高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法在血清同型半胱氨酸含量檢測中的應(yīng)用*

楊元好肖靜蔣藝勤吳永國唐娟

高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法在血清同型半胱氨酸含量檢測中的應(yīng)用*

楊元好①肖靜①蔣藝勤①吳永國①唐娟①

目的：比較高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法對血清同型半胱氨酸含量測定效果。方法：選取2013年12月-2015年9月于本院健康體檢的體檢者120例作為研究對象，將其分為高效液相色譜法組和L-蛋氨酸γ-裂解酶法組，每組60例。比較兩組變異系數(shù)、回收率及準確度。結(jié)果：兩組不同濃度批內(nèi)和日間變異系數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；兩組不同濃度回收率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；兩組檢測同型半胱氨酸含量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），L-蛋氨酸γ-裂解酶法組檢測準確率為99.24%，高于高效液相色譜法組的89.63%，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：在同型半胱氨酸含量的測定中，兩組檢測穩(wěn)定性無明顯差異，相對高效液相色譜法而言，L-蛋氨酸γ-裂解酶法檢測準確率較高。在臨床檢驗中，可以根據(jù)檢測工作需求選擇合適的檢測方法。

高效液相色譜法； L-蛋氨酸γ-裂解酶法； 同型半胱氨酸

同型半胱氨酸是一種含硫氨基酸，其在血液中的含量過高會產(chǎn)生同型半胱氨酸癥，同時同型半胱氨酸的濃度增加，與心腦血管疾病的發(fā)病有著密切的關(guān)系，可以說同型半胱氨酸濃度已經(jīng)成為腦卒中、冠心病等心腦血管疾病發(fā)病的危險因素[1]。所以在臨床治療中，對同型半胱氨酸進行檢測，可以有效的對患者病情進行判斷，進而為患者實施有效的治療，降低死亡率的發(fā)生[2]。當前在同型半胱氨酸的檢測中，不同的檢測方法，檢測的結(jié)果存在著差異性，影響著檢測結(jié)果的準確性[3]。L-蛋氨酸γ-裂解酶法，在同型半胱氨酸的檢測中有較高的檢測效果，高效液相色譜法也是同型半胱氨酸檢測中使用的檢測方法。為了研究兩種檢測方法，在同型半胱氨酸的檢測中的測定準確性，本文針對高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法對血清中同型半胱氨酸含量的測定效果進行分析研究，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2013年12月-2015年9月于本院健康體檢的體檢者120例作為研究對象，將其平均分為高效液相色譜法組和L-蛋氨酸γ-裂解酶法組，每組60例。高效液相色譜法組中男36例，女24例；年齡45～76歲，平均（57.4±2.3）歲。L-蛋氨酸γ-裂解酶法組男35例，女25例；年齡44～78歲，平均（57.5±2.4）歲。兩組性別和年齡等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2方法 首先，分別抽取兩組研究對象空腹靜脈血，經(jīng)抗凝分離處理后，低溫保存血清待檢；其次，提取其中的同型半胱氨酸，形成不同濃度的同型半胱氨酸標本；最后，將其稀釋成不同的濃度，分別使用高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法對血清中同型半胱氨酸含量進行測定。同型半胱氨酸的濃度分別為1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L。高效液相色譜法檢測儀器包括AU2700全自動生化分析儀器、510液相色譜儀、HCU色譜分析柱等，對測定樣品進行預(yù)處理，然后加入相關(guān)試劑進行檢測。L-蛋氨酸γ-裂解酶法：在3（γ-羧乙基）膦氯化氫作用下，血清中胱氨酸、蛋白結(jié)合型和混合型同型半胱氨酸轉(zhuǎn)化成游離型的同型半胱氨酸，加入的L-蛋氨酸γ-裂解酶在PLP輔助下，將游離的同型半胱氨酸分解出α-丁酮酸、氨和硫化氫。硫化氫和熒光化合物N，N-雙甲基- p -亞苯二胺雙鹽酸（DMPD·2HCl）在Fe3+和酸性條件下反應(yīng)形成最高吸光率在670 nm處的藍色產(chǎn)物亞甲藍，在全自動生化分析儀上通過定量測定亞甲藍在670 nm處的吸光率來計算血清總同型半胱氨酸的含量。

1.3評價指標 （1）精度檢驗：取待檢10.0 μmol/L為低濃度、40.0 μmol/L為高濃度的同型半胱氨酸標準液各一份，進行上、下午的雙測定，并連續(xù)測定20 d；（2）回收實驗：將10.0、40.0 μmol/L同型半胱氨酸采用高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法測定回收率；（3）含量檢測：對各個濃度的同型半胱氨酸的含量進行測定，加入相應(yīng)的試劑進行檢測，確定檢測的準確度，所有檢測結(jié)果均取平均值。

1.4統(tǒng)計學處理 使用SPSS 18.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，計量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用x2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1兩種檢測方法變異系數(shù)比較 兩組不同濃度批內(nèi)和日間變異系數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

表1　兩種檢測方法變異系數(shù)比較 %

2.2兩種檢測方法回收率比較 兩組不同濃度回收率比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表2。

表2　兩種檢測方法回收率比較 %

2.3兩種檢測方法準確率比較 L-蛋氨酸γ-裂解酶法組檢測準確率為99.24%，高于高效液相色譜法組的89.63%，比較差異有統(tǒng)計學意義（x2=3.564，P=0.015）。

2.4兩種檢測方法不同濃度同型半胱氨酸含量的測定結(jié)果比較 兩組檢測同型半胱氨酸含量比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表3。

3　討論

隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提升，各種心腦血管疾病的發(fā)病率不斷提高，嚴重威脅著人們的身體健康和生命安全。當前在臨床治療中，發(fā)病率較高的心腦血管疾病有高血壓、冠心病、腦卒中、腦梗死等[4]。造成心腦血管疾病發(fā)病的因素有很多，隨著臨床醫(yī)學的研究，除了可以控制的危險因素，如飲酒、吸煙、糖代謝異常等因素外，還有一些通過藥物治療可以改善的危險因素。同型半胱氨酸是蛋氨酸代謝過程中的一個中間產(chǎn)物，其與各種心腦血管疾病的發(fā)病有著密切的關(guān)系[5-8]。同型半胱氨酸濃度增加，會產(chǎn)生同型半胱氨酸血癥，而重度同型半胱氨酸血癥會誘發(fā)動脈粥樣硬化、靜脈栓塞等，為此在心血管疾病發(fā)病因素的研究中，人們開始關(guān)注同型半胱氨酸。在臨床治療中，同型半胱氨酸在心腦血管疾病的診斷中起著關(guān)鍵性作用，同型半胱氨酸是一種含硫氨基酸，屬于人體內(nèi)的一種內(nèi)源性物質(zhì)，在大多數(shù)的情況下以與白蛋白結(jié)合物的形式出現(xiàn)[9-12]。同型半胱氨酸有較強的親水性和極性，其對紫外線的吸收較弱，可以通過轉(zhuǎn)硫通路而產(chǎn)生半胱氨酸[13]。在人體中同型半胱氨酸的代謝工作受阻，同型半胱氨酸會在患者的體內(nèi)產(chǎn)生積聚，并進入血液循環(huán)中，影響患者血液的正常循環(huán)，進而造成各種心腦血管疾病的發(fā)展[14-16]。

表3　兩種檢測方法不同濃度同型半胱氨酸含量的測定結(jié)果比較（±s） μ mol/L

表3　兩種檢測方法不同濃度同型半胱氨酸含量的測定結(jié)果比較（±s） μ mol/L

組別　1.0 μmol/L　2.0 μmol/L　5.0 μmol/L　10.0 μmol/L　20.0 μmol/L　40.0 μmol/L高效液相色譜法組（n=60）　0.87±0.06　1.88±0.11　4.79±0.16　9.84±0.15　19.43±0.23　38.98±0.16 L-蛋氨酸γ-裂解酶法組（n=60）　0.89±0.07　1.92±0.05　4.82±0.13　9.77±0.21　19.67±0.26　38.97±0.15 t值　1.6803　1.5642　1.1272　1.1011　1.5783　0.3532 P值　0.0955　0.1674　0.2619　0.5347　0.1534　0.7246

在對同型半胱氨酸進行檢測的過程中，不同的檢測方法有不同的檢測結(jié)果和檢測準確率，高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法是當前同型半胱氨酸含量檢測中常用的兩種檢測方法，這兩種檢測方法的檢測結(jié)果有一定的差異性，但是其檢測結(jié)果的準確率均相對較高[17-20]。為此本文針對高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法對血清中同型半胱氨酸含量的測定效果進行了對比研究。本研究結(jié)果顯示：高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法在同型半胱氨酸含量的測定中，變異系數(shù)、回收率、同型半胱氨酸的含量比較差異均無統(tǒng)計學統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法的檢測準確性均較好，但是L-蛋氨酸γ-裂解酶法測定同型半胱氨酸含量的檢測準確率相對較高（P<0.05），因此，在實際檢測應(yīng)用中可根據(jù)檢測需求和相關(guān)條件合理選擇檢測方法。

綜上所述，高效液相色譜法與L-蛋氨酸γ-裂解酶法的在血清同型半胱氨酸含量測定中具有一定的可行性，且測定的操作相對簡單，但是L-蛋氨酸γ-裂解酶法的測定結(jié)果準確性較高效液相色譜法高，在實際的測定中可以根據(jù)實際需求，選擇合適的測定方法進行測定，為患者的病情診斷提供有效的臨床診斷依據(jù)。

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Application of High Performance Liquid Chromatography（HPLC） and L-methionine γ Cracking Enzymatic Methods on the Detection of Serum Homocysteine Levels

Y ANG Y uan-hao，XIAO J ing，J IANG Yi-qin，et al.

Medical Innovation of China，2016，13（24）：050-053

Objective：To compare the effect of high performance liquid chromatography（HPLC） and L-methionine γ cracking enzymatic methods on the detection of serum homocysteine levels.Method：From December 2013 to September 2015，120 cases of physical examination in our hospital were selected as the research objects，they were divided into the HPLC group and L-methionine γ cracking enzymatic group，each group had 60 cases.The variation coefficient，recovery rate and accuracy of two groups were compared. Result：There were no significant differences of two groups in the different concentration of the intra and inter day variation coefficient（P>0.05）.There was no significant difference in the recovery rate of two groups（P>0.05）. There was no significant difference of two groups in the detection of homocysteine levels（P>0.05），the detection accuracy of L-methionine γ cracking enzymatic group was 99.24%，higher than 89.63% of the HPLC group，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：In the detection of homocysteine levels，there was no obvious difference of two groups in detection stability，the detection accuracy of L-methionine γ cracking enzymatic method is higher in the relative high performance liquid chromatography.In the clinical test，according to the detection of the need to choose the appropriate detection method.

High performance liquid chromatography； L-methionine γ cracking enzymatic method； Homocysteine

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.24.013

2016-05-14） （本文編輯：李穎）

2009年深圳市科技計劃項目（200903191）

①廣東省深圳市寶安區(qū)松崗人民醫(yī)院 廣東 深圳 518105

楊元好

First-author’s address：Baoan District Songgang People’s Hospital of Shenzhen City，Shenzhen 518105，China