ILT4與Ki67在上皮性卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)情況

張彩霞　王麗萍　武建軍　趙靈燕

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院1婦產(chǎn)科，2消化科，呼和浩特0100593內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院呼和浩特010059

4內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院呼和浩特010059

ILT4與Ki67在上皮性卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)情況

張彩霞1王麗萍2#武建軍3趙靈燕4

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院1婦產(chǎn)科，2消化科，呼和浩特0100593內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院呼和浩特010059

4內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院呼和浩特010059

目的探討免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子4（ILT4）與Ki67在上皮性卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)情況。方法回顧性分析70例上皮性卵巢癌患者，通過淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（37例）和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（33例），觀察兩組患者ILT4、Ki67的表達(dá)情況。結(jié)果免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，卵巢癌組織中ILT4表達(dá)水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，Ki67表達(dá)水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組ILT4陽性率35.14%（13/37）低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的84.85%（28/33），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Ki67陽性率表達(dá)81.08%（30/37）高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的45.45%（15/33），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論在上皮性卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中，ILT4水平表達(dá)降低，Ki67表達(dá)升高，可將其作為診斷病情的指標(biāo)。

上皮性卵巢癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子4；Ki67

Oncol Prog，2016，14（6）

上皮性卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤，該病發(fā)病隱匿，易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，并且在臨床上缺少早期診斷方法，若未及時能作出早期診斷，則預(yù)后較差［1-2］。在上皮性卵巢癌患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對腫瘤分期及評估預(yù)后有重要意義［3-4］。研究顯示，免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子4（immunoglobulin-like transcript 4，ILT4）和Ki67與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系，但在婦科腫瘤中對于這兩種指標(biāo)的研究較少［5］。本研究對上皮性卵巢癌患者中ILT4與Ki67表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性進(jìn)行了研究，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2014年11月至2015年11月在我院通過病理學(xué)診斷確診為上皮性卵巢癌的患者70例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①通過國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）中對卵巢惡性腫瘤分期結(jié)果均為Ⅲ、Ⅵ期［6］；②均為初次發(fā)病，且是散發(fā)病例。根據(jù)病理證實是否存有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，將患者分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組37例和吳林壩轉(zhuǎn)移組33例。年齡34～72歲，平均為（50.49±3.71）歲，其中漿液性癌18例，黏液性癌16例，子宮內(nèi)膜樣癌3例，腫瘤分期Ⅲ期30例，Ⅵ期7例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者年齡35～71歲，平均為（51.19±3.69）歲，漿液性癌17例，黏液性癌14例，子宮內(nèi)膜樣癌2例，腫瘤分期Ⅲ期26例，Ⅵ期7例。而且一般資料特征比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），可以進(jìn)行對比分析。

1.2方法

采取所有患者卵巢癌組織，使用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋切片。使用免疫組化二步法染色，切片常規(guī)脫蠟，在4%H2O2中進(jìn)行孵育10 min，水浴95℃，15 min抗原修復(fù)，加入200倍稀釋的一抗之后，4℃過夜；PBS沖洗2～3次，滴入Polymer Helper試劑，37℃孵育20 min；PBS沖洗2～3次，滴入IgG；37℃孵育20 min，PBS沖洗2～3次；DAB顯色，自來水沖洗干凈，復(fù)染、脫水、透明和封片等操作。最后采用PBS進(jìn)行陰性對照，使用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察。其中鼠抗人Ki67單克隆抗體由美國Changdao公司進(jìn)行提供，鼠抗人ILT4單克隆抗體由美國Sunbio公司提供。通過染色的有無及強(qiáng)弱情況進(jìn)行分級，無染色情況為陰性（-），部分腫瘤細(xì)胞發(fā)生染色為弱陽性（+），所有腫瘤細(xì)胞發(fā)生染色為強(qiáng)陽性（++）。并結(jié)合HE染色，選擇5個無壞死細(xì)胞的視野，使用圖像分析團(tuán)建對陽性細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，計算每個視野中每1000個細(xì)胞中陽性細(xì)胞所占的百分比，表示陽性細(xì)胞率表達(dá)情況。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)用SPSS1-8.0軟件包進(jìn)行處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，并采用t檢驗，計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗，等級資料的比較采用秩和檢驗，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者卵巢癌組織中ILT4表達(dá)水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組卵巢癌組織中Ki67表達(dá)水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1　兩組患者ILT4和Ki67表達(dá)水平（%，±s）

表1　兩組患者ILT4和Ki67表達(dá)水平（%，±s）

組別淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（n=37）無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（n=33）ILT4表達(dá)15.67±2.15 31.24±6.81 Ki67表達(dá)38.87±11.23 24.52±6.19

在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中，ILT4（-）的患者高達(dá)64.86%（24/37），ILT4（+）及ILT4（++）的患者依次減少；而無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組ILT4（+）患者占54.55%（18/33），其次是ILT4（++）和ILT4（-），兩組ILT4強(qiáng)弱表達(dá)情況經(jīng)秩和檢驗分析，差異有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者ILT4陽性率35.14%（13/37），低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者的84.85%（28/33），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2　兩組患者ILT4表達(dá)強(qiáng)弱及陽性率比較［n（%）］

2.3兩組患者Ki67表達(dá)強(qiáng)弱及陽性率比較

在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中，Ki67（+）患者占56.76%（21/37），其次是Ki67（++）和Ki67（-）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，Ki67（-）患者占54.54%（18/33），其次是Ki67（+）和Ki67（++），兩組Ki67強(qiáng)弱表達(dá)情況經(jīng)秩和檢驗分析，差異有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者Ki67陽性率81.08%（30/37），高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者的45.45%（15/33），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表3）

表3　兩組患者Ki67表達(dá)強(qiáng)弱及陽性率［n（%）］

3　討論

卵巢的惡性腫瘤在早期診斷上較為困難，約70%的患者在發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)屬腫瘤晚期，致使預(yù)后差，且病死率高［7-8］。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是上皮性卵巢癌中臨床分期的重要依據(jù)，也是指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后的重要因素。研究表明，在腫瘤細(xì)胞中，某些分子表達(dá)與否和水平高低與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移之間存在著一定聯(lián)系［9］。因此在上皮性卵巢癌中，尋找可靠的指標(biāo)對病情分期的判斷及預(yù)后都具有重要的臨床意義。

ILT4是ILTs家族中的重要成員，屬抑制性受體，在單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞中，都有不同程度的表達(dá)，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)，且和多種組織相容性復(fù)合體分子等相互結(jié)合，向細(xì)胞內(nèi)傳達(dá)信號，抑制細(xì)胞免疫功能。研究顯示，ILT4與其配體結(jié)合，通過細(xì)胞內(nèi)免疫絡(luò)氨酸抑制基序的傳遞下發(fā)出負(fù)調(diào)節(jié)信號，從而抑制淋巴細(xì)胞的活化和增殖情況［10］。研究顯示，ILT4在肺癌組織中有不同程度表達(dá)，且和肺癌的發(fā)生進(jìn)展有密切聯(lián)系［11-12］。采用免疫組化法檢測ILT4表達(dá)水平，結(jié)果顯示，ILT4隨上皮性卵巢癌的發(fā)展，表達(dá)強(qiáng)度逐漸下降，在存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的卵巢癌組織中ILT4表達(dá)水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，且陽性率的表達(dá)情況也低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。表明ILT4與上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展有緊密關(guān)系，可成為上皮性卵巢癌臨床診斷的指標(biāo)。

Ki67是反應(yīng)惡性腫瘤細(xì)胞的增殖活性重要分子標(biāo)志物，是目前對腫瘤增殖活性和增殖速率檢測的可靠指標(biāo)。腫瘤的增殖、浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后間關(guān)系密切，Ki67的表達(dá)對細(xì)胞增殖及患者預(yù)后評估具有重要臨床意義。研究顯示，在上皮性卵巢癌患者中，Ki67表達(dá)水平高于良性卵巢上皮性腫瘤患者，且隨著腫瘤分期的增高，Ki67表達(dá)水平也呈上升趨勢［13-14］。本研究結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者卵巢癌組織中Ki67表達(dá)水平高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，且陽性率高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，表明Ki67的表達(dá)可提示腫瘤細(xì)胞的增殖活性和速率，Ki67表達(dá)越高，患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞增殖速率越快，易受到侵襲而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此次研究結(jié)果限制，可以將Ki67的表達(dá)作為判斷是否有淋巴轉(zhuǎn)移情況的重要參考指標(biāo)，對今后在腫瘤的治療方式、療效評估及預(yù)后中都存在積極的臨床意義。

綜上所述，在上皮性卵巢癌中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者ILT4表達(dá)水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，Ki67表達(dá)水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，這兩個指標(biāo)可為臨床診治起到積極作用。

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Expression of ILT4 and Ki67 in patients with epithelial ovarian carcinoma and lymph node metastasis

ZHANG Cai-xia1WANG Li-ping2#WU Jian-jun3ZHAO Ling-yan41Department of Obstetrics，2Department of Gastroenterology，Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical College，Hohhot 010059，Inner Mongolia，China
3Graduate School，4School of Public Health，Inner Mongolia Medical College，Hohhot 010059，Inner Mongolia，China

ObjectiveTo investigate the expression profile of ILT4 and Ki67 in patients with epithelial ovarian carcinoma and lymph node metastasis.MethodA retrospective analysis was performed in 70 patients with epithelial ovarian cancer，who were stratified as lymph node metastasis group（n=37）and non-lymph node metastasis group（n=33）by respective status of metastasis.The expression of ILT4 and Ki67 in both groups were analyzed.ResultIn immunohistochemical analysis，the expression of ILT4 in ovarian cancer tissue of metastasis group was lower than that in non-metastasis group，while the expression of Ki67 was higher in the former than that in the latter（P＜0.05）；the positive rate of ILT4 expression in metastasis group was 35.14%（13/37），lower than that in non-metastasis group at 84.85%（28/33），with significant difference observed（P＜0.05）；while the positive rate of Ki67 was 81.08%（30/37）in metastasis group，higher than that in non-metastasis group at 45.45%（15/33），which was of significant difference（P＜0.05）.Conclusion In epithelial ovarian cancer patients with lymph node metastasis，it is common that low ILT4 expression is accompanied by high expression of Ki67，which can be used as an important index for the diagnosis.

epithelial ovarian cancer；lymphatic metastasis；immunoglobulin-like transcript 4；Ki67

R737.31

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.06.28

2016-02-28）

（corresponding author），郵箱：946908569@qq.com