• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    抗除草劑bar基因與EPSPS基因在轉(zhuǎn)基因甘蔗中的應(yīng)用研究

    2016-10-13 13:20:33王文治楊本鵬蔡文偉熊國(guó)如馮翠蓮王俊剛武媛麗沈林波張樹珍
    生物技術(shù)通報(bào) 2016年3期
    關(guān)鍵詞:銨膦草銨宿根

    王文治 楊本鵬 蔡文偉 熊國(guó)如 馮翠蓮 王俊剛 武媛麗沈林波 張樹珍

    (中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所 農(nóng)業(yè)部熱帶作物生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,???571101)

    抗除草劑bar基因與EPSPS基因在轉(zhuǎn)基因甘蔗中的應(yīng)用研究

    王文治 楊本鵬 蔡文偉 熊國(guó)如 馮翠蓮 王俊剛 武媛麗沈林波 張樹珍

    (中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所 農(nóng)業(yè)部熱帶作物生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,???571101)

    通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,分別將bar基因和EPSPS基因?qū)氲礁收嶂?,分別獲得了抗草銨膦和草甘膦兩種除草劑的轉(zhuǎn)基因甘蔗。通過直接噴灑田間施用濃度的草銨膦和草甘膦除草劑,證明了轉(zhuǎn)基因甘蔗T0、T1代、宿根1代和宿根2代外源基因遺傳穩(wěn)定,且均具有穩(wěn)定的耐除草劑的功能。因此轉(zhuǎn)耐除草劑基因的甘蔗,可以與轉(zhuǎn)耐除草劑基因的玉米、大豆、油菜和棉花一樣,有廣闊的應(yīng)用前景。

    轉(zhuǎn)基因甘蔗;耐除草劑;bar基因;EPSPS基因;草銨膦;草甘膦

    田間雜草與作物競(jìng)爭(zhēng)陽光、水分、養(yǎng)分及生長(zhǎng)空間,同時(shí)又是作物病原菌和害蟲的中間寄主生物,嚴(yán)重影響了農(nóng)作物產(chǎn)量和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量[1]。同其他作物如水稻、小麥、玉米、大豆和油菜等一樣,甘蔗雜草危害也相當(dāng)嚴(yán)重,使用除草劑除草是目前備受青睞的除草方式。然而傳統(tǒng)的除草劑如草銨膦和草甘膦除草無選擇性,不能直接用于作物的生長(zhǎng)期,因此這個(gè)時(shí)期的田間除草只能依賴于人工操作[2]。然而隨著中國(guó)農(nóng)村剩余勞動(dòng)力的減少和勞動(dòng)力成本的增加,使本來機(jī)械化水平就偏低的甘蔗生產(chǎn)成本進(jìn)一步提高[3-5]。種植耐除草劑轉(zhuǎn)基因作物是解決這個(gè)問題的最有效方法之一,在中國(guó)開展耐除草劑轉(zhuǎn)基因育種具有巨大的市場(chǎng)需求[6]。

    2014年,全球種植轉(zhuǎn)基因作物1.815億hm2,相當(dāng)于全球總耕種面積的10%,其中具有耐除草劑性狀的轉(zhuǎn)基因作物占全球轉(zhuǎn)基因作物面積的61%[7,8]。開展耐除草劑轉(zhuǎn)基因研究的作物有很多種,得到大面積推廣應(yīng)用的主要以玉米、大豆、油菜和棉花為主[9]。國(guó)內(nèi)外對(duì)甘蔗耐除草劑轉(zhuǎn)基因方面的研究也有一些報(bào)道[10-12],但對(duì)其推廣應(yīng)用還遠(yuǎn)不如大豆、玉米等其他作物,特別是在國(guó)內(nèi),甘蔗抗除草劑轉(zhuǎn)基因的研究相對(duì)來說還比較落后。

    世界上應(yīng)用得比較多的耐除草劑的基因主要為bar基因和EPSPS基因[13,14]。本研究通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,分別將bar基因和EPSPS基因?qū)敫收嶂?,通過直接噴灑田間施用濃度的草銨膦和草甘膦,以期獲得抗草銨膦和草甘膦的轉(zhuǎn)基因甘蔗。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 品種、質(zhì)粒和菌株 受體材料為甘蔗主栽品種新臺(tái)糖22號(hào),抗草銨膦的bar基因來源于pCAMBIA3300載體,抗草甘膦的EPSPS基因來源于根癌農(nóng)桿菌CP4菌株。分別含兩個(gè)抗除草劑基因的植物表達(dá)載體均為本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建并保存,轉(zhuǎn)化所用農(nóng)桿菌菌株為EHA105。所使用草銨膦為浙江永農(nóng)生物科技有限公司生產(chǎn),農(nóng)藥名稱為“百速頓”,產(chǎn)品批號(hào):2014080701,其有效濃度為20%的草銨膦。所使用草甘膦為江蘇豐山集團(tuán)有限公司生產(chǎn),農(nóng)藥名稱為“雙火”,產(chǎn)品批號(hào):2014111201,其有效濃度為41%草甘膦異丙胺鹽。

    實(shí)驗(yàn)地點(diǎn):農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因植物及植物用微生物環(huán)境安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(海口) ——文昌基地。

    1.1.2 培養(yǎng)基配方 胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+ 2,4-D 1 mg/L+蔗糖30 g/L+卡拉膠8 g/L,pH5.8。

    胚狀體分化培養(yǎng)基:MS+6-BA 1 mg/L+KT 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+卡拉膠8 g/L,pH5.8。

    生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS(大量元素減半,其他成分不變)+NAA 2 mg/L+蔗糖20 g/L+ 椰水100 mL/L+卡拉膠8 g/L+活性炭0.2 g/L,pH 5.8[15]。

    MR培養(yǎng)基:MS(1/5大量元素)+30 g/L蔗糖+100 μm/L乙酰丁香酮,pH5.2。

    1.2 方法

    1.2.1 甘蔗胚性愈傷組織的誘導(dǎo) 以田間生長(zhǎng)良好的甘蔗頂端生長(zhǎng)點(diǎn)處的幼葉組織為外植體,經(jīng)酒精及升汞消毒、無菌水沖洗后,于無菌濾紙上吸干其表面的水分后,切成1 mm左右厚度的薄片接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,于避光條件下進(jìn)行培養(yǎng)至誘導(dǎo)出愈傷組織。

    1.2.2 農(nóng)桿菌侵染菌液的制備 通過凍融法將含bar基因及EPSPS基因的植物表達(dá)載體分別導(dǎo)入到EHA105中。將經(jīng)PCR鑒定為陽性的農(nóng)桿菌在含抗生素的YEP平板上劃線,挑取單菌落接種到5 mL YEP的液體培養(yǎng)基中,振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,于150 mL三角瓶中擴(kuò)大培養(yǎng),培養(yǎng)至OD為0.6左右,將菌液轉(zhuǎn)移到離心管中,5 000 r/min離心5 min,棄上清,吸干殘液,用MR液體培養(yǎng)基重懸菌體,最后置于28℃,200 r/min激活2 h,誘導(dǎo)細(xì)菌Vir基因的表達(dá),作為轉(zhuǎn)化材料的浸染液。

    1.2.3 愈傷組織的轉(zhuǎn)化 挑取生長(zhǎng)旺盛的愈傷組織于濾紙上吹干使其處于干縮狀態(tài),于工程菌液中浸泡30 min后,濾去菌液,用濾紙吸干殘液,吹干,轉(zhuǎn)移到MR固體培養(yǎng)基上。共培養(yǎng)3-4 d后,繼代篩選培養(yǎng)20 d后,分化篩選培養(yǎng)15 d。待愈傷長(zhǎng)出1 cm左右的小苗后,生根篩選培養(yǎng)30 d。

    1.2.4 轉(zhuǎn)化植株的移栽與培養(yǎng) 當(dāng)分別轉(zhuǎn)入抗草銨膦的bar基因及抗草甘膦的EPSPS基因的植株在抗性生根培養(yǎng)基上生長(zhǎng)至4-7 cm后,將經(jīng)PCR鑒定為陽性的轉(zhuǎn)化株系移栽到大花盆里,并置于室外進(jìn)行種植培養(yǎng),此次培養(yǎng)得到的植株設(shè)為T0代。到T0生長(zhǎng)8個(gè)月左右后,砍去主莖,適量培土進(jìn)行宿根培養(yǎng),重新生長(zhǎng)出來的植株設(shè)為宿根1代。待宿根1代生長(zhǎng)到8個(gè)月左右,再次砍去所有主莖,再次進(jìn)行宿根培養(yǎng),重新生長(zhǎng)出來的植株設(shè)為宿根2代。而將所砍取的T0代的甘蔗莖段作為種莖,移栽大田擴(kuò)繁種植,稱為T1代。

    1.2.5 轉(zhuǎn)化植株的分子檢測(cè) 分別合成bar基因及EPSPS基因的特異性引物,分別對(duì)T0代、T1代、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行PCR檢測(cè),分析bar基因及EPSPS基因在轉(zhuǎn)基因甘蔗中的遺傳穩(wěn)定性。進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè),擴(kuò)增時(shí)設(shè)置正負(fù)對(duì)照。并對(duì)植株擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行回收測(cè)序,檢測(cè)擴(kuò)增目的條帶的準(zhǔn)確性。

    1.2.6 T0代、T1代、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株的耐除草劑特性檢測(cè) 對(duì)轉(zhuǎn)有bar基因的T0代、T1代、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株,噴灑田間建議使用濃度4.5/hm2的百速頓草銨膦除草劑(200 g/L草銨膦,永農(nóng)生物科技有限公司,浙江)。對(duì)轉(zhuǎn)有EPSPS基因的T0、T1、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株,噴灑田間建議使用濃度6 L/hm2的農(nóng)達(dá)草甘膦除草劑(41%草甘膦異丙胺鹽,豐山集團(tuán)有限公司,江蘇)。

    2 結(jié)果

    2.1 bar基因及EPSPS基因植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的鑒定

    用合成的bar基因及EPSPS基因的特異性引物,對(duì)通過凍融法將含抗草銨膦的bar基因及抗草甘膦的EPSPS基因的兩個(gè)植物表達(dá)載體分別導(dǎo)入EHA105中的農(nóng)桿菌菌株進(jìn)行PCR鑒定,并通過農(nóng)桿菌質(zhì)粒DNA間接酶切鑒定法進(jìn)行質(zhì)粒載體的酶切鑒定[16]。如圖1所示,1、2號(hào)菌株能擴(kuò)增出與預(yù)期條帶359 bp大小一致的條帶,且如圖2-A所示,通過酶切可以獲得與bar基因550 bp大小一致的條帶,說明含抗草銨膦的bar基因的植物表達(dá)載體已經(jīng)正確導(dǎo)入到EHA105農(nóng)桿菌菌株中。同樣如圖1所示,3、4號(hào)菌株能擴(kuò)增出與預(yù)期條帶643 bp大小一致的條帶,且如圖2-B所示,通過酶切可以切出與EPSPS基因1 600 bp大小一致的條帶,說明含抗草甘膦的EPSPS基因的植物表達(dá)載體已經(jīng)正確導(dǎo)入到EHA105農(nóng)桿菌菌株中。

    圖1 農(nóng)桿菌菌株P(guān)CR鑒定

    圖2 植物表達(dá)載體的酶切鑒定

    2.2 轉(zhuǎn)基因植株的獲得

    通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,用含抗草銨膦的bar基因及抗草甘膦的EPSPS基因的兩個(gè)植物表達(dá)載體分別對(duì)甘蔗新臺(tái)糖22號(hào)進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,結(jié)果(圖3)表明,為轉(zhuǎn)化篩選后得到了分別含抗草銨膦的bar基因及抗草甘膦的EPSPS基因的轉(zhuǎn)化植株。

    圖3 轉(zhuǎn)含bar基因(A)EPSPS基因(B)的甘蔗遺傳轉(zhuǎn)化

    2.3 T0代轉(zhuǎn)化株系的PCR檢測(cè)

    當(dāng)所獲得的轉(zhuǎn)化抗性植株生長(zhǎng)至4-7 cm,按編號(hào)剪取小苗葉片組織約10-20 mg,剪碎置于eppendorf管中,用CTAB法提取DNA。用1.2.5合成的bar基因及EPSPS基因的特異性引物,對(duì)分別轉(zhuǎn)有bar基因及EPSPS基因的轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行PCR檢測(cè)。圖4顯示,所檢測(cè)的轉(zhuǎn)bar基因的23株轉(zhuǎn)化抗性植株中有20株為bar基因陽性(編號(hào)為:b1、b2、b3、b5、b6、b7、b8、b9、b10、b12、b13、b14、b15、b17、b18、b19、b20、b21、b22、b23)。而所檢測(cè)的轉(zhuǎn)EPSPS基因的23株轉(zhuǎn)化抗性植株中有15株為EPSPS基因陽性(編號(hào)為:E1、E5、E6、E8、E9、E10、E12、E14、E15、E17、E18、E20、E21、E22、E23)。

    圖4 轉(zhuǎn)化bar基因(A)及EPSPS基因(B)植株T0代的PCR檢測(cè)

    2.4 T1代、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株的PCR鑒定

    砍取T0代為陽性的植株主莖轉(zhuǎn)移到大田擴(kuò)繁種植,稱為T1代。而T0代在花盆中留下的蔗頭則連續(xù)進(jìn)行兩次宿根培養(yǎng),稱為宿根1代及宿根2代。通過bar基因及EPSPS基因的特異性引物,對(duì)T1代、宿根1代及宿根2代進(jìn)行PCR檢測(cè),以檢測(cè)bar基因及EPSPS基因在轉(zhuǎn)基因甘蔗中的遺傳穩(wěn)定性。圖5顯示,T0代檢測(cè)為bar基因PCR陽性的20個(gè)轉(zhuǎn)化植株,在T1代、宿根1代及宿根2代中均能檢測(cè)到bar基因的存在,說明bar基因可以在轉(zhuǎn)基因甘蔗中得到穩(wěn)定的遺傳。圖6則顯示,T0代檢測(cè)為EPSPS基因PCR陽性的15個(gè)轉(zhuǎn)化植株,在T1代、宿根1代及宿根2代中均能檢測(cè)到EPSPS基因的存在,說明EPSPS基因也可在轉(zhuǎn)基因甘蔗中得到穩(wěn)定的遺傳。

    圖5 轉(zhuǎn)bar基因甘蔗的遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)

    圖6 轉(zhuǎn)EPSPS基因甘蔗的遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)

    2.5 T0代、宿根1代及宿根2代的耐除草劑特性檢測(cè)

    分別對(duì)轉(zhuǎn)bar基因與EPSPS基因的轉(zhuǎn)基因甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代,噴灑田間施用濃度的草銨膦4.5 L/hm2和草甘膦6 L/hm2。轉(zhuǎn)bar基因與EPSPS基因的轉(zhuǎn)基因甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代噴灑除草劑7 d后觀察,并拍照。轉(zhuǎn)bar基因甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代噴灑草銨膦7 d后的結(jié)果(圖7)顯示,每個(gè)花盆的左邊為補(bǔ)充種植的非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓?,已?jīng)干枯并逐漸死亡,而右邊為轉(zhuǎn)bar基因植株則不受草銨膦的任何影響繼續(xù)健康生長(zhǎng)。說明轉(zhuǎn)bar基因的甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代都具備穩(wěn)定的耐除草銨膦特性。轉(zhuǎn)EPSPS基因甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代噴灑草甘膦7 d后的結(jié)果(圖8)顯示,每個(gè)花盆的右邊為補(bǔ)充種植的非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓辏呀?jīng)干枯并逐漸死亡,而左邊為轉(zhuǎn)EPSPS基因植株則不受草甘膦的任何影響繼續(xù)健康生長(zhǎng)。說明轉(zhuǎn)EPSPS基因的甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代都具備穩(wěn)定的耐除草甘膦特性。

    圖7 轉(zhuǎn)bar基因甘蔗噴灑草銨膦

    圖8 轉(zhuǎn)EPSPS基因甘蔗噴灑草甘膦

    2.6 田間擴(kuò)繁T1代耐除草劑特性檢測(cè)

    分別對(duì)轉(zhuǎn)bar基因與EPSPS基因的轉(zhuǎn)基因甘蔗田間擴(kuò)繁T1代,噴灑田間施用濃度的草銨膦4.5 L/hm2和草甘膦6 L/hm2。

    田間噴灑草銨膦除草劑10 d后的結(jié)果(圖9)顯示,雜草及非轉(zhuǎn)基因?qū)φ崭收峋蔹S,基本接近死亡,對(duì)草銨膦沒有任何耐受性(圖9-A);噴灑了草銨膦的轉(zhuǎn)bar基因的甘蔗不受草銨膦的任何影響繼續(xù)健康生長(zhǎng)(圖9-B),說明轉(zhuǎn)bar基因的甘蔗對(duì)草銨膦有極強(qiáng)的耐受性。

    圖9 田間噴灑草銨膦除草劑10 d后

    田間噴灑草甘膦除草劑10 d后的效果(圖10)顯示,雜草及非轉(zhuǎn)基因?qū)φ崭收峋蔹S,基本接近死亡,對(duì)草甘膦沒有任何耐受性(圖10-A);噴灑了草甘膦的轉(zhuǎn)EPSPS基因的甘蔗不受草甘膦的任何影響繼續(xù)健康生長(zhǎng)(圖10-B),說明轉(zhuǎn)EPSPS基因的甘蔗對(duì)草甘膦有極強(qiáng)的耐受性。

    圖10 田間噴灑草甘膦除草劑10 d后

    3 討論

    草甘膦和草銨膦從化學(xué)結(jié)構(gòu)上講都屬含磷的氨基酸類除草劑。草甘膦于1974年投入市場(chǎng),而草銨膦于1986年投入市場(chǎng)。這兩種除草劑都是非選擇性的滅生性除草劑,這是他們的共同之處,但作用機(jī)制卻不同。草甘膦為5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP)抑制劑。草甘膦通過阻礙此酶,從而破壞雜草所必須的芳香族氨基酸的合成,諸如色氨酸、酪氨酸、丙氨酸,導(dǎo)致雜草枯死。而草銨膦則為谷氨酰胺合成酶(GS)抑制劑,通過阻礙該酶的合成而滅殺雜草。目前草甘膦是全球銷售市場(chǎng)最高的除草劑,也是全世界銷售額第一的農(nóng)藥品種,2012年,其銷售額達(dá)45.75億美元。可見,草甘膦的銷售與應(yīng)用遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了草銨膦。所以目前抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物的推廣應(yīng)用也最為廣泛。

    但隨著草甘膦抗性難除雜草的增多、百草枯禁用日期臨近,草銨膦作為理想的替代選擇成為業(yè)界關(guān)注的熱點(diǎn)品種。在2014年11月的草銨膦應(yīng)用技術(shù)與市場(chǎng)推廣交流會(huì)上,不少業(yè)內(nèi)專家認(rèn)為,除草劑將進(jìn)入草銨膦時(shí)代。草銨膦對(duì)土壤、作物根系和后茬無影響,殺草譜廣、持效期較長(zhǎng),可以減少用藥次數(shù),降低成本,性價(jià)比優(yōu)勢(shì)明顯,未來應(yīng)用面積將進(jìn)一步擴(kuò)大。國(guó)內(nèi)百草枯水劑退市后,近4萬t市場(chǎng)空白將被草銨膦等滅生除草劑替代,而草銨膦將成為唯一的快速滅生除草劑,尤其是淺根作物行間除草,增長(zhǎng)空間大。草銨膦生產(chǎn)工藝復(fù)雜,要經(jīng)過13道反應(yīng)工序,歷經(jīng)半個(gè)多月的時(shí)間才能生產(chǎn)出來,國(guó)內(nèi)能生產(chǎn)出這一產(chǎn)品的廠家屈指可數(shù),產(chǎn)能供應(yīng)不足。同時(shí),價(jià)格偏高也限制了其在大田作物的應(yīng)用。雖然草銨膦的用藥成本是百草枯的2-3倍,但至少能節(jié)約一次用藥,每公傾可以節(jié)省用工成本300多元錢,目前人工成本貴,而且勞動(dòng)力緊缺。百草枯的退市,使得滅生性除草劑選擇空間變?。滑F(xiàn)在農(nóng)戶對(duì)種植成本有了新的認(rèn)識(shí),不是簡(jiǎn)單看價(jià)錢,關(guān)鍵看性價(jià)比;隨著草銨膦規(guī)模的不斷擴(kuò)大和科技進(jìn)步,也會(huì)逐漸降低生產(chǎn)成本,這幾大因素讓草銨膦有非常大的發(fā)展?jié)摿?。同時(shí)這也將進(jìn)一步推進(jìn)抗草銨膦轉(zhuǎn)基因作物的研究與應(yīng)用[17]。

    4 結(jié)論

    利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別獲得了抗草甘膦與草銨膦的轉(zhuǎn)基因甘蔗,并對(duì)T0代、宿根1代、宿根2代及田間擴(kuò)繁T1代外源基因遺傳穩(wěn)定性和耐除草劑穩(wěn)定性進(jìn)行較為系統(tǒng)的研究。結(jié)果證明,轉(zhuǎn)bar基因耐草銨膦和轉(zhuǎn)EPSPS基因耐草甘膦的甘蔗轉(zhuǎn)基因植株的外源基因均能穩(wěn)定遺傳,耐除草劑特性強(qiáng)且穩(wěn)定。因此,轉(zhuǎn)bar基因和轉(zhuǎn)EPSPS基因的耐除草劑轉(zhuǎn)基因甘蔗有良好的應(yīng)用前景。

    [1]http://www. fao. org/news/story/en/item/29402/icode/

    [2]邱龍, 馬崇烈, 劉博林, 章旺根. 耐除草劑轉(zhuǎn)基因作物研究現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 45(12):2357-2363.

    [3]宋麗萍. 中國(guó)勞動(dòng)力成本上升的原因及對(duì)策[J]. 經(jīng)濟(jì)論壇,2010, 484(12):26-28.

    [4]劉皞春, 區(qū)穎剛, 曾志強(qiáng). 湛江農(nóng)墾甘蔗機(jī)械化現(xiàn)狀調(diào)查與分析[J]. 農(nóng)機(jī)化, 2013, 6:28-33.

    [5]趙德昭, 許和連. FDI、農(nóng)業(yè)技術(shù)進(jìn)步與農(nóng)村剩余勞動(dòng)力轉(zhuǎn)移—基于“合力模型”的理論與實(shí)證研究[J]. 科學(xué)學(xué)研究, 2012,30(9):1342-1353.

    [6]強(qiáng)勝, 宋小玲, 戴偉民. 抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物面臨的機(jī)遇與挑戰(zhàn)及其發(fā)展策略[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào), 2010, 18(1):114-125.

    [7]Global Status of Commercialized Biotech/GM Crops:2010, ISAAA Brief 42-2010.

    [8]張成, 劉定富, 易先達(dá). 全球轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化進(jìn)展及現(xiàn)狀分析[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 50(14):2819-2823.

    [9]何少海, 鄭葉平, 嚴(yán)景城, 等. 農(nóng)作物抗除草劑草丁膦基因的發(fā)展進(jìn)程[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè), 2015, 1:33-34.

    [10] 王繼華, 張木青, 曹干. 抗除草劑轉(zhuǎn)基因甘蔗農(nóng)藝性狀調(diào)查[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011(9):23-34.

    [11]Dong SJ, Delucca P, Geijskes RJ, et al. Advances in agrobacteriummediated sugarcane transformation and stable transgene expression[J]. Sugar Tech, 2014, 16(4):366-371.

    [12] Mayavan S, Subramanyam K, Arun M, et al. Agrobacterium tumefaciens-mediated in planta seed transformation strategy in sugarcane[J]. Plant Cell Rep, 2013, 32(10):1557-1574.

    [13]張宏軍, 劉學(xué), 張佳. 草銨膦的作用機(jī)理及其應(yīng)用[J]. 農(nóng)藥與科學(xué)管理, 2004, 25(4):23-27.

    [14]Bonny S. Genetically modified glyphosate-tolerant soybean in the USA:adoption factors, impacts and prospects[J]. Agron Sustain Dev, 2008, 28:21-32.

    [15]王文治, 楊本鵬, 蔡文偉, 等. 甘蔗轉(zhuǎn)基因甘露糖篩選系統(tǒng)的建立[J]. 生物技術(shù)通報(bào), 2015, 31(1):92-97.

    [16]馬滋蔓, 王文治, 楊本鵬, 張樹珍. 農(nóng)桿菌質(zhì)粒DNA的間接酶切鑒定[J]. 生物技術(shù)通報(bào), 2009(7):171-173.

    [17]凌進(jìn). 草銨膦、百草枯、草甘膦對(duì)非耕地雜草的防效比較[J].農(nóng)藥, 2014, 53(8):613-615.

    (責(zé)任編輯 馬鑫)

    On Application of Herbicide Resistant Gene bar and EPSPS in Transgenic Sugarcane

    WANG Wen-zhi YANG Ben-peng CAI Wen-wei XIONG Guo-ru FENG Cui-lian WANG Jun-gang WU Yuan-li SHEN Lin-bo ZHANG Shu-zhen
    (Sugarcane Research Center of CATAS,Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology of CATAS,Key Biotechnology Laboratory for Tropical Crops of Ministry of Agriculture,Haikou 571101)

    In this research gene bar and EPSPS were transferred into sugarcane cultivar via agrobacterium-mediated method,and the transgenic sugarcane lines resistant to glufosinate-ammonium and glyphosphate were obtained. Directly spraying two herbicides at application concentration for field onto the field planting the transgenic sugarcane lines demonstrated the genetic stability of exogenous gene in generation T0,T1,ratoon 1,and 2 of them,and the lines had the stable herbicide-resistant ability. Therefore,the transgenic sugarcane lines resistant to herbicide can be widely used in the field production as the other transgenic herbicide-resistant crops such as corn,soybean,rape and cotton.

    transgenic sugarcane;herbicide-resistant;gene bar;gene EPSPS;glufosinate-ammonium;glyphosphate

    10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.012

    2015-06-01

    國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31371687),現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(甘蔗)建設(shè)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(CARS-20-6-11)

    王文治,男,碩士研究生,助理研究員,研究方向:甘蔗基因工程;E-mail:wangwenzhi@itbb.org.cn

    張樹珍,女,博士,研究員,研究方向:甘蔗生物技術(shù);E-mail:zhangshuzhen@itbb.org.cn

    猜你喜歡
    銨膦草銨宿根
    草銨膦混配制劑篩選思路及簡(jiǎn)介
    草銨膦價(jià)格創(chuàng)新高短期價(jià)格仍將上行
    草銨膦價(jià)格創(chuàng)新高 短期價(jià)格仍將上行
    宿根花卉在城市道路上的營(yíng)造與維護(hù)
    花卉(2020年4期)2020-01-07 18:11:13
    草銨膦水劑對(duì)柑桔園雜草的防效試驗(yàn)初報(bào)
    精草銨膦原藥高效液相色譜分析方法研究
    急性草甘膦與草銨膦中毒23例臨床分析
    草銨膦產(chǎn)能擴(kuò)張 價(jià)格降至11.9 萬/噸
    固相萃取/液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定果蔬中草銨膦的殘留量
    宿根花卉在北方園林綠化中的應(yīng)用
    男的添女的下面高潮视频| 麻豆国产av国片精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲欧洲日产国产| 五月天丁香电影| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 欧美黑人欧美精品刺激| 男的添女的下面高潮视频| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品成人在线| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| www.av在线官网国产| 国产男女超爽视频在线观看| 成年人免费黄色播放视频| 国产男女超爽视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 中文字幕av电影在线播放| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 亚洲国产欧美在线一区| 国产1区2区3区精品| 另类精品久久| 国产主播在线观看一区二区 | 亚洲三区欧美一区| 国产一卡二卡三卡精品| 久久性视频一级片| 校园人妻丝袜中文字幕| 婷婷成人精品国产| 大香蕉久久网| 在线观看免费午夜福利视频| 91九色精品人成在线观看| 成年av动漫网址| 看免费成人av毛片| 99热网站在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| av天堂在线播放| 亚洲人成77777在线视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产成人av激情在线播放| 国产视频一区二区在线看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 青草久久国产| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲伊人色综图| 看十八女毛片水多多多| 女人精品久久久久毛片| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲精品一二三| 亚洲av国产av综合av卡| 国产成人av激情在线播放| 妹子高潮喷水视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲欧美激情在线| 亚洲久久久国产精品| 久久99精品国语久久久| 一区二区三区四区激情视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 大话2 男鬼变身卡| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 日韩一区二区三区影片| 国产欧美亚洲国产| 七月丁香在线播放| 99国产精品一区二区三区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品免费久久久久久久清纯 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 一区在线观看完整版| 校园人妻丝袜中文字幕| 中文字幕制服av| 女人久久www免费人成看片| 免费在线观看黄色视频的| 啦啦啦在线免费观看视频4| 免费在线观看影片大全网站 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 男人添女人高潮全过程视频| 尾随美女入室| 蜜桃在线观看..| 成人午夜精彩视频在线观看| 黄色一级大片看看| 成人国产av品久久久| 亚洲国产欧美在线一区| a级毛片黄视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产一区二区三区av在线| 久久青草综合色| 欧美成人精品欧美一级黄| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产色视频综合| 国产成人av激情在线播放| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲国产欧美在线一区| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久鲁丝午夜福利片| 操出白浆在线播放| av不卡在线播放| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 2018国产大陆天天弄谢| 超碰97精品在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 国产成人欧美在线观看 | 国产黄频视频在线观看| 国产1区2区3区精品| 午夜免费成人在线视频| 日韩av不卡免费在线播放| 国产高清国产精品国产三级| 好男人电影高清在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 精品久久蜜臀av无| 欧美日韩av久久| 人妻 亚洲 视频| 国产精品国产三级专区第一集| 午夜免费鲁丝| 91成人精品电影| 国产福利在线免费观看视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 飞空精品影院首页| 国产高清不卡午夜福利| 男女边吃奶边做爰视频| 国产成人欧美| 亚洲av日韩在线播放| 久久久精品94久久精品| 建设人人有责人人尽责人人享有的| www.999成人在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 一本综合久久免费| 久久亚洲国产成人精品v| 国产熟女午夜一区二区三区| 色播在线永久视频| 赤兔流量卡办理| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 日日爽夜夜爽网站| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 你懂的网址亚洲精品在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产欧美日韩一区二区三区在线| 精品免费久久久久久久清纯 | 五月开心婷婷网| 国产在线一区二区三区精| 黄频高清免费视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 老司机靠b影院| 久久久国产精品麻豆| 在线av久久热| 激情视频va一区二区三区| 国产一区二区激情短视频 | 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 热99久久久久精品小说推荐| 极品人妻少妇av视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久鲁丝午夜福利片| 日韩大片免费观看网站| 亚洲精品国产区一区二| 久久久国产精品麻豆| 成人三级做爰电影| 欧美 日韩 精品 国产| 最近中文字幕2019免费版| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 一区二区三区激情视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产人伦9x9x在线观看| 乱人伦中国视频| 大话2 男鬼变身卡| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产精品成人在线| 女性被躁到高潮视频| 亚洲,欧美精品.| 亚洲欧洲国产日韩| 一级黄色大片毛片| 国产av精品麻豆| 久久久精品94久久精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 美女大奶头黄色视频| xxxhd国产人妻xxx| 精品视频人人做人人爽| 日本wwww免费看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲av美国av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 99热全是精品| 天堂中文最新版在线下载| 精品第一国产精品| 久久狼人影院| 最黄视频免费看| 不卡av一区二区三区| 久久亚洲国产成人精品v| 国产麻豆69| 下体分泌物呈黄色| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 精品亚洲成国产av| 91国产中文字幕| 久久精品国产综合久久久| 午夜福利一区二区在线看| 波多野结衣一区麻豆| 国产精品久久久久成人av| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产亚洲欧美精品永久| 18禁观看日本| 十八禁人妻一区二区| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲综合色网址| 蜜桃国产av成人99| 色精品久久人妻99蜜桃| av电影中文网址| 午夜福利,免费看| 美女主播在线视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲精品在线美女| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 女性生殖器流出的白浆| 午夜老司机福利片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| a级毛片黄视频| 在线天堂中文资源库| 久久久国产一区二区| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲一码二码三码区别大吗| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲男人天堂网一区| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 老司机影院毛片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 999久久久国产精品视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 精品少妇内射三级| 亚洲久久久国产精品| av网站在线播放免费| 成年av动漫网址| 1024视频免费在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 丁香六月欧美| www.999成人在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 一个人免费看片子| 色婷婷av一区二区三区视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产精品 国内视频| 精品国产国语对白av| 国产成人一区二区在线| www.熟女人妻精品国产| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 午夜老司机福利片| 久久久久久人人人人人| 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲精品第二区| 久久人妻熟女aⅴ| 91精品国产国语对白视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产精品国产三级专区第一集| 国产精品久久久久成人av| 黄色一级大片看看| xxxhd国产人妻xxx| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| √禁漫天堂资源中文www| 97在线人人人人妻| 国产成人av教育| 麻豆乱淫一区二区| 老鸭窝网址在线观看| 好男人视频免费观看在线| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| avwww免费| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 美女视频免费永久观看网站| 只有这里有精品99| 97精品久久久久久久久久精品| 男女之事视频高清在线观看 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产视频首页在线观看| 考比视频在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| av在线老鸭窝| 国产麻豆69| 亚洲精品在线美女| 国产精品偷伦视频观看了| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 人体艺术视频欧美日本| 视频区图区小说| 一级a爱视频在线免费观看| 黄频高清免费视频| 无限看片的www在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 天堂8中文在线网| 精品人妻在线不人妻| 十分钟在线观看高清视频www| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产黄频视频在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 丝袜美足系列| 色94色欧美一区二区| 一级毛片女人18水好多 | 午夜福利视频精品| av有码第一页| 91精品国产国语对白视频| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产精品成人在线| 免费一级毛片在线播放高清视频 | bbb黄色大片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美激情 高清一区二区三区| 免费不卡黄色视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 人人妻人人澡人人看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产不卡av网站在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美大码av| av天堂在线播放| 男女免费视频国产| 人人澡人人妻人| 99久久人妻综合| 一级片免费观看大全| 成人三级做爰电影| 亚洲av在线观看美女高潮| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久 成人 亚洲| 日韩视频在线欧美| 美女主播在线视频| 午夜日韩欧美国产| avwww免费| 黄色片一级片一级黄色片| 国产精品熟女久久久久浪| 九草在线视频观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产视频一区二区在线看| 国产免费现黄频在线看| 少妇的丰满在线观看| 97精品久久久久久久久久精品| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲情色 制服丝袜| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲av片天天在线观看| 精品视频人人做人人爽| 欧美日韩视频精品一区| 老司机深夜福利视频在线观看 | 黄片小视频在线播放| 国产男人的电影天堂91| 97精品久久久久久久久久精品| 色94色欧美一区二区| 夫妻午夜视频| 好男人电影高清在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 99国产综合亚洲精品| 久久午夜综合久久蜜桃| 热re99久久精品国产66热6| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 尾随美女入室| 久久这里只有精品19| 女性被躁到高潮视频| 久久天堂一区二区三区四区| 制服诱惑二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| av国产久精品久网站免费入址| 99re6热这里在线精品视频| 一级毛片 在线播放| 韩国高清视频一区二区三区| 看免费成人av毛片| 丰满迷人的少妇在线观看| 9热在线视频观看99| 欧美激情极品国产一区二区三区| 大码成人一级视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久久久精品人妻al黑| 久久热在线av| avwww免费| 老司机午夜十八禁免费视频| 蜜桃国产av成人99| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美乱码精品一区二区三区| 午夜福利,免费看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 日本a在线网址| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 91字幕亚洲| 麻豆av在线久日| 免费在线观看日本一区| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美 日韩 精品 国产| 中国美女看黄片| 丝袜脚勾引网站| 五月开心婷婷网| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲av成人精品一二三区| 国产亚洲av高清不卡| 国产免费福利视频在线观看| av国产精品久久久久影院| 亚洲人成网站在线观看播放| 男女边吃奶边做爰视频| 国产野战对白在线观看| 香蕉国产在线看| 老司机亚洲免费影院| 大香蕉久久网| 两人在一起打扑克的视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| a级毛片在线看网站| 99九九在线精品视频| 91精品三级在线观看| 精品一区在线观看国产| 国产在线观看jvid| 国产精品偷伦视频观看了| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 麻豆av在线久日| 热99国产精品久久久久久7| 人体艺术视频欧美日本| 日日夜夜操网爽| 人妻一区二区av| 免费av中文字幕在线| 亚洲欧美色中文字幕在线| bbb黄色大片| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 在线 av 中文字幕| 色网站视频免费| 亚洲成人手机| 少妇精品久久久久久久| 99热国产这里只有精品6| 少妇 在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产日韩欧美视频二区| 国产一区二区激情短视频 | 在线观看国产h片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 精品熟女少妇八av免费久了| a 毛片基地| 黑丝袜美女国产一区| 不卡av一区二区三区| 麻豆av在线久日| 老汉色∧v一级毛片| 午夜老司机福利片| 男女无遮挡免费网站观看| 中国国产av一级| 五月开心婷婷网| 无限看片的www在线观看| 电影成人av| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 成年动漫av网址| 两个人看的免费小视频| 国产精品.久久久| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 中国美女看黄片| 免费在线观看影片大全网站 | 中文字幕亚洲精品专区| 国产成人欧美在线观看 | 午夜日韩欧美国产| cao死你这个sao货| 欧美亚洲日本最大视频资源| 操美女的视频在线观看| 久久久精品免费免费高清| 精品少妇久久久久久888优播| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 老司机深夜福利视频在线观看 | 国产一区二区 视频在线| 视频区欧美日本亚洲| 老司机亚洲免费影院| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲精品国产av蜜桃| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| 久久 成人 亚洲| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久精品久久久久久久性| 国产一区二区在线观看av| 国产淫语在线视频| 国产99久久九九免费精品| 欧美日韩综合久久久久久| 老司机在亚洲福利影院| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 在线看a的网站| 丰满饥渴人妻一区二区三| 黄色片一级片一级黄色片| 日韩视频在线欧美| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 色综合欧美亚洲国产小说| 国产91精品成人一区二区三区 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 大陆偷拍与自拍| a 毛片基地| 亚洲人成电影免费在线| 青春草视频在线免费观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久热爱精品视频在线9| 美女主播在线视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品免费久久久久久久清纯 | 首页视频小说图片口味搜索 | 丰满少妇做爰视频| 国产黄色免费在线视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产高清videossex| 国产一区二区激情短视频 | 少妇被粗大的猛进出69影院| 热re99久久国产66热| 伊人亚洲综合成人网| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 啦啦啦 在线观看视频| 国产成人av激情在线播放| 十八禁网站网址无遮挡| 成人三级做爰电影| 乱人伦中国视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美乱码精品一区二区三区| 色94色欧美一区二区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲免费av在线视频| 免费在线观看完整版高清| 午夜91福利影院| 18在线观看网站| 男女午夜视频在线观看| 欧美大码av| 香蕉丝袜av| 激情视频va一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 又黄又粗又硬又大视频| 国产色视频综合| 搡老岳熟女国产| 午夜免费鲁丝| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 午夜精品国产一区二区电影| 免费av中文字幕在线| 老司机影院毛片| 国产精品一二三区在线看| 少妇的丰满在线观看| 91精品三级在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲人成电影免费在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 一区二区三区乱码不卡18| 两性夫妻黄色片| 美女午夜性视频免费| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美精品一区二区大全| 91字幕亚洲| 国产人伦9x9x在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 免费在线观看影片大全网站 | tube8黄色片| 脱女人内裤的视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 精品人妻1区二区| 精品第一国产精品| 男女免费视频国产| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 搡老乐熟女国产| 精品国产乱码久久久久久男人| 蜜桃国产av成人99| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产男女超爽视频在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲av电影在线进入| 久久精品久久久久久久性| 午夜激情久久久久久久| 久久女婷五月综合色啪小说| 性色av一级| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲av电影在线进入| 热re99久久精品国产66热6| 一边亲一边摸免费视频| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 在线观看人妻少妇| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 天堂中文最新版在线下载| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 男女国产视频网站| 久久人妻熟女aⅴ| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久ye,这里只有精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲国产欧美日韩在线播放| www.熟女人妻精品国产| 性色av乱码一区二区三区2| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日韩制服丝袜自拍偷拍|