• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    山羊MSH4和MSH5基因的cDNA克隆、序列分析及組織表達(dá)

    2016-10-13 13:20:39鄭杰劉霜羅斌胡亮楊珂?zhèn)?/span>字向東
    生物技術(shù)通報(bào) 2016年3期
    關(guān)鍵詞:金堂黑山羊核苷酸

    鄭杰 劉霜 羅斌 胡亮 楊珂?zhèn)?字向東

    (西南民族大學(xué)國家民委動物科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,成都 610041)

    山羊MSH4和MSH5基因的cDNA克隆、序列分析及組織表達(dá)

    鄭杰 劉霜 羅斌 胡亮 楊珂?zhèn)?字向東

    (西南民族大學(xué)國家民委動物科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,成都 610041)

    以低繁藏山羊和高繁金堂黑山羊?yàn)檠芯繉ο?,分別提取處于發(fā)情期的5只藏山羊和5只金堂黑山羊的卵巢、子宮、輸卵管、垂體的總RNA,并通過RT-PCR技術(shù)對MSH4、MSH5基因cDNA進(jìn)行克隆、序列分析,以Real-time PCR技術(shù)對其進(jìn)行組織表達(dá)研究。結(jié)果表明,藏山羊和金堂黑山羊MSH4基因編碼區(qū)均長2 499 bp,編碼832個氨基酸,兩品種基因編碼區(qū)有5處堿基不同,并導(dǎo)致3處氨基酸的差異;MSH5基因編碼區(qū)均長2 496 bp,編碼831個氨基酸,兩品種基因編碼區(qū)有9處堿基不同,并導(dǎo)致5處氨基酸的差異。藏山羊MSH4基因編碼區(qū)核苷酸序列與金堂黑山羊、山羊、綿羊、牛、馬、小鼠、褐家鼠、人的同源性分別為:99.8%、99.8%、99.4%、98.1%、94.4%、85.1%、84.7%和93.5%;藏山羊MSH5基因編碼區(qū)核苷酸序列與金堂黑山羊、山羊、牛、家犬、小鼠、褐家鼠、人的同源性分別為:99.6%、99.6%、97.3%、88.0%、85.8%、85.3%和90.2%。MSH4和MSH5基因mRNA在兩個山羊品種的卵巢、子宮、輸卵管、垂體中均有表達(dá),但兩品種間無顯著性差異(P>0.05)。說明MSH4和MSH5基因在動物進(jìn)化中比較保守,與山羊多羔性狀的相關(guān)性有待進(jìn)一步研究。

    藏山羊;金堂黑山羊;Msh4;Msh5;克隆;定量PCR

    藏山羊主要分布在青藏高原牧區(qū),其繁殖性能較低,多數(shù)一年產(chǎn)一羔[1]。金堂黑山羊產(chǎn)于四川省成都市金堂縣,是經(jīng)過長期自然選擇和人工重點(diǎn)選育的多胎地方山羊品種,其繁殖性能高、產(chǎn)羔率高(一胎2-3羔)[2]。山羊的產(chǎn)羔率是一個經(jīng)濟(jì)價值巨大的數(shù)量性狀,其遺傳力低,只有0.05-0.15[3],表明采用傳統(tǒng)的育種方法難以在較短時間內(nèi)提高山羊的繁殖力。國內(nèi)外研究者從生殖激素基因、綿羊多胎基因等方面開展了山羊多胎機(jī)制研究,但目前對山羊排卵數(shù)性狀形成的生理學(xué)和遺傳學(xué)機(jī)理還不清楚[4,5]。減數(shù)分裂是一種高度保守的有性生殖細(xì)胞分裂方式,是生殖細(xì)胞成熟的重要階段,為染色體數(shù)目的恒定以及生物體的變異奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。減數(shù)分裂的完成需要依賴一系列重要復(fù)雜的過程,任何一個階段出現(xiàn)問題都會導(dǎo)致生殖細(xì)胞異常,使機(jī)體出現(xiàn)生殖障礙。若人的同源染色體在減數(shù)分裂時未分離,會導(dǎo)致不孕和先天缺陷(如唐氏綜合癥)[6]。錯配修復(fù)蛋白除了參與DNA的錯配修復(fù)、細(xì)胞周期的調(diào)控外,還可以影響生殖細(xì)胞減數(shù)分裂過程中DNA重組的忠實(shí)性和效率[7],其缺陷可導(dǎo)致哺乳動物的不孕。對于減數(shù)分裂和錯配修復(fù)蛋白之間關(guān)系的研究是從MSH4、MSH5基因的研究開始的,現(xiàn)已確定參與減數(shù)分裂的錯配修復(fù)蛋白包括:MLH1、MLH3、MSH4、MSH5和PMS2[8]。MSH4和MSH5是MutS同源蛋白DNA錯配修復(fù)蛋白家族中的2個主要成員,二者可以形成異源二聚體,形成的異源二聚體在雙鏈DNA分子上形成“夾子”型結(jié)構(gòu),稱之為Holliday連接體,參與減數(shù)分裂過程中的重組過程,并在減數(shù)分裂Ⅰ期促進(jìn)染色體互換,可影響減數(shù)分裂中交換位點(diǎn)的數(shù)量與分布[9-14]。MSH5蛋白是雄性和雌性小鼠減數(shù)分裂過程中染色體配對和聯(lián)會所必需的,參與DNA損傷應(yīng)答以及在免疫球蛋白多樣性的形成中起重要作用,具有識別并特異性結(jié)合錯配堿基的特殊功能[15-18]。研究發(fā)現(xiàn),Msh4和/或Msh5基因被敲除后會造成小鼠減數(shù)分裂Ⅰ前期染色體聯(lián)會失敗,使得小鼠卵巢功能退化,最終導(dǎo)致其不育[18-22]?,F(xiàn)階段,根據(jù)Shenker等[23]和Kazma等[24]研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)行全基因組關(guān)聯(lián)研究,結(jié)果均發(fā)現(xiàn),MSH5可能是肺癌的一個重要相關(guān)基因。

    目前,有關(guān)MSH4和MSH5基因在人、小鼠、酵母等物種的研究中均有報(bào)道,但在對山羊中的研究尚未見報(bào)道。本研究通過對單胎山羊品種藏山羊與多胎山羊品種金堂黑山羊MSH4和MSH5基因的cDNA克隆、序列分析、組織表達(dá)差異分析,探索MSH4和MSH5基因在山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂中可能發(fā)揮的作用,以期為研究山羊多胎機(jī)制提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及樣品采集 分別選取處于同一發(fā)情周期的健康藏山羊、金堂黑山羊各5只作為研究對象。藏山羊選自四川省理縣,連續(xù)3胎產(chǎn)單羔的母羊;金堂黑山羊選自四川省金堂縣,連續(xù)3胎產(chǎn)3羔的母羊。對選取的10只母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理:將孕酮陰道栓(CIDR)放入山羊陰道內(nèi),經(jīng)11 d后取出,并在取出CIDR前1天肌肉注射氯前列醇鈉(Merck Animal Health,Canada)2 mL,在取出CIDR后40 h左右將山羊進(jìn)行屠宰,屠宰后立即采集垂體、輸卵管、卵巢、子宮等組織放入凍存管中,并做好標(biāo)記投入到液氮罐中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.1.2 主要試劑 反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Fermentas(MBI)公司;DNA Marker DL2000、2×Taq PCR MasterMix、感受態(tài)細(xì)胞均購自上海天根生物科技有限公司;DNA凝膠回收試劑盒購自愛思進(jìn)生物技術(shù)(杭州)有限公司;氨芐青霉素、克隆載體pMD19-T Vector 購自大連寶生物工程有限公司;E.coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞購自康迪生物技術(shù)有限公司;SsoAdvancedTMSYBR?Green Supermix、八連管、蓋子均購自伯樂公司;引物合成與測序由成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司完成。

    1.2 方法

    1.2.1 總RNA的提取及cDNA的合成 在同一條件下,采用Trizol法分別提取藏山羊、金堂黑山羊4種組織(垂體、輸卵管、卵巢、子宮)的總RNA。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行cDNA的合成。

    1.2.2 引物設(shè)計(jì)與PCR擴(kuò)增目的片段 根據(jù)NCBI上已發(fā)表的MSH4、MSH5的基因序列,利用引物設(shè)計(jì)軟件Primer Premier 5設(shè)計(jì)克隆引物,引物序列見表1。以合成的卵巢cDNA第一鏈為模板,擴(kuò)增MSH4、MSH5基因,PCR擴(kuò)增程序:95℃預(yù)變性4 min;95℃變性45 s,MSH4、MSH5退火溫度分別為55℃/40 s、53.2℃/40 s,72℃延伸120 s,30個循環(huán);最后72℃延伸5 min;4℃保存。

    表1 克隆引物序列

    1.2.3 目的基因的克隆與測序 用1%瓊脂糖凝膠電泳對PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測,并用愛思進(jìn)DNA凝膠回收試劑盒對其進(jìn)行回收純化。將回收產(chǎn)物與pMD19-T Vector于16℃連接過夜,再將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化宿主菌E.coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞,并涂布于含有氨芐青霉素的LB固體培養(yǎng)基上,37℃恒溫培養(yǎng)12 h。挑選白色單克隆菌落于含有芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基中,37℃震蕩培養(yǎng)12 h,再對菌液做PCR鑒定,產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測后,挑選藏山羊、金堂黑山羊的陽性克隆菌液各2 mL送至成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司測序。

    1.2.4 山羊MSH4、MSH5基因的生物信息學(xué)分析 通過DNAman、DNAstar等生物分析軟件對基因序列進(jìn)行同源性比對,利用生物軟件MEGA 5.1構(gòu)建核苷酸系統(tǒng)進(jìn)化樹。

    1.2.5 實(shí)時熒光定量PCR 根據(jù)已克隆出的藏山羊和金堂黑山羊MSH4、MSH5的序列設(shè)計(jì)基因的定量引物,引物序列及擴(kuò)增長度見表2。

    表2 定量引物序列

    對藏山羊、金堂黑山羊的垂體,輸卵管,卵巢,子宮中的MSH4、MSH5基因及內(nèi)參β-actin基因mRNA表達(dá)量進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR檢測。反應(yīng)體系為10 μL:上下游引物各0.8 μL,cDNA模板0.5 μL,ddH2O 2.9 μL,SsoAdvancedTMSYBR?Green Supermix 5 μL。反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性3 min;95℃變性10 s,MSH4、MSH5退火溫度分別為61℃/20 s、60℃/20 s,65℃延伸5 s,40個循環(huán);65℃延伸5 min;4℃保存。每個樣品設(shè)置3個重復(fù),并設(shè)置陰性對照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用Pfaffl法[25]分析MSH4、MSH5基因分別在兩種山羊不同組織中的相對表達(dá)量,計(jì)算公式為:

    其中,Etarget表示目的基因的擴(kuò)增效率;Eref表示內(nèi)參基因的擴(kuò)增效率;△Ct1表示對照樣本中目的基因的CT值與實(shí)驗(yàn)樣本中目的基因CT值之差,△Ct2表示對照樣本中內(nèi)參基因的CT值與實(shí)驗(yàn)樣本中內(nèi)參基因的CT值之差。

    2 結(jié)果

    2.1 藏山羊和金堂黑山羊MSH4、MSH5基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

    吸取藏山羊和金堂黑山羊MSH4、MSH5基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物各5 μL,進(jìn)行電泳檢測。經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測條帶后,結(jié)果(圖1和圖2)顯示,其中MSH4上半段、下半段和MSH5上半段、下半段條帶與預(yù)期大小基本一致,且目的條帶明亮清晰,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    2.2 藏山羊和金堂黑山羊MSH4、MSH5基因核苷酸序列比對

    獲得的藏山羊、金堂黑山羊的MSH4和MSH5基因測序已提交到NCBI中(MSH4登錄號分別為KR864751和KR864752,MSH5登錄號分別為KR864753和KR864754)。藏山羊和金堂黑山羊MSH4基因編碼區(qū)均長2 499 bp,編碼832個氨基酸,兩品種基因編碼區(qū)有5處堿基不同,并導(dǎo)致了3處氨基酸的差異。藏山羊和金堂黑山羊MSH5基因編碼區(qū)均長2 496 bp,編碼831個氨基酸,兩品種基因編碼區(qū)有9處堿基不同,并導(dǎo)致了5處氨基酸的差異(表3)。

    圖1 MSH4基因PCR產(chǎn)物電泳檢測

    圖2 MSH5基因PCR產(chǎn)物電泳檢測

    表3 藏山羊和金堂黑山羊MSH4、MSH5基因序列差異

    2.3 MSH4、MSH5基因編碼區(qū)核苷酸序列同源性比對

    通過DNAstar分析藏山羊和金堂黑山羊與其他物種MSH4、MSH5基因編碼區(qū)核苷酸序列同源性,結(jié)果顯示,藏山羊MSH4基因編碼區(qū)核苷酸序列與金堂黑山羊、山羊(XM_005678235)、綿羊(XM_004002088)、牛(NM_001206255)、馬(XM_ 001918273)、小鼠(AF178957)、褐家鼠(NM_001-106477)和人(HSU89293)的同源性分別為:99.8%、99.8%、99.4%、98.1%、94.4%、85.1%、84.7%和93.5%;藏山羊MSH5基因編碼區(qū)核苷酸序列與金堂黑山羊、山羊(XM_005696572)、牛(NM_ 001205-499)、家犬(XM_005627746)、小鼠(AF-107352)、褐家鼠(NM_212536)和人(AF070071)的同源性分別為:99.6%、99.6%、97.3%、88.0%、85.8%、85.3%和90.2%。

    2.4 MSH4、MSH5基因系統(tǒng)發(fā)生樹的構(gòu)建

    利用Clustal X、MAGA5.1對相應(yīng)物種的MSH4、MSH5基因編碼區(qū)進(jìn)行多序列對比,并構(gòu)建基因Neighbor-Joining(NJ)系統(tǒng)發(fā)生樹(圖3和圖4)。圖3顯示,藏山羊首先與金堂黑山羊、山羊聚為一類,再依次與綿羊、牛、馬、人聚為一類,最后與小鼠、褐家鼠聚為一類。圖4顯示,藏山羊首先與山羊聚為一類,再依次與金堂黑山羊、牛、家犬、人聚為一類,最后與小鼠、褐家鼠聚為一類。系統(tǒng)發(fā)生樹的構(gòu)建結(jié)果與核苷酸同源性比對結(jié)果一致,與哺乳動物進(jìn)化程度相符合。

    2.5 目的基因組織表達(dá)差異分析

    本實(shí)驗(yàn)通過實(shí)時熒光定量PCR技術(shù),以β-actin基因?yàn)閰⒄眨瑱z測MSH4、MSH5基因在單胎品種藏山羊和多胎品種金堂黑山羊不同組織間mRNA表達(dá)量,結(jié)果表明:MSH4和MSH5的mRNA在山羊卵巢、子宮、輸卵管、垂體中均有表達(dá),但兩個品種間mRNA表達(dá)量無顯著性差異(P>0.05,圖5和圖6)。

    圖3 MSH4基因的核苷酸系統(tǒng)發(fā)生樹

    圖4 MSH5基因的核苷酸系統(tǒng)發(fā)生樹

    圖5 MSH4基因在藏山羊和金堂黑山羊不同組織中的相對表達(dá)量(±s)

    圖6 MSH5基因在藏山羊和金堂黑山羊不同組織中的相對表達(dá)量(±s)

    3 討論

    山羊的產(chǎn)羔率是一個具有巨大經(jīng)濟(jì)價值的數(shù)量性狀,提高山羊的產(chǎn)羔率已成為提高養(yǎng)羊業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的重要途徑。山羊的產(chǎn)羔率主要取決于一個發(fā)情周期的排卵數(shù),所以研究者對山羊開展了大量有關(guān)生殖激素基因、綿羊多胎基因等方面的研究,以期揭示其排卵數(shù)性狀形成的分子調(diào)控機(jī)制,但未取得突破性進(jìn)展[3,26]。減數(shù)分裂是生物體有性生殖的基礎(chǔ),是生物遺傳、進(jìn)化和多樣性的重要保證,受精和減數(shù)分裂一同確保了物種世代染色體數(shù)目的穩(wěn)定不變。研究報(bào)道,在生殖細(xì)胞減數(shù)分裂過程中,若減數(shù)分裂相關(guān)基因遭到破壞,則后期卵巢內(nèi)生殖細(xì)胞迅速凋亡,機(jī)體出現(xiàn)生殖障礙[20],雌性動物主要表現(xiàn)為卵巢功能早衰,雄性動物主要表現(xiàn)為少精、無精等生精缺陷。錯配修復(fù)蛋白主要參與了減數(shù)分裂粗線期的細(xì)胞同源重組,在一定程度上保證生殖細(xì)胞在減數(shù)分裂過程中的高效率與準(zhǔn)確性。MSH4、MSH5是MutS同源蛋白DNA錯配修復(fù)蛋白中的兩個重要成員,二者以MSH4-MSH5異源二聚體的形式通過重組參與減數(shù)分裂,并且MSH4、MSH5蛋白的表達(dá)大部分在睪丸跟卵巢,說明它們對生殖細(xì)胞的發(fā)育與減數(shù)分裂有直接作用[27-29]。Ross-Macdonald等[30]報(bào)道,敲除MSH4基因的小鼠的精子與卵母細(xì)胞出現(xiàn)了受損的聯(lián)會復(fù)合體結(jié)構(gòu)以及染色體錯配現(xiàn)象。MSH4和/或MSH5基因敲除的小鼠生長發(fā)育正常,但生殖器官出現(xiàn)異常,雄性小鼠表現(xiàn)為睪丸縮小,雌性小鼠則表現(xiàn)為卵巢退化,最終導(dǎo)致不育[19-21]。研究結(jié)果表明MSH4、MSH5基因在小鼠的減數(shù)分裂Ⅰ期同源染色體配對中起到至關(guān)重要的作用[20,31]。

    本實(shí)驗(yàn)選取連續(xù)3胎產(chǎn)單羔的藏山羊和連續(xù)3胎產(chǎn)3羔的金堂黑山羊?yàn)檠芯繉ο螅寺〉玫礁髯缘腗SH4、MSH5基因序列。藏山羊MSH4基因編碼區(qū)序列與金堂黑山羊有5處堿基不同,導(dǎo)致3處氨基酸的差異;MSH5基因編碼區(qū)序列有9處堿基不同,導(dǎo)致5處氨基酸的差異。藏山羊與金堂黑山羊MSH4、MSH5氨基酸序列的差異是否會引起生殖細(xì)胞減數(shù)分裂的變化,進(jìn)而使得山羊排卵數(shù)發(fā)生改變而影響山羊的繁殖性狀還有待進(jìn)一步研究。藏山羊和金堂黑山羊MSH4、MSH5基因編碼區(qū)序列與牛、小鼠、人等都具有較高的同源性,說明MSH4和MSH5基因在哺乳動物進(jìn)化中均具有較高的保守性。根據(jù)MSH4和MSH5基因編碼區(qū)核苷酸序列構(gòu)建的分子系統(tǒng)發(fā)生樹,藏山羊、金堂黑山羊跟山羊親緣關(guān)系最近,各分支置信度高,表明系統(tǒng)發(fā)生樹具有較高的可信度。MSH4、MSH5的mRNA分別在藏山羊和金堂黑山羊的卵巢、子宮、輸卵管和垂體中均有表達(dá),但兩個品種各組織間mRNA表達(dá)量均無顯著性差異(P>0.05),說明兩個基因在山羊卵巢、子宮等組織中發(fā)揮著重要的作用,但是這兩個基因mRNA表達(dá)量的差異可能不是引起排卵數(shù)差異的主要原因。

    4 結(jié)論

    采用RT-PCR技術(shù),首次克隆了藏山羊、金堂黑山羊MSH4和MSH5基因,兩個山羊品種的MSH4基因編碼區(qū)序列有5處堿基不同,導(dǎo)致3處氨基酸的差異;MSH5基因編碼區(qū)序列有9處堿基不同,導(dǎo)致5處氨基酸的差異。MSH4和MSH5基因在兩個山羊品種的卵巢、子宮、輸卵管和垂體中均有表達(dá),但品種間mRNA表達(dá)量無顯著性差異。

    [1] 王杰, 王永, 歐陽熙, 等. 藏山羊研究[J]. 中國畜牧雜志,1993, 29(1):10-13.

    [2] 許德貴, 張家明, 唐詩軍, 等. 金堂黑山羊生產(chǎn)性能研究[J].四川畜牧獸醫(yī), 2006, 33(11):25-26.

    [3] Notter DR. Genetic improvement of reproductive efficiency of sheep and goats[J]. Anim Reprod Sci, 2012, 130(3-4):147-151.

    [4] 胡亮, 龍石太, 吳憲紅, 等. 川中黑山羊OPN基因cDNA克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 42(5):34-36.

    [5] 龍石太, 胡亮, 吳憲紅, 等. 川中黑山羊BMP2、BMP4基因cDNA克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 42(3):19-23.

    [6] Nagaoka SI, Hassold TJ, Hunt PA. Human aneuploidy:mechanisms and new insights into an age-old problem[J]. Nat Rev Genet,2012, 13:493-504.

    [7] Schroering AG, Edelbrock MA, Richards TJ, et al. The cell cycle and DNA mismatch repair[J]. Exper Cell Res, 2007, 313(2):292-304.

    [8] Jirieny J. The multifaceted mismatch-repair system[J]. Nat Rev Mol Cell Biol, 2006, 7(5):335-346.

    [9] Eisen JA. A phylogenomic study of the MutS family of proteins[J]. Nucleic Acids Res, 1998, 26(18):4291-4300.

    [10] Fishel R, Wilson T. MutS homologs in mammalian cells[J]. Curr Opin Genet Dev, 1997, 7(1):105-113.

    [11] Karen VM, Cassandra J, Yashna T, et al. Separable crossoverpromoting and crossover-constraining aspects of Zip1 activity during budding yeast meiosis[J]. PLoS Genet, 2015, 11(6):e1005335.

    [12] 駱驊. 黃牛和犏牛睪丸組織中減數(shù)分裂同源重組基因表達(dá)、克隆與啟動子區(qū)甲基化分析[D]. 南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

    [13] 祿婷婷. 錯配修復(fù)蛋白基因多態(tài)性與少精、無精癥的相關(guān)研究[D]. 長沙:中南大學(xué), 2009.

    [14] Ramaswamy R, Narayanaswamy S, Koodali TN. Structural insights into saccharomyces cerevisiae Msh4-Msh5 complex function using homology modeling[J]. PLoS One, 2013, 8(11):e78753.

    [15] Snowden T, Acharya S, Butz C, et al. hMSH4-hMSH5 recognizes Holliday Junctions and forms a meiosis-specific sliding clamp that embraces homologous chromosomes[J]. Mol Cell, 2004, 15(3):437-451.

    [16] 祿婷婷, 徐克前. 一組多功能的錯配修復(fù)蛋白[J]. 生命的化學(xué), 2008, 165(6):696-700.

    [17] Wu XL, Xu KQ, Her CT. The Role of muS homologues MSH4 and MSH5 in DNA metabolism and damage response[M]// Kusic-Tisma J. DNA replication and related cellular processes. Rijeka,Croatia:In Tech Press, 2001:87-110.

    [18] Her C, Zhao N, Wu X, et al. MutS homologues hMSH4 and hMSH5:diverse functional implications in humans[J]. Front Biosci, 2007, 12(3):905-911.

    [19] Edelmann W, Cohen PE, Kneitz B, et al. Mammalian MutS homologue 5 is required for chromosome pairing in meiosis[J]. Nature Genetics, 1999, 21:123-127.

    [20] Kneitz B, Cohen PE, Avdievich E, et al. MutS homolog 4 localization to meiotic chromosomes is required for chromosome pairing during meiosis in male and female mice[J]. Genes Dev,2000, 14(9):1085-1097.

    [21] De Vries SS, Baart EB, Dekker M, et al. Mouse MutS-like protein Msh5 is required for proper chromosome synapsis in male and female meiosis[J]. Genes Dev, 1999, 13(5):523-531.

    [22] Ehrenstein MR, Neuberger MS. Deficiency in Msh2 affects the efficiency and local sequence specificity of immunoglobulin classswitch recombination:parallels with somatic hypermutation[J]. EMBO J, 1999, 18(12):3484-3490.

    [23] Shenker NS, Polidoro S, van Veldhoven K, et al. Epigenome-wide association study in the European Prospective Investigation into Cancer and Nutrition(EPIC-Turin)identifies novel genetic loci associated with smoking[J]. Hum Mol Genet, 2013, 22(5):843-851.

    [24] Kazma R, Babron MC, Gaborieau V, et al. Lung cancer and DNA repair genes:multilevel association analysis from the International Lung Cancer Consortium[J]. Carcinogenesis, 2012, 33(5):1059-1064.

    [25] Pfaffl MW. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR[J]. Nucleic Acids Res, 2001, 29(9):e45.

    [26] 胡亮, 字向東, 盧建遠(yuǎn), 等. 多胎和單胎山羊品種Bcl-2和Bax基因的克隆及組織表達(dá)研究[J]. 畜牧與獸醫(yī), 2015, 47(1):28-32.

    [27] Bocker T, Barusevicius A, Snowden T, et al. hMSH5:a human MutS homologue that forms a novel heterodimer with hMSH4 and is expressed during spermatogenesis[J]. Cancer Res, 1999, 59(4):816-822.

    [28] Her C, Doggett NA. Cloning, structural characterization, and chromosomal localization of the humanorthologue of Saccharomyces cerevisiae MSH5 gene[J]. Genomics, 1998, 52(1):50-61.

    [29] Moens PB, Kolas NK, Tarsounas M, et al. The time course and chromosomal localization of recombination-related proteins at meiosis in the mouse are compatible with models that can resolve the early DNA-DNA interactions without reciprocal recombination[J]. J Cell Sci, 2002, 115(8):1611-1622.

    [30] Ross-Macdonald P, Roeder GS. Mutation of a meiosis-specific MutS homolog decreases crossing over but not mismatch correction[J]. Cell, 1994, 79(6):1069-1080.

    [31] Her C, Wu X, Griswold MD, et al. Human MutS homologue MSH4 physically interacts with von Hippel-Lindau tumor suppressorbinding protein 1[J]. Cancer Res, 2003, 63(4):865-872.

    (責(zé)任編輯 馬鑫)

    cDNA Cloning,Sequence Analysis and Tissue Expression of Gene MSH4 and MSH5 in Goats

    ZHENG Jie LIU Shuang LUO Bin HU Liang YANG Ke-wei ZI Xiang-dong
    (The Key Laboratory of Animal Science of State Ethnic Affairs Commission,Southwest University for Nationalities,Chengdu 610041)

    The total RNA of ovary,endometrium,oviduct and pituitary extracted from 5 Tibetan goats and 5 Jintang black goats in the period of estrus were used to clone and analyze cDNA sequences of gene MSH4 and MSH5 by RT-PCR,and their expression levels in different tissues were determined by real-time PCR. The result showed that the coding region of gene MSH4 from Tibetan goat and Jintang black goat were 2 499 bp,encoding 832 amino acids;there were 5 base variations between two breeds,leading to 3 differences of amino acid. The coding region of gene MSH5 from Tibetan goat and Jintang black goat were 2 496 bp,encoding 831 amino acids;there were 9 base variations between two breeds,leading to 5 differences in amino acid. The nucleotide sequences of coding region of gene MSH4 from Tibetan goat were 99.8%,99.8%,99.4%,98.1%,94.4%,85.1%,84.7% and 93.5% homology with that of Jintang black goat,Capra hircus,Ovis aries,Bos taurus,Equus caballus,Mus musculus,Rattus norvegicus,and Homo sapiesn,respectively. The nucleotide sequences of coding region of gene MSH5 from Tibetan goat were 99.6%,99.6%,97.3%,88.0%,85.8%,85.3% and 90.2% homology with that of Jintang black goat,C. hircus,B. taurus,Canis lupus familiaris,M. musculus,R. norvegicus,and H. sapiens,respectively. The mRNA of gene MSH4 and MSH5 were all expressed in ovary,endometrium,oviduct and pituitary of two breeds of goat,but there was no significant difference between two breeds(P>0.05). The results reveal that both gene MSH4 and MSH5 are conservative in the course of animal evolution,and the role of their effect on prolificacy of goats needs to be further studied.

    Tibetan goat;Jintang black goat;MSH4;MSH5;cloning;qPCR

    10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.016

    2015-06-29

    四川省應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目(2013JY0043),西南民族大學(xué)研究生創(chuàng)新型科研項(xiàng)目(CX2015SZ088)

    鄭杰,男,碩士研究生,研究方向:動物遺傳育種與繁殖;E-mail:zhengjie201505@163.com

    字向東,男,教授,研究方向:動物遺傳育種與繁殖;E-mail:zixd@sina.com

    猜你喜歡
    金堂黑山羊核苷酸
    “五老”精神
    中國火炬(2023年4期)2023-04-21 01:45:38
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關(guān)性研究進(jìn)展
    云上黑山羊品種介紹
    徐長風(fēng):核苷酸類似物的副作用
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:48:28
    提升技能促進(jìn)就業(yè) 打造“金堂焊工”勞務(wù)品牌
    云上黑山羊品種介紹
    云上黑山羊品種介紹
    Acknowledgment to reviewers—November 2018 to September 2019
    Numerical simulation of cementing displacement interface stability of extended reach wells *
    黑山羊羊痘病的發(fā)生原因及防治
    99久久无色码亚洲精品果冻| 在线天堂最新版资源| 91在线精品国自产拍蜜月 | 亚洲成av人片在线播放无| 在线天堂最新版资源| 草草在线视频免费看| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美3d第一页| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲精品在线观看二区| 久久久国产精品麻豆| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 色在线成人网| 性色av乱码一区二区三区2| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 精品一区二区三区av网在线观看| 不卡一级毛片| 国产黄a三级三级三级人| 国产亚洲精品久久久com| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产探花极品一区二区| eeuss影院久久| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲av免费高清在线观看| 天堂影院成人在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 色吧在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国语自产精品视频在线第100页| 久久久久亚洲av毛片大全| 变态另类丝袜制服| 在线免费观看不下载黄p国产 | 午夜久久久久精精品| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美bdsm另类| 69av精品久久久久久| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲一区二区三区不卡视频| 精品人妻1区二区| 成人特级av手机在线观看| 毛片女人毛片| 亚洲av不卡在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 色哟哟哟哟哟哟| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日韩av在线大香蕉| 午夜久久久久精精品| 精品不卡国产一区二区三区| 一二三四社区在线视频社区8| 日韩亚洲欧美综合| 午夜视频国产福利| 在线视频色国产色| 丝袜美腿在线中文| 观看免费一级毛片| 国产爱豆传媒在线观看| 18禁在线播放成人免费| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久久久久久久久大av| 成人无遮挡网站| svipshipincom国产片| 激情在线观看视频在线高清| 97超视频在线观看视频| 可以在线观看的亚洲视频| 麻豆一二三区av精品| 国产乱人视频| 精品免费久久久久久久清纯| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| av福利片在线观看| www.999成人在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 99热精品在线国产| 久久国产乱子伦精品免费另类| 日韩欧美免费精品| 欧美极品一区二区三区四区| 在线天堂最新版资源| 99精品欧美一区二区三区四区| 毛片女人毛片| 免费av观看视频| 国产男靠女视频免费网站| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲国产精品久久男人天堂| 三级国产精品欧美在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 久久久国产成人精品二区| 欧美乱色亚洲激情| 一进一出好大好爽视频| 亚洲人成电影免费在线| 我要搜黄色片| 青草久久国产| 亚洲国产欧美网| 国产三级在线视频| 91久久精品国产一区二区成人 | 国产男靠女视频免费网站| 制服丝袜大香蕉在线| 欧美一级毛片孕妇| 国产视频一区二区在线看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 桃色一区二区三区在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 麻豆国产97在线/欧美| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久这里只有精品中国| 一级作爱视频免费观看| 天天一区二区日本电影三级| 日本精品一区二区三区蜜桃| 女人被狂操c到高潮| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产淫片久久久久久久久 | 国产精品99久久99久久久不卡| 一进一出好大好爽视频| 免费在线观看成人毛片| 国产精品99久久99久久久不卡| 精品乱码久久久久久99久播| xxxwww97欧美| 欧美区成人在线视频| 波多野结衣高清作品| 51国产日韩欧美| 欧美+日韩+精品| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲精品色激情综合| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 18禁国产床啪视频网站| 偷拍熟女少妇极品色| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久久色成人| 99久国产av精品| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美乱码精品一区二区三区| 成人永久免费在线观看视频| 国产亚洲精品av在线| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久人人精品亚洲av| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲无线在线观看| www.www免费av| 淫妇啪啪啪对白视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 美女大奶头视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产探花在线观看一区二区| 午夜福利高清视频| АⅤ资源中文在线天堂| 免费看日本二区| 国产伦一二天堂av在线观看| 日韩欧美精品v在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 9191精品国产免费久久| 香蕉av资源在线| 久99久视频精品免费| 日本熟妇午夜| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 搡老岳熟女国产| 哪里可以看免费的av片| 麻豆国产97在线/欧美| 制服丝袜大香蕉在线| 精品欧美国产一区二区三| 国内精品久久久久久久电影| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产伦人伦偷精品视频| 国模一区二区三区四区视频| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲人成网站在线播| 国内精品美女久久久久久| av在线天堂中文字幕| 国产成人啪精品午夜网站| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美一级a爱片免费观看看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 最近最新免费中文字幕在线| 中文资源天堂在线| 欧美午夜高清在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 黄色日韩在线| 免费大片18禁| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 久久久久久国产a免费观看| 精品日产1卡2卡| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 99热这里只有精品一区| 日本五十路高清| 午夜福利在线观看吧| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美bdsm另类| av片东京热男人的天堂| 三级国产精品欧美在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 18+在线观看网站| 一进一出好大好爽视频| 国产69精品久久久久777片| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲在线观看片| 成人三级黄色视频| 国产成人av教育| 欧美日韩精品网址| 制服丝袜大香蕉在线| 久久久精品大字幕| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 操出白浆在线播放| 在线天堂最新版资源| 我要搜黄色片| 人人妻人人看人人澡| 他把我摸到了高潮在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 91久久精品电影网| 日韩高清综合在线| 岛国在线观看网站| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 丰满的人妻完整版| 欧美另类亚洲清纯唯美| 免费看a级黄色片| 国产精华一区二区三区| 757午夜福利合集在线观看| 国产成人福利小说| 国产高清三级在线| 热99在线观看视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产爱豆传媒在线观看| a在线观看视频网站| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 91久久精品电影网| 给我免费播放毛片高清在线观看| 一级黄色大片毛片| 两个人视频免费观看高清| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲av免费在线观看| 精品日产1卡2卡| 男人舔奶头视频| 免费观看的影片在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 午夜免费成人在线视频| 51国产日韩欧美| 全区人妻精品视频| 国模一区二区三区四区视频| 国产黄片美女视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲成人精品中文字幕电影| 午夜激情欧美在线| 成年女人看的毛片在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 婷婷精品国产亚洲av| 我要搜黄色片| 搡老熟女国产l中国老女人| 免费高清视频大片| 国产色爽女视频免费观看| 最新中文字幕久久久久| 久久久国产成人精品二区| 精品电影一区二区在线| 精品一区二区三区视频在线 | 国产精品美女特级片免费视频播放器| 午夜两性在线视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品99久久99久久久不卡| 我要搜黄色片| 一本综合久久免费| 欧美性感艳星| 在线观看舔阴道视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 成人无遮挡网站| 亚洲最大成人中文| 69人妻影院| 久久精品国产综合久久久| 亚洲内射少妇av| 观看免费一级毛片| 黄片小视频在线播放| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲国产色片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美精品啪啪一区二区三区| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 99久久九九国产精品国产免费| 18禁在线播放成人免费| 中文字幕av在线有码专区| 长腿黑丝高跟| 国产探花在线观看一区二区| 哪里可以看免费的av片| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产av不卡久久| 男女那种视频在线观看| 88av欧美| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品一及| 中文在线观看免费www的网站| 欧美bdsm另类| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 美女大奶头视频| e午夜精品久久久久久久| 国产乱人视频| 国产中年淑女户外野战色| 精品一区二区三区人妻视频| 久久久国产成人免费| 在线天堂最新版资源| 色精品久久人妻99蜜桃| 又紧又爽又黄一区二区| 俺也久久电影网| av福利片在线观看| 日本 欧美在线| 成人国产综合亚洲| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 老司机深夜福利视频在线观看| av在线天堂中文字幕| 午夜日韩欧美国产| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 99久久精品一区二区三区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 给我免费播放毛片高清在线观看| 九九在线视频观看精品| 中亚洲国语对白在线视频| 成人国产综合亚洲| 天天躁日日操中文字幕| 又紧又爽又黄一区二区| 男人的好看免费观看在线视频| 在线a可以看的网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产精品1区2区在线观看.| 69av精品久久久久久| 亚洲最大成人中文| 99久久无色码亚洲精品果冻| 在线观看66精品国产| 99国产精品一区二区蜜桃av| 黄色日韩在线| 桃红色精品国产亚洲av| 麻豆久久精品国产亚洲av| 一本一本综合久久| 欧美一区二区精品小视频在线| 午夜精品久久久久久毛片777| av在线蜜桃| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产乱人视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 色视频www国产| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费看日本二区| 91av网一区二区| www国产在线视频色| 丁香欧美五月| 精品久久久久久成人av| 午夜免费观看网址| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲18禁久久av| 天堂网av新在线| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美最黄视频在线播放免费| 丰满乱子伦码专区| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 岛国在线观看网站| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品久久久久久久电影 | 日本五十路高清| 桃色一区二区三区在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 色尼玛亚洲综合影院| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美午夜高清在线| 免费观看精品视频网站| 色综合站精品国产| 搡老熟女国产l中国老女人| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 18禁美女被吸乳视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 免费av不卡在线播放| 久久久久国内视频| 免费在线观看影片大全网站| 午夜激情欧美在线| 美女大奶头视频| 亚洲人成网站在线播| 久久久成人免费电影| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产伦在线观看视频一区| а√天堂www在线а√下载| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日韩高清综合在线| 久久久久久人人人人人| 欧美丝袜亚洲另类 | 精品国产超薄肉色丝袜足j| 1024手机看黄色片| 午夜福利在线在线| 欧美极品一区二区三区四区| 色吧在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 一夜夜www| 日韩精品中文字幕看吧| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 好男人在线观看高清免费视频| 91字幕亚洲| 国产97色在线日韩免费| 一a级毛片在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 老鸭窝网址在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 在线观看日韩欧美| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久久久久久大av| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久99久视频精品免费| 男女午夜视频在线观看| 日本三级黄在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av | 色综合亚洲欧美另类图片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产真实乱freesex| 国产男靠女视频免费网站| 老司机福利观看| 久久99热这里只有精品18| 国产精品一区二区免费欧美| 露出奶头的视频| 内射极品少妇av片p| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美日韩黄片免| 一级黄片播放器| www日本黄色视频网| av黄色大香蕉| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 内射极品少妇av片p| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲欧美激情综合另类| 国产高清激情床上av| 男女那种视频在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 国产精品亚洲美女久久久| 天天躁日日操中文字幕| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲精品456在线播放app | 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产高清videossex| 国产精品三级大全| 日本熟妇午夜| 青草久久国产| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲人成网站在线播| 高清日韩中文字幕在线| 少妇的逼水好多| 男女之事视频高清在线观看| 国产老妇女一区| bbb黄色大片| av国产免费在线观看| 久久人妻av系列| 一个人免费在线观看的高清视频| 激情在线观看视频在线高清| 麻豆国产av国片精品| 亚洲美女黄片视频| 国产av一区在线观看免费| 九色成人免费人妻av| 国产精品亚洲美女久久久| 成人无遮挡网站| 成人国产一区最新在线观看| 人妻久久中文字幕网| 在线免费观看的www视频| 欧美高清成人免费视频www| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产精品综合久久久久久久免费| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品色激情综合| 亚洲无线观看免费| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国产毛片a区久久久久| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲国产精品999在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 成人国产一区最新在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 亚洲av五月六月丁香网| 1024手机看黄色片| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲在线自拍视频| 欧美日韩乱码在线| 999久久久精品免费观看国产| 欧美黄色淫秽网站| 宅男免费午夜| 9191精品国产免费久久| 性色avwww在线观看| 国产av在哪里看| 久久久久精品国产欧美久久久| 色综合站精品国产| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| bbb黄色大片| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 亚洲精品色激情综合| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲精品久久国产高清桃花| 此物有八面人人有两片| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 免费人成在线观看视频色| 狠狠狠狠99中文字幕| 国内精品美女久久久久久| 老司机午夜福利在线观看视频| 岛国视频午夜一区免费看| 无限看片的www在线观看| 日本一二三区视频观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 日韩欧美 国产精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 88av欧美| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲国产色片| 国产精品av视频在线免费观看| 久久久久久久久中文| 最近最新免费中文字幕在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产伦人伦偷精品视频| 两个人的视频大全免费| 人妻久久中文字幕网| 亚洲国产欧美人成| 一级黄色大片毛片| 色视频www国产| 男女床上黄色一级片免费看| 国内精品一区二区在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| www.www免费av| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产综合懂色| 51午夜福利影视在线观看| 精品一区二区三区人妻视频| 99热这里只有精品一区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产一区二区在线av高清观看| 波野结衣二区三区在线 | 国产免费一级a男人的天堂| 少妇的丰满在线观看| 九色成人免费人妻av| 黄色成人免费大全| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 深夜精品福利| 激情在线观看视频在线高清| x7x7x7水蜜桃| 深夜精品福利| 亚洲色图av天堂| 99久久精品国产亚洲精品| 岛国视频午夜一区免费看| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美黑人欧美精品刺激| 免费无遮挡裸体视频| 午夜激情福利司机影院| 岛国视频午夜一区免费看| 婷婷亚洲欧美| 欧美色欧美亚洲另类二区| www.999成人在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 国产视频内射| АⅤ资源中文在线天堂| 一级黄色大片毛片| www国产在线视频色| 国产一区二区激情短视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 欧美一级毛片孕妇| 久久久国产精品麻豆| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 叶爱在线成人免费视频播放| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国内久久婷婷六月综合欲色啪|