探析生活飲用水微生物檢驗方法和評價標(biāo)準(zhǔn)

廣東省惠州市博羅縣疾病預(yù)防控制中心（516100）陳曉能 鄧育芳

隨著經(jīng)濟的不斷發(fā)展，工業(yè)化建設(shè)的進程也在不斷地加快，導(dǎo)致人們?nèi)粘Ｉ钪械娘嬘盟镂廴驹絹碓絿乐?，也是造成人們疾病的主要原因之一[1][2]。所以，我國政府對生活飲用水的衛(wèi)生問題也越來越關(guān)注，并且多次發(fā)布和修改飲用水衛(wèi)生的標(biāo)準(zhǔn)。在我國，對生活飲用水均采用沉淀、過濾并且加氯消毒，減少水中的微生物，因此生活飲用水中的微生物檢測指標(biāo)就是評價水質(zhì)生物性污染的重要指標(biāo)。與此同時，本文選取一家生活飲用水中的微生物檢驗科抽檢1000例水樣，對其進行微生物大腸菌群檢驗，探討生活飲用水微生物的檢驗方法和評價標(biāo)準(zhǔn)，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取一家生活飲用水中的微生物檢驗科抽檢1000例水樣，所有的水樣選取都是按照《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法水樣的采集與保存》中的規(guī)定進行具體操作。隨機抽取生活的飲用水，并對生活飲用水進行大腸菌群檢測，將其分成觀察組和對比組，對兩組方法收集的1000例的水樣放入試管中進行檢驗。

1.2 方法

1.2.1 觀察組中的多管發(fā)酵法

1.2.1.1 多管發(fā)酵法和需要的儀器和設(shè)備 多管發(fā)酵法主要用于對生活飲用水中總大腸菌群進行測定。總大腸菌群是一種革蘭氏陰性菌，是一類無芽孢桿菌，在培養(yǎng)溫度為37℃的環(huán)境中進行24小時的培養(yǎng)，可產(chǎn)酸產(chǎn)氣、發(fā)酵乳糖，并具有厭氧與需氧的特性。在多管發(fā)酵法中，需要采用培養(yǎng)基及其相關(guān)試劑進行培養(yǎng)，在采用該方法進行檢測時，需要采用培養(yǎng)基與實驗試劑進行測定。首先需要試管、天平、分度吸管、冰箱、顯微鏡、培養(yǎng)箱、小倒管、平皿、錐形瓶、載玻片這些儀器設(shè)備。

1.2.1.2 操作步驟 首先，分別將10mL、1mL水樣放至10mL的雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液以及10mL的單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另外將lmL水樣放入9mL無菌生理鹽水中，將其混勻后，取1mL將其放入單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，并將每一種稀釋度進行5管接種。對于經(jīng)處理后的飲用水，也要每天進行定期檢驗。其次，對水源水樣行檢驗時，當(dāng)發(fā)現(xiàn)水源污染嚴重，應(yīng)將稀釋度加大，將3種接種水樣的稀釋度進行5管接種，共15管。再就是試管接種后，將其置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，時間為24小時。然后，對于產(chǎn)酸產(chǎn)氣的接種管，將其在伊紅美藍瓊脂板上進行轉(zhuǎn)種，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。同時對菌落形態(tài)進行觀察，將紫黑色合并金屬光澤或無金屬光澤以及淡紫紅色且中心部分顏色較深的菌落進行染色，并通過鏡檢進行證實。最后，采用染色鏡進行染色，證實為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則可對其進行乳糖蛋白胨的培養(yǎng)，將接種管置于恒溫培養(yǎng)箱中，進行一天培養(yǎng)之后，出現(xiàn)產(chǎn)酸氣的接種管，則為總大腸菌群陽性。

附表 兩組水樣檢驗對比

1.2.2 對比組中的濾膜法 濾膜法主要采用0.45微米的微孔濾膜對水樣進行過濾，對總大腸菌群進行檢測。所需要的儀器和設(shè)備有0.45微米孔徑濾膜、小倒管、無齒鑷子、濾器、錐形瓶、培養(yǎng)箱、天平、冰箱、顯微鏡、試管、平皿、抽濾設(shè)備，分度吸管、載玻片。其次，濾膜法的具體操作步驟為：①滅菌：采用火焰進行滅菌，可將酒精棉球點燃實施滅菌，還可采用蒸汽滅菌器實施滅菌，滅菌時間為20分鐘。同時，在燒杯中放置濾膜，并將蒸餾水加入燒杯中，將水煮沸三次進行滅菌，每次滅菌時間為15分鐘。②培養(yǎng)：對水樣進行過濾之后，再抽氣5秒，隨后把濾器閥門關(guān)上，并將濾膜用滅菌鑷子夾取至品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，將濾膜截留的細菌面朝上放置，緊貼培養(yǎng)基后在恒溫箱中進行培養(yǎng)。③過濾水樣：將滅菌濾膜采用無菌鑷子進行夾取，將濾膜的粗糙面朝上，置于無菌濾床上，隨后將100mL水樣在濾器中注入，并打開閥門，進行抽濾。

1.3 觀察指標(biāo) 水源污染比較嚴重的水樣在進行檢驗時可以進行稀釋，每遞增一次就換一個滅菌刻度吸管。將試管放置在培養(yǎng)器皿中，將溫度控制在合理的溫度表上。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 對數(shù)據(jù)庫的錄入及統(tǒng)計分析均通過SPSS22.0軟件實現(xiàn)。計量資料的檢驗和計數(shù)資料的檢驗分別采用t 和x來體現(xiàn)。P<0.05表示具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組中合格有478例，不合格22例，總合格率為95.6%。對比組中合格390例，不合格110例，總合格率為78%，觀察組中的檢驗合格率明顯高于對比組，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。詳見附表。

3 討論

有研究顯示，多管發(fā)酵法在對少于1mL的水樣進行接種時，應(yīng)稀釋10倍，隨后取1mL進行接種，采用逐次遞增法進行稀釋，在稀釋時的吸管應(yīng)具有滅菌刻度，它也是生活用水日常的檢驗中最常用的一種檢驗方法[3][4][5]。濾膜法則主要采用0.45微米的微孔濾膜對水樣進行過濾，對總大腸菌群進行檢測，采用火焰進行滅菌，可將酒精棉球點燃實施滅菌，并將蒸餾水加入燒杯中，將水煮沸三次進行滅菌，每次滅菌時間為15分鐘[6][7]。與此同時，生活飲用水的衛(wèi)生與人類身體的健康具有緊密聯(lián)系，所以相關(guān)部門應(yīng)加強飲用水的工作，加大對水源的管理力度，防止水污染。在工作范圍內(nèi)，還應(yīng)該加強對水質(zhì)凈化消毒以及加大對群眾的飲用水衛(wèi)生的宣傳。尤其是對生活飲用水均采用沉淀、過濾并且加氯消毒，減少水中的微生物，因此生活飲用水中的微生物檢測指標(biāo)就是評價水質(zhì)生物性污染的重要指標(biāo)，并且所有的水樣選取都是按照《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法水樣的采集與保存》中的規(guī)定進行具體操作。本次研究，探討生活飲用水微生物的檢驗方法和評價標(biāo)準(zhǔn)。其中，觀察組中的總合格率為95.6%，對比組中的總合格率為78%，觀察組中的檢驗合格率明顯高于對比組，表明了兩組檢驗出來的數(shù)值完全不同，不同的檢驗方法對大腸菌群的檢驗顯得非常重要。這一結(jié)果與相關(guān)文獻報道的數(shù)據(jù)吻合，因此本次研究具有參考價值[8]。綜上所述，多管發(fā)酵法檢驗和濾膜法的比較得出兩組的基本數(shù)據(jù)相同，但是兩組檢驗出來的數(shù)值完全不同，其中有80%的濾膜是通過多管發(fā)酵法來界定的，因此，在相同的檢驗環(huán)境中，不同的檢驗方法對大腸菌群的檢驗顯得非常重要。