異型南五味子總?cè)茖?duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠抗炎鎮(zhèn)痛藥效學(xué)研究

鄧?guó)Q，張煒寧

(深圳市福田區(qū)中醫(yī)院，廣東 深圳　518034)

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異型南五味子總?cè)茖?duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠抗炎鎮(zhèn)痛藥效學(xué)研究

鄧?guó)Q，張煒寧

(深圳市福田區(qū)中醫(yī)院，廣東 深圳518034)

目的觀察異型南五味子總?cè)频目寡祖?zhèn)痛的藥效。方法昆明小鼠180只隨機(jī)分為五組，包括空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(1 mg·kg-1吲哚美辛)、總?cè)平M(高6 mg·kg-1、中3 mg·kg-1、低1 mg·kg-1三個(gè)劑量)，通過(guò)二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)、醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、熱板法測(cè)定小鼠痛閾值考察異型南五味子總?cè)频目寡祖?zhèn)痛效果。結(jié)果在改善小鼠耳腫脹度、扭體潛伏期、扭體反應(yīng)的次數(shù)、扭體發(fā)生率、不同時(shí)間痛閾值等方面，總?cè)聘鲃┝拷M治療前后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),治療后總?cè)聘鲃┝拷M與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，治療后總?cè)聘邉┝拷M與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論異型南五味子總?cè)茖?duì)小鼠的急性炎性反應(yīng)、物理化學(xué)性刺激引起的疼痛有抑制作用，總?cè)聘邉┝烤哂忻黠@的抗炎鎮(zhèn)痛效果。

地血香/藥理學(xué);關(guān)節(jié)炎,類風(fēng)濕;小鼠

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種慢性自身免疫性疾病，主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥，軟骨和骨破壞，可造成關(guān)節(jié)畸形和功能障礙[1]。近年來(lái)該病的發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)[2]。我國(guó)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患病率約0.2%～0.4%[3]，發(fā)病初期表現(xiàn)為進(jìn)展性關(guān)節(jié)損害，影響日常工作，如不給予適當(dāng)治療，病情逐漸發(fā)展加重，最后將導(dǎo)致畸形、關(guān)節(jié)強(qiáng)直和功能喪失，甚至死亡[4]。目前臨床針對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有西醫(yī)治療藥物但毒副作用較大，因此，開發(fā)高效、低毒的新型抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物意義重大。異型南五味子是少數(shù)民族長(zhǎng)期用于治療風(fēng)濕痹痛等疾患的民間特色藥物，其有效成份為總?cè)?，常用于治療風(fēng)濕痹痛、骨痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰肌勞損、產(chǎn)后痹等[5]。我們開展異型南五味子提取物總?cè)浦委燁愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型的抗炎鎮(zhèn)痛研究，以探討總?cè)浦委燁愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥理作用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物與分組選用昆明小鼠180只，體質(zhì)量(180±20)g，雌雄各半，動(dòng)物來(lái)源為廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(粵)2013-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(粵)2013-0002。動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性馴養(yǎng)1周，動(dòng)物房溫度和濕度分別維持在20 ℃和70%左右。按照三個(gè)實(shí)驗(yàn)研究均隨機(jī)分為5組，包括空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(1 mg·kg-1吲哚美辛)、總?cè)平M(高6 mg·kg-1、中3 mg·kg-1、低1 mg·kg-1三個(gè)劑量)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)取昆明小鼠60只，隨機(jī)分為5組，包括空白對(duì)照組(給予等體積純水)、陽(yáng)性藥對(duì)照組(1 mg·kg-1吲哚美辛)、總?cè)平M(高6 mg·kg-1、中3 mg·kg-1、低1 mg·kg-1三個(gè)劑量),每組動(dòng)物12只，灌胃給藥，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后乙醚麻醉小鼠，于小鼠左耳前后兩面涂抹二甲苯0.05 mL，右耳作對(duì)照，30 min后將小鼠頸椎脫位處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑6 mm的打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，稱重，以左右耳片重量之差為腫脹度。

1.2.2總?cè)奇?zhèn)痛作用研究(1)扭體法實(shí)驗(yàn):取昆明小鼠60只，處理同上。末次給藥1 h后，小鼠腹腔注射0.7%冰醋酸溶液0.2 mL/10 g，記錄注射冰醋酸后扭體反應(yīng)發(fā)生的潛伏期、30 min內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)(腹部收縮內(nèi)凹、軀干與后腿伸張、臀部高起)以及扭體發(fā)生率，統(tǒng)計(jì)分析其抑制率。(2)熱板法篩選30 s內(nèi)舔后足的昆明小鼠60只，分組情況同上。調(diào)節(jié)恒溫水浴(55±0.5) ℃，將普通燒杯底部接觸水面，先測(cè)量給藥前痛閾值，按照扭體法給藥劑量一次給藥，于給藥后30、60、90、120 min分別測(cè)定各鼠的痛閾值，計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的痛閾提高百分率。結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2　結(jié)果

2.1總?cè)瓶寡鬃饔醚芯?對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹影響對(duì)比)經(jīng)單因素方差分析，陽(yáng)性藥對(duì)照組、總?cè)聘鲃┝拷M與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明陽(yáng)性藥對(duì)照組及總?cè)聘鲃┝拷M能明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹?？?cè)频蛣┙M與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.037<0.05)；總?cè)聘邉┝拷M與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.013<0.05)，說(shuō)明總?cè)聘鲃┝拷M抑制二甲苯致小鼠耳腫脹的作用弱于陽(yáng)性藥對(duì)照組，結(jié)果見表1。

表1　二甲苯致小鼠耳腫脹影響比較

注：腫脹度整體比較為單因素方差分析，抑制率則為整體χ2檢驗(yàn)。

2.2總?cè)奇?zhèn)痛作用研究(對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)影響對(duì)比)經(jīng)單因素方差分析，陽(yáng)性藥對(duì)照組、總?cè)聘邉┝拷M小鼠的扭體潛伏期與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)；總?cè)频蛣┝拷M小鼠的扭體潛伏期與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016)。說(shuō)明總?cè)聘鲃┝拷M均能明顯延長(zhǎng)小鼠的扭體潛伏期,抑制醋酸引起的扭體反應(yīng)?？?cè)聘鲃┝拷M扭體潛伏期與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。陽(yáng)性藥對(duì)照組、總?cè)聘鲃┝拷M扭體次數(shù)與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)?？?cè)聘鲃┝拷M可明顯堅(jiān)守醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，對(duì)醋酸所致疼痛有顯著的鎮(zhèn)痛作用；總?cè)聘邉┝拷M扭體次數(shù)與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.98)，鎮(zhèn)痛效果相近。綜合來(lái)看，各用藥組均可明顯減少小鼠的扭體次數(shù)，延長(zhǎng)小鼠的扭體潛伏期，但總?cè)浦小⒌蛣┝拷M扭體發(fā)生率達(dá)50%以上，陽(yáng)性藥對(duì)照組的鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于總?cè)频母鲃┝拷M，但與總?cè)聘邉┝拷M比較，鎮(zhèn)痛作用差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表2。

表2　醋酸致小鼠扭體反應(yīng)影響比較

注：扭體發(fā)生率比較為整體χ2檢驗(yàn)，其它指標(biāo)整體比較為單因素方差分析。

2.3總?cè)奇?zhèn)痛作用研究(對(duì)熱板致小鼠痛閾對(duì)比)陽(yáng)性藥對(duì)照組給藥后痛閾值與給藥前相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；總?cè)聘邉┝拷M給藥后90、120 min的痛閾值與給藥前痛閾值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與空白組對(duì)照比較，陽(yáng)性藥對(duì)照組給藥后痛閾值與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，總?cè)聘邉┝拷M給藥后痛閾值與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，中低劑量組在給藥后痛閾值30、60、90、120 min與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較，總?cè)聘鲃┝拷M在給藥后90 min和120 min的痛閾值提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，總?cè)聘?、中、低三個(gè)劑量組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表3。

3　討論

目前臨床針對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎西醫(yī)治療藥物如非甾體抗炎藥物、抗風(fēng)濕藥、糖皮質(zhì)激素類，雖然有一定的治療作用，但毒副作用較大；中藥針對(duì)痹癥的臨床治療如雷公藤多苷片、益腎鐲痹丸等，療效局限，且有一定毒性。因此，開發(fā)高效、低毒的新型抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物意義重大。以中藥為主的天然藥物不僅來(lái)源廣泛、不良反應(yīng)小，而且具有多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)整體調(diào)節(jié)的特點(diǎn)，因此在治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

表3　熱板致小鼠痛閾影響比較±s

注：組間整體比較均為單因素方差分析。

我們對(duì)少數(shù)民族藥用資源進(jìn)行調(diào)查的過(guò)程中，“血筒”的民間用藥特色引起了我們的關(guān)注。該藥資源豐富，民間有習(xí)慣用于治療風(fēng)濕痹痛、慢性腰腿痛等痛癥的基礎(chǔ)，千百年來(lái)，少數(shù)民族中醫(yī)藥知識(shí)都是靠“口口相傳”來(lái)“代代豐富”的，許多醫(yī)藥知識(shí)流散于民間，常用草藥就有300種之多[6]，至今仍對(duì)人民的衛(wèi)生保健事業(yè)發(fā)揮著重要作用。本課題組通過(guò)對(duì)粵北、湘西北少數(shù)民族聚居區(qū)的調(diào)研和野外實(shí)地考察，深感少數(shù)民族醫(yī)藥的原始、自然、神奇，有許多寶貴的民族醫(yī)藥資源值得我們?nèi)ネ诰颍麄兂Ｄ昃幼≡诖笊街?，山林間濕熱蒸郁，易感受風(fēng)寒、濕邪而致身痛、身重，關(guān)節(jié)疼痛、屈伸不利等，為此，有自己的防治手段和藥物，如“三十六血”以及土家族“七”類藥都是具有活血散瘀、消腫、止痛等功效的藥物[7-8]?！把病庇置把摺薄ⅰ把ā?，是經(jīng)典民族藥物中“三十六血”藥以及“七”類藥之一，經(jīng)鑒定為異型南五味子，隸屬五味子科南五味子屬。民間以藤莖入藥，味甘、微辛，性溫，具有補(bǔ)血活血、祛風(fēng)除濕、行氣止痛之功效。常用于治療風(fēng)濕痹痛等病。是我國(guó)傳統(tǒng)中藥“雞血藤”的主要來(lái)源植物[9]。南五味子屬植物主要含有三萜和木脂素類化合物[10]，異型南五味子的主要成分為三萜類化合物。其中主要是針對(duì)三萜類化合物的細(xì)胞毒活性以及抗HIV作用開展了研究[11]，并已在南五味子屬中發(fā)現(xiàn)了大量具有抗HIV活性及較好細(xì)胞毒活性的三萜化合物。南五味子屬植物“血筒”能“祛風(fēng)鎮(zhèn)痛，舒筋活絡(luò),主治風(fēng)濕痹痛，慢性腰腿痛，胃痛，腹痛，痛經(jīng)”；“祛風(fēng)除濕，理氣止痛，活血散瘀,主治風(fēng)濕筋骨疼痛，腰肌勞損，坐骨神經(jīng)痛，急性胃腸炎，慢性胃炎，胃、十二指腸潰瘍，痛經(jīng)，產(chǎn)后腹痛，跌打損傷”；“行氣活血，消脹止痛,用于腹痛腹脹，肝炎，關(guān)節(jié)疼痛，勞傷腰痛等癥”。土家族等少數(shù)民族用其治療關(guān)節(jié)疼痛、頭痛、胃痛、腹部肌肉疼痛等已有多年的使用經(jīng)驗(yàn)，其療效和安全性得到實(shí)踐的確認(rèn)。但到目前為止，與這些民間習(xí)用相關(guān)的活性成分結(jié)構(gòu)，藥效評(píng)價(jià)、毒性研究均未見報(bào)道。

為此，我們?cè)谇捌趯?duì)異型南五味子化學(xué)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究基礎(chǔ)上，開展“血筒”總?cè)婆c民間傳統(tǒng)用途相關(guān)聯(lián)的治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究；并開展總?cè)茖?duì)動(dòng)物急性、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的毒理學(xué)研究，以考察異型南五味子總?cè)频乃幚砘钚院桶踩?，為開發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的、安全有效的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療藥物奠定基礎(chǔ)。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床上急性發(fā)作期多以多關(guān)節(jié)腫脹，疼痛為發(fā)病特點(diǎn)，在急性發(fā)作期以急則治其標(biāo)的原則，臨床治療多以抗炎,鎮(zhèn)痛為主要治療目的。因此，本課題藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了急性期炎癥疼痛模型，即二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠扭體反應(yīng)、熱板致小鼠疼痛，以觀測(cè)異型南五味子總?cè)茖?duì)急性炎癥疼痛的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明總?cè)聘鲃┝拷M對(duì)小鼠耳腫脹抑制作用明顯，對(duì)急性炎癥有明顯抑制效果。而總?cè)聘邉┝拷M可明顯延長(zhǎng)小鼠的扭體潛伏期、減少扭體次數(shù)、抑制小鼠的扭體反應(yīng)，并且提高小鼠的痛閾值，對(duì)物理、化學(xué)性刺激引起的疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛效果。

綜上所述，異型南五味子在民間有很好的治療風(fēng)濕痹痛及各種痛癥的應(yīng)用基礎(chǔ)，且鑒于三萜類成分是其主要成分，我們選擇其總?cè)剖状伍_展抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的抗炎鎮(zhèn)痛藥理研究，實(shí)驗(yàn)證明異型南五味子總?cè)颇苡行б种萍毙匝装Y和疼痛，下一步研究需在確定有效部位的前提下，進(jìn)一步分離篩選活性結(jié)構(gòu)，為創(chuàng)新藥物的發(fā)現(xiàn)和研發(fā)打下基礎(chǔ)，也對(duì)異型南五味子屬藥用植物的開發(fā)研究起到示范性作用，更為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等各種疼痛疾患發(fā)掘高效低毒的民間藥物打下基礎(chǔ)。

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Pharmacodynamics of alien kadsura total triterpenes used for anti-inflammatory analgesia in mice suffering from rheumatoid arthritis

DENG Ming，ZHANG Weining

(FutianTCMHospital，Shenzhen，Guangdong518034,China)

ObjectiveTo observe anti-inflammatory analgesic effect of Alien kadsura total triterpenes.MethodsA total of 180 mice from Kunming were randomized into 5 groups,including blank control group,positive control group (1 mg·kg-1indomethacin),total triterpenoid group (high,medium and low doses,6 mg·kg-1,3 mg·kg-1and 1 mg·kg-1,respectively).We examined anti-inflammatory analgesic effect of aliens kadsura total triterpenoid through Xylene induced mouse ear swelling experiment,body torsion induced by acetic acid and measurement of mice pain threshold by hot plate method.ResultsThere were significant differences among groups with different doses in improvement of the mouse ear swelling,incubation period of body torsion,the number of body torsion reaction,the incidence of body torsion,and pain threshold at different time before and after treatment (P<0.05).After treatment there were significant differences between groups with different doses and blank control group (P<0.05) while there was no significant difference between high dose group and positive control group (P>0.05).ConclusionsAlien kadsura total triterpenes has inhibitory effect on acute inflammation and pain caused by physical or chemical stimulation of mice,therefore,high dose of total triterpene has obvious anti-inflammatory analgesic effect.

Kadsura heteroclita/pharmacology;Arthritis,rheumatoid;Mice

2014年廣東省科學(xué)技術(shù)廳項(xiàng)目(2014A020220178)

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.013

2016-05-22，

2016-06-20)