• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定各生長(zhǎng)期紫蘇中酚類物質(zhì)的含量

    2016-10-18 06:03:26艾鑫衛(wèi)胡思平龔?qiáng)瑠?/span>黃文鄴楊潔球廖照江
    食品科學(xué) 2016年18期
    關(guān)鍵詞:結(jié)果期草素木犀

    艾鑫衛(wèi),胡思平,龔?qiáng)瑠S文鄴,楊潔球,王 力,廖照江,*

    (1.三峽大學(xué)生物與制藥學(xué)院,湖北 宜昌 443000;2.宜昌人??诜腆w制劑廠,湖北 宜昌 443000)

    高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定各生長(zhǎng)期紫蘇中酚類物質(zhì)的含量

    艾鑫衛(wèi)1,胡思平1,龔?qiáng)瑠?,黃文鄴1,楊潔球2,王力1,廖照江1,*

    (1.三峽大學(xué)生物與制藥學(xué)院,湖北 宜昌 443000;2.宜昌人??诜腆w制劑廠,湖北 宜昌 443000)

    目的:建立一種簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,同時(shí)分離與檢測(cè)紫蘇葉、莖和根中酚類化合物含量,探討紫蘇各部位酚類物質(zhì)的累積規(guī)律,為確定紫蘇各部位最佳采收時(shí)期提供依據(jù)。方法:對(duì)紫蘇進(jìn)行人工栽培,樣品分期采集,采集后的樣品經(jīng)乙醇提取,采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析,對(duì)影響色譜、質(zhì)譜的重要參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,通過(guò)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間及質(zhì)譜分析,確定相應(yīng)的化合物;通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量,以其中13 種酚類化合物為主要參考指標(biāo),觀察它們?cè)诟鞑课坏膭?dòng)態(tài)含量變化。結(jié)果:鑒定出化合物:咖啡酸、咖啡酸-3-O-葡萄糖苷、迷迭香酸、迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷、木犀草素、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸、木犀草素-7-O-二葡萄糖苷酸、芹菜素、芹菜素-7-咖啡酰基葡萄糖苷、芹菜素-7-O-二葡萄糖苷、野黃岑素-7-O-二葡萄糖苷、迷迭香酸甲酯,以上化合物中酚酸及其糖苷化合物含量呈先降低,至結(jié)果期急劇上升達(dá)到最大,黃酮及其糖苷化合物含量則遞增至結(jié)果期達(dá)到最大。其中鑒定出迷迭香酸和木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸分別在結(jié)果期達(dá)到最大,含量分別為21.41 mg/g和19.89 mg/g,結(jié)果期葉部位總酚類含量達(dá)到最大,含量為47.50 mg/g。結(jié)論:通過(guò)對(duì)紫蘇各個(gè)部位不同采收時(shí)期黃酮、黃酮糖基化、酚酸的動(dòng)態(tài)變化、總含量變化和部位成分分布的研究,對(duì)紫蘇酚類資源的利用提供參考依據(jù)。

    紫蘇;酚類物質(zhì);高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;動(dòng)態(tài)積累;最佳采收時(shí)期

    紫蘇(Perilla frutescens),別名桂荏、白蘇、赤蘇等,為一年生草本植物,屬于唇形科。由于具有特有的活性物質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分,紫蘇經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高,成為備受世界關(guān)注的植物,可以廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和保健。紫蘇所含有的酚類物質(zhì)具有抗氧化活性、對(duì)酶的作用、止癢活性、抗腫瘤、保護(hù)肝臟和其他作用[1-5]。隨著對(duì)酚類化合物的深入研究和應(yīng)用不斷發(fā)展,人們將目光轉(zhuǎn)向?qū)ふ姨烊环宇惢衔?,而酚類化合物在紫蘇中分布比較廣泛,所以紫蘇對(duì)于人們的開發(fā)利用至關(guān)重要。

    目前關(guān)于紫蘇酚類化合物的分離和檢測(cè)研究較多,如對(duì)紫蘇籽中的酚類抗氧化性研究[6],迷迭香酸和迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷的抗氧化活性比較[7],紫蘇酚類化合物商業(yè)化[8],對(duì)皮膚炎癥、皮膚疾病、帕金森癥、血管性癡呆、老年癡呆和抑制腦衰老的作用和功效[9]。由此可見,紫蘇的酚類化合物無(wú)論是在食用、藥用還是酚類的商業(yè)化產(chǎn)品發(fā)展都將具有著穩(wěn)定的發(fā)展趨勢(shì)。

    目前,國(guó)內(nèi)外研究人員主要對(duì)紫蘇屬植物葉和種子的成分鑒定[10]、分離和化合物的表征[11]進(jìn)行研究。對(duì)紫蘇籽渣中的酚類物質(zhì)[12]、不同紫蘇葉中的迷迭香酸[13],紫蘇籽主要成分[14]、總黃酮和總多酚含量進(jìn)行比較[15]。鮮見紫蘇4 個(gè)部位的酚類化合物及其糖苷的相關(guān)報(bào)道。

    本研究基于紫蘇全部位不同時(shí)期的酚類化合物,采用快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、專屬性好、雙重檢測(cè)器表征的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLC-MS/ MS)法對(duì)紫蘇提取物進(jìn)行分離和表征,對(duì)于影響色譜、質(zhì)譜分離效果的重要因素,如進(jìn)樣量、流動(dòng)相的流速、流動(dòng)相中酸的添加量及多級(jí)質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,并應(yīng)用于紫蘇全部位不同時(shí)期酚類化合物含量測(cè)定??蔀樽咸K酚類累積、各部位不同酚類采收時(shí)期、酚類資源合理利用,提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1材料與試劑

    紫蘇籽藥材購(gòu)買于湖北,該樣本經(jīng)三峽大學(xué)王玉兵副教授鑒定為湖北紫蘇,標(biāo)本存放于三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

    標(biāo)準(zhǔn)品:迷迭香酸(含量:20 mg;批號(hào):15030306)、木犀草素(含量:20 mg;批號(hào):15030404)、芹菜素(含量:20 mg;批號(hào):15060501)、野黃岑素(含量:20 mg;批號(hào):15041311) 成都瑞發(fā)科技開發(fā)有限公司;咖啡酸(含量:20 mg;批號(hào):EK140410) 上海伊卡生物技術(shù)有限公司;甲醇(色譜純) 美國(guó)Fisher公司;乙酸(分析純) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;無(wú)水乙醇(分析純) 天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司;其他試劑均為分析純。

    1.2儀器與設(shè)備

    1200 UPLC儀(配有電噴霧離子源及Hystar3.2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)) 美國(guó)Agilent公司;Amazon SL MS聯(lián)用儀德國(guó)Brüker公司。

    1.3方法

    1.3.1樣品制備

    將種子于2015年6月5日(150605)播種,直至2015年6月15日(150615)發(fā)芽長(zhǎng)出兩對(duì)葉片,小心對(duì)幼苗進(jìn)行移栽,每組幼苗隨機(jī)種植。種植到實(shí)驗(yàn)田后每隔20 d后按規(guī)則采樣(150705、150725、150815、150905、150925、151015),采樣方法為實(shí)驗(yàn)田對(duì)角線取樣,在實(shí)驗(yàn)田對(duì)角線上選定5 個(gè)取樣點(diǎn),在每個(gè)取樣點(diǎn)上按規(guī)定的面積(50×50)cm內(nèi)采樣,每個(gè)點(diǎn)采取至少一株紫蘇,為全株采摘。根據(jù)植物生長(zhǎng)情況,根、莖、葉采摘分為營(yíng)養(yǎng)期、開花期、結(jié)果期。將新鮮的植株用清水除去表面的泥沙后將植株表面的水除去,自然陰干,備用。

    精密稱取紫蘇根、莖、葉粉末各1.5 g,種子5.0 g(過(guò)40 目篩),種子進(jìn)行索氏提取,用石油醚65 ℃回流除去脂肪,將粉碎過(guò)目樣品加入50 mL乙醇(80∶20,V/V)溶液,超聲波輔助提取。重復(fù)3 次,合并提取液減壓蒸干。然后加入甲醇-水(80∶20,V/V)溶液定容。定容后過(guò)0.45 μm有機(jī)膜,進(jìn)樣5 μL。每期樣品分別重復(fù)3 次,并求得各部位酚類化合物的平均含量。

    1.3.2HPLC條件

    色譜柱:Agligent C18液相色譜柱(150 mm× 2.1 mm,5 μm);流速0.2 mL/min;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量5 μL;流動(dòng)相:A為甲醇溶液;B為體積分?jǐn)?shù)0.01%醋酸溶液;流動(dòng)相洗脫程序如表1所示。

    表1 HPLC梯度洗脫程序Table1 Gradient elution program of HPLC

    1.3.3MS條件

    電噴霧離子源;自動(dòng)二級(jí)質(zhì)譜模式;負(fù)離子模式掃描;毛細(xì)管電壓4 000 V;擋板電壓2 500 V;干燥氣流5 L/min;干燥氣壓力35 psi;干燥器溫度350 ℃;二級(jí)質(zhì)譜條件:MS/MS多級(jí)質(zhì)譜裂解能量1.00 V;離子肼離子數(shù)目30 000;最大積累時(shí)間300.00 ms;質(zhì)量掃描范圍m/z 100~1 200。

    1.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品咖啡酸、迷迭香酸、芹菜素、木犀草素、野黃岑素各5.00 mg,分別用甲醇溶解,定容10 mL,即得0.5 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液,0 ℃保存。使用時(shí)分別用甲醇逐級(jí)稀釋,得到合適的線性范圍。線性方程及相關(guān)系數(shù)如表2所示。

    表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)Table2 Standard curves with correlation coefficients as well as limits of detection and quantitation

    2 結(jié)果與分析

    本實(shí)驗(yàn)將根、莖、葉分為3 個(gè)時(shí)期:營(yíng)養(yǎng)期(0~60 d)、開花期(60~100 d)、結(jié)果期(100~120 d)。

    2.1HPLC-MS條件的優(yōu)化

    2.1.1HPLC條件的選擇

    2.1.1.1流動(dòng)相的選擇

    本實(shí)驗(yàn)考察甲醇-水、乙腈-水作為流動(dòng)相的分離效果,結(jié)果表明,所提取的酚類化合物在甲醇-水的體系能夠取得較好的分離效果。

    2.1.1.2流速和進(jìn)樣量的選擇

    本實(shí)驗(yàn)對(duì)于流動(dòng)相流速進(jìn)行優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)液相流速為0.2 mL/min時(shí)效果優(yōu)于0.3 mL/min;考察進(jìn)樣量分別為5、10、15 μL時(shí)效果,發(fā)現(xiàn)當(dāng)進(jìn)樣量為5 μL時(shí),目標(biāo)峰峰形好,分離度好,如圖1所示。

    圖1 紫蘇樣品酚類化合物色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of phenolic compounds in Perilla frutescens

    2.1.2MS條件的選擇

    本實(shí)驗(yàn)采用負(fù)離子模式監(jiān)測(cè),對(duì)分子離子峰及其二級(jí)質(zhì)譜信號(hào)采集分別進(jìn)行優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)在多級(jí)質(zhì)譜裂解能量1.00 V;離子肼離子數(shù)目30 000;最大積累時(shí)間300.00 ms條件下,能夠保證離子化效率高、信號(hào)強(qiáng)且儀器分辨率正常,如圖2所示。

    圖2 紫蘇樣品酚類化合物總離子流圖Fig.2 HPLC-MS/MS total ion chromatograms of phenolic compounds in Perilla frutescens

    2.2酚類化合物時(shí)間變化規(guī)律

    將不同采收時(shí)期根、莖、葉3 個(gè)部位醇提取物通過(guò)HPLC分離,初步鑒定其中13 種酚類化合物,分別為咖啡酸、咖啡酸-3-O-葡萄糖苷、迷迭香酸、迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷、木犀草素、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸、木犀草素-7-O-二葡萄糖苷酸、芹菜素、芹菜素-7-O-咖啡?;咸烟擒?、芹菜素-7-O-二葡萄糖苷酸、野黃岑素-7-O-二葡萄糖苷酸、迷迭香酸甲酯。紫蘇各部位的酚類含量動(dòng)態(tài)變化如圖3A~F所示,紫蘇各部位的黃酮含量動(dòng)態(tài)變化如圖3G~O所示。

    圖3 各生長(zhǎng)期紫蘇根、莖、葉部位酚酸化合物含量(A~F)和黃酮化合物含量(G~O)Fig.3 Dynamic changes in the contents of phenolics in roots, stems,and leaves of Perilla frutescens at different growing periods

    根據(jù)圖3可以看出,不同采收時(shí)期的根、莖、葉三部位13 種主要成分分析顯示,紫蘇的莖、葉部位黃酮化合物總含量從營(yíng)養(yǎng)期到開花期逐漸增加,到結(jié)果期達(dá)到最大,含量分別為7.99 mg/g和25.86 mg/g。紫蘇莖、葉部位的酚酸從營(yíng)養(yǎng)期到開花期略有降低,但在結(jié)果期含量反彈到最大,含量分別為1.66 mg/g和21.42 mg/g。紫蘇莖、葉部位的總酚類含量在結(jié)果期達(dá)到最大,含量分別為9.65 mg/g和47.50 mg/g。

    木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸為紫蘇中黃酮化合物最主要成分,均在莖、葉的開花初期和開花期形成,隨著植物代謝增強(qiáng),含量急劇上升以結(jié)果期達(dá)到最大,含量分別為3.88 mg/g和19.88 mg/g。迷迭香酸為紫蘇中酚酸化合物最主要成分,其在營(yíng)養(yǎng)初期就存在于紫蘇的根、莖、葉3 個(gè)部位,迷迭香酸含量在營(yíng)養(yǎng)初期較大,隨后到開花期含量急劇降低,但到了結(jié)果期達(dá)到最大。根部位迷迭香酸含量在營(yíng)養(yǎng)期和開花期均比其他部位要高,在營(yíng)養(yǎng)初期根部位含量最高為3.10 mg/g,含量最低為莖部位為0.24 mg/g。紫蘇在開花期,代謝更加旺盛,其中根部位與莖、葉部位迷迭香酸含量相比較而言,含量更高于這2 個(gè)部位,根部位含量最高為1.24 mg/g,大約為莖部位的18 倍。到了結(jié)果期,葉片作為植物最主要器官,為整個(gè)植株提供營(yíng)養(yǎng)成分,葉部位迷迭香酸含量增加到最大,含量由開花期的0.045 mg/g急劇增加到21.40 mg/g,均遠(yuǎn)高于其他3 個(gè)部位,分別是莖、根部位的13.51 倍和31.88 倍。

    紫蘇葉、籽等部位的酚酸類物質(zhì)國(guó)內(nèi)外已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道,最主要的酚酸類物質(zhì)為迷迭香酸[16]。本實(shí)驗(yàn)將紫蘇根、莖、葉、種子4 個(gè)部位的提取物采用HPLCMS/MS法分析,檢測(cè)到紫蘇莖、葉部位迷迭香酸在結(jié)果期含量達(dá)到最大,葉部位含量為21.41 mg/g,種子部位含量為5.02 mg/g,同時(shí)也檢測(cè)到葉部位化合物含量可達(dá)19.89 mg/g。而芹菜素-7-咖啡?;咸烟擒蘸颓鄄怂?7-O-二葡萄糖苷的含量在開花期達(dá)到最大,以開花期為最佳采收時(shí)期。紫蘇4 個(gè)部位的酚類含量差異很大,很可能是紫蘇本身的酚酸合成和在植物體內(nèi)代謝、體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)有很大的關(guān)系,Liu Jing等[17]研究了12 種紫蘇莖、葉、種子部位的迷迭香酸的含量,結(jié)果表明:紫蘇葉部位迷迭香酸含量在8.33~14.98 mg/g之間,莖部位含量在0.34~3.08 mg/g之間,種子部位含量在1.03~3.30 mg/g之間。購(gòu)買于四川、廣西、香港等大多數(shù)樣品葉部位迷迭香酸含量較高,而北京、湖北、江蘇等樣品種子部位含量遠(yuǎn)高于葉片。本實(shí)驗(yàn)為人工栽培湖北紫蘇,迷迭香酸含量與文獻(xiàn)[17]購(gòu)買于香港的品種相類似,種子部位含量高于文獻(xiàn)[17]種子部位的含量。江安娜[18]研究了不同紫蘇葉片總黃酮含量的變化,其中營(yíng)養(yǎng)期到開花期總黃酮含量呈上升態(tài)勢(shì),隨后逐漸遞增,在結(jié)果期達(dá)到最大,本實(shí)驗(yàn)紫蘇總黃酮變化與文獻(xiàn)[18]所報(bào)道的4 種紫蘇變化趨勢(shì)一致。

    2.3糖基化隨時(shí)間變化規(guī)律

    紫蘇根、莖、葉三部位的酚類糖基化化合物為:咖啡酸-3-O-葡萄糖苷、迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸、木犀草素-7-O-二葡萄糖苷酸、芹菜素、芹菜素-7-咖啡酰基葡萄糖苷、芹菜素-7-O-二葡萄糖苷、野黃岑素-7-O-二葡萄糖。由圖3可以看出,紫蘇莖、葉部位酚酸、黃酮的糖基化均在開花期被檢測(cè)到,葉片在營(yíng)養(yǎng)期出現(xiàn)少量的黃酮糖苷,由于植物體內(nèi)相關(guān)酶的活性變化導(dǎo)致相關(guān)酚類化合物變化來(lái)滿足植物本身的生理需求[19-20],酚類化合物在酶的作用下通過(guò)生物合成改變本身的結(jié)構(gòu),如糖基化、基化?;图谆?,這些改變對(duì)于植物體累化合物的溶解性、穩(wěn)定性和降低毒性都至關(guān)重要[21-23],所以隨著植物的生長(zhǎng)、新陳代謝逐步增強(qiáng),糖基化的種類和含量也逐漸增多,含量和種類均到結(jié)果期達(dá)到最大,種子部位酚酸和黃酮的糖基化物質(zhì)相對(duì)于莖、葉部位要少。酚酸的糖基化主要以葡萄糖苷形式存在,黃酮主要以葡萄糖苷、苷酸、二苷酸形式存在。

    營(yíng)養(yǎng)期:葉中木犀草素、芹菜素主要以其葡萄糖苷酸和葡萄糖苷形式存在,且葡萄糖苷酸占主要成分,黃酮化合物均為7號(hào)位上;莖部位糖基化總類和含量少,根部位未檢測(cè)到相關(guān)糖苷。

    開花期和結(jié)果期:莖、葉部位木犀草素主要以葡萄糖苷、葡萄糖苷酸和二葡萄糖苷酸存在,葡萄糖苷酸占主要成分,芹菜素主要以二葡萄糖苷酸和咖啡酰基糖苷存在,二葡萄糖苷酸占主要成分,野黃岑素主要以二葡萄糖苷酸存在。種子部位木犀草素主要以葡萄糖苷形式存在,芹菜素主要以咖啡酰基糖苷存在,莖、葉和種子三部位的咖啡酸和迷迭香酸分別以糖苷形式存在,且種子部位酚酸糖苷含量要高于其他部位,黃酮化合物的糖苷均為7號(hào)位,酚酸化合物的糖苷均為3號(hào)位,根部位未檢測(cè)到相關(guān)糖苷的存在。

    3 結(jié) 論

    本研究表明,紫蘇酚類含量較高的化合物是迷迭香酸和木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸。根部位迷迭香酸累積峰值出現(xiàn)在營(yíng)養(yǎng)期,而葉部位為落葉期,主要以迷迭香酸形式存在,糖苷較少。木犀草素累積最高主要是在葉部位的落葉期,主要存在的形式為木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸。紫蘇特征酚酸的最佳采收時(shí)期為落葉期,主要積累在落葉期葉片中,含量可達(dá)21.41 mg/g。黃亮輝等[13]研究不同紫蘇葉的迷迭香酸采收時(shí)期為8月,江安娜[18]研究了紫蘇葉部位總黃酮含量,認(rèn)為結(jié)果期為最佳采收時(shí)期,該結(jié)論與本實(shí)驗(yàn)相符合,不同的植物其總黃酮含量變化不同,植物體內(nèi)的黃酮酚酸抗紫外、外部環(huán)境變化有很密切的關(guān)系[24-25]。本研究實(shí)現(xiàn)了高靈敏度、高效率、低成本、準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì),為全面認(rèn)識(shí)紫蘇各部位的酚類化合物組成及其含量動(dòng)態(tài)變化提供了依據(jù),同時(shí)也為紫蘇的品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)功能提供了必要的基礎(chǔ)。還需結(jié)合相關(guān)合成黃酮的酶進(jìn)行研究,從而能夠解釋這些化合物的動(dòng)態(tài)變化,也更能夠?yàn)檫@些化合物的合成提供重要的依據(jù)。

    [1] RAME?OV ?, SOKOLOV R, TARBEK J, et al. The oxidation of luteolin, the natural flavonoid dye[J]. Electrochim Acta, 2013, 110(6): 46-54. DOI:10.1016/j.electacta.2013.06.136.

    [2] HA T J, LEE J H, LEE M H, et al. Isolation and identification of phenolic compounds from the seeds of Perilla frutescens (L.) and their inhibitory activities against alpha-glucosidase and aldose reductase[J]. Food Chemistry, 2012, 135(3): 1397-1403. DOI:10.1016/ j.foodchem.2012.05.104.

    [3] NABAVI S F, BRAIDY N, GORTZI O, et al. Luteolin as an anti-inflammatory and neuroprotective agent: a brief review[J]. Brain Reserach Bulletin, 2015, 119: 1-11. DOI:10.1016/ j.brainresbull.2015.09.002.

    [4] LIN E S, CHOU H J, KUO P L, et al. Antioxidant and antiprolife active of mehanolic extracts of Perilla frutescend[J]. Journal of Medical Plants Reserachs, 2010, 4: 477-483. DOI:10.5897/ JMPR10.035.

    [5] YANG S Y, HONG C O, LEE G P, et al. The hepatoprotection of caffeic acid and rosmarinic acid, major compounds of Perilla frutescens, against t-BHP-induced oxidative liver damage[J]. Food and Chemical Toxicology, 2013, 55: 92-99. DOI:10.1016/j.fct.2012.12.042.

    [6] LEE J H, PARK K H, LEE M H, et al. Identification, characterisation,and quantification of phenolic compounds in the antioxidant activitycontaining fraction from the seeds of Korean perilla (Perilla frutescens) cultivars[J]. Food Chemistry, 2013, 136(2): 843-852. DOI:10.1016/ j.foodchem.2012.08.057.

    [7] ZHOU Xiaojing, YAN Linlin, YIN Peiei, et al. Structural characterisation and antioxidant activity evaluation of phenolic compounds from cold-pressed Perilla frutescens var. arguta seed flour[J]. Food Chemistry, 2014, 164: 150-157. DOI:10.1016/ j.foodchem.2014.05.062.

    [8] MENG L, LOZANO Y, BOMBARDA I, et al. Polyphenol extraction from eight Perilla frutescens cultivars[J]. Comptes Rendus Chimie,2009, 12(5): 602-611. DOI:10.1016/j.crci.2008.04.011.

    [9] ZHAO Gang, CHEN Yaoyue, QIN Guowei, et al. Luteolin from Purple Perilla mitigates ROS insult particularly in primary neurons[J]. Neurobiology of Aging, 2012, 33(1): 176-186. DOI:10.1016/ j.neurobiolaging.2010.02.013.

    [10] GUAN Zheng, LI Sicong, LIN Zongtao, et al. Identification and quantitation of phenolic compounds from the seed and pomace of Perilla frutescens using HPLC/PDA and HPLC-ESI/QTOF/MS/ MS[J]. Phytochemical Analysis, 2014, 25(6): 508-513. DOI:10.1002/ pca.2521.

    [11] JUN H I, KIM B T, SONG G S, et al. Structural characterization of phenolic antioxidants from purple perilla (Perilla frutescens var. acuta) leaves[J]. Food Chemistry, 2014, 148: 367-372. DOI:10.1016/ j.foodchem.2013.10.028.

    [12] 吳嬈, 馬飛, 張良曉, 等. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定紫蘇籽油中11種酚類化合物[J]. 分析化學(xué), 2015, 43(10): 208-211. DOI:10.11895/j.jssn.0253-3820.150367.

    [13] 黃亮輝, 蘇琪, 張新新, 等. 不同采收時(shí)期的紫蘇葉和白蘇葉中迷迭香酸的含量測(cè)定[J]. 藥物分析雜志, 2012, 32(10): 1753-1755. DOI:10.16155/j.0254-1793.2012.10.008.

    [14] 李曉鵬. 紫蘇籽粒主要營(yíng)養(yǎng)成分的提取與分離[D]. 太原: 中北大學(xué), 2013.

    [15] 周曉晶. 紫蘇種子脂肪酸、醇提物成分含量分析及其抗氧化活性研究[D]. 北京: 北京林業(yè)大學(xué), 2014.

    [16] OSAKABE N, YASUDA A, NATSUME M, et al. Rosmarinic acid,a major polyphenolic component of Perilla frutescens, reduces lipopolysaccharide (LPS)-induced liver injury in D-galactosamine(D-GalN)-sensitized mice[J]. Free Radical Biology and Medicine,2002, 33(6): 798-806. DOI:10.1016/ S0891-5849(02)00970-X.

    [17] LIU Jing, WANY K, ZHAO Zhongzhen, et al. Determination of the content of rosmarinic acid by HPLC and analytical comparison of volatile constituents by GC-MS in different parts of Perilla frutescens (L.) Britt[J]. Chemistry Central Journal, 2013, 7(1): 61. DOI:10.1186/1752-153X-7-61.

    [18] 江安娜. 葉用紫蘇農(nóng)藝性狀比較及不同生育期葉片中主要成分的含量變化研究[D]. 武漢: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2012.

    [19] WINKEL B S J. Metabolic channeling in plants[J]. Annual Review of Plant Biology, 2004, 55: 85-107. DOI:10.1146/annurcy.arplant.55. 031903.141714.

    [20] JORGENSEN K, RASMUSSEN A V, MORANT M, et al. Metabolon formation and metabolic channeling in the biosynthesis of plant natural products[J]. Current Opinion in Plant Biology, 2005, 8: 280-291. DOI:10.1016/j.pbi.2005.03.014.

    [21] KLEIN M, MARTINOIA E, HOFFMANN THOMA G, et al. A membrane-potential dependent ABC-like transporter mediates the vacuolar uptake of rye flavoneglucuronides: regulation of glucuronide uptake by glutathione and its conjugates[J]. Plant Journal, 2002, 21(3): 289-304. DOI:10.1046/j.1365-313x.2000.00684.x.

    [22] BARTHOLOMEW D M, van DYKL D E, CINDYLAUL S M, et al. Alternate energy-dependent pathways for the vacuolar uptake of glucose and glutathione conjugates[J]. Plant Physiology, 2002, 130(3): 1562-1572. DOI:10.1104/pp.008334.

    [23] FRANGNE N, EGGMANNL T, KOBLISCHKE C, et al. Flavone glucoside uptake into barley mesophyll and Arabidopsis cell culture vacuoles: energization occursby H(+)-antiport and ATP-binding cassette-type mechanisms[J]. Plant Physioogyl, 2002, 128(2): 726-733. DOI:10.1104/pp.010590.

    [24] AGATI G, CEROVIC Z G, MARTA A D, et al. Optically-assessed preformed flavonoids and susceptibility of grapevine to Plasmopara viticola under different lignt egimes[J]. Functional Plant Biology,2008, 35(1): 77-84. DOI:10.1071/FP07178.

    [25] ROGERS L A, DUBOSC, CULLIS I F, et al. Light, the circadian clock, and sugar perception in the control of biosynthesis[J]. Journal of Experimental Botany, 2005, 56: 1651-1663. DOI:10.1093/jxb/eri162.

    Quantitation of Phenolic Compounds in Perilla frutescens at Different Growing Stages Using HPLC-MS/MS

    AI Xinwei1, HU Siping1, GONG Hengheng1, HUANG Wenye1, YANG Jieqiu2, WANG Li1, LIAO Zhaojiang1,*
    (1. College of Biological and Pharmaceutical, China Three Gorges University, Yichang 443000, China;2. Yichang Humanwell Oral Solid Dosage Plant, Yichang 443000, China)

    Purpose: To establish a simple, rapid, accurate high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) for the simultaneous separation and determination of phenolic compounds in leaves, stems and roots of Perilla frutescens and further to examine the accumulation patterns of phenolics in different plant parts during the growing period for the purpose of determining the optimal harvest time for Perilla frutescens. Methods: Samples of cultivated Perilla frutescens were collected at three different growing stages and extracted with ethanol for HPLCMS analysis. The important chromatographic and mass spectrometric parameters were optimized. The identification of phenolic compounds was done by retention time comparison with reference standards and quantitation was performed using calibration curves. Moreover, changes in the contents of 13 major phenolic compounds in various parts of Perilla frutescens at different growing stages were observed. Results: The following compounds were identified: caffeic acid, caffeic acid-3-O-glucoside, rosmarinic-acid, rosmarinic-acid-3-O-glucoside, luteolin, luteloin-7-O-glucoside, luteloin-7-O-diglucuronide,luteloin-7-O-glucuronide, apigenin, apigenin-7-O-caffeoyglucoside, apigenin-7-O-diglucuronide and scutellarein-7-O-diglucuronide. Among these, the contents of rosmarinic acid and its glucoside derivatives decreased initially and then sharply increased to the maximum at the fruiting stage, while the flavonoids and their glucoside derivatives gradually increased until reaching the maximum at the fruiting stage. The contents of rosmarinic acid and luteloin-7-O-glucuronide in leaves at the fruiting stage were the highest, reaching 21.41 mg/g and 19.89 mg/g, respectively. Furthermore, leaves at the fruiting stage had the highest total phenol content of 47.50 mg/g among the various parts examined. Conclusions: The results of ourpresent work may provide a good reference for the utilization of Perilla frutescens as a phenolics resource.

    Perilla frutescens; phenolics; high performance liquid chormatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS);accumulation; optimal harvest time

    10.7506/spkx1002-6630-201618021

    TS255.7

    A

    1002-6630(2016)18-0126-07

    艾鑫衛(wèi), 胡思平, 龔?qiáng)瑠?等. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定各生長(zhǎng)期紫蘇中酚類物質(zhì)的含量[J]. 食品科學(xué), 2016,37(18): 126-132. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201618021. http://www.spkx.net.cn

    AI Xinwei, HU Siping, GONG Hengheng, et al. Quantitation of phenolic compounds in Perilla frutescens at different growing stages using HPLC-MS/MS[J]. Food Science, 2016, 37(18): 126-132. (in Chinese with English abstract)DOI:10.7506/spkx1002-6630-201618021. http://www.spkx.net.cn

    2016-03-12

    三峽大學(xué)科學(xué)基金項(xiàng)目(KJ2013B070);宜昌市科技局自然基礎(chǔ)科學(xué)研究與應(yīng)用專項(xiàng)(A15-302-a05)

    艾鑫衛(wèi)(1990—),男,碩士研究生,研究方向?yàn)楝F(xiàn)代儀器分析及應(yīng)用。E-mail:392589019@qq.com

    廖照江(1964—),男,副教授,博士,研究方向?yàn)闊o(wú)機(jī)化學(xué)及分析化學(xué)。E-mail:Liaozhaojiang@163.com

    猜你喜歡
    結(jié)果期草素木犀
    結(jié)果期核桃樹改接品種應(yīng)當(dāng)注意的幾點(diǎn)問(wèn)題
    河北果樹(2021年4期)2021-12-02 01:15:04
    陽(yáng)光玫瑰葡萄結(jié)果期管理技術(shù)
    木犀草素通過(guò)上調(diào)microRNA-34a-5p誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞株H460凋亡的研究
    響應(yīng)面法優(yōu)化鳳尾草中木犀草素的酶法提取工藝
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:56
    英雄降獸木犀舞
    西江月(2017年4期)2017-11-22 07:24:09
    結(jié)果期冬棗樹如何修剪
    YT星球的少年
    蘋果結(jié)果期果園溫度空間分布規(guī)律
    木犀草素抑制酪氨酸酶活性的分子機(jī)制
    木犀草素-Al3+配合物的光譜分析
    青草久久国产| xxx96com| 欧美乱码精品一区二区三区| 大型黄色视频在线免费观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 精品欧美国产一区二区三| 国产单亲对白刺激| 亚洲专区字幕在线| 久久久久亚洲av毛片大全| www.999成人在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久中文看片网| 久久亚洲真实| 伦理电影免费视频| 欧美三级亚洲精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 日韩高清综合在线| 日韩有码中文字幕| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲一区中文字幕在线| 日本 av在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 又大又爽又粗| 亚洲在线自拍视频| 国产爱豆传媒在线观看 | 大香蕉久久成人网| 欧美国产日韩亚洲一区| av免费在线观看网站| 亚洲国产看品久久| 1024视频免费在线观看| 男女那种视频在线观看| 国产成人欧美| 国产三级黄色录像| 国内精品久久久久久久电影| 一本大道久久a久久精品| 自线自在国产av| 亚洲av美国av| 亚洲人成电影免费在线| 黄色毛片三级朝国网站| 熟女电影av网| 亚洲成人精品中文字幕电影| 男女下面进入的视频免费午夜 | 亚洲成a人片在线一区二区| 一级毛片女人18水好多| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久香蕉精品热| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲黑人精品在线| 制服人妻中文乱码| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 中文字幕人妻熟女乱码| 中文资源天堂在线| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 白带黄色成豆腐渣| 日韩欧美三级三区| 午夜老司机福利片| 日韩国内少妇激情av| 在线视频色国产色| 免费搜索国产男女视频| 欧美久久黑人一区二区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲九九香蕉| 色av中文字幕| 亚洲三区欧美一区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产成人欧美在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 久久亚洲精品不卡| 国产色视频综合| 人人澡人人妻人| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 免费在线观看成人毛片| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美黑人欧美精品刺激| bbb黄色大片| 日韩欧美 国产精品| 在线免费观看的www视频| 青草久久国产| 黑人操中国人逼视频| 国产精品影院久久| av视频在线观看入口| 色综合欧美亚洲国产小说| 757午夜福利合集在线观看| 在线观看一区二区三区| 午夜福利视频1000在线观看| 一级毛片女人18水好多| 国产三级在线视频| 免费看十八禁软件| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 天堂动漫精品| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 99国产精品一区二区三区| 美女大奶头视频| cao死你这个sao货| 日本一本二区三区精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久久精品欧美日韩精品| xxxwww97欧美| 麻豆成人av在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 热99re8久久精品国产| 中文资源天堂在线| 国产精品久久久久久精品电影 | 97碰自拍视频| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| av免费在线观看网站| 深夜精品福利| 国产视频内射| 一级黄色大片毛片| 国产精品九九99| 老司机午夜十八禁免费视频| 少妇 在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 三级毛片av免费| 亚洲一区二区三区不卡视频| 香蕉av资源在线| 久9热在线精品视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 村上凉子中文字幕在线| 俺也久久电影网| 一级毛片精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 日韩av在线大香蕉| 人人妻人人澡人人看| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 欧美成人免费av一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 18美女黄网站色大片免费观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲国产看品久久| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美日韩乱码在线| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久亚洲真实| 最新在线观看一区二区三区| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲五月色婷婷综合| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲av美国av| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产男靠女视频免费网站| 99精品欧美一区二区三区四区| 夜夜爽天天搞| 亚洲一区高清亚洲精品| 中文资源天堂在线| 神马国产精品三级电影在线观看 | 亚洲成人国产一区在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 成人国产综合亚洲| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产成人欧美在线观看| 老司机靠b影院| 91av网站免费观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 一a级毛片在线观看| 青草久久国产| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲五月婷婷丁香| 一级毛片高清免费大全| 午夜福利欧美成人| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美国产精品va在线观看不卡| 免费电影在线观看免费观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| www.999成人在线观看| 亚洲免费av在线视频| 国产精品免费视频内射| videosex国产| 九色国产91popny在线| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 免费看十八禁软件| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产99白浆流出| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 一本久久中文字幕| www日本在线高清视频| 宅男免费午夜| 欧美黄色淫秽网站| 国产爱豆传媒在线观看 | 亚洲avbb在线观看| 男人舔奶头视频| 亚洲五月天丁香| 真人做人爱边吃奶动态| 免费在线观看完整版高清| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 日本成人三级电影网站| 最近最新中文字幕大全免费视频| 男男h啪啪无遮挡| 两个人免费观看高清视频| 国产真实乱freesex| 亚洲最大成人中文| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 99精品久久久久人妻精品| 曰老女人黄片| 黄色视频,在线免费观看| 黄色丝袜av网址大全| 免费看十八禁软件| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久中文看片网| 女人被狂操c到高潮| 妹子高潮喷水视频| 欧美黑人巨大hd| 最新美女视频免费是黄的| 国产三级在线视频| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美日韩精品网址| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品久久久av美女十八| 久久这里只有精品19| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产成人精品久久二区二区91| 高潮久久久久久久久久久不卡| 在线视频色国产色| 精品无人区乱码1区二区| 在线观看66精品国产| 美女高潮到喷水免费观看| 成人亚洲精品av一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一本一本综合久久| 熟女电影av网| 午夜福利在线观看吧| 9191精品国产免费久久| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美久久黑人一区二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 色av中文字幕| 亚洲国产精品999在线| 一级作爱视频免费观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| a级毛片a级免费在线| www.熟女人妻精品国产| 精品电影一区二区在线| 国产色视频综合| 成人国产综合亚洲| 日本a在线网址| 波多野结衣巨乳人妻| 色综合亚洲欧美另类图片| 很黄的视频免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av视频在线观看入口| 男男h啪啪无遮挡| 99热只有精品国产| 精品久久久久久久久久久久久 | 欧美日韩福利视频一区二区| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 少妇粗大呻吟视频| 香蕉国产在线看| 激情在线观看视频在线高清| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 一本大道久久a久久精品| 黄色视频不卡| 看免费av毛片| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 十八禁网站免费在线| 国产久久久一区二区三区| 91成人精品电影| 日韩有码中文字幕| 少妇粗大呻吟视频| 久久久国产成人免费| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 天天添夜夜摸| 国产激情欧美一区二区| 国产一卡二卡三卡精品| 日本在线视频免费播放| 国产亚洲精品第一综合不卡| 99久久精品国产亚洲精品| 黄色 视频免费看| 又大又爽又粗| 在线观看免费视频日本深夜| 久久精品91无色码中文字幕| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 91在线观看av| 日韩视频一区二区在线观看| 看片在线看免费视频| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲国产精品999在线| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 丝袜人妻中文字幕| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 成人精品一区二区免费| 亚洲无线在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 99热只有精品国产| 黄片播放在线免费| 岛国视频午夜一区免费看| www.熟女人妻精品国产| 国产又色又爽无遮挡免费看| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久人人精品亚洲av| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 亚洲五月天丁香| 亚洲国产精品合色在线| 欧美zozozo另类| 欧美 亚洲 国产 日韩一| a级毛片a级免费在线| 丁香六月欧美| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲男人天堂网一区| 国产片内射在线| 婷婷六月久久综合丁香| 国产av一区在线观看免费| 国产又色又爽无遮挡免费看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 一a级毛片在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲精品国产一区二区精华液| 成人三级黄色视频| e午夜精品久久久久久久| 亚洲 国产 在线| 欧美日韩一级在线毛片| 999久久久国产精品视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 悠悠久久av| 在线观看免费日韩欧美大片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲国产精品成人综合色| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本免费a在线| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲无线在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 成在线人永久免费视频| 欧美乱色亚洲激情| av视频在线观看入口| 女性被躁到高潮视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 手机成人av网站| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 极品教师在线免费播放| 亚洲专区字幕在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美精品亚洲一区二区| 俺也久久电影网| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲五月婷婷丁香| 一区二区三区高清视频在线| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 男女午夜视频在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| www日本黄色视频网| 精品日产1卡2卡| avwww免费| 国产激情久久老熟女| 国产高清激情床上av| 亚洲avbb在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| aaaaa片日本免费| 黄色 视频免费看| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品98久久久久久宅男小说| 91av网站免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 69av精品久久久久久| 国产精品国产高清国产av| 啪啪无遮挡十八禁网站| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| a级毛片在线看网站| 日本成人三级电影网站| 真人一进一出gif抽搐免费| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产国语露脸激情在线看| 国产精品影院久久| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产精品久久久av美女十八| 99久久综合精品五月天人人| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产高清videossex| 丰满的人妻完整版| 高潮久久久久久久久久久不卡| 在线天堂中文资源库| 麻豆一二三区av精品| 久久久精品欧美日韩精品| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品久久久久久人妻精品电影| av免费在线观看网站| 一本久久中文字幕| 午夜福利高清视频| 久久久国产成人精品二区| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲avbb在线观看| 久久中文看片网| 日韩大尺度精品在线看网址| a级毛片a级免费在线| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产午夜福利久久久久久| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产男靠女视频免费网站| 欧美一级毛片孕妇| 久久99热这里只有精品18| 久久久久久久久免费视频了| 成人免费观看视频高清| 不卡av一区二区三区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 日韩中文字幕欧美一区二区| 日韩有码中文字幕| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 天堂影院成人在线观看| 国产av不卡久久| 精品国产国语对白av| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产精品1区2区在线观看.| 欧美乱妇无乱码| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国内精品久久久久久久电影| 在线观看一区二区三区| 人人澡人人妻人| 色综合站精品国产| 日韩国内少妇激情av| 最近最新免费中文字幕在线| 老司机靠b影院| 免费在线观看成人毛片| av欧美777| 男女那种视频在线观看| or卡值多少钱| 免费无遮挡裸体视频| 久久性视频一级片| 成人国产一区最新在线观看| 老司机福利观看| 18禁国产床啪视频网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 我的亚洲天堂| 成在线人永久免费视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 99在线视频只有这里精品首页| av中文乱码字幕在线| 99热这里只有精品一区 | 日本黄色视频三级网站网址| 午夜激情福利司机影院| 日韩精品免费视频一区二区三区| 淫妇啪啪啪对白视频| 视频区欧美日本亚洲| 99国产精品一区二区三区| 这个男人来自地球电影免费观看| 男人舔女人的私密视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 免费高清视频大片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 禁无遮挡网站| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产熟女xx| 中亚洲国语对白在线视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 最新在线观看一区二区三区| 香蕉av资源在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 中文亚洲av片在线观看爽| 操出白浆在线播放| 国产不卡一卡二| 黄色a级毛片大全视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 欧美国产精品va在线观看不卡| 午夜免费激情av| 91字幕亚洲| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一二三四社区在线视频社区8| 美国免费a级毛片| 免费看十八禁软件| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产激情久久老熟女| АⅤ资源中文在线天堂| 色婷婷久久久亚洲欧美| 麻豆国产av国片精品| 国产野战对白在线观看| 伦理电影免费视频| 国产精品九九99| 一区二区三区国产精品乱码| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国内精品久久久久精免费| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久草成人影院| 精品人妻1区二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 在线观看66精品国产| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲专区国产一区二区| 欧美日韩福利视频一区二区| 男女下面进入的视频免费午夜 | 免费av毛片视频| 男男h啪啪无遮挡| 男女视频在线观看网站免费 | 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| www日本在线高清视频| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲真实伦在线观看| 级片在线观看| av在线天堂中文字幕| 中文亚洲av片在线观看爽| 99久久精品国产亚洲精品| 午夜免费观看网址| 国产亚洲精品一区二区www| 这个男人来自地球电影免费观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 在线播放国产精品三级| 天天添夜夜摸| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 十分钟在线观看高清视频www| 日韩欧美三级三区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久午夜亚洲精品久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| xxx96com| 午夜亚洲福利在线播放| 国产成人欧美| 99热这里只有精品一区 | 亚洲全国av大片| 国产精品久久电影中文字幕| 久久久国产精品麻豆| 少妇 在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产91精品成人一区二区三区| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 亚洲av五月六月丁香网| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产亚洲精品av在线| 日韩高清综合在线| 亚洲自拍偷在线| 人人澡人人妻人| 两个人视频免费观看高清| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久久久久大精品| 午夜两性在线视频| 狂野欧美激情性xxxx| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品99久久99久久久不卡| 美女 人体艺术 gogo| 国产一卡二卡三卡精品| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 曰老女人黄片| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久中文看片网| 不卡av一区二区三区| 亚洲人成电影免费在线| 丰满的人妻完整版| 国产伦一二天堂av在线观看| 99riav亚洲国产免费| 美女大奶头视频| 一级毛片精品| 又大又爽又粗| 国产在线观看jvid| 真人做人爱边吃奶动态| www.www免费av| 国产精品久久久av美女十八| 成人欧美大片| www.www免费av| 亚洲第一av免费看| 99国产精品99久久久久| 午夜免费激情av| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲中文日韩欧美视频| 午夜福利视频1000在线观看| 99re在线观看精品视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 成年人黄色毛片网站| 午夜福利欧美成人| 91在线观看av| 欧美色视频一区免费| 黄色女人牲交| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久久国产成人免费| 他把我摸到了高潮在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲成人久久爱视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 757午夜福利合集在线观看| 久久这里只有精品19|