HER-2與Ki-67在直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

張志云　雷新益　吉袒進(jìn)　楊勇　蔣學(xué)軍

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·論著·

HER-2與Ki-67在直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

張志云雷新益吉袒進(jìn)楊勇蔣學(xué)軍

目的探討HER-2與Ki-67在直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法選取2013年10月至2015年3月接收的80例直腸癌患者，收集切除后的直腸癌組織標(biāo)本，作為觀察組。另外，收集20例健康者腸黏膜組織標(biāo)本作為對(duì)照組。采用免疫組化SP方法對(duì)2組標(biāo)本HER-2與Ki-67的表達(dá)進(jìn)行研究。結(jié)果直腸癌組織中的HER-2、Ki67陽性表達(dá)率明顯高于正常腸黏膜組織，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HER-2的表達(dá)與直腸癌患者的性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤部位無明顯關(guān)聯(lián)(P>0.05)，而與直腸癌患者Dukes分期、細(xì)胞分化程度、浸潤深度有明顯關(guān)聯(lián)(P<0.05)。Ki-67表達(dá)與直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、細(xì)胞分化程度無顯著關(guān)聯(lián)(P>0.05),而與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Dukes分期有顯著關(guān)聯(lián)(P<0.05)。對(duì)直腸癌患者組織中HER-2與Ki-67的表達(dá)情況進(jìn)行等級(jí)相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)兩者表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.354,P<0.01)。結(jié)論直腸癌組織中HER-2與Ki-67蛋白的表達(dá)在一定程度上與患者的性別、年齡、腫瘤部位、以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)，與直腸癌組織細(xì)胞分化程度、Dukes分期、浸潤深度有關(guān)。HER-2和Ki-67表達(dá)水平可作為判定直腸癌的生物學(xué)指標(biāo)。

HER-2；Ki-67；直腸腫瘤

直腸癌是由直腸組織細(xì)胞發(fā)生癌變而形成的，是常見的消化道惡性腫瘤[1]。近年來其發(fā)病率和病死率呈上升趨勢(shì)[2]。由于直腸癌發(fā)生癌變的位置底，深入盆腔，解剖關(guān)系比較復(fù)雜，易造成手術(shù)不徹底，術(shù)后復(fù)發(fā)率相對(duì)比較高[3]。在我國，直腸癌發(fā)病年齡大致居于45歲左右，但近年來，青年人發(fā)病的幾率有明顯上升趨勢(shì)[4]。關(guān)于直腸癌發(fā)病的原因目前尚未明確，但與生活環(huán)境、飲食習(xí)慣、遺傳因素密不可分[5]。目前，公認(rèn)的一種誘因是動(dòng)物脂肪以及蛋白質(zhì)攝入量太多，而食物纖維攝入不足等。早期直腸癌患者大多無明顯癥狀[6]。在其生長到一定程度后，便會(huì)出現(xiàn)排便習(xí)慣改變，便秘、腹瀉、血便、膿血便等。到晚期，大便逐漸變細(xì)，伴有排便梗阻，體形消瘦。目前關(guān)于直腸癌的治療，需要以外科手術(shù)為主，借助于化療、放療進(jìn)行綜合治療[7]。與許多惡性腫瘤類似，直腸癌的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后尚不明確，為了尋找與直腸癌相關(guān)的生物標(biāo)志物，本研究針對(duì)HER-2與Ki-67在直腸癌組織中的表達(dá)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2013年10月至2015年3月我院接收的80例直腸癌患者，收集切除后的直腸癌組織標(biāo)本，作為觀察組。另外，收集20例健康者腸黏膜組織標(biāo)本作為對(duì)照組。觀察組男43例，女37例；年齡24～83歲，其中≥60歲47例，<60歲33例；依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟直腸癌分期系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)將所收集的標(biāo)本進(jìn)行分類。分化程度：中低分化有54例，高分化26例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：未轉(zhuǎn)移55例，轉(zhuǎn)移25例。Dukes分期:A+B 48例，C+D 32例。腫瘤部位發(fā)生在結(jié)腸38例，直腸42例。浸潤深度T分期：T1/T2 14例，T3/T4 66例。

1.2方法將收集到的標(biāo)本用10%甲醛溶液固定后采用常規(guī)石蠟包埋，做成5 μm連續(xù)切片，采用免疫組化SP法染色，染色步驟嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。HER-2單克隆抗體、Ki-67單克隆抗體和免疫組化SP試劑盒均購自上海研卉生物科技有限公司。ER-2主要為細(xì)胞膜著色，Ki-67為細(xì)胞核著色，H把細(xì)胞膜或細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒判斷為陽性細(xì)胞。在光學(xué)顯微鏡鏡下隨機(jī)觀察3～5個(gè)視野，視野中陽性細(xì)胞數(shù)<5%計(jì)為“-”，5%～25%計(jì)為“+”，26%～50%計(jì)為“++”，>50%計(jì)為“+++”，將“+～+++”判定為陽性表達(dá)，將“-”判定為陰性表達(dá)。Ki67表達(dá)于細(xì)胞核，在細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，呈彌散分布。在顯微鏡下選擇3～5個(gè)視野進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞百分比。陽性細(xì)胞百分比≤5%計(jì)0分，6%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，>75%計(jì)4分。細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：無著色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，黃棕色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。將兩者標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分相乘后所得數(shù)表示陽性表達(dá)水平。0～1為陰性“-”，2～3為弱陽性“+”，4～7為陽性“++”，8以上為強(qiáng)陽性“+++”。Ki67表達(dá)中將“+++”級(jí)判定為陽性高表達(dá)組，將“+”和“++”級(jí)視為低表達(dá)組。另外，用PBS溶液替代一抗作為陰性對(duì)照。

2　結(jié)果

2.1直腸癌組織與正常腸黏膜組織中HER-2、Ki67陽性的表達(dá)情況分析比較直腸癌組織中HER-2、Ki67陽性表達(dá)率明顯高于正常腸黏膜組織，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　直腸癌組織與正常腸黏膜組織中HER-2、Ki67強(qiáng)陽性的表達(dá)情況分析比較　例(%)

2.2直腸癌組織中HER-2陽性表達(dá)與臨床病理特征的分析比較HER-2的表達(dá)與直腸癌患者的性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤部位無明顯關(guān)聯(lián)(P>0.05)，而患者Dukes分期、細(xì)胞分化程度、浸潤深度有明顯關(guān)聯(lián)(P<0.05)。細(xì)胞分化程度越低，陽性表達(dá)率越高，隨著Dukes分期的升高,HER-2蛋白在直腸癌組織中表達(dá)增多，浸潤程度越深，陽性表達(dá)率越高。見表2。

表2　直腸癌組織中HER-2陽性表達(dá)與臨床病理特征的分析比較　例(%)

2.3直腸癌組織中Ki67表達(dá)情況與臨床病理特征的分析比較Ki-67表達(dá)與直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、細(xì)胞分化程度無顯著關(guān)聯(lián)(P>0.05),而與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Dukes分期有顯著關(guān)聯(lián)(P<0.05)。見表3。

2.4直腸癌組織中Ki67表達(dá)、HER2表達(dá)相關(guān)情況分析比較對(duì)80例直腸癌患者組織中 HER-2與Ki-67的表達(dá)情況進(jìn)行等級(jí)相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)兩者的表達(dá)呈正相關(guān)(Spearman相關(guān)系數(shù)為r=0.354，P<0.01)。見表4。

2.5直腸癌組織中Ki67、HER2表達(dá)與正常組織的病理切片比較分析Ki67表達(dá)于細(xì)胞核，在細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，呈彌散分布。ER-2主要為細(xì)胞膜著色，Ki-67為細(xì)胞核著色，所以把細(xì)胞膜或細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒判斷為陽性細(xì)胞。見圖1～5。

表3　直腸癌組織中Ki67表達(dá)情況與臨床病理特征的分析比較　例(%)

表4　直腸癌組織中Ki67表達(dá)、HER2表達(dá)相關(guān)情況分析比較　例(%)

圖1　正常直腸腺體Ki-67局灶陽性(免疫組化×200)

3　討論

近年來，隨著人們生活水平的不斷提高以及飲食結(jié)構(gòu)的變化，我國直腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，逐年增多。直腸癌的發(fā)病與直腸癌組織細(xì)胞的生長、增殖、分化、凋亡等相關(guān)基因蛋白失調(diào)有關(guān)[8]。HER-2歸屬于生長因子受體家族，其表達(dá)主要開始于胚胎發(fā)育時(shí)期，到成年后，正常組織中，對(duì)HER-2基因的檢出率非常低[9]。HER-2基因?qū)?xì)胞的正常增殖分化起到一定的作用，在正常情況下，HER-2處于非激活狀態(tài)。當(dāng)其受到人體內(nèi)某些因子刺激以后，其調(diào)控和表達(dá)機(jī)制失常，進(jìn)而被激活。關(guān)于HER-2的表達(dá)與結(jié)腸癌的關(guān)系，國內(nèi)外相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道不太一致，很多報(bào)道認(rèn)為HER-2在直腸癌組織中的陽性表達(dá)率底，僅為0.5%～5%，而且直腸癌組織HER-2的表達(dá)與患者體內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期、細(xì)胞分化程度無關(guān)[10]。

圖2　直腸癌細(xì)胞Ki-67彌漫陽性(免疫組化×200)

圖3　正常直腸腺體HER-2陰性(免疫組化×200)

圖4　直腸癌細(xì)胞HER-2陰性(免疫組化×200)

圖5　直腸癌細(xì)胞HER-2陽性(免疫組化×200)

Ki67抗原是Gerdes等從增殖細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，主要定位于細(xì)胞核。目前，是學(xué)術(shù)界比較認(rèn)可的細(xì)胞核增殖標(biāo)記物，與細(xì)胞周期有密切關(guān)聯(lián)[11]。在細(xì)胞凋亡的G1期、S期、M期都有表達(dá)。在細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂的過程中，起著維持DNA結(jié)構(gòu)的作用。細(xì)胞核在進(jìn)行增殖的過程中，抗原Ki-67表達(dá)，能夠快速準(zhǔn)確的反映出惡性腫瘤的細(xì)胞增殖情況，并與多種惡性腫瘤的生長、凋亡、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)聯(lián)[12]。關(guān)于Ki-67的表達(dá)與直腸癌臨床病例的關(guān)系的研究存在差異[13]。一種研究認(rèn)為：Ki-67表達(dá)的陽性表達(dá)與患者性別、年齡、Dukes分期、細(xì)胞分化程度、血管浸潤深度有關(guān)[14]。另一種研究認(rèn)為：Ki-67的陽性表達(dá)與Dukes分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)，與患者年齡、性別等病理類型無關(guān)[15]。

本研究顯示，直腸癌患者組織中HER-2陽性表達(dá)率與健康者正常腸黏膜組織比較，直腸癌患者組織陽性表達(dá)率31.25%，高于正常腸黏膜組織的15%，差異明顯。關(guān)于HER-2的表達(dá)與結(jié)腸癌的關(guān)系，此次研究發(fā)現(xiàn)，直腸癌中的HER-2陽性表達(dá)率與患者的性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤部位無明顯關(guān)聯(lián)，而與患者的Dukes分期、細(xì)胞分化程度、血管浸潤深度有明顯關(guān)聯(lián)。研究表明細(xì)胞分化程度越低，陽性表達(dá)率越高，隨著Dukes分期的升高,HER-2蛋白在直腸癌組織中表達(dá)增多。血管浸潤程度越深，陽性表達(dá)率越高。這充分證實(shí),HER-2蛋白的高表達(dá)率，與腫瘤的侵襲性有關(guān)，表達(dá)率越高，侵襲性越強(qiáng)。Her-2的高表達(dá)率在直腸癌的產(chǎn)生、發(fā)展中起重要作用。

直腸癌組織中Ki-67陽性表達(dá)率與正常腸黏膜組

織相比較，強(qiáng)陽性表達(dá)率63.75%顯著高于正常腸黏膜組織5%。Ki-67的表達(dá)與直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、細(xì)胞分化程度無顯著關(guān)聯(lián)，而與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Dukes分期顯著相關(guān)。研究結(jié)果表明,K-i67蛋白的高表達(dá)，對(duì)結(jié)直腸癌的診斷和黏膜癌變的監(jiān)視有重要意義,對(duì)結(jié)直腸癌早期發(fā)現(xiàn)有非常高的醫(yī)學(xué)價(jià)值。直腸癌患者組織中HER-2與Ki-67的表達(dá)呈正相關(guān)。

綜上所述，HER-2、Ki-67表達(dá)與直腸癌的Dukes分期、浸潤深度以及進(jìn)展有關(guān)，在直腸癌的產(chǎn)生、增殖過程中起著非常重要的作用,提示將HER-2、Ki-67的表達(dá)作為直腸癌診斷的生物學(xué)指標(biāo)。對(duì)HER-2、Ki-67的聯(lián)合檢測，可作為判斷直腸癌腫瘤惡性程度的依據(jù)，對(duì)臨床指導(dǎo)治療直腸癌具有重要作用。

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Expression and clinical significance of HER-2 and Ki-67 in colorectal cancer tissues

ZHANGZhiyun,LEIXinyi,JITanjin,etal.

DepartmentofAnorectumSurgery,DongfengGeneralHospitalAffiliatedtoHubeiMedicineCollage,Hubei,Shiyan442008,China

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of HER-2 and Ki-67 in colorectal cancer tissues.MethodsEighty patients with colorectal cancer who were admitted into our hospital from October 2013 to March 2015 were served as observation group,whose ablated colorectal cancer tissues were collected as specimens,and the other 20 healthy subjects were served as control group,whose intestine mucous membrane tissues were collected as specimens.The expression levels of HER-2 and Ki-67 were detected by immunohistochemistry (SP).ResultsThe expression levels of HER-2 and Ki67 in observation group were significantly higher than those in control group (P<0.05). The expression levels of HER-2 were not correlated to patient’s sex,age, lymph node metastasis, tumor’s location (P>0.05),which were closely related with Dukes staging of colorectal cancer, cell differentiation degree, tumor's infiltration depth (P<0.05). The expression levels of Ki-67 were not correlated to patient’s sex,age, tumor’s size and location, cell differentiation degree (P>0.05),however,which were closely associated with tumor’s infiltration depth, lymph node metastasis and Dukes staging (P<0.05). The expressions HER-2 were positively correlated to those of Ki-67(r=0.354,P<0.01).ConclusionThe expressions of HER-2 and Ki-67 protein in colorectal cancer tissue are not correlated to patient’s sex and age, tumor location, lymph node metastasis at some extent,however,which are closely related with cell differentiation of colorectal cancer tissue,Dukes staging, tumor’s infiltration depth.The expression levels of HER-2 and Ki-67 can be regarded as biological parameters for the diagnosis of colorectal cancer.

HER-2;Ki-67;colorectal cancer

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.19.002

442008湖北省十堰市，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)總醫(yī)院結(jié)直腸肛門外科

雷新益，442008湖北省十堰市，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)總醫(yī)院；

E-mail：181137822@qq.com

R 735.37

A

1002-7386(2016)19-2891-04

2015-12-07)

項(xiàng)目來源：湖北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：2014CDB07152)