正交試驗法優(yōu)選強(qiáng)力五虎合劑的水提取工藝

田杰，王艷平，寧娛，王仲艷，徐競

(寧夏自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，寧夏 銀川 750021)

·中藥工業(yè)·

正交試驗法優(yōu)選強(qiáng)力五虎合劑的水提取工藝

田杰，王艷平*，寧娛，王仲艷，徐競

(寧夏自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，寧夏 銀川 750021)

目的：優(yōu)選強(qiáng)力五虎合劑水提取工藝。方法：以苦杏仁苷和鹽酸麻黃堿含量及總浸膏得率為主要考察指標(biāo)，采用L9(34)正交試驗法考察加水量、提取次數(shù)、提取時間對水提取工藝的影響，選擇最佳提取工藝。結(jié)果：最佳提取工藝為加8倍水量，煎煮3次，每次1 h。結(jié)論：優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行，有效成分提取率最高，重現(xiàn)性好，可為強(qiáng)力五虎合劑規(guī)范化生產(chǎn)提供參考。

強(qiáng)力五虎合劑；提取工藝；正交試驗

強(qiáng)力五虎合劑[1]由麻黃、苦杏仁、黃芩、僵蠶等組方，具有清熱化痰、止咳平喘的功能，適用于小兒支氣管炎、支氣管肺炎等。該方是寧夏自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院臨床應(yīng)用多年的處方，2000年取得院內(nèi)制劑批號，療效確切。為進(jìn)一步提高制劑工藝，本研究采用正交試驗法[2-3]，以君藥麻黃中的鹽酸麻黃堿，臣藥苦杏仁中的苦杏仁苷含量為指標(biāo)，結(jié)合浸膏得率進(jìn)行綜合分析，以優(yōu)選其最佳提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1.2 試藥

對照品苦杏仁苷、鹽酸麻黃堿(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110820-201305，171241-201007)；蜜麻黃、苦杏仁、黃芩等中藥材均購自寧夏明德中藥飲片有限公司；甲醇、乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 總浸膏得率的測定

按處方比例稱取適量藥材，加水提取，提取液濃縮成流浸膏，移置經(jīng)110 ℃干燥3 h至很重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，取出，移置干燥器中，冷卻至室溫，迅速精密稱定，計算浸膏得率。

2.2 鹽酸麻黃堿的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：WondaSil C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸水(5∶95)；檢測波長：207 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)以鹽酸麻黃堿計不低于5000。色譜圖見圖1。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為4 μg·mL-1的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密吸取供試液1 mL，加濃氨水0.5 mL(pH值約為10)，振搖，加入三氯甲烷定容至50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，稱定質(zhì)量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量。振搖，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25 mL，加鹽酸乙醇(1→20)溶液4 mL(PH值呈酸性)，置水浴鍋上蒸干，殘渣加0.1 mol·L-1的鹽酸溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，定容至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

3）業(yè)務(wù)應(yīng)用逐步融合?；诖髷?shù)據(jù)的協(xié)同性、開放性和整合性的特點，建立校園數(shù)據(jù)中心，整合不同業(yè)務(wù)系統(tǒng)和提升數(shù)據(jù)流轉(zhuǎn)效率，構(gòu)建數(shù)據(jù)建設(shè)體系，對結(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)和非結(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)進(jìn)行收集、清洗、加工、整合、應(yīng)用，進(jìn)而實現(xiàn)數(shù)據(jù)的資產(chǎn)價值，整合不同業(yè)務(wù)系統(tǒng)，提供高效、便捷的信息化服務(wù)門戶。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例配置除麻黃以外其余藥味的陰性樣品，照上述供試品溶液的制備方法，制備陰性對照溶液。

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液(4 μg·mL-1)2、4、6、8、10、12 μL，按2.2.1項下色譜條件進(jìn)行測定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，鹽酸麻黃堿的回歸方程為Y=1 582 500X-3 209.9(r=0.999 9)，結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在0.008～0.048 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

注：A.空白溶劑；B.對照品溶液；C.樣品；D.陰性對照溶液；1.麻黃堿。圖1 鹽酸麻黃堿的HPLC圖

2.3 苦杏仁苷含量的測定

2.3.1 色譜條件與適用性試驗 色譜柱：WondaSil C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-乙腈-水(80∶16∶4)；檢測波長：207 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL，理論塔板數(shù)以苦杏仁苷計不低于4000。色譜圖見圖2。

注：A.空白溶劑；B.對照品溶液；C樣品；D.陰性對照液；1.苦杏仁苷。圖2 苦杏仁苷的HPLC圖

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁苷對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為40.8 μg·mL-1的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取供試液1.5 mL，置于預(yù)處理的大孔吸附樹脂柱，放置1 h后，先用60 mL水洗脫至流出液為無色，棄去洗脫液，再用50 mL的60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，置60 ℃水浴中蒸干。加10 mL甲醇超聲15 min，溶液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，過濾，棄去初濾液。精密吸取濾液5 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得。

2.3.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例配置除苦杏仁以外其余藥味的陰性樣品，照上述供試品溶液的制備方法，制備陰性對照溶液。

2.3.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取苦杏仁苷對照品溶液(40.8 μg·mL-1)2、5、10、15、18、20 μL，按2.3.1項下色譜條件進(jìn)行測定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，苦杏仁苷的回歸方程為Y=506 795X+10 460(r=0.999 4)，結(jié)果表明，苦杏仁苷在0.081 6～0.816 0 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 水提取工藝優(yōu)選

稱取1/2處方量藥材，按L9(34)正交設(shè)計表進(jìn)行試驗，選取加水量、提取次數(shù)、提取時間為考察因素，每個因素設(shè)3個水平，以浸膏得率和鹽酸麻黃堿、苦杏仁苷含量為評價指標(biāo)，應(yīng)用綜合加權(quán)評分法進(jìn)行分析。權(quán)重系數(shù)分別為0.2、0.4、0.4，即綜合評分=浸膏得率/(浸膏最高得率×0.2×10)+鹽酸麻黃堿含量/(鹽酸麻黃堿最高含量×0.4×10)+苦杏仁苷含量/(苦杏仁苷最高含量×0.4×10)。因素水平見表1，試驗安排及結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1 水提取工藝優(yōu)選正交試驗因素水平表

表2 水提取工藝優(yōu)選正交試驗安排

表3 水提取工藝方差分析

注：F0.05(2，2)=19.0。

由直觀分析可知，各因素對水提取工藝的影響程度為C>A>B。方差分析表明，因素C對提取工藝的影響顯著。其他因素則影響不顯著。確定最佳提取條件為A2B1C3，即提取加水量8倍，提取3次，每次1 h。

2.5 驗證試驗

稱取1/2處方量藥材，按優(yōu)選的水提取工藝進(jìn)行3次驗證試驗，結(jié)果3批強(qiáng)力五虎合劑水提工藝測定結(jié)果見表4，表明優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行。

表4 3批強(qiáng)力五虎合劑水提工藝測定結(jié)果(n=3)

3 討論

強(qiáng)力五虎合劑為寧夏自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，在市場上尚無供應(yīng)，對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究也未見報道，具有一定的新穎性。方中麻黃為君藥，主要活性成分是鹽酸麻黃堿，可以擴(kuò)張支氣管、鎮(zhèn)咳、化痰[4]?？嘈尤受諡槌妓?，主要活性成分為苦杏仁苷，具有鎮(zhèn)咳平喘的作用[5]。同時出膏率與產(chǎn)品生產(chǎn)及質(zhì)量關(guān)系密切，故本試驗以鹽酸麻黃堿和苦杏仁苷含量及浸膏得率為評價指標(biāo)。綜上，本研究優(yōu)選的水提工藝穩(wěn)定、可行，重現(xiàn)性好，可用于強(qiáng)力五虎合劑的提取控制。

[1] 田杰，王華，王艷平.強(qiáng)力五虎合劑制備及臨床研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，13(3)143-144.

[2] 姜玲艷，張小華，張宏武，等.正交試驗法優(yōu)選健胃清腸合劑的水提醇沉工藝[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19(17)：35-37.

[3] 郭廷東，唐志立，謝雨洮，等.正交試驗法優(yōu)選芍黃通便合劑的水提取工藝[J].中國藥業(yè)，2012，21(24)：67-68.

[4] 張保國，劉慶芳.麻黃湯現(xiàn)代藥效學(xué)研究與臨床運用[J].中成藥，2007，29(3)：415-422.

[5] 魏金婷，劉文奇.方藥中苦杏仁苷的研究和應(yīng)用進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，13(6)：589-591.

OptimizationofWaterExtractionProcessofQiangliWuhuMixturesbyOrthogonalTest

TIANJie，WANGYanping*，NINGYu，WANGZhongyan，XUJing

(TraditionalChineseMedicineHospitalofNingxiaAutonomousRegion,Yinchuan750021,China)

Objective： To optimize water extraction of Qiangli Wuhu mixtures.Method:With ephedrine and amygdalin extract rate as the main index, the L9(34) orthogonal design was used to screen the optimal water extraction.Results:The optimal water extraction process of Qiangli Wuhu mixture was as follows: adding 8 times amount of water, decocting three times, 1h each time.Conclusion:The technology is optimized under simulated production conditions with high extraction rate of active ingredient, good reproducibility, stability and feasibility, which can provide reference for the mass production technology of Qiangli Wuhu Mixture.

Qiangli Wuhu mixture；water extraction technology；orthogonal design

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.6.021

2016-02-26)

寧夏自治區(qū)科技支撐計劃項目[寧科技字2013(20)]；中央本級重大增減支項目(2060302)

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王艷平，主任藥師，研究方向：制劑研究；Tel：(0591)5600655，E-mail：13895013806@163.com