M?LLER H S, et al. Identification of myofibrillar substrates for calpain[J]. Meat Science, 2004, 68(4): 515-521. DOI:10.1016/j.meatsci.2004.03.018.

    [22] MIGNINO L A, PAREDI M E. Physico-chemical and functional properties of myofibrillar proteins from different species of molluscs[J]. LWT-Food Science and Technology, 2006, 39(1): 35-42. DOI:10.1016/j.lwt.2004.12.004.

    [23] XIONG Y L, BLANCHARD S P. Myofibrillar protein gelation: viscoelastic changes related to heating procedures[J]. Journal of Food Science, 1994, 59(4): 734-738. DOI:10.1111/j.1365-2621.1994. tb08115.x.

    [24] 彭曉蓓. 肌原纖維蛋白及其與脂肪替代品混合凝膠流變性與形成機制研究[D]. 南京: 南京財經(jīng)大學, 2012.

    [25] SUN Fengyuan, HUANG Qilin, HUA Ting, et al. Effects and mechanism of modified starches on the gel properties of myofibrillar protein from grass carp[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2014, 64: 17-24. DOI:10.1016/ j.ijbiomac.2013.11.019.

    [26] CAO Yungang, XIONG Youling L. Chlorogenic acidmediated gel formation of oxidatively stressed myofibrillar protein[J]. Food Chemistry, 2015, 180: 235-243. DOI:10.1016/ j.foodchem.2015.02.036.

    [27] SANO T, NOGUCHI S F, TAUCHIYA T. Dynamic viscoelastic behavior of natural actomyosin and myosin during thermal gelation[J]. Food Science, 1988, 53: 924-928. DOI:10.1111/j.1365-2621.1988. tb08987.x.

    [28] SUN Xiangdong, ARNTFIELD S D. Gelation properties of chicken myofibrillar protein induced by transglutaminase crosslinking[J]. Journal of Food Engineering, 2011, 107(2): 226-233. DOI:10.1016/ j.jfoodeng.2011.06.019.

    [29] 于巍, 周堅. 草魚鹽溶蛋白保水性及流變性質(zhì)的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2007, 33(10): 72-75.

    [30] LIU Qin, BAO Hairong, XI Chunrui, et al. Rheological characterization of tuna myofibrillar protein in linear and nonlinear viscoelastic regions[J]. Journal of Food Engineering, 2014, 121: 58-63. DOI:10.1016/j.jfoodeng.2013.08.016.

    [31] CHEN Hongsheng, DIAO Jingjing, LI Yuanyuan, et al. The effectiveness of clove extracts in the inhibition of hydroxyl radical oxidation-induced structural and rheological changes in porcine myofibrillar protein[J]. Meat Science, 2016, 111: 60-66. DOI:10.1016/ j.meatsci.2015.08.017.

    [32] 陳文博. 肌原纖維蛋白熱誘導凝膠形成機制研究[D]. 南京: 南京農(nóng)業(yè)大學, 2010.

    [33] 黃曉鈺, 余海虎. 冷藏期間淡水魚新鮮度變化的研究[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學學報, 1997, 18(3): 100-104.

    [34] JóNSDóTTIR R, óLAFSDóTTIR G, CHANIE E, et al. Volatile compounds suitable for rapid detection as quality indicators of cold smoked salmon (Salmo salar)[J]. Food Chemistry, 2008, 109(1): 184-195.

    [35] 王偉, 汪夢非, 姚遙, 等. 魔芋葡甘聚糖膠囊對鴨肉鹽溶性蛋白凝膠特性的影響[J]. 食品工業(yè)科技, 2013, 34(20): 144-148.

    [36] 曾淑薇, 李吉利, 熊善柏, 等. 磷酸鹽對草魚肌原纖維蛋白結構的影響[J]. 食品科學, 2014, 35(23): 48-51. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201423010.

    [37] 任麗娜. 白鰱魚肉肌原纖維蛋白冷凍變性的研究[D]. 無錫: 江南大學, 2014.

    [38] 張俐娜. 高分子物理近代研究方法[M]. 武漢: 武漢大學出版社, 2006.

    [39] 張玲. 膠原多肽在離子液體中的溶解及溶液流變性研究[D]. 濟南:山東輕工業(yè)學院, 2011.

    [40] CHING S H, BANSAL N, BHANDARI B. Rheology of emulsionfilled alginate microgel suspensions[J]. Food Research International,2016, 80: 50-60. DOI:10.1016/j.foodres.2015.12.016.

    Effect of Different Polysaccharides on the Rheology of Grass Carp Myofibrillar Proteins during Frozen Storage

    SHAO Ying1,2, WANG Xiaohong2, XIONG Guangquan1, LI Xin1, WU Wenjin1, QIAO Yu1, DING Anzi1, LIAO Li1, WANG Jun1, WANG Lan1,*
    (1. Farm Products Processing Research Sub-Center of Hubei Innovation Center of Agriculture Science and Technology,Institute of Agricultural Products Processing and Nuclear-Agricultural Technology, Hubei Academy of Agricultural Sciences,Wuhan 430064, China; 2. College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China)

    The study aimed to investigate the cryoprotective effect and mechanism of different polysaccharides on grass carp myofibrillar protein during frozen storage. Grass carp myofibrillar proteins added with 0.5% β-glucanase konjac glucomannan (KGM) hydrolysate, 0.5% irradiation degraded KGM and 0.5% dextran, respectively, were stored at -18 ℃ for 0, 10 d and 75 d. Changes in myofibrillar protein concentration, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) pattern and rheology were measured. Results showed that the concentration and storage modulus (G’) of grass carp myofibrillar protein added with nothing, β-glucanase KGM hydrolysate, irradiation degraded KGM, dextran T7 and a commercial antifreeze decreased with frozen storage time, which was in accordance with the changes in SDS-PAGE pattern during frozen storage. At the same time, the concentration and storage modulus (G’) of grass carp myofibrillar protein added with different polysaccharides were higher than those of the control. It was demonstrated that the cryoprotection of β-glucanase KGM hydrolysate, irradiated degraded KGM and dextran on grass carp myofibrillar proteins was achieved by protecting the alpha helix structure of vice myosin and myosin light chain. The cryoprotection of different polysaccharides was in the decreasing order: irradiation degraded KGM > dextran T7 > β-glucanase KGM hydrolysate.

    myofibrillar protein; polysaccharide; cryoprotective effect; SDS-PAGE; rheology

    10.7506/spkx1002-6630-201618048

    TS254.1

    A

    1002-6630(2016)18-0304-09

    邵穎, 王小紅, 熊光權, 等. 不同多糖對凍藏過程中草魚肌原纖維蛋白流變性的影響[J]. 食品科學, 2016, 37(18): 304-312. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201618048. http://www.spkx.net.cn

    SHAO Ying, WANG Xiaohong, XIONG Guangquan, et al. Effect of different polysaccharides on the rheology of grass carp myofibrillar proteins during frozen storage[J]. Food Science, 2016, 37(18): 304-312. (in Chinese with English abstract)DOI:10.7506/spkx1002-6630-201618048. http://www.spkx.net.cn

    2016-03-16

    武漢市青年科技晨光計劃項目(2015070404010197);湖北省重大科技創(chuàng)新計劃項目(2015ABA038);湖北省科技支撐計劃項目(2014BBA158);湖北省農(nóng)科院青年科學基金項目(2013NKYJJ16)

    邵穎(1994—),女,學士,研究方向為水產(chǎn)品加工。E-mail:275673017@qq.com

    汪蘭(1981—),女,副研究員,博士,研究方向為農(nóng)產(chǎn)品加工和天然產(chǎn)物化學。E-mail:11060577@qq.com

    猜你喜歡
    肌球蛋白肌原纖維抗凍
    果上豐:神奇的抗凍衛(wèi)士
    畜禽防寒抗凍及凍后應急管理
    人體六部位最不抗凍
    海峽姐妹(2020年1期)2020-03-03 13:36:02
    淺淡引氣劑在抗凍混凝土中的應用
    肌球蛋白磷酸化的研究進展
    高糖對體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞通透性及肌球蛋白輕鏈磷酸化的影響
    心臟型肌球蛋白結合蛋白與射血分數(shù)保留的心力衰竭
    肌原纖維蛋白與大豆分離蛋白復合體系乳化性的研究
    TG酶協(xié)同超高壓處理對雞胸肉中肌原纖維蛋白凝膠品質(zhì)的影響
    NaCl濃度對肌原纖維蛋白-食用膠混合物功能特性的影響
    日韩一本色道免费dvd| 嫩草影院入口| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲,欧美,日韩| 老司机福利观看| 亚洲高清免费不卡视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品精品国产色婷婷| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 麻豆成人av视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 韩国av在线不卡| 国产黄色小视频在线观看| 国产精品女同一区二区软件| av视频在线观看入口| 日日干狠狠操夜夜爽| 夜夜爽天天搞| 好男人在线观看高清免费视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 午夜福利成人在线免费观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲欧美精品综合久久99| 男女那种视频在线观看| 中文字幕久久专区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久鲁丝午夜福利片| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲精品亚洲一区二区| 最新中文字幕久久久久| 亚洲自偷自拍三级| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲人与动物交配视频| 国产69精品久久久久777片| 亚洲国产精品国产精品| 国内精品久久久久精免费| 欧美人与善性xxx| 亚洲电影在线观看av| 国产三级在线视频| 美女黄网站色视频| 偷拍熟女少妇极品色| 一本久久精品| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 又爽又黄a免费视频| 97超碰精品成人国产| 国产高清不卡午夜福利| 国产极品天堂在线| 亚洲av.av天堂| 最近视频中文字幕2019在线8| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲人与动物交配视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 中文字幕av在线有码专区| 免费无遮挡裸体视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 精品一区二区免费观看| 中文字幕熟女人妻在线| 插阴视频在线观看视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩欧美精品v在线| 有码 亚洲区| 99久久精品国产国产毛片| 成人二区视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 听说在线观看完整版免费高清| 97热精品久久久久久| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产在线男女| 身体一侧抽搐| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 深夜精品福利| 久久久久久久久大av| 两个人视频免费观看高清| 国产视频首页在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 乱系列少妇在线播放| 免费看日本二区| 99热这里只有是精品50| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 午夜福利在线在线| 欧美精品国产亚洲| 夜夜爽天天搞| 能在线免费观看的黄片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产高清三级在线| 欧美+日韩+精品| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 久久久久久久亚洲中文字幕| 欧美激情国产日韩精品一区| 免费看光身美女| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 精品久久久久久久久亚洲| 欧美性感艳星| 国产麻豆成人av免费视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 高清午夜精品一区二区三区 | 99久国产av精品| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品.久久久| 看十八女毛片水多多多| 国产亚洲5aaaaa淫片| 五月玫瑰六月丁香| 欧美成人a在线观看| 99久国产av精品| 亚洲成av人片在线播放无| 一区二区三区高清视频在线| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 三级毛片av免费| 亚洲av成人精品一区久久| 午夜亚洲福利在线播放| 国产高清有码在线观看视频| 欧美色视频一区免费| 国产久久久一区二区三区| 亚洲人成网站在线观看播放| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产成人精品婷婷| 午夜福利在线观看吧| 毛片女人毛片| 国产亚洲欧美98| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产精品99久久久久久久久| 成人毛片a级毛片在线播放| 日韩中字成人| 一级二级三级毛片免费看| а√天堂www在线а√下载| 卡戴珊不雅视频在线播放| 欧美成人a在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 日韩欧美三级三区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产精品无大码| 日韩中字成人| 精品一区二区免费观看| 99热精品在线国产| 在线观看66精品国产| 精品久久久久久久久亚洲| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产黄片视频在线免费观看| 嫩草影院入口| 99热这里只有精品一区| 国产av一区在线观看免费| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲一区二区三区色噜噜| 中文欧美无线码| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日韩亚洲欧美综合| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产精品一区二区在线观看99 | 99久久精品国产国产毛片| 成人av在线播放网站| 99久久成人亚洲精品观看| av在线亚洲专区| 男女啪啪激烈高潮av片| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲av熟女| 亚洲国产精品国产精品| 欧美日韩综合久久久久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 欧美一级a爱片免费观看看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲国产精品成人久久小说 | 亚洲精品自拍成人| 天堂√8在线中文| 日日摸夜夜添夜夜爱| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲av成人av| 麻豆国产av国片精品| 午夜爱爱视频在线播放| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | videossex国产| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 性色avwww在线观看| 性欧美人与动物交配| 大香蕉久久网| 2021天堂中文幕一二区在线观| 免费看美女性在线毛片视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产在线男女| 亚洲精品自拍成人| 中文字幕熟女人妻在线| 国产精品一二三区在线看| 日韩欧美在线乱码| 日本与韩国留学比较| 99九九线精品视频在线观看视频| 99热这里只有是精品在线观看| 国内精品久久久久精免费| 日本黄色视频三级网站网址| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 一夜夜www| 精品无人区乱码1区二区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 五月玫瑰六月丁香| 一进一出抽搐动态| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 97超碰精品成人国产| 日本成人三级电影网站| 99国产极品粉嫩在线观看| 色综合站精品国产| 给我免费播放毛片高清在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 成人午夜精彩视频在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲av一区综合| 亚洲久久久久久中文字幕| 久久亚洲国产成人精品v| 一本久久中文字幕| 久久亚洲精品不卡| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲自拍偷在线| 69人妻影院| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲电影在线观看av| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 欧美一区二区国产精品久久精品| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品国产av成人精品| 精品久久久久久久久久免费视频| 免费看日本二区| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲av.av天堂| 一本一本综合久久| 国产精品野战在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产一区二区在线av高清观看| 一本一本综合久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲自拍偷在线| 亚洲在线观看片| 日韩大尺度精品在线看网址| 在线观看66精品国产| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产成人精品婷婷| 能在线免费看毛片的网站| 内地一区二区视频在线| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 观看美女的网站| 色尼玛亚洲综合影院| 九草在线视频观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 可以在线观看的亚洲视频| 日韩视频在线欧美| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 欧美性猛交黑人性爽| 青春草国产在线视频 | 久久99精品国语久久久| 一个人免费在线观看电影| 亚洲国产精品久久男人天堂| 中文亚洲av片在线观看爽| 97超视频在线观看视频| 插阴视频在线观看视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩欧美精品v在线| 一个人免费在线观看电影| 天堂网av新在线| 午夜福利在线在线| 在线观看午夜福利视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美色视频一区免费| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲av.av天堂| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲成a人片在线一区二区| 中文字幕久久专区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 好男人视频免费观看在线| 国产午夜精品一二区理论片| www日本黄色视频网| 精品一区二区三区视频在线| 国产成人a区在线观看| 国产三级中文精品| 一级毛片电影观看 | 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 岛国毛片在线播放| 久久久久久伊人网av| 99热全是精品| 高清午夜精品一区二区三区 | 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产 一区精品| 免费观看的影片在线观看| 在线国产一区二区在线| 日韩一本色道免费dvd| 色播亚洲综合网| 99热这里只有是精品50| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产高清激情床上av| av女优亚洲男人天堂| 91狼人影院| 欧美精品国产亚洲| 欧美极品一区二区三区四区| 天堂中文最新版在线下载 | 91久久精品国产一区二区三区| 秋霞在线观看毛片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久这里只有精品中国| 午夜精品在线福利| 日韩成人伦理影院| 亚洲综合色惰| 亚洲精品国产av成人精品| 看黄色毛片网站| 婷婷色综合大香蕉| 午夜免费激情av| 国产精品乱码一区二三区的特点| 在线观看一区二区三区| 国产片特级美女逼逼视频| 天天一区二区日本电影三级| 久久久久久久午夜电影| 人妻系列 视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| av在线蜜桃| 免费观看人在逋| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产一级毛片七仙女欲春2| 嫩草影院新地址| 国产av麻豆久久久久久久| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 国产成人影院久久av| 人人妻人人看人人澡| 热99在线观看视频| 精品久久久久久久末码| 99热这里只有是精品50| 日韩精品有码人妻一区| 99riav亚洲国产免费| 国产午夜精品一二区理论片| 99热网站在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 99久久九九国产精品国产免费| a级毛片免费高清观看在线播放| 神马国产精品三级电影在线观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 此物有八面人人有两片| 国产精品嫩草影院av在线观看| 色5月婷婷丁香| 九色成人免费人妻av| 中文字幕制服av| 大型黄色视频在线免费观看| 久久韩国三级中文字幕| 国产激情偷乱视频一区二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 在线观看美女被高潮喷水网站| 麻豆乱淫一区二区| 色哟哟·www| 男人和女人高潮做爰伦理| 日韩欧美在线乱码| 国产三级中文精品| 亚洲欧美清纯卡通| 精品久久久噜噜| av在线蜜桃| www.色视频.com| 一级黄片播放器| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲av成人av| 中文字幕免费在线视频6| 一区二区三区高清视频在线| 两个人视频免费观看高清| 十八禁国产超污无遮挡网站| 97人妻精品一区二区三区麻豆| av女优亚洲男人天堂| h日本视频在线播放| 久久久精品欧美日韩精品| 日韩成人伦理影院| 亚洲av熟女| 一个人看的www免费观看视频| 好男人视频免费观看在线| 九九在线视频观看精品| 在线免费十八禁| 国产乱人视频| 久99久视频精品免费| 亚洲av中文av极速乱| 精品无人区乱码1区二区| 最好的美女福利视频网| 中文字幕免费在线视频6| 精品一区二区免费观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产视频首页在线观看| 在线播放无遮挡| 午夜亚洲福利在线播放| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产精华一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲精品456在线播放app| 精华霜和精华液先用哪个| 九九爱精品视频在线观看| 高清日韩中文字幕在线| 国产av麻豆久久久久久久| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 内射极品少妇av片p| 校园人妻丝袜中文字幕| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产69精品久久久久777片| 黄片wwwwww| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲av男天堂| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 色综合站精品国产| 欧美+日韩+精品| 观看美女的网站| 国产黄片美女视频| 老司机影院成人| 久久久久久九九精品二区国产| 人妻系列 视频| 日韩中字成人| 男女那种视频在线观看| 国产视频首页在线观看| 少妇高潮的动态图| 日本欧美国产在线视频| 久久精品人妻少妇| 人妻久久中文字幕网| 国产精品av视频在线免费观看| 一本精品99久久精品77| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一个人看视频在线观看www免费| av卡一久久| 国产一级毛片七仙女欲春2| 少妇人妻精品综合一区二区 | 男人的好看免费观看在线视频| 在线a可以看的网站| 成人无遮挡网站| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 日韩 亚洲 欧美在线| 只有这里有精品99| 免费看日本二区| 欧美日韩在线观看h| 禁无遮挡网站| av天堂中文字幕网| 精品久久久久久久末码| 九草在线视频观看| 日韩强制内射视频| 午夜久久久久精精品| 2022亚洲国产成人精品| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产极品精品免费视频能看的| 中国美女看黄片| 免费无遮挡裸体视频| 国产高清有码在线观看视频| 黄色欧美视频在线观看| 美女国产视频在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 日韩欧美 国产精品| 嫩草影院新地址| 国产午夜精品论理片| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久久久九九精品影院| 黄色配什么色好看| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久久成人免费电影| 九九爱精品视频在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 特大巨黑吊av在线直播| 男人舔女人下体高潮全视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产精品无大码| 国产精品蜜桃在线观看 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲综合色惰| kizo精华| 卡戴珊不雅视频在线播放| 成人毛片60女人毛片免费| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 成人欧美大片| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美区成人在线视频| 国产片特级美女逼逼视频| 成人三级黄色视频| 亚洲在线观看片| 青青草视频在线视频观看| 99视频精品全部免费 在线| 美女 人体艺术 gogo| 黄片wwwwww| 成人综合一区亚洲| 免费观看人在逋| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 长腿黑丝高跟| 久久久久久久久久成人| 给我免费播放毛片高清在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 日本在线视频免费播放| 变态另类丝袜制服| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 村上凉子中文字幕在线| 精品久久久久久久久久免费视频| 午夜亚洲福利在线播放| 身体一侧抽搐| 精品日产1卡2卡| 亚洲18禁久久av| 日韩国内少妇激情av| 午夜精品在线福利| 欧美日韩精品成人综合77777| 日韩欧美国产在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 人体艺术视频欧美日本| 麻豆av噜噜一区二区三区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 丰满的人妻完整版| 国产精品不卡视频一区二区| 一区二区三区免费毛片| 又粗又爽又猛毛片免费看| 午夜精品国产一区二区电影 | 校园春色视频在线观看| 久久这里只有精品中国| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品三级大全| 啦啦啦啦在线视频资源| 免费无遮挡裸体视频| 黄片无遮挡物在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久中文看片网| 国产探花在线观看一区二区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 精品久久久久久久末码| 不卡一级毛片| 午夜激情欧美在线| 国产三级在线视频| 亚洲第一电影网av| 97在线视频观看| 亚洲成av人片在线播放无| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | av在线蜜桃| 桃色一区二区三区在线观看| 日本色播在线视频| 校园春色视频在线观看| 久久99热这里只有精品18| 老女人水多毛片| 男女下面进入的视频免费午夜| 又爽又黄无遮挡网站| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美高清性xxxxhd video| 男女下面进入的视频免费午夜| 精品日产1卡2卡| 久久亚洲精品不卡| 丝袜喷水一区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久亚洲国产成人精品v| 丝袜美腿在线中文| 九九在线视频观看精品| 麻豆国产av国片精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 插阴视频在线观看视频| 午夜福利高清视频| 国产单亲对白刺激| 黄片wwwwww| 一本精品99久久精品77| 有码 亚洲区| 亚洲欧美日韩东京热| videossex国产| 12—13女人毛片做爰片一| 精品无人区乱码1区二区| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久久久久久久久久丰满| 国产成人精品婷婷| av在线亚洲专区| 六月丁香七月| 久久精品91蜜桃| 能在线免费观看的黄片| 国产av在哪里看| 直男gayav资源| 国产黄a三级三级三级人| 久久久久久久久久成人| 一区二区三区免费毛片| 久久久久久九九精品二区国产| 国产单亲对白刺激| 日日撸夜夜添| 赤兔流量卡办理| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 一级黄色大片毛片| 国产美女午夜福利| 少妇人妻一区二区三区视频| 高清在线视频一区二区三区 | avwww免费| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产一区二区亚洲精品在线观看|