GC-MS法測(cè)定香茅草中石竹烯氧化物的含量

葉繪晟，楊力龍，向楊，梁芳，龔志強(qiáng)

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西南寧530222；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，廣西南寧530001；3.三峽大學(xué)仁和醫(yī)院藥械科，湖北宜昌443001）

GC-MS法測(cè)定香茅草中石竹烯氧化物的含量

葉繪晟1，楊力龍2，向楊3，梁芳1，龔志強(qiáng)1

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西南寧530222；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，廣西南寧530001；3.三峽大學(xué)仁和醫(yī)院藥械科，湖北宜昌443001）

研究了香茅草中石竹烯氧化物的含量測(cè)定方法。選擇GC-M S聯(lián)用儀，HP-5M S石英毛細(xì)管柱（30m×0.25m m× 0.25μ m），70～160℃程序升溫；EI離子源,載氣為He，分流比5∶1。結(jié)果表明：石竹烯氧化物進(jìn)樣濃度在0.01～0.10m g/ m L范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 5），平均回收率為100.50%，RSD為2.63%（n=6）。由此表明，采用GC-M S法對(duì)香茅草中石竹烯氧化物進(jìn)行測(cè)定，方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確且重復(fù)性好。

香茅草；石竹烯氧化物；GC-M S

香茅草［Cymbopogon citratus（DC.） Stapf］為禾本科香茅屬植物，又名檸檬草、香巴茅、姜巴茅、香草風(fēng)茅草等，原產(chǎn)于南印度、斯里蘭卡，我國(guó)主產(chǎn)于廣東、臺(tái)灣、廣西、貴州、云南等省區(qū)，作為重要的草本香料。其味甘、辛，性溫，功用祛風(fēng)通絡(luò)，溫中止痛、止瀉。主治感冒頭身疼痛，風(fēng)寒濕痹，脘腹冷痛，泄瀉，跌打損傷，還有和胃通氣、醒腦催情的功效［1］。文獻(xiàn)研究報(bào)道［2-4］香茅中檸檬醛證實(shí)為抗菌的活性成分，β-香葉烯是香茅草中鎮(zhèn)痛主要成分，而石竹烯氧化物具有鎮(zhèn)痛和抗炎作用。

目前對(duì)香茅草揮發(fā)油成分已有不少報(bào)道，對(duì)香茅油中檸檬醛含量進(jìn)行了研究，但未見石竹烯氧化物的報(bào)道，本文采用GC-MS法對(duì)香茅草中的石竹烯氧化物進(jìn)行含量測(cè)定，為其資源開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和材料

7890A-5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀GC-MS（美國(guó)安捷倫公司）；石英毛細(xì)管柱HP-5MS （30m×0.25mm×0.25μm）；KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；XS型分析天平（梅特勒-托利系儀器（上海）有限公司）；LG16-W臺(tái)式高速離心機(jī)（北京京立離心機(jī)有限公司）。石竹烯氧化物對(duì)照品（批號(hào)：5649，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。香茅草藥材采購自廣西各地，共9批，并經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院生藥教研室苑敏副教授鑒定為禾本科植物香茅［Cymbopogon citratus （DC.） Stapfa］的干燥全草。

1.2 色譜條件

色譜柱：石英毛細(xì)管柱HP-5MS（30m× 0.25mm×0.25μm）；程序升溫：初始溫度70℃，保留1min，以7℃/min速率升溫至130℃，保持2min，再以8℃/min速率升溫至160℃，并保留5min；進(jìn)樣量：1μL，載氣：He，柱流量1.0mL/min，分流比5∶1；質(zhì)譜條件：接口溫度250℃，電離方式為EI離子源，電子能量70eV，離子源溫度250℃，四極桿溫度150℃，掃描范圍m/z 35～500，加速電壓1 247eV，掃描間歇2.94次/s，溶劑延遲時(shí)間3min。

1.3 溶液的制備

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取石竹烯氧化物對(duì)照品5.0mg，加入無水乙醇制成0.1mg/mL的對(duì)照品溶液，作為儲(chǔ)備液。

1.3.2 供試品溶液的制備

精密稱取香茅草粉末約3g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密量取乙酸乙酯30mL加入錐形瓶中，密塞，靜置30min，稱定重量，超聲處理（功率180W，頻率42KHz）30min，放冷至室溫，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失重量，搖勻，過濾，將濾液揮干，再用無水乙醇溶解并定容5mL，1萬rpm/min離心10min，過0.45μm微孔濾膜備用即得。

1.4 測(cè)定法

分別精密吸取石竹烯氧化物對(duì)照品溶液與香茅草供試品溶液各1μL，注入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，測(cè)定并記錄石竹烯氧化物的峰面積，結(jié)果見圖1和圖2。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)（A）和樣品（B）的總離子色譜圖

圖2 峰1質(zhì)峰

2 結(jié)果與討論

2. 1 測(cè)定方法線性關(guān)系

分別精密量取濃度為0.1mg/mL的對(duì)照品溶液1、2、4、6mL和8mL置于10mL量瓶中，加入無水乙醇定容至刻度，搖勻，即得6個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液。分別將這6個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液注入氣相色譜儀，進(jìn)樣量為1μL，按上述程序升溫條件測(cè)定石竹烯氧化物峰面積。以峰面積A對(duì)樣品溶度C（mg/mL）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線：A=5.0×108C+3.0×106，r=0.999 5，其線性范圍為0.01～0.10mg/mL。

2. 2 測(cè)定方法精密度試驗(yàn)

精密吸取1μL濃度為0.03mg/mL的石竹烯氧化物對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果顯示石竹烯氧化物峰面積的RSD值為1.59%（n=6），說明試驗(yàn)儀器精密度較好。

2. 3 測(cè)定方法穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液1μL，按1.1項(xiàng)下色譜條件分別于0、1、2、4、8、12h和24h進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得石竹烯氧化物峰面積的RSD值為2.50%（n=7），說明供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2. 4 測(cè)定方法重復(fù)性試驗(yàn)

取香茅草藥材粉末6份，精密稱定，分別按1.3.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，在1.1項(xiàng)下測(cè)定石竹烯氧化物的峰面積，并計(jì)算石竹烯氧化物的含量，結(jié)果石竹烯氧化物的平均含量為0.04mg/g，RSD為2.12%（n=6），表明重復(fù)性良好。

2. 5 測(cè)定方法回收率試驗(yàn)

精密稱量1.5g已知含量的香茅草藥材，精密加入石竹烯氧化物對(duì)照品（0.03mg/mL）1、2、3mL，按1.3.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法處理樣品，在1.3.1項(xiàng)下測(cè)定樣品中石竹烯氧化物的含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1，平均加樣回收率為100.50%，RSD 為2.63%（n=6）。

表1 石竹烯氧化物回收結(jié)果

2.6 樣品測(cè)定

取9批香茅草藥材，分別按照1.3.2項(xiàng)下處理樣品，按1.1項(xiàng)下的色譜條件分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，計(jì)算各批次香茅草藥材樣品中石竹烯氧化物的含量，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 不同批次中香茅草中石竹烯氧化物含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

（1）實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，9個(gè)批次的香茅草藥材中石竹烯氧化物的含量差異較大，可能與植物的生長(zhǎng)環(huán)境、產(chǎn)地、氣候、藥材采集時(shí)間等因素有關(guān)。供含量測(cè)定藥材的收集存在一定局限性，并不能完全反映出香茅草藥材中石竹烯氧化物含量的動(dòng)態(tài)變化關(guān)系。

（2）氣相色譜法（GC法）是一種常用的分析揮發(fā)性、半揮發(fā)性成分的方法，具有分析準(zhǔn)確、處理步驟簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，常用于定量分析。但在未知成分的鑒定方面，利用GC僅能通過保留時(shí)間進(jìn)行定性，物質(zhì)鑒定受到限制。故在分析復(fù)雜的樣品時(shí)，采用氣質(zhì)聯(lián)用法（ GC-MS）［5］對(duì)一些未知成分進(jìn)行定性定量分析，往往起到事半功倍的效果。

（3）本文首次采用乙酸乙酯超聲處理測(cè)定香茅草原植物中石竹烯氧化物含量，與文獻(xiàn)報(bào)道［6，7］香茅草揮發(fā)油中石竹烯氧化物比較，廣西香茅草精油中石竹烯氧化物的相對(duì)百分含量為0.06%，新鮮海南香茅草精油中石竹烯氧化物相對(duì)百分含量為0.65%，依據(jù)不同產(chǎn)地香茅草的出油率，試驗(yàn)表明香茅草原植物中石竹烯氧化物測(cè)定結(jié)果與香茅草精油中石竹烯氧化物含量結(jié)果相符。

（4）石竹烯及其衍生物具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和生理活性，能夠成為新藥設(shè)計(jì)開發(fā)中的先導(dǎo)化合物，對(duì)其活性進(jìn)行相關(guān)的結(jié)構(gòu)改造與優(yōu)化，可發(fā)展成為理想的新藥物。石竹烯及其衍生物在藥物合成中有較大的應(yīng)用潛力和價(jià)值，已有學(xué)者對(duì)其化合物進(jìn)行合成［8-10］。研究對(duì)石竹烯氧化物的含量測(cè)定，不僅可作為香茅草壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的增補(bǔ)項(xiàng)，還可以為石竹烯及其衍生物開發(fā)新藥資源提供依據(jù)。

4 結(jié)論

石竹烯作為香料已經(jīng)被應(yīng)用于化妝品和食品添加劑中，藥理研究表明石竹烯具有局麻作用、抗炎作用、驅(qū)蚊蟲作用、抗焦慮、抗抑郁作用，石竹烯醇還應(yīng)用于鎮(zhèn)咳祛痰藥物中，石竹烯氧化物具有鎮(zhèn)痛和抗炎作用，抗真菌作用，還有細(xì)胞毒性等。同時(shí)還簡(jiǎn)單介紹了石竹烯及其部分衍生物的合成方法。

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Determination of the Content of the Caryophyllene Oxide of Cymbopogon citratus (DC.) Stapf in GC-MS Method

Ye Hui-sheng1, Yang Li-long2, Xiang Yang3, Liang Fang1, Gong Zhi-qiang1
(1. Faculty of Chinese Medical Science, Guangxi Traditional Chinese Medical University, Guangxi Nanning 530222; 2. The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medical, Guangxi Nanning 530001; 3. Drug and Equipment Section, Renhe Hospital of Three Gorges University, Hubei Yichang 443001)

To establish the methods for the content determination of the Caryophyllene oxide in Cymbopogon citrates (DC.) Stapf, gas chromatography combined with mass spectrography(GC-MS) was used to analyze the content of muscone in a HP-5MS capillary column (30m×0.25mm×0.25μ m), the column temperature was rose by program from 70～ 160℃ , ion source of EI, the carrier gas was He and split ratio was 5∶ 1. The result showed that the concentration showed a good linear relationship (r=0.9995) within the range of 0.01～0.10 mg/mL, and the average recovery was 100.50% with RSD of 2.63%. So this method is simple, accurate, reliable and suitable for Cymbopogon citrates.

Cymbopogon citrates(DC.) Stapf; Caryophyllene oxide; GC-MS

TB331

A

2096-0387（2016）04-0025-03

廣西壯族自治區(qū)教育廳科研課題資助項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)YB2014616）。

葉繪晟（1977-），男，漢，講師，研究方向：中藥學(xué)。

龔志強(qiáng)，講師，研究方向：中藥質(zhì)量控制。