婦痛寧對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥COX2-PGE2作用途徑的影響*

蘇曉華，宋殿榮，張　崴，郭　潔，王雅楠

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津　300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦科，天津　300150）

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婦痛寧對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥COX2-PGE2作用途徑的影響*

蘇曉華1，宋殿榮2，張崴2，郭潔2，王雅楠2

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦科，天津300150）

［目的］通過研究化瘀散結(jié)中藥婦痛寧對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）病灶中環(huán)氧化酶2（COX2）-前列腺素E2 （PGE2）作用途徑中相關(guān)分子基因和蛋白的表達(dá)，探討婦痛寧對(duì)EMs中血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移方面的影響。［方法］收集EMs患者的異位病灶組織，原代消化培養(yǎng)子宮內(nèi)膜細(xì)胞，將25×106/mL濃度混合培養(yǎng)的異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞注射到裸鼠腹部皮下，成功建立模型后，將成模裸鼠分為空白對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對(duì)照組，分別予無菌生理鹽水、低劑量中藥、中劑量中藥、高劑量中藥和孕三烯酮灌胃，3周后處死裸鼠，取病灶，測(cè)量病灶體積，免疫組化法檢測(cè)各組病灶中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)和微血管密度（MVD），逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)病灶中COX2、PGE2、VEGF、Snail和E-cadherin mRNA的表達(dá)，Western-blot法檢測(cè)病灶中Snail和E-cadherin蛋白的表達(dá)。［結(jié)果］中劑量及高劑量婦痛寧治療組裸鼠異位病灶體積減小、VEGF表達(dá)及MVD均降低，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各劑量治療組裸鼠異位病灶中COX2、PGE2、VEGF、Snail mRNA表達(dá)降低，E-cadherin mRNA表達(dá)升高，且Snail蛋白表達(dá)降低，E-cadherin蛋白表達(dá)升高，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。［結(jié)論］婦痛寧可影響COX2-PGE2作用途徑中與血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的表達(dá)，通過抑制異位病灶的血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移能力而抑制病灶的生長(zhǎng)。

子宮內(nèi)膜異位癥；婦痛寧；COX2-PGE2作用途徑

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）是一種婦科常見疾病，是以有功能的子宮內(nèi)膜組織或細(xì)胞出現(xiàn)在子宮腔以外為特點(diǎn)的慢性疾?。?］。EMs在育齡期婦女中發(fā)病率約為7%～10%［2］，可出現(xiàn)慢性盆腔痛、性交疼痛、痛經(jīng)和不孕等癥狀，可引起女性精神心理障礙和降低社會(huì)功能［3］，嚴(yán)重地影響了女性的健康和生活質(zhì)量。EMs患者的不孕率為非EMs患者人群的20倍［4］，對(duì)其治療也有一定的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，美國(guó)每年需花費(fèi)220億美元［5］、加拿大花費(fèi)18億加幣［6］來治療該病。目前EMs的治療主要包括藥物治療和手術(shù)治療，藥物治療主要是通過降低體內(nèi)激素水平而抑制異位病灶的生長(zhǎng)，使之萎縮，該治療可引起月經(jīng)不調(diào)、陰道干澀、潮熱、體質(zhì)量增加、骨質(zhì)疏松等不良反應(yīng)，且用藥期間不適合妊娠［7］，從而限制了藥物的長(zhǎng)期應(yīng)用。手術(shù)治療后易于復(fù)發(fā)，2 a內(nèi)復(fù)發(fā)率約為21.5%，5 a內(nèi)復(fù)發(fā)率約為40%～50%［8］，因此尋求新的治療方法降低復(fù)發(fā)和減輕不良反應(yīng)是亟待解決的問題。

EMs在中醫(yī)學(xué)屬于“痛經(jīng)”、“癥瘕”的范疇，《景岳全書·婦人規(guī)》指出“瘀血留滯作癥，惟婦人有之，其證則由經(jīng)期或產(chǎn)后，內(nèi)傷生冷或外受風(fēng)寒；或恚怒傷肝，氣逆血留；或憂思傷脾，氣虛而血滯；或積勞積弱，氣弱不行，總由血?jiǎng)又畷r(shí)，余血未凈，而一有所逆則留滯，日積而漸成癥矣”。1990年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科專業(yè)委員會(huì)第三屆學(xué)術(shù)會(huì)議上正式將EMs確定為血瘀證，并得到大家的公認(rèn)。本院著名婦科專家韓冰教授在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，結(jié)合多年治療EMs的臨床經(jīng)驗(yàn)以及對(duì)國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展，確立了“活血化瘀，軟堅(jiān)散結(jié)”為治療大法，擬定代表方劑婦痛寧，臨床應(yīng)用治療EMs患者效果顯著。本課題通過COX2作用途徑研究化瘀散結(jié)中藥婦痛寧對(duì)EMs血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移方面的影響。

1材料與方法

1.1標(biāo)本采集異位子宮內(nèi)膜組織取自2012年10月—2013年12月在天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦科因卵巢巧克力囊腫行手術(shù)剝除的異位病灶，術(shù)后病理證實(shí)符合EMs，患者年齡23～49歲（平均32歲），術(shù)前6個(gè)月內(nèi)未服用抗炎、激素類等藥物治療。共收集異位子宮內(nèi)膜組織30例。所有標(biāo)本的采集均得到患者本人或家屬知情授權(quán)，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

取材后將標(biāo)本迅速放入裝有冰全培基（含有1%雙抗、10%胎牛血清、89%DMEM/F12）的離心管中，30 min內(nèi)移入實(shí)驗(yàn)室于紫外線消毒后的超凈臺(tái)中進(jìn)行操作。

1.2子宮內(nèi)膜細(xì)胞原代培養(yǎng)參考文獻(xiàn)［9］的方法消化培養(yǎng)子宮內(nèi)膜細(xì)胞。

1.3子宮內(nèi)膜細(xì)胞傳代培養(yǎng)原代細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶壁約80%時(shí)進(jìn)行傳代，以1∶2或1∶3比例傳代。將第二代子宮內(nèi)膜細(xì)胞凍存到液氮中備用。

1.4子宮內(nèi)膜細(xì)胞復(fù)蘇從液氮中取出凍存管，迅速放入37℃溫水浴中，輕輕搖晃令其快速解凍，離心后加入含10%胎牛血清的全細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，接種到75 cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

1.5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用鼠齡為5周的健康SPF級(jí)雌性BALB/c裸鼠40只，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)為：SCXK-2012-0004。裸鼠適應(yīng)環(huán)境一周后，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對(duì)照組，每組8只，各組之間體質(zhì)量沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.6造模方法在無菌條件下進(jìn)行操作：將培養(yǎng)的異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞，配制成25×106/mL的濃度，注射至各組裸鼠腹部皮下的4個(gè)部位，即左上象限、左下象限、右上象限和右下象限，每組8只裸鼠，共注射32個(gè)部位。

1.7實(shí)驗(yàn)藥物及給藥方法婦痛寧、孕三烯酮均由天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院提供。參照《人和動(dòng)物間按體表面積折算的等效劑量比率表》，裸鼠用婦痛寧劑量每次約為0.003 9 g/g，2次/日，該劑量為中劑量，低劑量=1/2×中劑量，高劑量=2×中劑量。裸鼠用孕三烯酮?jiǎng)┝棵看渭s為0.00195mg/g，每周2次。

注射細(xì)胞10 d后，空白對(duì)照組每日灌服無菌水，每次0.5 mL，2次/日。低劑量、中劑量和高劑量治療組裸鼠每日灌服不同劑量婦痛寧中藥，每次0.5 mL，2次/日。陽性對(duì)照組裸鼠灌服孕三烯酮，每次0.5 mL，2次/周，其余時(shí)間灌服等量生理鹽水。

1.8觀察指標(biāo)

1.8.1裸鼠一般狀態(tài)治療期間觀察裸鼠的進(jìn)食、活動(dòng)、二便等一般情況。

1.8.2病灶大小游標(biāo)卡尺每日測(cè)量裸鼠腹部皮下病灶大小，并記錄。藥物治療3周后處死裸鼠，各組病灶分別固定在4%福爾馬林溶液、RNA儲(chǔ)存液和磷酸鹽緩沖液（PBS）中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.8.3免疫組化法測(cè)定病灶VEGF表達(dá)及CD34標(biāo)記的微血管密度（MVD） 參考文獻(xiàn)［10］的分析方法，測(cè)定病灶中VEGF表達(dá)和CD34標(biāo)記的微血管，見圖1、圖2。

圖1　VEGF染色強(qiáng)度Fig.1　The staining intensity of VEGF

圖2　CD34標(biāo)記的微血管Fig.2　The microvessels marked by CD34

1.8.4RT-PCR法檢測(cè)各組病灶中COX2、PGE2、VEGF、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)

分別移取0、0.10、0.30、0.50、1.0、3.0、5.0、10.0mL Ga、In、Tl、Cd、Ge混合標(biāo)準(zhǔn)溶液于100mL容量瓶中，用2% HNO3稀釋至刻度、搖勻，此標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中Ga、In、Tl、Cd、Ge的質(zhì)量濃度依次均為0、1.00、3.00、5.00、10.0、30.0、50.0、100.0ng/mL。采取三通閥在線添加的方式加入內(nèi)標(biāo)混合溶液，在選定的儀器工作條件下進(jìn)行測(cè)定并繪制校準(zhǔn)曲線。

1.8.4.1組織總RNA提取嚴(yán)格按試劑盒說明操作。

1.8.4.2引物序列見表1。

表1　COX2、PGE2、VEGF、Snail、E-cadherin、β-actin RT-PCR引物序列Tab.1　The RT-PCR primers sequences of COX2，PGE2，VEGF，Snail，E-cadherin and β-actin

1.8.4.3RT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)嚴(yán)格按試劑盒說明操作。取各組PCR產(chǎn)物7 μL加入樣本孔中行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察電泳條帶，每個(gè)樣本經(jīng)PCR擴(kuò)增后以Marker作為參照。

1.8.4.4PCR產(chǎn)物半定量分析PCR產(chǎn)物電泳后經(jīng)Gel-PRO ANALYZER凝膠定量分析軟件對(duì)電泳條帶進(jìn)行灰度分析，目的基因相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度=目的基因電泳條帶灰度值/β-actin內(nèi)參照條帶灰度值。

1.8.5Western-blot法檢測(cè)各組病灶中Snail、E-cadherin蛋白表達(dá)檢測(cè)蛋白樣品制備，SDS-PACE電泳分離蛋白，轉(zhuǎn)膜，免疫反應(yīng)及化學(xué)發(fā)光、顯影、定影均嚴(yán)格參照試劑盒，按實(shí)驗(yàn)步驟操作。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較若方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett's T3法；等級(jí)資料的比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用Nemenyi檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2病灶體積比較婦痛寧治療低劑量組裸鼠病灶體積與空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；中劑量組和高劑量組裸鼠病灶體積均變小，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；但中劑量組和高劑量組病灶體積均大于陽性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　各組病灶體積比較（±s）Tab.2　Comparison of volume of nidus in each group（±s）

表2　各組病灶體積比較（±s）Tab.2　Comparison of volume of nidus in each group（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01；與陽性對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別　動(dòng)物數(shù)　病灶數(shù)　體積（mm3）空白對(duì)照組　8　32　12.536±0.413低劑量組　8　32　12.241±0.356##中劑量組　8　32　11.685±0.491**##高劑量組　8　32　11.379±0.377**#陽性對(duì)照組　8　32　10.858±0.327

2.3各組病灶中VEGF表達(dá)及微血管密度（MVD）的比較低劑量組病灶中VEGF表達(dá)與空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；中劑量組和高劑量組病灶中VEGF表達(dá)與空白對(duì)照組比較均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與陽性對(duì)照組比較VEGF表達(dá)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3　各組病灶中VEGF比較Tab.3　Comparison of VEGF of nidus in each group

低劑量組MVD與空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；中劑量組和高劑量組MVD與空白對(duì)照組比較均減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但與陽性對(duì)照組比較MVD均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

表4　各組病灶中MVD比較（±s）Tab.4　Comparison of MVD of nidus in each group（±s）

表4　各組病灶中MVD比較（±s）Tab.4　Comparison of MVD of nidus in each group（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與陽性對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別　病灶數(shù)　MVD空白對(duì)照組　32　355.46±30.45低劑量組　32　336.44±44.51##中劑量組　32　303.52±23.70*##高劑量組　32　267.96±20.95**#陽性對(duì)照組　32　229.36±15.26

2.4各組病灶中 COX2、PGE2、VEGF、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)比較婦痛寧治療后低劑量組裸鼠異位病灶COX2、PGE2、VEGF、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)與空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而中、高劑量組COX2、PGE2、VEGF、Snail mRNA表達(dá)比空白對(duì)照組降低，E-cadherin mRNA表達(dá)比空白對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但各治療組COX2、PGE2、VEGF、Snail mRNA表達(dá)均比陽性對(duì)照組升高，E-cadherin mRNA表達(dá)比陽性對(duì)照組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖3、表5。

2.5各組病灶中Snail、E-cadherin蛋白表達(dá)比較婦痛寧治療后低劑量組裸鼠異位病灶Snail、E-cadherin蛋白表達(dá)與空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。中、高劑量組病灶中Snail蛋白表達(dá)比空白對(duì)照組降低，E-cadherin蛋白表達(dá)比空白對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但各治療組Snail蛋白表達(dá)比陽性對(duì)照組升高，E-cadherin蛋白表達(dá)比陽性對(duì)照組比較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖4、表6。

表5　各組病灶中目的基因mRNA表達(dá)量比較（±s）Tab.5　Comparison of target gene mRNA expression of nidus in each group（±s）

表5　各組病灶中目的基因mRNA表達(dá)量比較（±s）Tab.5　Comparison of target gene mRNA expression of nidus in each group（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01，與陽性對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別　動(dòng)物數(shù)　COX2　PGE2　VEGF　Snail　E-cadherin空白對(duì)照組　8　0.965±0.029　0.993±0.029　0.810±0.012　0.590±0.032　0.637±0.021低劑量組　8　0.910±0.044##　0.958±0.015##　0.769±0.039##　0.516±0.059##　0.704±0.022##中劑量組　8　0.804±0.015**##　0.900±0.021**##　0.548±0.041**##　0.410±0.046**##　0.763±0.068**##高劑量組　8　0.691±0.027**#　0.823±0.035**##　0.469±0.015**#　0.348±0.021**#　0.861±0.016**##陽性對(duì)照組　8　0.611±0.041　0.701±0.033　0.397±0.038　0.262±0.029　0.988±0.025

3　討論

圖3　各組子宮內(nèi)膜異位病灶目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig.3　Electrophorogram of target gene amplification products of EMS lesions in each group

圖4　各組子宮內(nèi)膜異位病灶目的蛋白的表達(dá)Fig.4　The expression of target protein of EMS lesions in each group

瘀血內(nèi)停是EMs發(fā)病的病理基礎(chǔ)，故治療當(dāng)以化瘀散結(jié)為主。婦痛寧由丹參、三棱、鱉甲、海藻、薏苡仁、皂角刺組成。方中丹參，性苦、微寒，歸心、肝經(jīng)，能活血化瘀、涼血、養(yǎng)血、止痛，為君藥。三棱性苦、平，莪術(shù)辛、苦、溫，辛以行氣血，苦以通泄、燥濕，二者均歸肝、脾經(jīng)，有破血行氣，消積止痛之功能，共為臣藥。鱉甲、海藻均為咸寒之品，入肝經(jīng)，能活血通經(jīng)。鱉甲為血肉有形之品，用之“以動(dòng)制動(dòng)、以肉治肉”，以其剔邪搜絡(luò)、攻堅(jiān)破積之性，直達(dá)病所，暢通絡(luò)脈氣血。海藻消痰軟堅(jiān)散結(jié)利水，促使停聚之水濕消散，津液盡化霧露；薏苡仁甘、淡、微寒，入脾、胃、肺，功能利水滲濕，健脾以除積濕，調(diào)整機(jī)體水液代謝平衡，三者共為佐藥。皂角刺性辛、溫，能祛痰通竅，消積破癥，活血散結(jié)，其性銳利，易直達(dá)病所，為使藥。全方共奏活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)之功效。

表6　各組病灶目的蛋白表達(dá)量比較（±s）Tab.6　Comparison of target protein expression of nidus in each group（±s）

表6　各組病灶目的蛋白表達(dá)量比較（±s）Tab.6　Comparison of target protein expression of nidus in each group（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，與陽性對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別　動(dòng)物數(shù)　Snail　E-cadherin空白對(duì)照組　8　0.839±0.109　0.457±0.038低劑量組　8　0.790±0.082##　0.546±0.040##中劑量組　8　0.694±0.033*##　0.699±0.078*##高劑量組　8　0.620±0.020**#　0.972±0.135**#陽性對(duì)照組　8　0.515±0.034　1.217±0.193

EMs之發(fā)病多因經(jīng)期、產(chǎn)時(shí)、產(chǎn)后（特別是小產(chǎn)或人工流產(chǎn)后）攝生不慎，外有所感，內(nèi)有所傷，或手術(shù)所傷，使離經(jīng)之血當(dāng)行不行，當(dāng)瀉不瀉，留滯體內(nèi)，成為瘀血。瘀血久停，漸成癥瘕積聚。EMs雖為良性疾病，卻具有無限生長(zhǎng)、生成新生血管、浸潤(rùn)并破壞周圍組織和局部或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等惡性腫瘤的一些特性。在EMs病灶形成過程中，黏附→侵襲→血管形成是主要的病理生理過程［11］。“陽化氣，陰成形”，EMs的無限生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移的特性體現(xiàn)了陽主動(dòng)的性質(zhì)，即性善走竄，易轉(zhuǎn)移到其他臟腑，具有“用為陽”的特點(diǎn)；其生成新生血管、形成病灶有形可見，具有“體為陰”的特點(diǎn)。

COX2是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為PGE2的誘導(dǎo)酶，具有刺激細(xì)胞增殖、抑制凋亡、參與細(xì)胞侵襲、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和促進(jìn)血管生成的作用［12-15］。研究表明伴有盆腔痛癥狀的EMs患者異位病灶COX2、PGE2表達(dá)水平明顯升高［16］。Brenner［17］等研究認(rèn)為EMs患者盆腹腔內(nèi)PGE2可能誘導(dǎo)VEGF的表達(dá)，從而利于子宮內(nèi)膜細(xì)胞形成新生血管。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中、高劑量化瘀散結(jié)中藥婦痛寧治療后EMs模型病灶中VEGF表達(dá)和MVD減少，且COX2、PGE2和VEGF mRNA表達(dá)降低，提示婦痛寧可使異位病灶生成血管能力降低，血液供應(yīng)減少。但各治療組病灶中VEGF表達(dá)和MVD均比陽性對(duì)照組高，COX2、PGE2、VEGF mRNA表達(dá)也比陽性對(duì)照高，提示婦痛寧在抑制異位病灶血管生成方面仍較孕三烯酮療效差。Snail作為E-cadherin的抑制因子，其主要功能是促進(jìn)細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移［18-20］。E-cadherin是細(xì)胞間黏附和維持正常組織結(jié)構(gòu)必須的蛋白，其降低與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有關(guān)。在肺癌中過表達(dá)的COX2誘導(dǎo)產(chǎn)生的PGE2通過促進(jìn)Snail的表達(dá)而抑制E-cadherin的表達(dá)，從而使細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力增加［21］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中、高劑量化瘀散結(jié)中藥婦痛寧治療后EMs模型病灶中參與細(xì)胞侵襲、黏附、轉(zhuǎn)移的Snail mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低，E-cadherin mRNA和蛋白表達(dá)明顯升高，提示婦痛寧可使異位病灶的侵襲、轉(zhuǎn)移能力降低。但各治療組病灶中Snail mRNA和蛋白表達(dá)均比陽性對(duì)照組高，E-cadherin mRNA和蛋白表達(dá)均比陽性對(duì)照組低，提示婦痛寧在抑制異位病灶的侵襲、轉(zhuǎn)移能力方面尚不如孕三烯酮。

孕三烯酮是目前治療EMs和預(yù)防術(shù)后復(fù)發(fā)的常用藥物，其主要不良反應(yīng)有月經(jīng)不規(guī)律、閉經(jīng)、肝功能損害、肥胖、痤瘡、脂溢性皮炎、多毛和聲音改變等，不適宜長(zhǎng)期服用，且服藥期間不能妊娠，不易被患者接受。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示婦痛寧可通過抑制異位病灶的血管生成和降低侵襲、轉(zhuǎn)移能力兩方面同時(shí)達(dá)到治療EMs的作用，即所謂“陽化氣、陰成行”受阻，則新的病灶難以形成而抑制病灶的生長(zhǎng)?；錾⒔Y(jié)中藥婦痛寧雖治療EMs療效不及孕三烯酮，但服藥期間無高雄激素癥狀、不影響月經(jīng)和妊娠，可長(zhǎng)期服用，易被患者接受。在臨床中，婦痛寧可作為孕三烯酮的輔助藥物，治療和預(yù)防EMs術(shù)后的復(fù)發(fā)。

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（本文編輯：馬英，于春泉）

Effect on the COX2-PGE2 pathways of endometriosis by Fu Tong Ning

SU Xiao-hua1，SONG Dian-rong2，ZHANG Wei2，GUO Jie2，WANG Ya-nan2
（1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Department of Gynaecology，The Second Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300150，China）

［Objective］To study the expressions of related molecules gene and protein in COX2-PGE2 pathways of endometriosis lesions by removing blood stasis and dispersing phlegm Chinese medicine，investigate the effects on angiogenesis，invasion and metastasis of EMs by Fu Tong Ning.［Methods］Ectopic endometrial samples were obtained and endometrial cells were cultured respectively.The concentration of 25×106mL co-cultured ectopic endometrial cells of EMs patients were injected into the abdominal subcutaneous tissue of nude mice.After the models were established succeffuly，the model mice were randomly divided into the blank control group，lower dose treatment group，intermediate dose treatment group，high dose treatment group and positive control group.The mice were given sterilized saline solution，lower dose Fu Tong Ning Chinese medicine，intermediate dose Fu Tong Ning Chinese medicine，high dose Fu Tong Ning Chinese medicine and gestrinone capsules respectively.Mice were euthanized after three weeks and taken the lesions.The volumes of lesions were calculated.The expressions of VEGF and CD34 were detected by immunohistochemical examination，then the MVD was calculated.The expressions of COX2，PGE2，VEGF，Snail and E-cadherin mRNA in each group were detected by RT-PCR.The expressions of Snail and E-cadherin protein were detected by Western-blot.［Results］The volumes of lesions were smaller，the expressions of VEGF and MVD were decreased in intermediate and high dose treatment groups，there were statistically significant differences compared with the blank control group（P＜0.05）.The expressions of COX2，PGE2，VEGF and Snail mRNA were decreased，but the expressions of E-cadherin mRNA were increased in each treatment groups，meanwhile.The expressions of Snail protein were decreased and the expressions of E-cadherin protein were increased in each treatment groups，and there were statistically significant differences compared with the blank control group（P＜0.05）.［Conclusion］Fu Tong Ning Chinese medicine could affect the expression of molecules related to angiogenesis，invasion and metastasis in COX2-PGE2 pathways，and the growth of the lesions were restrained by inhibiting the ability of angiogenesis，invasion and metastasis.

endometriosis；Fu Tong Ning；COX2-PGE2 pathway

R285.5

A

1672-1519（2016）08-0481-06

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.08.10

2016-03-24）

蘇曉華（1986-），女，博士，醫(yī)師，主要從事子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制及中醫(yī)藥治療。

宋殿榮，E-mail：songdr58@126.com。