p-mTOR在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義

汪星星，韓麗紅，閆斌，于躍利

1.包頭醫(yī)學(xué)院研究生院，內(nèi)蒙古包頭014060；2.包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外二科，內(nèi)蒙古包頭014010

*基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究*

p-mTOR在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義

汪星星1，韓麗紅1，閆斌2，于躍利2

1.包頭醫(yī)學(xué)院研究生院，內(nèi)蒙古包頭014060；2.包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外二科，內(nèi)蒙古包頭014010

目的 探討p-mTOR的表達(dá)水平與胃癌發(fā)生的關(guān)系。方法 選擇2014年3月—2016年2月于包頭市腫瘤醫(yī)院經(jīng)手術(shù)根治切除的胃癌標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)60例胃癌組織及40例癌旁胃組織中p-mTOR蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果 pmTOR蛋白在胃癌組織中的表達(dá)水平高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論p-mTOR在胃癌組織中過度表達(dá)可能是胃癌發(fā)生的機(jī)制之一。

胃癌；磷酸化雷帕霉素靶蛋白(mTOR)；免疫組織化學(xué)法

胃癌作為我國(guó)一種較為常見的惡性腫瘤，此病發(fā)病率乃處于各種腫瘤病癥之首。該病早期并無明顯癥狀表現(xiàn)，當(dāng)抽選明顯臨床癥狀時(shí)，則多數(shù)皆為晚期，因此，胃癌具有極高的致死率。哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR蛋白）作為一個(gè)于近些年發(fā)現(xiàn)的信號(hào)傳導(dǎo)樞紐，乃是蛋白質(zhì)翻譯、核糖體合成及細(xì)胞內(nèi)參當(dāng)中一種十分重要的生物學(xué)行為[1]，mTOR可通過其促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化和增加腫瘤新生血管的形成，在體內(nèi)惡性腫瘤的形成過程和腫瘤細(xì)胞耐藥性的形成關(guān)系密切[2]。本研究采用免疫組化的方法觀察2014年3月—2016年2月包頭市腫瘤醫(yī)院60例胃癌患者癌組織及癌旁組織(腫瘤邊緣5 cm處）中p-mTOR的表達(dá)情況并分析其與胃癌之間的聯(lián)系。

1 材料與方法

1.1 材料

觀察組為2014年3月—2016年2月于包頭市腫瘤醫(yī)院經(jīng)手術(shù)根治切除的胃癌石蠟標(biāo)本60例（術(shù)前未接受化療、放療或內(nèi)分泌治療，無合并其他惡性腫瘤和遺傳病史），對(duì)照組為癌旁組織(腫瘤邊緣5 cm處)40例。標(biāo)本均4%甲醛固定、脫水、石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，蘇木精—伊紅染色，所有患者診斷均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。

1.2 方法

p-mTOR的檢測(cè)采用免疫組化法：一抗p-mTOR (s2448)購(gòu)于Bioworld Technology,貨號(hào)為BS4706,抗體來源為兔,多克隆抗體,適用于人、小鼠、大鼠。一抗稀釋度分別為1:100。二抗:HRP標(biāo)記抗兔二抗，0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液pH7.4，0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖液pH6.0，DAB顯色液(GK346810)，按說明書操作。p-mTOR以胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，以0.01 mol/LPBS作為陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)。參照Naoki標(biāo)準(zhǔn)，陽性細(xì)胞數(shù)0%為(-)，0%～20%為(±)，20%～80%為(+)，＞80%為(++)；(-)和(±)為陰性，(+)和(++)為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)分析軟件。組間陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采取百分比表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

從本次實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法對(duì)胃癌組織及胃正常組織進(jìn)行染色后所提供的染色圖片上可以看出，兩者的染色結(jié)果存在較為明顯的差異。在胃癌中，p-mTOR的染色陽性部分主要集中于胃癌細(xì)胞的細(xì)胞胞漿部分，成棕色、彌漫性的分布于細(xì)胞胞漿當(dāng)中，在對(duì)照組的胃正常組織中，染色的陽性部分主要集中于細(xì)胞胞漿，呈棕色，但比較胃癌細(xì)胞染色不同的是胃正常的染色為顆粒狀，大小不等，分布較散在（如圖1）。

本次實(shí)驗(yàn)中的60例胃癌組織中，根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)中所提到的mTOR因子染色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的評(píng)分方法，最后得出p-mTOR在觀察組胃癌60例患者中的陽性表達(dá)的例數(shù)為22例，對(duì)照組胃正常組織40例患者中p-mTOR陽性表達(dá)的例數(shù)為4例，根據(jù)SPSS軟件四格表資料的χ2檢驗(yàn)計(jì)算，結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（根據(jù)四格表資料的χ2檢驗(yàn)結(jié)果示：χ2＝5.557，P＝0.005）。詳見表1。

表1 p-mTOR表達(dá)情況

圖1 p-mTOR在胃正常組織及胃癌組織中的表達(dá)

3 討論

調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)代謝相應(yīng)信號(hào)傳導(dǎo)途徑出現(xiàn)功能紊亂狀況，其也是造成發(fā)生腫瘤的重要因素，mTOR信號(hào)通路密切相關(guān)于多種惡性腫瘤的的發(fā)生及發(fā)展，當(dāng)mTOR受到其通路方面的胰島素受體、PTEN基因及上游生長(zhǎng)因子受體等多方面的刺激影響下，能夠?qū)?xì)胞凋亡具有抑制作用，且還會(huì)促進(jìn)細(xì)胞在運(yùn)行周期方面的加快，對(duì)于腫瘤血管相應(yīng)形成具有促進(jìn)作用，同時(shí)還促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。另外，對(duì)于mTOR信號(hào)通路而言，其對(duì)于那些從正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞，均有所參與，而在具體的腫瘤細(xì)胞當(dāng)中，其內(nèi)部存有與編碼mTOR信號(hào)通路存在關(guān)聯(lián)的蛋白，其可實(shí)現(xiàn)基因突變，此些蛋白在表達(dá)方面如若出現(xiàn)異常，則會(huì)造成mTOR通路出現(xiàn)過度性的激活狀況。mTOR對(duì)于cyclinD1表達(dá)具有上調(diào)作用，進(jìn)而對(duì)細(xì)胞周期給予調(diào)控，自G1轉(zhuǎn)變?yōu)镾期，而對(duì)于mTOR抑制劑，其可利用對(duì)細(xì)胞增殖所具有的相應(yīng)抑制作用，通過對(duì)細(xì)胞凋亡實(shí)施誘導(dǎo)，從而將抵抗腫瘤的作用予以充分發(fā)揮。

活化的mTOR/4EBP1信號(hào)通路與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，目前已發(fā)現(xiàn)肺癌、腎癌、乳腺癌和白血病等多種腫瘤中存在mTOR信號(hào)通路的過度激活。mTOR在肝癌、胰腺癌、胃癌等[3]消化系腫瘤中亦存在高表達(dá)和活化，已成為胃癌治療的新靶點(diǎn)。

Yu等[4]用1 072例胃癌患者的胃癌組織及配對(duì)的非腫瘤胃組織構(gòu)建組織微陣列塊，并用免疫組織化學(xué)和免疫印跡法發(fā)現(xiàn)總mTOR和p-mTOR過表達(dá)，兩者的過表達(dá)顯著相關(guān)。另有研究[5]用免疫組化法檢測(cè)210例患者胃腺癌組織中p-mTOR的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞胞漿中pmTOR陽性率為88%，與胃癌發(fā)生呈線性相關(guān)。Li等[6]研究發(fā)現(xiàn)33例胃癌患者的胃癌細(xì)胞中，mTOR的陽性率為51.5%。應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)286例患者的胃癌組織中發(fā)現(xiàn)4EBP1和p-4EBP1的表達(dá)率分別為68.5%（196/286）和49.7%（142/286）與胃癌呈線性相關(guān)。

韓國(guó)學(xué)者An等[7]采用組織微陣列免疫組化方法研究290例pT2b期胃癌患者磷酸化mTOR的表達(dá)（p-mTOR），胃癌組織中p-mTOR以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在明確的相關(guān)性，p-mTOR的表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。研究表明[8-9]聯(lián)合使用卡培他濱及mTOR抑制劑依維莫司對(duì)復(fù)發(fā)的胃癌患者具有腫瘤細(xì)胞毒作用及適度的臨床效果。

mTOR信號(hào)通路密切相關(guān)于多種惡性腫瘤的的發(fā)生及發(fā)展，當(dāng)mTOR受到其通路方面的胰島素受體、PTEN基因及上游生長(zhǎng)因子受體等多方面的刺激影響下，能夠?qū)?xì)胞凋亡具有抑制作用，且還會(huì)促進(jìn)細(xì)胞在運(yùn)行周期方面的加快，對(duì)于腫瘤血管相應(yīng)形成具有促進(jìn)作用，同時(shí)還促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。另外，對(duì)于mTOR信號(hào)通路而言，其對(duì)于那些從正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞，均有所參與，而在具體的腫瘤細(xì)胞當(dāng)中，其內(nèi)部存有與編碼mTOR信號(hào)通路存在關(guān)聯(lián)的蛋白，其可實(shí)現(xiàn)基因突變，此些蛋白在表達(dá)方面如若出現(xiàn)異常，則會(huì)造成mTOR通路出現(xiàn)過度性的激活狀況。

伴隨mTOR信號(hào)通路在整個(gè)抗癌研究的廣泛應(yīng)用，其通過抑制靶向，或?qū)⒋诵盘?hào)相應(yīng)傳導(dǎo)通路當(dāng)中的某位點(diǎn)給予下調(diào)，則會(huì)對(duì)腫瘤相應(yīng)發(fā)生及發(fā)展作用造成影響。本次研究依據(jù)臨床實(shí)際，采用免疫組化對(duì)mTOR在胃癌組織、癌旁胃組織中相應(yīng)表達(dá)差異予以研究，從而為對(duì)胃癌發(fā)生分子機(jī)制更加深入的認(rèn)識(shí)，提供更加豐富、充實(shí)的理論支撐，從而為胃癌臨床干預(yù)及早期診斷的有效開展，提供新的且更為有效的分子標(biāo)記物。mTOR表達(dá)水平變化可為胃癌的診斷、靶向治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。

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[1]季冬梅,李進(jìn).靶向PI3K/Akt/mTOR通路在胃癌中的研究進(jìn)展[J].腫瘤,2014(2):191-196.

[2]孫丹鳳,張燕捷,田筱青,等.哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白信號(hào)通路及其下游蛋白在胃癌組織中的活化及臨床意義[J].中華消化雜志,2013,33(3):166-170.

[3]Nemunaitis J,Hochster HS,Lustgarten S,et al.A phase I trial of oral ridaforolimus (AP23573;MK-8669)in combination with bevacizumab for patients with advanced cancers[J].Clin Oncol(R Coll Radiol),2013,25(6):336-342.

[4]Yu G,Wang J,Chen Y,et al.Overexperssion of phosphorylated mammalian target of rapamycin perdicts lymph node metastsis and prognosis of chinese patients with gastric cancer[J].Clin Cancer Res,2009,15(5):1821-1829.

[5]Feng W,Brown RE,Trung CD,et al.Morphoproteomic profile of mTOR,Ras/Raf/kinase/ERK,and NF-kappaB pathways in human gastric adenocarcinoma[J].Ann Clin Lab Sci,2008,38 (3):195-209.

[6]Li M,Sun H,Song L,et al.Immunohistochemical expression of mTOR negatively correlates with PTEN expression in gastric carcinoma[J].Oncol Lett,2012,4(6):1213-1218.

[7]An JY,Kim KM,Choi MG,et al.Prognostic role of p-mTOR expression in cancer tissues and metastatic lymph nodes in pT2b gastric cancer[J].Int J Cancer,2010,126(12):2904-2913.

[8]Lim T,Lee J,Lee DJ,et al.Phase I trial of capecitabine plus everolimus (RAD001)in patients with previously treated metastatic gastric cancer[J].Cancer Chemother Pharmacol, 2011,68(1):255-262.

[9]孫丹鳳,張燕捷,田筱青,等.哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白信號(hào)通路及其下游蛋白在胃癌組織中的活化及臨床意義[J].中華消化雜志,2013,33(3):166-170.

Expression and Significance of p-mTOR in the Tissue of Gastric Carcinoma

WANG Xing-xing1，HAN Li-hong1，YAN Bin2，YU Yue-li2
1.Baotou Medical College,Baotou，Inner Mongolia,014060 China；2.First Affiliated Hospital of Baotou Medical College Second Department of General Surgery,Baotou，Inner Mongolia,014010 China

Objective To investigate relationship between the expression levels of p-mTOR and gastric carcinoma Methods Choose in March 2014 to February 2016 in baotou tumor hospital after the surgery,radical resection of gastric cancer specimens.Immuneohistochemistry was used to determine the expression levels of p-mTOR in 60 cancerous tissues and 40 paracancerous tissues.Results The expression level of p-mTOR was markedly higher in the gastric carcinoma tissues than in the paracancerous tissues.Conclusions Overexpression of p-mTOR in gastric cancer may be one of the important mechanisms of gastric cancer.

Gastric carcinoma;mTOR;Immuneohistochemistry

R735.2

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.01.06

2015-12-09；

2016-02-01

包頭市科技計(jì)劃項(xiàng)目（Wsjj1015073),內(nèi)蒙古自治區(qū)高等學(xué)?？茖W(xué)研究項(xiàng)目（NJZY16204),包頭醫(yī)學(xué)院博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目（BSJJ201605)。

汪星星 （1988.9-），漢族，男，江西上饒人，在讀碩士研究生，主要從事普外科疾病的診斷與治療工作，E-mial:vhanlihong@163.com。

于躍利（1964.9-），漢族，男，內(nèi)蒙古包頭人，碩士，主任醫(yī)師，教授，研究生導(dǎo)師，主要從事普外科疾病的相關(guān)工作，聯(lián)系電話13384720188，E-mial:ybacm@163.com。

汪星星，韓麗紅，閆斌，等.p-mTOR在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].世界復(fù)合醫(yī)學(xué)，2016,2（1）：24-26.