患兒痰培養(yǎng)病原菌分布與耐藥性分析

龐寶華, 張　凡, 段　偉,韓繼明, 趙菊梅, 田紅英

(1.延安大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 陜西 延安　716000;2.延安大學(xué) 醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院, 陜西 延安　716000)

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患兒痰培養(yǎng)病原菌分布與耐藥性分析

龐寶華1, 張凡1, 段偉2,韓繼明1, 趙菊梅1, 田紅英1

(1.延安大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 陜西 延安716000;2.延安大學(xué) 醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院, 陜西 延安716000)

通過對某醫(yī)院兒科送檢的痰標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定及藥敏試驗,分析患兒下呼吸道感染中細(xì)菌種類,細(xì)菌分布以及不同菌株的耐藥特點和耐藥趨勢。收集某醫(yī)院兒科2014年12月到2015年3月下呼吸道感染患兒的痰培養(yǎng)陽性標(biāo)本,共分離出細(xì)菌121株。引起患兒下呼吸道感染的致病菌主要以革蘭氏陰性桿菌為主,居于前五位的依次為流感嗜血桿菌(27.3%)、大腸埃希菌(22.3%)、肺炎鏈球菌(19.8%)、肺炎克雷伯菌(7.4%)以及副流感嗜血桿菌(6.6%)。肺炎鏈球菌對青霉素、萬古霉素、利奈唑胺具有較好的敏感性;嗜血桿菌屬細(xì)菌對頭孢曲松、左氧氟沙星及美羅培南表現(xiàn)出較好的敏感性;而腸桿菌科細(xì)菌對哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦及碳青霉烯類藥物有極好的敏感性。臨床醫(yī)師應(yīng)重視病原菌的檢測與藥敏試驗,合理選用抗生素,減少耐藥菌株的產(chǎn)生,提高療效。

痰培養(yǎng); 細(xì)菌分布; 耐藥性

呼吸道感染是小兒時期的常見病,多發(fā)病,特別是下呼吸道感染是小兒死亡的主要病因。因此,了解引起小兒下呼吸道感染的主要病原菌種類和分布及其病原菌的對各種抗生素的耐藥特點顯得尤為重要。本研究收集某醫(yī)院兒科2014年12月到2015年3月期間患兒痰細(xì)菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本,分析其細(xì)菌的分布情況及主要細(xì)菌的耐藥情況,旨在指導(dǎo)臨床合理使用抗生素,避免濫用抗生素及經(jīng)驗用藥,減少耐藥菌株的發(fā)生,取得最合理的社會經(jīng)濟(jì)效益比,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1　資料與方法

1.1資料來源

來源于某醫(yī)院兒科2014年12月到2015年3月門診及住院的下呼吸道感染患兒痰培養(yǎng)標(biāo)本中分離出的致病細(xì)菌121株,排除了同一患兒的重復(fù)菌株。所有患兒均按照《實用兒科學(xué)》中小兒下呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確診。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集每位患兒入院后立即做痰細(xì)菌培養(yǎng)?；純喝“肱P體位,采用一次性誘導(dǎo)采痰器對患兒進(jìn)行引導(dǎo)流痰,吸取痰液1～2mL,注入無菌試管,及時送檢。

1.2.2標(biāo)本處理將痰標(biāo)本液化混勻后,分別接種在哥倫比亞血平板、巧克力瓊脂平板培養(yǎng)基上,并放入CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),24h之后觀察細(xì)菌生長情況并采用法國VITEK2 COMPACT全自動微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行病原菌鑒定。相關(guān)病原菌使用美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會1993年2月制定的紙片擴散法K-B法(部分藥敏試驗采用E-TEST藥敏試紙條)做藥敏實驗,不同的致病菌采用不同的藥敏環(huán)境和氣體環(huán)境,用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑(mm),依據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥敏結(jié)果判讀。質(zhì)控菌株為:金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、糞腸球菌ATCC29212或33186、銅綠假單胞菌ATCC27853，均由衛(wèi)生部臨床檢驗中心提供。

1.2.3數(shù)據(jù)處理采用世界衛(wèi)生組織細(xì)菌耐藥性檢測中心推薦的Whonet5.6軟件系統(tǒng)對結(jié)果進(jìn)行分析處理。

2　結(jié)　果

2.1患兒細(xì)菌菌株分布情況

送檢標(biāo)本中,總共培養(yǎng)分離出細(xì)菌為121株,前3位依次為:流感嗜血桿菌共33株,占27.3%;大腸埃希菌共27株,占22.3%;肺炎鏈球菌共24株,占19.8%。其他見表1。

表1患兒痰培養(yǎng)細(xì)菌菌株分布情況

Tab.1Bacterial strain distribution of sputum culture in children with lower respiratory infections

菌株株數(shù)構(gòu)成比/%流感嗜血桿菌3327.3大腸埃希菌2722.3肺炎鏈球菌2419.8肺炎克雷伯菌97.4副流感嗜血桿菌86.6金黃色葡萄球菌65.0陰溝腸桿菌43.3鮑曼不動桿菌43.3其他65.0合計121100.0

2.2藥敏試驗結(jié)果

2.2.1嗜血桿菌屬細(xì)菌耐藥情況流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌均從高到低依次對復(fù)方新諾明、氨芐西林、頭孢克洛、氨芐西林/舒巴坦、頭孢呋新,阿奇霉素表現(xiàn)出耐藥性。流感嗜血桿菌對第三代頭孢的耐藥率為0,而副流感嗜血桿菌對其出現(xiàn)一定程度的耐藥,耐藥率為14.3%,兩種細(xì)菌對左氧氟沙星和美羅培南耐藥率為0,結(jié)果見表2。

2.2.2腸桿菌科細(xì)菌耐藥情況大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌均對氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢肶肟、頭孢呋辛、頭孢噻肟、頭孢他啶、復(fù)方新諾明出現(xiàn)不同程度的耐藥,對于頭孢哌酮/舒巴坦、大腸埃希菌的耐藥率為0,而肺炎克雷伯菌的耐藥率為11.1%。對于阿米卡星、頭孢西丁、左氧氟沙星而言,大腸埃希菌出現(xiàn)不同程度的耐藥。但是，肺炎克雷伯菌對其耐藥率均為0。兩種細(xì)菌均對哌拉西林/他唑巴坦,亞胺培南,美羅培南表現(xiàn)出較好的敏感性。腸桿菌科細(xì)菌中,27株大腸埃希菌中21株為產(chǎn)ESBLs菌株,6株為非產(chǎn)ESBLs菌株,9株肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs菌株為5株,非產(chǎn)ESBLs菌株4株,肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs菌株對于青霉素類,一、二、三、四代頭孢菌素表現(xiàn)出較高的耐藥性,而非酶細(xì)菌對除了復(fù)方新諾明以外的藥物均表現(xiàn)出較好的敏感性。大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株與非產(chǎn)ESBLs菌株耐藥率只是表現(xiàn)在個別藥物如阿米卡星,頭孢噻肟,頭孢西丁上存在差異,結(jié)果見表3、表4。

表2流感嗜血桿菌與副流感嗜血桿菌的耐藥情況

Tab.2Drug resistance ofHaemophilusinfluenzaandHemophilusparainfluenzae/%

藥物流感嗜血桿菌副流感嗜血桿菌氨芐西林51.542.9復(fù)方新諾明81.871.4頭孢呋辛24.228.6頭孢曲松0.014.3氨芐西林/舒巴坦24.228.6左氧氟沙星0.00.0頭孢克洛42.442.9阿奇霉素6.114.3美羅培南0.00.0

表3大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌的耐藥情況

Tab.3Drug resistance ofEscherichiacoliandKlebsiellapneumoniae/%

藥物大腸埃希菌肺炎克雷伯菌氨芐西林87.488.9頭孢唑啉85.055.6哌拉西林/他唑巴坦0.00.0頭孢哌酮/舒巴坦0.011.1阿米卡星11.10.0頭孢肶肟63.033.3頭孢呋辛81.455.6頭孢噻肟70.444.4頭孢他啶40.744.4復(fù)方新諾明92.633.3頭孢西丁3.70.0左氧氟沙星33.30.0亞胺培南0.00.0美羅培南0.00.0

表4大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌的產(chǎn)ELBLs菌株與非產(chǎn)ESBLs耐藥比較

Tab.4Comparison of drug resistance of ELBLs producing strains and non producing ESBLs inEscherichiacoliandKlebsiellapneumonia%

藥 物 大腸埃希菌 肺炎克雷伯菌 產(chǎn)ESBLs菌株非產(chǎn)ESBLs菌株產(chǎn)ESBLs菌株非產(chǎn)ESBLs菌株氨芐西林1001001000頭孢唑啉10042.91000哌拉西林/他唑巴坦0000頭孢哌酮/舒巴坦00200阿米卡星042.900頭孢肶肟6557.1400頭孢呋辛10028.61000頭孢噻肟950800頭孢他啶4528.6800復(fù)方新諾明901006075頭孢西丁014.300左氧氟沙星3528.600亞胺培南0000美羅培南0000

2.2.3肺炎鏈球菌耐藥情況肺炎鏈球菌對紅霉素,克林霉素,四環(huán)素,左氧氟沙星,復(fù)方新諾明出現(xiàn)不同程度耐藥率,而對青霉素、萬古霉素和利奈唑胺的耐藥率為0。

表5　肺炎鏈球菌的耐藥情況

3　討　論

下呼吸道感染是嬰幼兒時期的常見疾病,這與嬰幼兒呼吸系統(tǒng)的解剖結(jié)構(gòu)特點及免疫功能不完善有關(guān)系。下呼吸道感染嚴(yán)重威脅兒童的健康,是嬰兒死亡的主要原因[1]。已有研究表明引起小兒下呼吸道感染的病原菌主要是細(xì)菌[2],本研究主要培養(yǎng)分離患兒痰液中的細(xì)菌,了解本地區(qū)小兒下呼吸道感染細(xì)菌種類、分布及耐藥情況,為臨床合理使用抗生素、減少耐藥菌發(fā)生、制定合理的用藥方案提供參考。

本研究結(jié)果顯示,送檢的患兒痰液共培養(yǎng)檢出細(xì)菌121株,主要為流感嗜血桿菌、大腸埃希菌、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌及副流感嗜血桿菌,分別占27.3%,22.3%,19.8%,7.4%,5.8%。致病菌主要以革蘭氏陰性桿菌為主,這與已有的相關(guān)研究結(jié)果[2-3]一致,但與王巧燕等[4]報道的不同,可能存在地區(qū)差異。

藥敏實驗結(jié)果表明,嗜血桿菌屬細(xì)菌對第三代頭孢菌素、左氧氟沙星、美羅培南的敏感性較高,其次是阿奇霉素,其對復(fù)方新諾明、氨芐西林的耐藥率較高。近幾年嗜血桿菌屬細(xì)菌由于產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶及青霉素結(jié)合位點變異菌株的不斷出現(xiàn),對于氨基青霉素的耐藥率逐年上升[5]。左氧氟沙星影響兒童軟骨發(fā)育,臨床上18歲以下孩子禁用,導(dǎo)致耐藥率非常低。臨床上應(yīng)當(dāng)依據(jù)藥敏結(jié)果及抗生素自身特點選用合適的藥物。

分離出的大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌由于產(chǎn)ESBL酶的菌株比例逐漸增高,對青霉素類、頭孢菌素類藥物耐藥程度較高,但對酶抑制劑類藥物哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦以及碳青霉烯類藥物敏感性較好,這與茹官璞[6]研究結(jié)果類似。臨床使用抗生素時對于嚴(yán)重小兒下呼吸道感染可優(yōu)先選用上述藥物進(jìn)行治療。另外,肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs的菌株與非產(chǎn)ESBLs的菌株在耐藥上存在很大差別,其中產(chǎn)ESBLs的菌株對大多數(shù)臨床常用的抗生素出現(xiàn)耐藥,而非產(chǎn)ESBLs菌株僅對復(fù)方新諾明出現(xiàn)耐藥,對大多數(shù)藥物敏感,在臨床用藥中應(yīng)該特別注意。

本研究發(fā)現(xiàn)肺炎鏈球菌對青霉素耐藥率為0,這可能與青霉素長時間退出臨床一線,而使致病菌對其又敏感了,根據(jù)研究結(jié)果可認(rèn)為青霉素仍可作為肺炎鏈球菌感染的首選藥物,也說明一種抗生素臨床廣泛使用出現(xiàn)大范圍的耐藥后,停用若干年,可能會出現(xiàn)致病菌對其又敏感的現(xiàn)象。肺炎鏈球菌對利奈唑胺、萬古霉素、左氧氟沙星耐藥率較低,這與已有的研究結(jié)果[4，7]類似,考慮利奈唑胺的價格、萬古霉素毒副作用及避免耐藥菌株出現(xiàn),可作為最后選用藥物。

總之,引起小兒呼吸道感染,尤其是下呼吸道感染的病原菌種類較多,而且還存在地區(qū)差異。臨床醫(yī)師應(yīng)通過各種途徑了解近幾年引起小兒呼吸道感染主要病原菌種類、分布及各種病原菌的耐藥情況,指導(dǎo)其臨床用藥,在一定程度上可及時有效控制或緩解患兒病情,另外,臨床醫(yī)師還應(yīng)重視病原菌的檢測與藥敏試驗,合理選用抗生素,減少耐藥菌株的產(chǎn)生,提高療效。

[1]李霞,杜忠東,周仲蜀，等.2003—2009年北京市部分醫(yī)院住院兒童疾病譜及病死原因演變[J].中國實用兒科雜志,2013,28(7):537-539.

[2]朱艷娜,陳頻,陳鳳英.小兒下呼吸道感染病原菌分布及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014,24(2):477-479.

[3]于春冬,王亞秋,楊麗，等. 小兒下呼吸道感染的病原菌分布及其耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014,24(19):4879-4881.

[4]王巧燕,孫正林,朱振坤，等.小兒下呼吸道感染病原菌分布及耐藥性分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2015,25(3):438-440+443.

[5]DIZBAY M,TUNCCAN O G,SEZER B E,et al. Nosocomial imipenem-resistant Acinetobacter baumannii infections:epidemiology and riskfactors[J].Scand J Infect Dis,2010,42(10): 741-746.

[6]茹官璞,李燕燕,王琪，等. 商州地區(qū)5歲以下小兒下呼吸道感染 1200 例病原學(xué)檢測分析[J].中國兒童保健雜志,2013,21(7):766-768.

[7]貝文政.小兒下呼吸道感染的肺炎鏈球菌耐藥性研究[J].中國婦幼保健,2013,28(19):3216-3218.

(編輯徐象平)

Analysis of the distribution and the drug resistance of pathogenic bacteria in the sputum culture of children with lower respiratory infections

PANG Bao-hua1, ZHANG Fan1, DUAN Wei2, HAN Ji-ming1,ZHAO Ju-mei1, TIAN Hong-ying1

(1.Medical College of Yan′an University, Yan′an 716000, China 2.Medical School Affiliated Hospital, Yan′an University, Yan′an 716000, China)

Through culturing and identifying of bacteria in the sputum specimens of pediatric department in a hospital, to analysis the kinds of bacteria and bacterial distribution in lower respiratory tract infection of children. Then through drug sensitivity test of bacteria, to analysis drug resistance characteristics and drug resistance tendency of bacteria.To collect positive specimens in sputum culture of lower respiratory tract infection of children in pediatrics department of a hospital from December, 2014 to March, 2015. A total of 121 strains of bacteria were isolated. Gram negative bacilli was the main pathogenic bacteria in children with lower respiratory tract infection, which is ranked in the top five followed by Haemophilus influenzae (27.3%), Escherichia coli (22.3%), Streptococcus pneumoniae (19.8%), Klebsiella pneumonia (7.4%) and Hemophilus parainfluenzae (6.6%). Streptococcus pneumoniae has better sensitivity to penicillin, vancomycin, linezolid; Haemophilus genus bacteria showed a good sensitivity to ceftriaxone, levofloxacin and meropenem, and Enterobacteriaceae has excellent sensitivity to piperacillin piperacillin/tazobactam and Cefoperazone/sulbactam and carbapenems drugs. Clinicians should pay attention to the detection of pathogenic bacteria and drug sensitivity test, to achive rational use of antibiotics, to reduce the production of drug resistant strains, and improve curative effect.

sputum culture; bacteria distribution; drug resistance

2015-01-09

國家自然科學(xué)基金資助項目(81470140);陜西省教育廳專項科研計劃基金資助項目(15JK1826)

龐寶華,女,陜西長安人，從事臨床流行病學(xué)研究。

R917

A

10.16152/j.cnki.xdxbzr.2016-04-016