淚道引流功能的動(dòng)物模型*

蘇文成，樊蓮蓮，黃　亞，錢　燦，張培雯，陳　宏，鄧峰美

1、德陽(yáng)市人民醫(yī)院(德陽(yáng)　618000)；2、成都醫(yī)學(xué)院 病理學(xué)與病理生理學(xué)教研室(成都　610500)

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淚道引流功能的動(dòng)物模型*

蘇文成1，樊蓮蓮1，黃亞1，錢燦1，張培雯1，陳宏1，鄧峰美2△

1、德陽(yáng)市人民醫(yī)院(德陽(yáng)618000)；2、成都醫(yī)學(xué)院 病理學(xué)與病理生理學(xué)教研室(成都610500)

目的利用不同種屬的動(dòng)物尋找和建立可能用于淚道功能研究的動(dòng)物模型。方法比較和分析貓和大鼠淚道系統(tǒng)的大體解剖結(jié)構(gòu)，并通過淚小管組織光鏡切片和電鏡切片觀察顯微解剖結(jié)構(gòu)，從大體解剖和微觀兩方面比較貓和大鼠淚道結(jié)構(gòu)的異同。結(jié)果貓和大鼠淚道大體解剖結(jié)構(gòu)與人十分相似，但淚道粘膜顯微結(jié)構(gòu)存在差異。結(jié)論貓和大鼠可作為研究淚道功能的動(dòng)物模型。

淚道引流功能；動(dòng)物模型；淚道結(jié)構(gòu)

正常的淚道引流系統(tǒng)是維持眼表功能正常的前提。淚道系統(tǒng)最重要要的功能之一就是引流淚液，關(guān)于淚道功能的研究目前還很少。關(guān)于淚液引流機(jī)制，目前得到認(rèn)同的有淚泵和虹吸機(jī)制[1-3]。但在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，患者在使用眼藥后即便閉上眼睛，數(shù)分鐘后咽喉部還是有苦味。因此，在閉眼狀態(tài)下，仍然存在液體在鼻淚道內(nèi)流動(dòng)的現(xiàn)象，而瞬目-淚泵-虹吸機(jī)制似乎不能解釋這一現(xiàn)象。因此，進(jìn)一步建立動(dòng)物模型來研究淚液引流十分重要。由于兔的淚道組織結(jié)構(gòu)與人十分相似，因此，關(guān)于淚道阻塞性疾病的研究主要以兔為模型[4-5]。但兔的淚道解剖結(jié)構(gòu)與人有很大區(qū)別，因此，兔損傷模型不適用于淚道引流功能及淚液流體動(dòng)力研究。本實(shí)驗(yàn)通過研究貓和大鼠淚道的大體及顯微結(jié)構(gòu)，力求建立一種適合于研究淚道功能且更加接近于人的解剖結(jié)構(gòu)的動(dòng)物模型。

1　材料與方法

1.1試劑

卡波姆940P(Lubrizol Advanced Materials Europe B.V.B.A，批號(hào)：0101616771)；吸入用七氟烷(250 ml/瓶)(上海恒瑞醫(yī)藥有限公司，批號(hào)14021931，國(guó)藥準(zhǔn)字H20070172)；鹽酸丙美卡因滴眼液(0.5%，2 mg/支)(南京瑞年百思特藥業(yè)有限公司，批號(hào)151125，國(guó)藥準(zhǔn)字H20103352)；熒光素鈉注射液(0.6 g/支)(廣西梧州制藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)160101，國(guó)藥準(zhǔn)字H45021477)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

大鼠20只(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供)，雌性，體質(zhì)量約0.2 kg。小貓10只，雌雄兼用，體質(zhì)量0.4～0.6 kg，市售。

1.3標(biāo)本采集與檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng)1 w，異氟烷吸入麻醉。麻醉成功后，顯微鏡下觀察眼瞼及淚小點(diǎn)開口等大體解剖結(jié)構(gòu)；分別從上、下淚小點(diǎn)插入沖洗針頭進(jìn)行淚道沖洗；觀察淚道結(jié)構(gòu)的傳統(tǒng)方法是淚道造影[6]。為觀察是否存在淚總管結(jié)構(gòu)，采用了一種新方法：在前期淚道沖洗的基礎(chǔ)上行淚道探子擴(kuò)張淚點(diǎn)及下淚小管，醫(yī)用淚道沖洗針頭將卡波姆凝膠自上淚小點(diǎn)注入淚道填充，記錄凝膠形成狀態(tài)。解剖實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，截取淚小管0.5～1.0 cm，用生理鹽水稍沖洗后以10%福爾馬林固定保存；最后將組織切片行光鏡和電鏡觀察。

2　結(jié)果

2.1淚道解剖

2.1.1大體解剖觀察貓的淚道有上、下2個(gè)淚小點(diǎn)分別開口于鼻側(cè)眥角的上、下瞼緣處，淚小點(diǎn)緊貼眼球；上、下淚小點(diǎn)連線與鼻中線平行；大鼠淚道大體結(jié)構(gòu)與貓類似。淚道沖洗：分別自上、下淚小點(diǎn)沖洗，貓和大鼠均可見鼻腔內(nèi)生理鹽水流出，說明淚管通暢且淚液均能引流入鼻腔。

2.1.2淚道凝膠填充凝膠自上淚小點(diǎn)注入后自下淚小點(diǎn)和鼻腔內(nèi)溢出(圖1和圖2)，所有納入實(shí)驗(yàn)的貓和大鼠均觀察到該現(xiàn)象，證明在貓和大鼠的淚道結(jié)構(gòu)中存在淚總管結(jié)構(gòu)。

圖1大鼠淚道凝膠填充圖

2.2淚道顯微結(jié)構(gòu)

2.2.1光鏡結(jié)果貓的淚道表面被覆復(fù)層柱狀上皮，極性規(guī)整，可見杯狀細(xì)胞，上皮下纖維結(jié)締組織排列緊密(圖3)。大鼠淚道被覆復(fù)層扁平上皮，細(xì)胞排列極向規(guī)整，上皮下纖維結(jié)締組織排列較疏松(圖4)。

圖2貓淚道凝膠填充圖

圖3貓淚道光鏡結(jié)構(gòu)(HE ×400)

圖4大鼠淚道光鏡結(jié)構(gòu)(HE ×400)

2.2.2電鏡結(jié)果貓和大鼠的正常淚道上皮細(xì)胞排列整齊、細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞表面有豐富的微絨毛，微絨毛密度均勻，且長(zhǎng)短一致，大量微絨毛凸向管腔。貓和大鼠淚道上皮細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)類似(圖5和圖6)。

圖5貓淚道粘膜表層上皮

圖6大鼠淚道粘膜表層上皮

3　討論

本研究結(jié)果表明，貓和大鼠的淚小點(diǎn)均開口于鼻側(cè)眥角的瞼緣處，有上、下淚小管、淚總管等結(jié)構(gòu)，與人淚道的解剖結(jié)構(gòu)相似。淚道組織光鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn)，貓的淚小管粘膜被覆的是柱狀上皮，大鼠為復(fù)層扁平上皮。兔的淚道粘膜上皮為柱狀上皮且富含杯狀細(xì)胞，與人的淚道粘膜結(jié)構(gòu)相似且有強(qiáng)大的吸收功能[7-9]，而復(fù)層上皮似乎并不具備吸收功能[10]。電鏡結(jié)果表明，貓和大鼠的淚道粘膜表層上皮均具有豐富的微絨毛，這與兔及人的淚道粘膜上皮結(jié)構(gòu)相似，從以上研究結(jié)果，我們不難發(fā)現(xiàn)貓和大鼠的淚道系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)與人有諸多相似之處，但顯微結(jié)構(gòu)又存在一定差異。

關(guān)于淚道系統(tǒng)疾病的研究主要集中在淚道阻塞再通、損傷狹窄等方面，幾乎都以兔作為動(dòng)物模型，據(jù)文獻(xiàn)[5]報(bào)道，以兔作為經(jīng)典淚道阻塞疾病模型的主要原因是兔淚道粘膜組織學(xué)結(jié)構(gòu)與人十分相似。文獻(xiàn)[11-13]報(bào)道，兔的解剖結(jié)構(gòu)與人不同，兔只有一個(gè)淚小點(diǎn)，且開口于鼻側(cè)眥角的近穹隆部結(jié)膜上，口徑寬大；淚小管為一個(gè)直徑寬、長(zhǎng)度短的小管，與淚囊相連。這種結(jié)構(gòu)使得淚液完全可以借助重力因素形成引流；因此兔淚道系統(tǒng)可能根本不存在類似淚泵、淚小管虹吸等功能。人的淚道之所以存在淚泵、淚小管虹吸等淚液引流機(jī)制，是因?yàn)槠渚邆溆锌糁芗∪饧皽I道系統(tǒng)等特殊解剖結(jié)構(gòu)[14]。

本研究顯示，貓和大鼠有著和人極其相似的大體解剖結(jié)構(gòu)，我們推測(cè)貓和大鼠也具備了某些人類淚液引流動(dòng)力學(xué)特征，除了大體解剖外，發(fā)現(xiàn)貓、大鼠、人[15]和家兔[7]的淚道上皮均存在豐富的微絨毛，不同之處：大鼠粘膜上皮為復(fù)層扁平上皮，而人、兔和貓均為柱狀上皮。在淚液動(dòng)力學(xué)研究中，發(fā)現(xiàn)兔淚道粘膜結(jié)構(gòu)和人相似，這種高柱狀上皮和豐富的杯狀細(xì)胞對(duì)淚液有著很好的吸收功能[1]，而復(fù)層柱狀上皮并不具有這種吸收功能。貓、大鼠與人的淚道粘膜的差異提示，貓和大鼠的淚道粘膜上皮微絨毛可能參與了淚液引流。

綜上所述，貓和大鼠的解剖結(jié)構(gòu)與人的淚道解剖結(jié)構(gòu)相似，可作為研究淚道功能的動(dòng)物。

[1]Zhang C, Wu Q, Cui Y,etal. Anatomy of nasolacrimal canal in congenital nasolacrimal duct obstruction - 18 cases retrospective study[J]. Acta Ophthalmol, 2015, 93(5):404-405.

[2]Estes JL,Tsiouris AJ,Christos PJ,etal.Three-Dimensional Volumetric Assessment of the Nasolacrimal Duct in Patients With Obstruction[J]. Ophthalmic Plastic and Reconstructive Surgery, 2015, 31(3):211-214.

[3]Imre A,Imre SS,Pinar E,etal.Transection of Nasolacrimal Duct in Endoscopic Medial Maxillectomy: Implication on Epiphora[J]. J Craniofac Surg, 2015, 26(7):616-619.

[4]李青松, 張興儒, 沈江帆, 等. 不同濃度99mTcO4-兔眼淚道顯像及對(duì)球結(jié)膜損傷的安全性研究[J]. 眼科研究, 2007, 25(8):573-574.

[5]Paulsen FP, F?ge M, Thale AB,etal. Animal model for the absorption of lipophilic substances from tear fluid by the epithelium of the nasolacrimal ducts[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2002, 43(10):3137-3143.

[6]朱艷清, 朱海云, 張福琛. 淚道的影像學(xué)檢查進(jìn)展[J]. 東南國(guó)防醫(yī)藥, 2010, 12(1):48-51.

[7]彭云, 葉琳, 張敬先, 等. 兔鼻淚道置管術(shù)后的病理研究[J]. 國(guó)際眼科雜志, 2014, 14(6):1013-1015.

[8]Nguyen CL, Verhoekx J, Forer M,etal. Adult nasolacrimal duct cyst causing epiphora[J]. Clin Experiment Ophthalmol, 2015, 43(7):684-685.

[9]Lee JK,Kim TH. Changes in cytokines in tears after endoscopic endonasal dacryocysto-rhinostomy for primary acquired nasolacrimal duct obstruction[J]. Eyel (Lond), 2014,28(5):600-607.

[10] Yam JC, Deitz LW, Wright KW. Bilateral canalicular and nasolacrimal duct obstruction in congenital erosive and vesicular dermatosis: a case report and review of the literature[J]. J AAPOS, 2014, 18(1):88-90.

[11] Xu J, Hong J, Sun X,etal. Combined Lacrimal Passage Probing and Tobramycin/Dexamethasone Ophthalmic Ointment Infiltration: A Minimally Invasive Surgical Procedure for Incomplete Nasolacrimal Duct Obstruction[J]. Medicine (Baltimore), 2015, 94(36):1483.

[12] Mataftsi A, Malamaki P, Tsinopoulos IT,etal. Fifteen-minute consultation: congenital nasolacrimal duct obstruction[J]. Arch Dis Child Educ Pract Ed, 2014, 99(2):42-47.

[13] Kantaputra PN, Kaewgahya M, Wiwatwongwana A,etal. Cutis laxa with pulmonary emphysema, conjunctivochalasis, nasolacrimal duct obstruction, abnormal hair, and a novel FBLN5 mutation[J]. Am J Med Genet A, 2014, 164(9):2370-2377.

[14] Eshraghi B, Masoomian B, Izadi A,etal. Conjunctival bacterial flora in nasolacrimal duct obstruction and its changes after successful dacryocystorhinostomy surgery[J]. Ophthal Plast Reconstr Surg, 2014, 30(1):44-46.

[15] Schnall BM. Pediatric nasolacrimal duct obstruction[J]. Curr Opin Ophthalmol, 2013, 24(5):421-424.

Animal Models for the Drainage Function of Lacrimal System

SuWencheng1,FanLianlian1,HuangYa1,QianCan1,ZhangPeiwen1,ChenHong1,DengFengmei2△.

1．People′sHospitalofDeyang,Deyang618000,China; 2.DepartmentofPathologyandPathophysiology,ChengduMedicalCollege,Chengdu610500,China

ObjectiveTo establish the animal model for the lacrimal drainage function in different animal species. MethodsThe gross anatomy structure and microanatomy structure of nasolacrimal systems in cats and rats were investigated and compared by light microscope and electron microscope to find out the structural differences of the lacrimal drainage system between cats and rats from the perspectives of the gross structure and the microstructure respectively. ResultsThe lacrimal drainage system of cats and rats and that of human beings are similar in the gross anatomy structure but different in the microanatomy structure. ConclusionCats and rats can be used as the animal models for studying the drainage function of the lacrimal system.

Drainage function of lacrimal system; Animal model ; Structure of lacrimal system

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.04.006

四川大學(xué)德陽(yáng)校市科技合作專項(xiàng)資金(No：HZYF 201406)

鄧峰美，E-mail：dengfm2004@163.com

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網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20160613.1052.014.html