肌酸激酶同工酶CK-MB試劑盒抗干擾性能的評估

劉 沛（河南省鎮(zhèn)平縣人民醫(yī)院，河南 南陽 474250）

肌酸激酶同工酶CK-MB試劑盒抗干擾性能的評估

劉 沛
（河南省鎮(zhèn)平縣人民醫(yī)院，河南 南陽 474250）

目的 對不同廠家的肌酸激酶同工酶（CK-MB）檢測試劑盒抗干擾性能進行評估。方法 采用奧林巴斯AU2700 全自動生化分析儀對不同廠家的肌酸激酶同工酶檢測試劑盒進行抗干擾性能比較。結(jié)果 各廠家試劑對膽紅素、血紅蛋白、維生素C、乳糜的抗干擾能力差別不大，另外對于癌癥患者等樣本檢測結(jié)果中出現(xiàn)CKMB大于CK的情況均類似；然而，僅美康試劑對于臨床中肝素血漿樣本的檢測正常，未出現(xiàn)結(jié)果為負值的情況。結(jié)論 各廠家的試劑抗干擾性能普遍一致，對于出現(xiàn)CKMB大于CK的現(xiàn)象是由方法學(xué)本身的缺陷所致；另外，對于檢測肝素血漿樣本中出現(xiàn)負值現(xiàn)象，可能與各廠家的試劑配方有關(guān)。

肌酸激酶同工酶；抗干擾；性能評估

肌酸激酶是一種與細胞內(nèi)能量轉(zhuǎn)運、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶，其主要功能在于催化磷酸根的轉(zhuǎn)運，在三磷酸腺苷（ATP）的參與下，催化肌酸磷酸化，從而形成磷酸肌酸（CP）和二磷酸腺苷（ADP）。作為臨床診斷心肌損傷的常規(guī)指標(biāo)，因此必須重視其檢測結(jié)果的正確性。然而，由于臨床檢測過程中發(fā)現(xiàn)該試劑檢測結(jié)果常出現(xiàn)異?，F(xiàn)象。為此，我們按照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）指南文件要求對5個不同廠家CKMB試劑的抗干擾性能進行了比對評估，報道如下。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1標(biāo)本收集：收集同一人日常進行CKMB檢測的新鮮、無溶血、黃疸、乳糜血清標(biāo)本及其肝素血漿標(biāo)本（同時采集）共200份，收集確診為癌癥患者的血清標(biāo)本40份，儲存于4 ℃冰箱。

1.1.2試劑：購自瑞士Roche公司CKMB試劑（批號：688815-01）、愛爾蘭歐迪診斷公司CKMB試劑（批號：P5671）、北京九強公司CKMB試劑（批號：13-07020P）、利德曼公司CKMB試劑（批號：301241L）、寧波美康公司CKMB試劑（批號：20140108）、寧波美康公司CK試劑（批號：20140124）。

1.1.3儀器：奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀。

1.2檢測原理：CK由M和B兩個亞單位組成三種不同的二聚體，分別為CK-BB、CK-MB和CK-MM。該試劑盒采用免疫抑制法測定，通過利用抗人M亞單位的抗體，抑制M亞單位，然后測定剩余的BB亞單位活性，乘2即得CK-MB活力。

1.3方法

1.3.1測定參數(shù)：按照各廠家試劑說明書要求設(shè)置檢測參數(shù)。

1.3.2常規(guī)干擾檢測：試劑的抗干擾性能按CLSI-7A［1］中的方法進行試驗評價：分別向高濃度、低濃度混合血清中分別加入病理最高濃度的干擾物質(zhì)（膽紅素、人血紅蛋白、維生素C、乳糜）進行檢測。

1.3.3肝素血漿樣本干擾的檢測：選取100個體檢正常人的肝素血漿樣本和同時采集的血清樣本，用5個廠家的試劑進行檢測比較。另外，將檢測結(jié)果為負值的肝素血漿樣本對應(yīng)的血清樣本中挑出，加入常規(guī)濃度的肝素進行模擬干擾，并對模擬樣本進行檢測分析。

1.3.4癌癥患者樣本的檢測：選取40個已確診為癌癥患者的血清樣本與100份體檢正常的血清樣本，用5個廠家的CKMB試劑及寧波美康公司的CK試劑進行檢測。

2　結(jié) 果

2.1常規(guī)干擾檢測結(jié)果：將高、低濃度血清混合得中濃度血清，將該血清樣本分成若干份，分別加入最高病理濃度的干擾物質(zhì)，測定加入干擾物質(zhì)前后CKMB值，當(dāng)結(jié)果相對偏差超過10%時作為有明顯干擾的評判標(biāo)準(zhǔn)。檢測結(jié)果見表1，當(dāng)添加膽紅素（288 mg/L）時，僅歐迪試劑受膽紅素負干擾，其他抗干擾能力各廠家均在10%的偏差以內(nèi)。當(dāng)添加人血紅蛋白（5 g/L）時，各廠家試劑均呈正干擾。而對于維生素C（30 mg/L）、乳糜（1450濁度），各廠家均不受干擾。

表1　各廠家CKMB常規(guī)干擾檢測結(jié)果

2.2肝素血漿樣本檢測結(jié)果：通過對100個體檢正常人的肝素血漿樣本和同時采集的血清樣本用以上5個廠家的試劑進行檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僅有寧波美康生物的CKMB試劑在檢測肝素血漿樣本時未出現(xiàn)負值檢測結(jié)果，其余4家試劑均出現(xiàn)部分肝素血漿樣本結(jié)果為負值（表2）。同時，將檢測結(jié)果為負值的肝素血漿樣本對應(yīng)的血清樣本中挑出，加入常規(guī)濃度的肝素進行模擬干擾檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5個廠家的試劑均未出現(xiàn)負值，檢測結(jié)果與未加入肝素前的血清樣本檢測結(jié)果一致。

表2　各廠家CKMB試劑對血清、肝素血漿樣本檢測結(jié)果異常值統(tǒng)計

2.3癌癥患者樣本的檢測結(jié)果：在對40份已確診為癌癥患者的血清樣本與100份體檢正常的血清樣本進行檢測比較中，同時利用5個廠家的CKMB試劑及寧波美康公司的CK試劑進行樣本檢測。檢測結(jié)果顯示，在40份癌癥患者中，5個廠家的試劑均存在超過一半的樣本CKMB結(jié)果大于CK的現(xiàn)象，而在100份體檢正常的血清樣本中，未發(fā)現(xiàn)有CKMB檢測結(jié)果大約CK的現(xiàn)象（表3）。

表3　各廠家CKMB試劑對癌癥、正常樣本檢測結(jié)果統(tǒng)計

3　討 論

肌酸激酶同工酶CK-MB作為診斷急性心肌梗死或心肌壞死的特異性指標(biāo)，已經(jīng)得到臨床檢驗的廣泛認可與應(yīng)用，因此，CKMB試劑結(jié)果對于臨床診斷的準(zhǔn)確性保證尤為重要。然而在臨床檢驗中，常遇到在檢測肝素血漿樣本時出現(xiàn)負值檢測結(jié)果的現(xiàn)象，通過本研究的實驗結(jié)果顯示，肝素血漿樣本對于檢測結(jié)果的影響不是由于肝素造成的。鑒于血漿與血清的成分存在差異，可初步推斷是由于血漿中的某些蛋白成分造成了對檢測的干擾，從而使得檢測結(jié)果出現(xiàn)負值。而去除這種干擾可通過優(yōu)化試劑配方達到抗干擾的效果，在本研究中所選用的5個廠家試劑中，寧波美康的CKMB試劑效果在檢測肝素血漿樣本中的抗干擾效果最佳。

同時，在臨床檢驗過程中，常出現(xiàn)血清中CK-MB活性假陽性升高，甚至大于總CK活性的現(xiàn)象，也給臨床診斷增加了難度。然而，造成此類異常檢測結(jié)果主要還是由免疫抑制法的局限性所導(dǎo)致的。因為基于免疫抑制法的檢測原理，當(dāng)血清樣本中CK含量很高，而試劑中抗M亞基的抗體量相對不足時，M亞基活性沒有得到完全抑制，因而造成CK-MB檢測結(jié)果假陽性升高［1］。同時，由于免疫抑制法是基于完全忽略了血清中CK-BB的活性，因此，當(dāng)血清中CK-BB含量增加時，也會導(dǎo)致CK-MB檢測結(jié)果異常［1-2］。此外，當(dāng)樣本中存在巨CK分子時，由于抗M亞基的抗體無法抑制巨CK分子中M亞基或B亞基的活性，同樣會使CK-MB檢測結(jié)果的假陽性升高。正是由于大部分癌癥患者體內(nèi)存在巨CK分子，導(dǎo)致了其CKMB大于CK的原因［3-4］。另外，當(dāng)樣本存在溶血現(xiàn)象時，紅細胞和血小板中大量存在的腺苷酸激酶也可影響CK-MB的檢測結(jié)果，造成假陽性偏高。

［1］ 王愛華，蔣永康，劉靖，等.高活力CK不稀釋可致CK-MB假性增高［J］.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2009，7（1）:45.

［2］ 李小冬，吳杰，許紹輝.血清中巨CK1、巨CK2和CK-BB的臨床意義［J］.中國實驗診斷學(xué)，1998，2（1）:46-47.

［3］ 劉群，王敏，楊玉萍，等.非心源性疾病患者MB型肌酸激酶活性假性升高原因分析［J］.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，35（12）:1296-1298.

［4］ 王英春，邱廣斌.血清巨CK_2檢測在腫瘤診斷中的意義探討［C］.第十屆全軍檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議，2005.

R446.11

B

1671-8194（2016）22-0166-02