李少暉 關(guān)亞風(fēng) 耿旭輝 陳士恒 謝云峰 楊永壇*
(1.中糧營(yíng)養(yǎng)健康研究院,營(yíng)養(yǎng)健康與食品安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 102209;2.中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所,大連 116023)
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一種新型黃曲霉毒素專用檢測(cè)器與市售商品化進(jìn)口熒光檢測(cè)器的應(yīng)用性能對(duì)比
李少暉1關(guān)亞風(fēng)2耿旭輝2陳士恒1謝云峰1楊永壇1*
(1.中糧營(yíng)養(yǎng)健康研究院,營(yíng)養(yǎng)健康與食品安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 102209;2.中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所,大連 116023)
對(duì)比了一種自制LED熒光檢測(cè)器與市售商品化進(jìn)口熒光檢測(cè)器檢測(cè)黃曲霉毒素的性能差異,利用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示:自制LED熒光檢測(cè)器的檢出限和信噪比優(yōu)于市售商品化進(jìn)口熒光檢測(cè)器,重復(fù)性不遜于市售商品化進(jìn)口熒光檢測(cè)器,是一種理想的黃曲霉毒素專用檢測(cè)器,適合在基層實(shí)驗(yàn)室推廣。
黃曲霉毒素專用檢測(cè)器商品化檢測(cè)器儀器比對(duì)統(tǒng)計(jì)分析
黃曲霉毒素(aflatoxins,AFT)是黃曲霉菌和寄生曲霉菌在生長(zhǎng)過程中分泌產(chǎn)生的一種次級(jí)代謝產(chǎn)物,其他真菌如毛霉、青霉、鐮孢曲霉等也能產(chǎn)生黃曲霉毒素[1,2]。黃曲霉毒素是一類結(jié)構(gòu)相似的化合物的總稱,其存在著多種異構(gòu)體和衍生物。常見的黃曲霉毒素主要包括黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2(AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1、AFM2)等[3],黃曲霉毒素具有很強(qiáng)的毒性、致癌性、致突變性和致畸毒性,其中以黃曲霉毒素B1的毒性最大[4],短期接觸大量黃曲霉毒素能夠引起急性毒性反應(yīng),包括發(fā)熱、腹痛、嘔吐等,嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)肝脾腫大、肝區(qū)疼痛、皮膚黏膜黃染、腹水、下肢浮腫及肝功能異常等中毒性肝病癥狀[5];同時(shí)黃曲霉毒素還是潛在的致癌物質(zhì),能夠誘導(dǎo)人類肝癌的發(fā)生和發(fā)展。實(shí)驗(yàn)表明:黃曲霉毒素B1的毒性為氰化鉀的10倍,砒霜的68倍;且其致癌性是二甲基亞硝胺的70倍,基于以上數(shù)據(jù),黃曲霉毒素已被國(guó)際癌癥研究組織(international agency for research on cancer,IARC)確定為I類致癌物[6,7]。
食物中的黃曲霉毒素主要來源于因儲(chǔ)存不當(dāng)?shù)仍蚨l(fā)生霉變的糧食和谷物,特別是霉變后的花生和玉米中的黃曲霉毒素含量較高,使用霉變的花生和玉米所制成的糧油制品中同樣存在著較為嚴(yán)重的黃曲霉毒素污染[8]。隨著多起黃曲霉毒素污染事件的發(fā)生,世界各國(guó)相關(guān)機(jī)構(gòu)和廣大消費(fèi)者對(duì)食品安全愈發(fā)關(guān)切。我國(guó)對(duì)食品中黃曲霉毒素B1也采取了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)(GB 2761-2011):花生、玉米及其制品中的黃曲霉毒素B1含量≤20 ng/g;大米及其他食用油的黃曲霉毒素B1含量≤10 ng/g,糧食、豆類、發(fā)酵食品及調(diào)味品中的黃曲霉毒素B1含量≤5 ng/g,乳制品及嬰兒配方食品中黃曲霉毒素B1、M1≤10 ng/g[9]。
目前國(guó)內(nèi)外的黃曲霉毒素檢測(cè)方法主要包括(超)高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法、薄層色譜法、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法等[10];薄層色譜法操作簡(jiǎn)單,檢測(cè)成本低,但是在檢測(cè)過程中需要接觸大量有毒有害有機(jī)試劑,故此方法已逐漸被淘汰[11];質(zhì)譜法具有高通量、高靈敏度、快速、無需衍生化等優(yōu)點(diǎn)[7],但是儀器成本及維護(hù)費(fèi)用較高,儀器操作較為復(fù)雜,目前在基層實(shí)驗(yàn)室還未得到廣泛的應(yīng)用。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法具有檢測(cè)速度快、特異性高、前處理簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)點(diǎn)[12],但其存在嚴(yán)重的假陽(yáng)和假陰性等問題[13],而且其結(jié)果的穩(wěn)定性和基質(zhì)適應(yīng)性仍未得到有效地改善,故此方法多用于樣品快速篩查和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。高效液相色譜-熒光檢測(cè)器法檢測(cè)黃曲霉毒素是實(shí)驗(yàn)室日常進(jìn)行黃曲霉毒素檢測(cè)的主要方法[14],由于黃曲霉毒素B1和G1遇水會(huì)發(fā)生熒光淬滅,故須用衍生劑對(duì)其進(jìn)行柱前或者柱后衍生,該方法重復(fù)性好、檢出限低、靈敏度高,儀器及維護(hù)成本適中,現(xiàn)已在基層實(shí)驗(yàn)室得到了非常廣泛的應(yīng)用[15]。
但是,基層實(shí)驗(yàn)室,特別是依托于生產(chǎn)環(huán)節(jié)的質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室的日常檢測(cè)項(xiàng)目相對(duì)集中,關(guān)注的風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)種類范圍較窄,通用型檢測(cè)器(熒光檢測(cè)器,二極管陣列檢測(cè)器等)在實(shí)際應(yīng)用中的使用效率較為低下,應(yīng)用性價(jià)比不高。針對(duì)食品行業(yè)重點(diǎn)關(guān)注的風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)制造有針對(duì)性的,廉價(jià)的專用型檢測(cè)器能夠在保證日常檢測(cè)要求的前提下為基層實(shí)驗(yàn)室降低儀器購(gòu)置和維護(hù)成本,提高儀器使用效率。專用型檢測(cè)器一般針對(duì)某一種或者某一類物質(zhì)的檢測(cè)而設(shè)計(jì),將與待測(cè)物檢測(cè)有關(guān)的控制設(shè)備模塊化、檢測(cè)參數(shù)固定化,從而舍去或者簡(jiǎn)化了通用型檢測(cè)器中一些不必要的部件,特別是一些易耗部件和高價(jià)部件,進(jìn)而大大降低了檢測(cè)器的造價(jià)和維護(hù)成本。
本研究對(duì)比了一種自主研發(fā)制造的黃曲霉毒素專用LED-熒光檢測(cè)器(DICP-AF01黃曲霉毒素專用熒光檢測(cè)器,以下簡(jiǎn)稱DICP-AF01檢測(cè)器,DICP-AF01 Detector)與市售商品化進(jìn)口熒光檢測(cè)器(以下簡(jiǎn)稱商品化檢測(cè)器,Commercial FLD)的性能差異,通過對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)數(shù)據(jù)、實(shí)際樣品檢測(cè)數(shù)據(jù),使用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,比較兩種檢測(cè)器各方面性能的差異。
1.1儀器與試劑
某品牌市售商品化進(jìn)口高效液相色譜儀-熒光檢測(cè)器系統(tǒng);Millipore Advantage超純水機(jī)(美國(guó)Millipore公司);Allegra 64R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)貝克曼公司);TTL DC 氮吹儀(中國(guó)同泰聯(lián)科技);玻璃纖維濾紙(英國(guó)Whatman公司)。黃曲霉毒素總量免疫親和柱(Romer Labs,COIAC1004);甲醇(色譜純,迪馬公司);黃曲霉毒素(B1、B2、G1、G2)標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma公司);實(shí)驗(yàn)用水為Millipore超純水機(jī)制備的超純水。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS 19.0(Statistical Product and Service Solutions 19.0,IBM公司)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,使用成對(duì)樣本t檢驗(yàn)比較檢出限和重復(fù)性,以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
1.2DICP-AF01黃曲霉毒素專用熒光檢測(cè)器
DICP-AF01黃曲霉毒素專用熒光檢測(cè)器為中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所研制。該檢測(cè)器采用正交光學(xué)結(jié)構(gòu),以發(fā)光二極管(LED)為激發(fā)光源,自研制的AccuOpt光電放大組件為熒光接收器件,采用光線追跡法對(duì)檢測(cè)器全光路進(jìn)行模擬優(yōu)化,使用LED、濾光片、透鏡,形成大體積、小峰展寬流通池和高信噪比熒光檢測(cè)池,適用于液相色譜儀。
DICP-AF01檢測(cè)器整機(jī)采用模塊化設(shè)計(jì),能適用于HPLC、FIA等不同系統(tǒng);且該檢測(cè)器功耗小(<300 mW),光源穩(wěn)定、故障率低,可用于基層實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)食品和飼料中的黃曲霉毒素殘留。
1.3色譜條件
色譜柱:Welch Ultimate AQ-C18(5μm,150mm×4.6mm);柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20μL;流動(dòng)相:甲醇:水=45∶55(等度洗脫),流速:0.8mL/min;碘衍生反應(yīng)條件:衍生溶液為0.05%碘溶液,衍生液流速為0.2mL/min,衍生反應(yīng)管溫度:70℃。
商品化檢測(cè)器條件:激發(fā)波長(zhǎng)360nm,發(fā)射波長(zhǎng)440nm。
數(shù)據(jù)采集系統(tǒng):DICP-AF01黃曲霉毒素專用檢測(cè)器采用浙大N2000色譜工作站,市售商品化進(jìn)口熒光檢測(cè)器采用儀器自帶的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),其中通過液相色譜儀的觸發(fā)器連接N2000色譜工作站的數(shù)據(jù)采集信號(hào)開關(guān),實(shí)現(xiàn)兩個(gè)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)的同步和數(shù)據(jù)的自動(dòng)存儲(chǔ),儀器連接方式見圖1。
圖1 實(shí)驗(yàn)裝置儀器連接示意圖
1.4樣品前處理方法
稱取5g研磨后的花生樣品至50mL離心管,加入1g氯化鈉和25mL提取液(甲醇∶水=7∶3),混勻。高速渦旋10min,離心,取提取液用定量濾紙過濾。移取15mL濾液并加入45mL水稀釋,混勻。用玻璃纖維濾紙過濾至澄清。取20mL澄清的濾液通過免疫親和柱,調(diào)節(jié)壓力,使液體以約3mL/min的流速通過親和柱,直至空氣進(jìn)入親和柱中。分別用10mL水淋洗親和柱兩次并抽干。再先后用1mL甲醇和1mL水分別洗脫親和柱并收集全部洗脫液,混勻后HPLC分析測(cè)定。
2.1兩種檢測(cè)器檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品溶液檢出限和重復(fù)性對(duì)比
對(duì)專用型檢測(cè)器的性能的評(píng)價(jià)主要包括信噪比、重復(fù)性、易耗部件壽命、能耗、工作環(huán)境耐受度等。本研究主要從實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用和方法學(xué)適應(yīng)性的角度考察了檢測(cè)器的信噪比和重復(fù)性。信噪比能夠衡量待測(cè)物在儀器上所產(chǎn)生的信號(hào)相比較于背景噪音和雜質(zhì)產(chǎn)生的無效信號(hào)的明顯程度,從而決定待測(cè)物質(zhì)的檢出限和定量限。重復(fù)性能夠反映儀器信號(hào)產(chǎn)生的穩(wěn)定性,從而體現(xiàn)出儀器在檢測(cè)過程中產(chǎn)生的偶然誤差的大小。
本實(shí)驗(yàn)首先利用標(biāo)準(zhǔn)品溶液對(duì)DICP-AF01檢測(cè)器與商品化檢測(cè)器的檢出限和重復(fù)性進(jìn)行對(duì)比,從而比較背景噪音、電噪音等儀器固有背景信號(hào)對(duì)4種黃曲霉毒素的檢出限和重復(fù)性的影響。
使用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋配制黃曲霉毒素B1、G1濃度相當(dāng)于0.05ng/mL、0.25ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,其中黃曲霉毒素B2、G2的濃度為0.015ng/mL、0.075ng/mL、0.15ng/mL、0.3ng/mL、0.75ng/mL、1.5ng/mL、3ng/mL、6ng/mL。使標(biāo)準(zhǔn)品溶液經(jīng)過DICP-AF01檢測(cè)器上的在線柱后衍生模塊后依次流入DICP-AF01檢測(cè)器和商品化熒光檢測(cè)器(圖1),每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次,利用工作站采集處理信息,計(jì)算信噪比、檢出限和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。
以含黃曲霉毒素B1、G1濃度為0.05 ng/mL,黃曲霉毒素B2、G2濃度為0.015 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣獲得色譜圖見圖2。
從圖2中可以看出,商品化檢測(cè)器產(chǎn)生的信號(hào)中黃曲霉毒素G2、G1、B2的信噪比均小于3,可以判定為未檢出;黃曲霉毒素B1的信噪比稍高,基本達(dá)到檢出限(S/N=3.896)。而DICP-AF01檢測(cè)器產(chǎn)生的信號(hào)中4種黃曲霉毒素均達(dá)到檢出限,信噪比分別為:3.568、5.362、3.856、6.331??梢钥闯鯠ICP-AF01檢測(cè)器的檢出限明顯低于商品化熒光檢測(cè)器。
利用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件比較兩種檢測(cè)器的檢出限和重復(fù)性,對(duì)每種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液的5次平行測(cè)定計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差;計(jì)算低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0.05ng/mL、0.25ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL)的檢測(cè)結(jié)果的信噪比。利用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)經(jīng)過兩種檢測(cè)器采集處理后得到的峰面積和峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差以及信噪比進(jìn)行成對(duì)樣本t檢驗(yàn),觀察其顯著性,結(jié)果見表1和表2。
圖2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖(a).DICP-AF01檢測(cè)器;(b).商品化熒光檢測(cè)器AFB1、AFG1=0.05ng/mL;AFB2、AFG2=0.015ng/mL
黃曲霉毒素樣本容量(N)自由度(df)t值p值(雙側(cè))黃曲霉毒素B12019-6.7160.003**黃曲霉毒素B22019-7.5450.003**黃曲霉毒素G12019-13.2330.001**黃曲霉毒素G22019-16.4440.005**
*差異顯著**差異極顯著
從表1中可以看出,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度在0.05ng/mL~1ng/mL范圍時(shí),兩種檢測(cè)器檢測(cè)4種黃曲霉毒素的信噪比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且差異極為顯著,p<0.01。表1中4種黃曲霉毒素的t值均為負(fù),可以判定在低濃度時(shí)DICP-AF01檢測(cè)器的信噪比、檢出限明顯優(yōu)于商品化熒光檢測(cè)器。
表2 兩種兩種檢測(cè)器檢測(cè)4種黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差比較(n=8)
*差異顯著**差異極顯著
從表2中可以看出,黃曲霉毒素G1在兩種檢測(cè)器上連續(xù)進(jìn)樣5次所產(chǎn)生信號(hào)信號(hào)(峰面積、峰高)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p<0.05,且t>0,而黃曲霉毒素B1、B2、G2在兩種檢測(cè)器上連續(xù)進(jìn)樣5次所產(chǎn)生信號(hào)信號(hào)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義??梢耘卸?,DICP-AF01檢測(cè)器的檢測(cè)黃曲霉毒素G1的重復(fù)性優(yōu)于商品化熒光檢測(cè)器,使用兩種檢測(cè)器其他的3種黃曲霉毒素的重復(fù)性無差別。
2.3兩種檢測(cè)器檢測(cè)實(shí)際樣品檢出限和重復(fù)性對(duì)比
在實(shí)際樣品檢測(cè)中,除了儀器的固有噪音和波動(dòng)會(huì)對(duì)檢測(cè)信號(hào)有所影響之外,樣品中未被凈化完全的雜質(zhì)和基質(zhì)物質(zhì)也會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生一定的干擾。
有機(jī)溶劑萃取-免疫親和柱凈化是食品中黃曲霉毒素檢測(cè)最常用的前處理手段[16],免疫親和柱上載有能夠特異性吸附黃曲霉毒素的抗體,樣品提取液經(jīng)過親和柱后待測(cè)物被吸附保留在抗體上,雜質(zhì)隨提取液和淋洗液流出。最終使用含有高濃度有機(jī)溶劑的洗脫液破壞抗體,使得待測(cè)組分隨洗脫液流出,用于檢測(cè)。由于黃曲霉毒素G1和B1遇水會(huì)發(fā)生熒光淬滅,所以在使用高效液相色譜-熒光檢測(cè)器是需要使用衍生劑對(duì)其進(jìn)行柱前或者柱后衍生。
本實(shí)驗(yàn)利用花生為基質(zhì)制備加標(biāo)陽(yáng)性樣品,加標(biāo)質(zhì)量濃度分別為0.5ng/g、5ng/g、20ng/g,對(duì)樣品進(jìn)行前處理后利用DICP-AF01檢測(cè)器和商品化熒光檢測(cè)器先后對(duì)上機(jī)溶液進(jìn)行測(cè)定。使上機(jī)溶液經(jīng)過DICP-AF01檢測(cè)器上的在線柱后衍生模塊后依次流入DICP-AF01檢測(cè)器和商品化熒光檢測(cè)器(如圖1),每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進(jìn)樣3次,利用工作站采集處理信息,計(jì)算信噪比和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。利用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)經(jīng)過兩種檢測(cè)器采集處理后得到的峰面積和峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差以及信噪比進(jìn)行成對(duì)樣本t檢驗(yàn),觀察其顯著性,結(jié)果見表3和表4。
表3 兩種檢測(cè)器檢測(cè)花生中4種黃曲霉毒素(0.5ng/g)的信噪比比較(n=6)
*差異顯著**差異極顯著
從表3中可以看出,在低濃度(0.5ng/g)花生加標(biāo)樣品上機(jī)溶液的檢測(cè)結(jié)果中兩種檢測(cè)器檢測(cè)4種黃曲霉毒素的信噪比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p(AFB2)<0.05,p(AFB1、G1、G2)<0.01。表中4種黃曲霉毒素的t值均為負(fù),可以判定在花生基質(zhì)的作用下,DICP-AF01檢測(cè)器的信噪比、檢出限仍明顯優(yōu)于商品化熒光檢測(cè)器。
表4 兩種檢測(cè)器檢測(cè)花生中4種黃曲霉毒素的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差比較(n=6)
續(xù)表4
*差異顯著**差異極顯著
從表4中可以看出,4種黃曲霉毒素在兩種檢測(cè)器上產(chǎn)生信號(hào)的重復(fù)性沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p>0.05,故可認(rèn)為DICP-AF01檢測(cè)器的檢測(cè)花生樣品中的4種黃曲霉毒素與商品化熒光檢測(cè)器的重復(fù)性無差別。
本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了自行開發(fā)研制的DICP-AF01黃曲霉毒素專用熒光檢測(cè)器與市售商品化熒光檢測(cè)器的性能,并將所得數(shù)據(jù)利用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。結(jié)果顯示,DICP-AF01黃曲霉毒素專用熒光檢測(cè)器的靈敏度和檢出限明顯優(yōu)于市售熒光檢測(cè)器,重復(fù)性不遜于市售商品化熒光檢測(cè)器,是一種理想的專用型黃曲霉毒素在線柱后衍生-熒光檢測(cè)器。
DICP-AF01黃曲霉毒素專用熒光檢測(cè)器能夠針對(duì)性地對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行在線柱后衍生和檢測(cè),且操作簡(jiǎn)單;其光源采用LED發(fā)光二極管,成本低,壽命長(zhǎng),非常適合基層實(shí)驗(yàn)室展開黃曲霉毒素的專項(xiàng)檢測(cè),以應(yīng)對(duì)日益嚴(yán)峻的黃曲霉毒素污染風(fēng)險(xiǎn)的挑戰(zhàn),保障國(guó)民糧食安全和身體健康。
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Comparison of a self-developed dedicated detector for aflatoxin with a commercially available imported fluorescence detector.
Li Shaohui1,Guan Yafeng2,Geng Xuhui2,Chen Shiheng1,Xie Yunfeng1,Yang Yongtan1*
(1.Beijing Key Laboratory of Nutrition Health and Food Safety,Nutrition &Health Research Institute of COFCO Corporation,Beijing 102209,China;2.Dalian Institute of Chemical Physics,Chinese Academy of Sciences,Dalian 116023,China)
All data were processed with SPSS statistical software.The results indicated that the detection limit of self-developed LED fluorescence detector was superior to commercial fluorescence detector,the reproducibility of self-developed LED fluorescence detector was as equal as commercial fluorescence detector.The self-developed LED fluorescence detector is an ideal aflatoxin dedicated detector,especially suitable for the basic laboratory.
aflatoxin;specific detector;commercial detector;detector comparison;statistic analysis
李少暉,男,碩士,研發(fā)專員,主要研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全,E-mail:lishaohui@cofco.com。
楊永壇,男,博士,研究員,主要研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全,E-mail:yangyongtan@cofco.com。
10.3936/j.issn.1001-232x.2016.04.018
2016-02-16