HPLC法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中川芎成分洋川芎內(nèi)酯 Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸

姜　維，趙　美，陳　曦，郭　舜，劉新友

(第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院藥劑科，西安　710038)

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·藥物分析·

HPLC法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中川芎成分洋川芎內(nèi)酯 Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸

姜維，趙美，陳曦，郭舜，劉新友*

(第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院藥劑科，西安710038)

目的建立以HPLC法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸質(zhì)量濃度的方法。方法含藥血漿進(jìn)行3種提取方法對(duì)比。色譜條件為：Agilent5TC-C18(2)(250mm×4.6mm，5μm)；柱溫為室溫(25 ℃)；流動(dòng)相為甲醇-2mL·L-1甲酸水梯度洗脫；流速為0.6mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。結(jié)果以乙酸乙酯和正己烷為萃取溶劑的血樣處理方法效果最佳；洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸質(zhì)量濃度分別在2.5～250，2.0～200和1.25～125μg·mL-1范圍內(nèi)線性良好。平均回收率均大于85%，日內(nèi)和日間RSD值均小于4%。結(jié)論該方法的血漿萃取效果較理想，檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏、可靠，可應(yīng)用于血漿中川芎主要成分的血藥質(zhì)量濃度分析。

洋川芎內(nèi)酯Ⅰ；藁本內(nèi)酯；阿魏酸；血藥質(zhì)量濃度；高效液相色譜法

川芎為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiongHort的干燥根莖，具有祛風(fēng)濕、止痛、活血祛瘀功能，主治血瘀氣滯的月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、痛經(jīng)及產(chǎn)后瘀滯腹痛等，也是治療頭痛的要藥[1-2]。隨著LC/MS、GC/MS等色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用，川芎體內(nèi)成分的檢測(cè)取得了很大突破[3-6]，對(duì)川芎入血成分的研究主要集中在洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸等酚酸類(lèi)和苯酞類(lèi)成分[7-11]。由于洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸不僅極性和溶解性差異非常大，而且阿魏酸易異構(gòu)或分解[12]，導(dǎo)致3種物質(zhì)的吸收入血后的血樣制備方法和HPLC分析方法出現(xiàn)很大差異，通常需要不同的樣品制備方法和色譜條件，同一份血漿樣本需要分多次檢測(cè)不同成分，這樣重復(fù)繁瑣的檢測(cè)方法不利于藥代動(dòng)力學(xué)的研究。本實(shí)驗(yàn)從含藥血漿HPLC的分析方法入手，研究同時(shí)檢測(cè)川芎提取物中3種主要入血成分洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的方法。

1　儀器與試藥

1.1儀器Agilent1200高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司);SartoriusBP221S型萬(wàn)分之一天平(德國(guó)Sartorius公司)；SK-1型快速混勻器(常州澳華儀器有限公司)；超純水制水機(jī)；TGL-20M高速臺(tái)式低溫冷凍離心機(jī)(湘儀公司)。

1.2試藥阿魏酸對(duì)照品、藁本內(nèi)酯對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究院，批號(hào)分別為110773-201313和110773-201507，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99%)；洋川芎內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品(北京嘉世玉禾化工技術(shù)研究院，批號(hào)為Y-085-151009，HPLC法測(cè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%)；川芎藥材，市售，經(jīng)鑒定，為傘形植物川芎(Ligusticum chuanxiongHort)的干燥根莖；色譜純：甲醇(美國(guó)Fisher公司)；超純蒸餾水(自制)；甲酸、乙酸乙酯、正己烷和其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent 5 TC-C18(2) (250 mm×4.6 mm，5 μm)。流動(dòng)相A為甲醇，B為2 mL·L-1甲酸水。梯度洗脫(0～9 min，50% A；9～15 min，50%～60% A;15～25 min，60%～75% A)。檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm;流速：0.6 mL·min-1;柱溫：室溫(25 ℃);進(jìn)樣量：20 μL。

2.2溶液的制備

2.2.1藥材提取液稱取川芎藥材粗粉100g，加入800mL體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇，回流提取3次，每次1.5h，合并提取液，減壓濃縮至100mL，備用。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取洋川芎內(nèi)酯Ⅰ 5.0mg、藁本內(nèi)酯4.0mg和阿魏酸2.5mg，分別置于10.0mL棕色量瓶中，用色譜甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，分別制備成洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸對(duì)照品溶液，質(zhì)量濃度分別為500.0,400.0和250.0μg·mL-1。取洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸適量，混勻，用不同量的甲醇稀釋至不同質(zhì)量濃度，制備系列混合對(duì)照品溶液。

2.2.3空白血漿加供試品溶液的制備正常SD大鼠取血前禁食12h，自由飲水。眼底叢靜脈取血，置于肝素鈉采血管內(nèi)，以8 000r·min-1離心10min，分離上層血漿。取200μL空白血漿+40μL藥材提取液，漩渦1min，樣品中加入冰乙酸甲醇液50μL，漩渦1min，加入乙酸乙酯正己烷1 000μL，漩渦2min，以8 000r·min-1離心10min，重復(fù)萃取2次，取全部上層上清液減壓抽干，用200μL甲醇復(fù)溶，0.22μm膜過(guò)濾，備用。

2.2.4空白血漿加對(duì)照品供試品溶液的制備正常SD大鼠取血前禁食12h，自由飲水。眼底叢靜脈取血1mL，置于肝素鈉采血管內(nèi)，以8 000r·min-1離心10min，取上清液0.2mL，加入20μL洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸混合對(duì)照品溶液，按照2.2.3項(xiàng)下空白血漿供試品溶液制備方法制備樣品。按照此方法制得一系列質(zhì)量濃度的空白血漿加混合對(duì)照品的供試品溶液，以及空白血漿加單獨(dú)對(duì)照品的供試品溶液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1方法專(zhuān)屬性考察及檢出限通過(guò)對(duì)比空白大鼠血漿以及空白血漿加洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸混合對(duì)照品的液相色譜圖，各液相色譜圖見(jiàn)圖1，可見(jiàn)該方法對(duì)藥材成分的檢測(cè)并無(wú)明顯干擾，說(shuō)明該液相條件具有良好的方法專(zhuān)屬性。以信噪比為3∶1時(shí)各指標(biāo)成分的濃度作為其檢出限，可得洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的檢出限分別為1.25，0.50和0.70μg·mL-1。用該色譜方法分析空白血漿加供試品溶液和空白血漿加混合對(duì)照品的供試品溶液，見(jiàn)圖1。由圖1可知，該方法在供試品的血漿檢測(cè)中也無(wú)干擾。

圖1HPLC圖

a.空白血漿；b.混合對(duì)照品；c.樣品；1.阿魏酸；2.洋川芎內(nèi)酯Ⅰ；3.藁本內(nèi)酯

Fig.1HPLCchromatograms

a.blankplasma;b.plasmaspikedwithfumalicacid，senkyunolideⅠandligustilide；c.plasmasampleafterLigusticum wallichiiadministrated；1.fumalicacid；2.senkyunolideⅠ；3.ligustilide

2.3.2線性范圍精密吸取血漿200μL，加入20μL系列質(zhì)量濃度的洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸混合對(duì)照品溶液，制得系列質(zhì)量濃度供試品溶液。按擬定樣品處理方法制備樣品，在擬定色譜條件下進(jìn)樣20.0μL，記錄峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度(X，μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，以對(duì)照品積分面積為縱坐標(biāo)(Y，A)，進(jìn)行回歸分析，得回歸方程及線性范圍，見(jiàn)表1。表1空白血漿加對(duì)照品溶液線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1ThelinearcorrelationresultsofsenkyunolideⅠ,ligustilideandfumalicacid

對(duì)照品名稱回歸方程r線性范圍/μg·mL-1洋川芎內(nèi)酯ⅠY=27.604X-0.39850.99912.5～250藁本內(nèi)酯Y=41.287X+19.1370.99962.0～200阿魏酸Y=62.414X-9.63990.99931.25～125

2.3.3精密度實(shí)驗(yàn)按照擬定方法制備低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的空白血漿加對(duì)照品溶液，在擬定分析條件下，進(jìn)樣 20.0μL分析。在1d內(nèi)重復(fù)測(cè)定6次，求得日內(nèi)偏差，結(jié)果見(jiàn)表2。將上述3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品分別在6d內(nèi)連續(xù)測(cè)定6次，求得日間偏差，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明,儀器精密度良好。

按照2.2.3項(xiàng)下空白血漿供試品溶液制備方法制備樣品，在擬定分析條件下，進(jìn)樣 20.0μL分析。在1d內(nèi)重復(fù)測(cè)定6次，統(tǒng)計(jì)樣品中洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸色譜峰積分面積求得日內(nèi)偏差，結(jié)果洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的日內(nèi)精密度RSD值分別為2.95%,1.36%和1.59%;樣品分別在6d內(nèi)連續(xù)測(cè)定6次，求得日間偏差，結(jié)果洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的日間精密度RSD分別為2.78%,1.57%和3.42%,結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密量取200.0μL空白血漿18份，平行分為3組，分別加入20.0μL低、中、高質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，按照擬定處理方法制備樣品，在擬定色譜條件下進(jìn)樣分析，其重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD值見(jiàn)表2，結(jié)果表明，色譜條件重復(fù)性良好。

2.3.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取空白血漿樣品，加入不同質(zhì)量濃度的洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸混合對(duì)照品溶液，得到低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的空白血漿加對(duì)照品溶液，室溫下放置4，6，8，10，12和24h，按照擬定樣品制備方法制備樣品。在擬定條件下進(jìn)樣 20.0μL分析，通過(guò)測(cè)定洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的質(zhì)量濃度變化，考察溫度對(duì)樣品穩(wěn)定性的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，結(jié)果表明穩(wěn)定性良好。

表2洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸精密度考察結(jié)果

Tab.2TheprecisionresultsofsenkyunolideⅠ,ligustilideandfumalicacid

對(duì)照品質(zhì)量濃度/μg·mL-1日內(nèi)精密度RSD/%日間精密度RSD/%重復(fù)性RSD/%洋川芎內(nèi)酯Ⅰ12.53.224.623.5050.02.652.171.60250.01.481.561.86藁本內(nèi)酯10.03.271.673.2940.01.250.992.04200.01.202.431.50阿魏酸6.251.292.292.6125.02.594.263.97125.00.893.861.66

表3洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的穩(wěn)定性

Tab.3ThestabilityresultsofsenkyunolideⅠ,ligustilideandfumalicacid

對(duì)照品質(zhì)量濃度/μg·mL-1測(cè)得量/×10-3μg4h6h8h10h12h24h平均值/×10-3μgx±sRSD/%洋川芎內(nèi)酯Ⅰ12.5011.6111.2211.5312.1311.4312.3311.7±0.433.6750.0047.5947.5347.0748.1549.7548.1748.04±0.931.94250.00234.07236.85237.17235.28239.27238.64236.88±1.970.83藁本內(nèi)酯10.009.979.809.239.729.149.529.06±0.303.9040.0039.1738.9440.1739.6239.2138.8539.32±0.491.27200.00193.97194.58196.85190.03194.81192.4193.77±2.331.71阿魏酸6.256.246.406.426.706.636.656.51±0.182.8625.0023.9923.6323.2524.0922.6922.7523.40±0.613.47125.00119.30117.83114.34117.63113.53113.93113.43±1.013.60

2.3.6提取回收率將20μL的對(duì)照品溶液分別加入到200μL的空白血漿和甲醇中，制成低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸空白血漿樣品和洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸甲醇溶液。按照2.2.3項(xiàng)下血漿處理方法制備樣品，記錄峰面積，以公式Rt=(AX/Ac)×100%計(jì)算方法回收率。式中：Rt為提取回收率，AX為血漿指標(biāo)成分實(shí)測(cè)峰面積，Ac為甲醇溶液指標(biāo)成分峰面積。以血漿中洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸與甲醇溶液中洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的峰面積之比計(jì)算提取回收率。結(jié)果見(jiàn)表4和表5。

2.3.7方法回收率按照擬定方法制備低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的空白血漿加對(duì)照品溶液，在擬定分析條件下，進(jìn)樣20.0μL。記錄峰面積，由洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸線性方程計(jì)算得到，由公式R=(AX/AS)×100%計(jì)算方法回收率，實(shí)驗(yàn)測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。式中：R為方法回收率；AX為血漿成分實(shí)測(cè)峰面積；AS為按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算的指標(biāo)成分峰面積。

2.4結(jié)果由考察結(jié)果可知，該方法洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的檢出限分別為1.25，0.50和0.70μg·mL-1。線性范圍分別為2.5～250，2.0～200和1.25～125μg·mL-1，線性范圍內(nèi)3種指標(biāo)成分線性關(guān)系良好；高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度提取回收率和方法回收率均大于80%；精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD值均小于10%。由以上數(shù)據(jù)可知，回收率、精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性等指標(biāo)均適合生物樣品測(cè)定要求，表明該方法可用于大鼠血漿中洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的分析。

表4洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸提取回收率

Tab.4TheextractionrecoveryrateresultsofsenkyunolideⅠ,ligustilideandfumalicacid

對(duì)照品名稱加入量/μg·mL-1血樣中測(cè)得量/μg·mL-1甲醇中測(cè)得量/μg·mL-1平均回收率/%RSD/%洋川芎內(nèi)酯Ⅰ12.511.57±0.6713.38±0.6586.474.7150.048.57±2.2553.71±2.3190.434.02250.0235.96±1.27266.58±5.4288.513.68藁本內(nèi)酯10.09.01±0.3610.61±0.5184.923.8440.038.49±0.7142.15±0.5791.321.76200.0194.92±3.14209.82±3.4992.901.45阿魏酸6.256.10±0.126.69±0.1891.182.5125.023.64±1.3425.54±0.4592.563.99125.0115.32±0.99129.08±1.1989.341.85

表5洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸方法回收率

Tab.5ThemethodrecoveryresultsofsenkyunolideⅠ,ligustilideandfumalicacid

對(duì)照品加入量/×10-3μg測(cè)得量/×10-3μg平均回收率/%RSD/%洋川芎內(nèi)酯Ⅰ12.511.55±0.8492.403.2150.048.53±0.9397.082.28250.0234.49±3.5593.791.55藁本內(nèi)酯10.09.38±0.4093.814.2940.039.06±0.4997.661.24200.0195.16±2.8697.581.46阿魏酸6.256.01±0.1296.162.0025.024.07±0.6696.282.75125.0115.90±1.9592.721.68

3　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)在保證洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸3個(gè)指標(biāo)成分良好的分離度的同時(shí)，對(duì)樣品處理方法和色譜條件進(jìn)行了系統(tǒng)優(yōu)化，考察3個(gè)樣品制備方法制備樣品：

方法一：200μL空白血漿+40μL藥材提取液，漩渦1min，加入甲醇1 000μL沉淀蛋白，漩渦2min，以8 000r·min-1離心10min，取出上層上清液后，取全部上層上清液減壓抽干，用200μL甲醇復(fù)溶，0.22μm膜過(guò)濾，備用。

方法二：200μL空白血漿+40μL藥材提取液，漩渦1min，加入乙酸乙酯-正己烷萃取液1 000μL，漩渦2min，以8 000r·min-1離心10min，取出上層上清液后，原液重復(fù)萃取2次，取全部上層上清液減壓抽干，用200μL甲醇復(fù)溶，0.22μm膜過(guò)濾，備用。

方法三：200μL空白血漿+40μL藥材提取液，漩渦1min，樣品中加入冰乙酸甲醇液50μL，漩渦1min，加入乙酸乙酯正己烷1 000μL，漩渦2min，以8 000r·min-1離心10min，重復(fù)萃取2次，取全部上層上清液減壓抽干，用200μL甲醇復(fù)溶，0.22μm膜過(guò)濾，備用。

在擬定分析條件下，進(jìn)樣10.0μL，對(duì)比提取效果，由液相色譜圖可知，在阿魏酸出峰處差異最顯著，其中方法三即本實(shí)驗(yàn)選定方案。

其中改進(jìn)最顯著的為對(duì)阿魏酸的提取和穩(wěn)定。阿魏酸在醇溶液中容易異構(gòu)或分解，在混合萃取劑中也有部分分解，使得液相色譜出現(xiàn)雙峰或者肩峰，極大地干擾了積分面積的計(jì)算。本實(shí)驗(yàn)將提取方法加酸優(yōu)化后，使用了乙酸乙酯和正己烷的混合萃取劑，使得樣品處理方法具有回收率高、靈敏度高、重復(fù)性及穩(wěn)定性良好、且操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)；液相色譜條件及樣品分析時(shí)間較短，3種指標(biāo)性成分均達(dá)到良好的分離。表明該方法適合于大鼠血漿中洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的含量測(cè)定，從而為川芎作用物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供了一種耗時(shí)較短、靈敏可靠的樣本處理方法和分析手段。

[1]張曉琳，徐金娣，朱玲英，等.中藥川芎研究新進(jìn)展 [J].中藥材，2012，35(10)：1706-1711.

[2]鄭琴，魏韶鋒，熊文海，等.川芎在治療頭痛中成藥中的組方應(yīng)用分析[J].中草藥，2013，44(19)：2777-2781.

[3]舒冰，周重建，馬迎輝，等.中藥川芎中有效成分的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2006，22(9)：1043-1047.

[4]魏剛，蔡慶群，黃月純，等.川芎飲片及其煎劑HPLC指紋圖譜的相關(guān)性研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(2)：46-49.

[5]楊光明，蔡寶昌，王天山，等.川芎化學(xué)成分的氣相-質(zhì)譜與指紋圖譜研究(Ⅰ)[J].西北藥學(xué)雜志，2002，17(4)：147-150.

[6]雷志丹，雷志鈞，夏新華.川芎血清藥物化學(xué)的初步研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(12)：96-98.

[7]劉小麗，石麗，李華.川芎藥材HPLC指紋圖譜及阿魏酸測(cè)定研究[J].中成藥，2011，33(8)：1289-1292.

[8]金月，李江.RP-HPLC法測(cè)定川芎藥材中阿魏酸的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2010，25(2)：85-87.

[9]吳平麗，劉雯，張繼全，等.川芎中洋川芎內(nèi)酯A和Z-蒿本內(nèi)酯的HPLC法測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2010，41(4)：290-292.

[10]熊耀坤，林曉，梁爽，等.HPLC法測(cè)定小鼠血漿中洋川芎內(nèi)酯I的濃度及藥動(dòng)學(xué)研究[J].藥物分析雜志，2013，33(3)：371-375.

[11]郭小藤，趙睜睜，容蓉，等.兩種方法測(cè)定川芎油中藁本內(nèi)酯、洋川芎內(nèi)酯A和正丁基苯酞的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(13)：95-98.

[12]丁明玉，馬帥武，劉德麟.阿魏酸的穩(wěn)定性及其在川芎和當(dāng)歸藥材中的存在形式[J].中草藥，2004，35(1)：28-30.

Simultaneous determination of senkyunolide Ⅰ，ligustilide and fumalic acid of Ligusticum chuanxiong Hort in rats plasma by HPLC

JIANGWei，ZHAOMei，CHENXi，GUOShun，LIUXinyou*

(Department of Pharmacy，Tangdu Hospital，the Fourth Military Medical University，Xi′an 710038，China)

ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthesimultaneousdeterminationoftheconcentrationofsenkyunolideⅠ，ligustilideandfumalicacidinratsplasma.MethodsThreesamplepreparationmethodswerecompared；chromatographicseparationwasaccomplishedusingAgilent5TC-C18(2)(250mm×4.6mm，5μm).Thecolumntemperaturewasatroomtemperature(25 ℃).Themobilephasewascomposedofmethanoland2mL·L-1formicacidinwaterinagradientelutionmode.Theflowratewassetat0.6mL·min-1.Thedetectionwavelengthwassetat280nm.ResultsThesamplepreparationmethodusingethylacetateandn-hexaneforbloodsamplesproducedbetterchromatographicbehavioroftheanalytes.ThegoodlinearrangesofsenkyunolideⅠ，ligustilideandfumalicacidwere2.5-250，2.0-200and1.25-125μg·mL-1，respectively.TheaveragerecoveryratesofsenkyunolideⅠ，ligustilideandfumalicacidinthismethodwasmorethan85%；andboththeintradayRSDandtheinterdayRSDwerelessthan4%.ConclusionsThesamplepreparationmethodshowedbettereffectandtheanalyticalmethodforbloodsamplesissimple，rapid，sensitive，reliable，andcanbeemployedforthesimultaneousdeterminationofmajorcomponentsofLigusticum wallichiiinratsplasma.

senkyunolideⅠ；ligustulide；fumalicacid；plasmaconcentration；HPLC

陜西省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目(編號(hào)：13-ZY039)

姜維，男，藥師，碩士研究生

劉新友，男，副主任藥師

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.007

R945

A

1004-2407(2016)05-0462-05

2015-10-25)