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    復(fù)合微生物固態(tài)發(fā)酵整粒棉籽的研究

    2016-01-10 02:39:50劉倚帆王星凌岳壽松萬發(fā)春趙紅波劉曉牧
    飼料工業(yè) 2016年20期
    關(guān)鍵詞:整粒棉籽黃曲霉

    ■ 劉倚帆 王星凌 岳壽松 錢 鑫 萬發(fā)春 趙紅波 劉曉牧

    (1.山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東濟(jì)南 250100;2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,山東濟(jì)南 250100;3.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心,山東濟(jì)南 250100;4.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,山東泰安 271018)

    我國是全球棉花產(chǎn)量最高的國家,棉籽產(chǎn)量已超過了1 000萬噸,棉籽脫殼后棉仁中含油脂30%~33%,含蛋白質(zhì)35%~38%,是優(yōu)良的植物油脂資源,也是重要的植物蛋白資源。此外,棉籽中還富含高附加值的棉籽糖、維生素E、木糖醇等,是重要的飼料資源[1]。全棉籽的粗蛋白質(zhì)含量較穩(wěn)定,平均22.5%~24.9%;粗脂肪含量16.9%~24.7%,而中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量很高,分別為39%~52%和29%~40.1%[2]。目前,對(duì)整粒棉籽在牛生產(chǎn)性能上的研究主要集中在奶牛上,育肥肉牛上很少報(bào)道。朱文濤等(2008)[3]研究表明,奶牛日糧中添加8%全棉籽使產(chǎn)奶量提高5.65%;鐘榮珍等研究表明,飼糧中添加全棉籽可以提高奶牛產(chǎn)奶量,改善乳脂品質(zhì)[4]。本團(tuán)隊(duì)在前期利用整粒棉籽進(jìn)行了一系列研究,在一定范圍內(nèi)用全棉籽替代精料中的棉餅和油脂能提高育肥閹牛的生長速度[5]。限制棉籽應(yīng)用的因素包括其自身含有的有毒、有害物質(zhì)如棉酚、硫代葡萄糖苷,以及纖維素、低聚糖等抗?fàn)I養(yǎng)因子,而且蛋白質(zhì)品質(zhì)較差,蛋氨酸等必需氨基酸含量低且不平衡等,目前通過微生物發(fā)酵方法以脫毒及提高飼用品質(zhì)的報(bào)道都是針對(duì)棉籽粕,但對(duì)整粒棉籽發(fā)酵尚未見報(bào)道。因此,本試驗(yàn)旨在研究整粒棉籽經(jīng)微生物有氧發(fā)酵后營養(yǎng)成分、pH值、氨基酸含量及黃曲霉毒素的變化,觀察和評(píng)估棉籽的發(fā)酵效果和營養(yǎng)價(jià)值,從而為棉籽在反芻動(dòng)物飼料中的應(yīng)用提供有效的途徑。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    棉籽:市售。米曲霉、馬克思克魯維酵母菌均由岳壽松博士實(shí)驗(yàn)室提供。

    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    棉籽發(fā)酵為有氧發(fā)酵,采用固態(tài)發(fā)酵的方式,米曲霉和酵母菌分別以0.8%和0.2%的接種量接種于7 kg棉籽中,水分含量為30%,發(fā)酵溫度為30℃,在第7、14 d取樣,一份65℃烘干測定初水分,用于常規(guī)飼料成分檢測;一份-20℃保存用于鮮樣測定。具體試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

    表1 棉籽發(fā)酵試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 棉籽形態(tài)、氣味觀察及霉變比例的測定

    每次取樣前先觀察記錄棉籽的形態(tài)及揮發(fā)出的氣味,并測定霉變比例。

    1.3.2 pH值測定

    在規(guī)定取樣時(shí)間,選取對(duì)照組和發(fā)酵組樣品各10 g,加蒸餾水90 ml,于搖床上100 r/min振蕩30 min,使用pH計(jì)測定其pH值。

    1.3.3 常規(guī)營養(yǎng)成分測定

    干物質(zhì)(DM):采用失重法測定;

    粗蛋白質(zhì)(CP):采用凱氏定氮法測定;

    粗脂肪(EE):采用殘余法測定;

    有機(jī)物(OM):采用灰化法測定;

    能量(GE):采用氧彈熱量計(jì)法測定;

    Ca、P:采用原子吸收光譜法測定;

    酸性洗滌纖維(ADF):采用NY/T 1459—2007測定;

    中性洗滌纖維(NDF):采用GB/T 20806—2006測定。

    1.3.4 氨基酸組成的測定

    參考GB/T 18246—2000,采用氨基酸自動(dòng)分析儀測定。

    1.3.5 黃曲霉毒素的測定

    參考GB/T 5009.23—2006,采用高效液相色譜法測定黃曲霉毒素B1。

    2 試驗(yàn)結(jié)果

    2.1 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽霉變比例的影響(見表2)

    表2 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽霉變比例的影響(W,%)

    由表2可知,與對(duì)照組相比,米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵能有效降低整粒棉籽在發(fā)酵過程中的霉變產(chǎn)生,在發(fā)酵第7 d和第14 d發(fā)酵組比對(duì)照組分別降低了60%和50%,差異極顯著(P<0.01)。

    2.2 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽pH值的影響(見表3)

    表3 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽pH值的影響

    由表3可知,發(fā)酵后7 d與發(fā)酵前的pH值沒有顯著差異,但發(fā)酵后14 d發(fā)酵組pH值升高。同時(shí),與對(duì)照組相比,發(fā)酵組在第7 d與對(duì)照組差異不顯著,發(fā)酵后14 d pH值極顯著升高(P<0.01)。

    2.3 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽營養(yǎng)成分的影響(見表4)

    表4 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽營養(yǎng)成分的影響

    由表4可知,米曲霉加酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵整粒棉籽第7 d,營養(yǎng)成分如粗蛋白、粗脂肪含量以及能量均高于對(duì)照組,比對(duì)照組分別提高6.2%、5.6%和25.6%,中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維低于對(duì)照組。同時(shí),與發(fā)酵前相比,發(fā)酵后棉籽的粗蛋白、粗脂肪的含量分別提高了12.27%、11.39%,中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維降低了5.5%和4.1%。而發(fā)酵第14 d,發(fā)酵組粗蛋白含量低于對(duì)照組,中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維高于對(duì)照組。同時(shí),與發(fā)酵前相比,粗蛋白、磷、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維提高,而鈣含量及能量降低。

    2.4 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽氨基酸組成的影響(見表5及表5續(xù))

    表5 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽氨基酸組成的影響(g/100 g)

    表5(續(xù)) 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽氨基酸組成的影響(g/100 g)

    由表5的試驗(yàn)結(jié)果可知,米曲霉加酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵整粒棉籽第7 d,發(fā)酵組必需氨基酸及總氨基酸含量比對(duì)照組分別提高了3.55%和8.14%,且比發(fā)酵前棉籽氨基酸含量分別提高了22.9%和27.2%,其中必需氨基酸中的蛋氨酸含量比發(fā)酵前提高了59%。但到發(fā)酵第14 d,必需氨基酸及總氨基酸含量均低于對(duì)照組,且比發(fā)酵前氨基酸含量明顯降低。

    2.5 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽黃曲霉毒素B1的影響(見表6)

    表6 米曲霉、酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵對(duì)整粒棉籽黃曲霉毒素B1的影響(μg/kg)

    由表6可知,發(fā)酵前并未檢測出棉籽中含有黃曲霉毒素B1,在發(fā)酵第7 d,對(duì)照組黃曲霉毒素B1含量高達(dá)340 μg/kg,發(fā)酵組未檢出。發(fā)酵第14 d,對(duì)照組黃曲霉毒素B1含量高達(dá)354 μg/kg,發(fā)酵組未檢出。

    3 討論

    棉籽脂肪含量18.09%,與大豆脂肪含量相似,比豆粕含量高,其中,不飽和脂肪酸占70%,是反芻動(dòng)物優(yōu)良的能量飼料來源。粗蛋白質(zhì)含量達(dá)30.57%,在常規(guī)原料中僅次于大豆類原料。王平等(2003)[6]研究日糧不同棉籽水平對(duì)肉牛消化率的影響的結(jié)果表明,添加棉籽后對(duì)日糧ADF消化率有顯著促進(jìn)作用,且添加25%棉籽組日糧養(yǎng)分消化率要低于添加13%棉籽組,日糧中粗脂肪消化率明顯提高。但是,棉籽自身含有抗?fàn)I養(yǎng)因子如纖維素、低聚糖等,而且蛋白質(zhì)品質(zhì)較差,必需氨基酸不平衡等因素又導(dǎo)致棉籽在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中受到諸多限制。本試驗(yàn)探討利用微生物發(fā)酵棉籽的適宜的生產(chǎn)模式,以期改善棉籽品質(zhì),提高其營養(yǎng)價(jià)值,為進(jìn)一步開發(fā)棉籽的應(yīng)用潛力提供理論依據(jù)。

    菌種是微生物發(fā)酵取得良好效果的關(guān)鍵,原料經(jīng)發(fā)酵后氣味芳香、適口性好,發(fā)酵過程中可產(chǎn)生多種水解酶,富含B族維生素等;黑曲霉、米曲霉、根霉、木霉等霉菌可以分泌豐富的酶類,如淀粉酶、纖維素酶、蛋白酶、果膠酶等,這些酶能夠促進(jìn)原料中的淀粉、纖維素等高分子化合物分解為單糖,供微生物生長需要;且菌體中蛋白質(zhì)含量也較高,達(dá)到20%~30%,因此,在蛋白質(zhì)飼料的生產(chǎn)中這些種類的霉菌得到廣泛應(yīng)用。夏新成等(2010)[7]利用兩株酵母和一株霉菌對(duì)棉籽粕進(jìn)行復(fù)合發(fā)酵,使底物粗蛋白提高了17.72%。張慶華等(2007)[8]采用熱帶假絲酵母、擬內(nèi)孢霉菌和植物乳桿菌三株菌協(xié)同固態(tài)發(fā)酵棉籽粕,發(fā)酵后蛋白質(zhì)和氨基酸含量顯著提高。吳偉偉(2009)[9]研究了黑曲霉與釀酒酵母混合固態(tài)發(fā)酵對(duì)棉籽餅粕的脫毒效果及提高棉籽餅粕營養(yǎng)價(jià)值的作用,結(jié)果表明,發(fā)酵溫度30℃、接種量15%,發(fā)酵時(shí)間為60 h,使真蛋白含量從32.99%提高到42.40%,必需氨基酸中賴氨酸、蛋氨酸和蘇氨酸分別較發(fā)酵前相比增加了31.03%、25.00%和22.23%,而且17種氨基酸的總量較發(fā)酵前相比增加了30.10%。張文舉等(2006)[10]利用熱帶假絲酵母與黑曲霉復(fù)合固體發(fā)酵使棉籽餅底物粗蛋白、總氨基酸、必需氨基酸含量分別提高了27.83%、18.15%、19.18%。研究表明,發(fā)酵處理后底物粗蛋白質(zhì)含量提高的原因:一是,由于微生物大量生長繁殖,而微生物菌體蛋白豐富,從而增加了粗蛋白質(zhì)的含量;二是,微生物通過對(duì)基質(zhì)利用,可大量合成自身所需要的菌體蛋白和細(xì)胞骨架,將其轉(zhuǎn)化成菌體蛋白或分泌蛋白,從而提高了飼料中的蛋白質(zhì)含量。另外,在發(fā)酵過程中同時(shí)也消耗一定量的糖類物質(zhì),釋放出能量和二氧化碳,糖類物質(zhì)比例降低后從而也導(dǎo)致基質(zhì)中蛋白質(zhì)的單位含量的增加。棉籽是重要的植物性蛋白質(zhì)和能量資源,但由于其中的蛋白質(zhì)相對(duì)分子量較大,結(jié)構(gòu)緊密,不利于動(dòng)物的消化和吸收,通過微生物發(fā)酵的方法,可將其中的大分子蛋白降解為小分子蛋白及多肽,從而提高動(dòng)物對(duì)其消化利用率。本試驗(yàn)利用米曲霉和酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵,添加量1%,含水量30%,發(fā)酵溫度30℃,發(fā)酵第7 d,肉眼可見棉籽上覆蓋一層黃色的米曲霉孢子菌絲,且發(fā)酵組比對(duì)照組霉變比例顯著下降,說明米曲霉具有防止霉變的作用。發(fā)酵后的棉籽營養(yǎng)成分如粗蛋白、粗脂肪含量均高于對(duì)照組,中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維低于對(duì)照組,能量高于對(duì)照組。同時(shí),與發(fā)酵前相比,發(fā)酵后棉籽的粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、磷的含量均明顯提高,中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維明顯降低,能量明顯提高,表明微生物發(fā)酵對(duì)棉籽的營養(yǎng)價(jià)值改善產(chǎn)生了顯著作用,特別是發(fā)酵7 d必需氨基酸和總氨基酸含量比發(fā)酵組和發(fā)酵前棉籽均有所提高,其中蛋氨酸含量提高了59%,這可能是由于微生物發(fā)酵后微生物菌體蛋白中蛋氨酸含量較高,所以使發(fā)酵后棉籽的蛋氨酸含量也顯著提高。隨著發(fā)酵時(shí)間的延長和底物的消耗,在發(fā)酵第14 d,雖然發(fā)酵組粗脂肪含量仍高于對(duì)照組,但粗蛋白含量低于對(duì)照組,且中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量升高,尤其是必需氨基酸及總氨基酸含量均低于對(duì)照組,且比發(fā)酵前氨基酸含量明顯降低,說明米曲霉和酵母菌混合固態(tài)有氧發(fā)酵整粒棉籽的最佳時(shí)間在7 d左右。

    pH值是發(fā)酵工藝中的一個(gè)重要因素,不同的微生物都有一個(gè)適宜其生長和發(fā)揮活性功能的最適pH值范圍。一般情況下,真菌生長的pH值范圍為3.5~6.0,酵母菌為4.5~7.0[9]。本試驗(yàn)在發(fā)酵第一周(7 d內(nèi)),對(duì)照組和發(fā)酵組pH值均在正常范圍內(nèi),而到發(fā)酵第二周結(jié)束(第14 d),對(duì)照組pH值為7.54,發(fā)酵組pH值為8.52,高于米曲霉和酵母菌最適生長pH值范圍,這也可能是導(dǎo)致發(fā)酵后期霉菌大量繁殖的原因。

    飼料中的霉菌毒素不僅會(huì)對(duì)畜禽健康和生產(chǎn)性能構(gòu)成危害,還會(huì)帶來食品安全問題。齊鳴等(2015)[11]對(duì)飼料中常見霉菌毒素進(jìn)行調(diào)查中指出,棉籽粕黃曲霉毒素B1含量較高,最高污染水平達(dá)3 992.5 μg/kg。本試驗(yàn)在發(fā)酵第7 d、第14 d于對(duì)照組棉籽樣品中均檢測出黃曲霉毒素B1,且含量分別為340、354 μg/kg,而添加米曲霉及酵母菌的發(fā)酵組并未檢出黃曲霉毒素B1。因?yàn)榘l(fā)酵是在開放的環(huán)境下進(jìn)行,參與發(fā)酵的微生物種類較多,易被雜菌污染從而產(chǎn)生黃曲霉毒素。本試驗(yàn)利用米曲霉加酵母菌混合發(fā)酵,嚴(yán)格控制了黃曲霉毒素的產(chǎn)生,是一種安全、可靠的生物控制方法。

    4 結(jié)論

    ①米曲霉和酵母菌復(fù)合固態(tài)有氧發(fā)酵整粒棉籽,能夠提高植物蛋白飼料中粗蛋白、粗脂肪等營養(yǎng)物質(zhì)的含量,并提高必需氨基酸及總氨基酸含量,從而改善飼料品質(zhì),提高了營養(yǎng)價(jià)值。

    ②米曲霉和酵母菌復(fù)合固態(tài)有氧發(fā)酵整粒棉籽,能有效降低發(fā)酵過程中植物蛋白飼料的霉變比例,并且米曲霉和酵母菌復(fù)合固態(tài)有氧發(fā)酵整粒棉籽能顯著降解黃曲霉毒素B1。

    ③米曲霉和酵母菌復(fù)合固態(tài)有氧發(fā)酵整粒棉籽的最佳時(shí)間為7 d,接種量為1%,含水量30%,發(fā)酵溫度30℃。

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