血小板減少癥患者的骨髓檢測分析

付 琳（西安醫(yī)學院附屬西安市北方醫(yī)院，陜西 西安 710043）

血小板減少癥患者的骨髓檢測分析

付 琳
（西安醫(yī)學院附屬西安市北方醫(yī)院，陜西 西安 710043）

目的 探討血小板減少癥患者的骨髓檢測方法與價值。方法 選擇在我院進行診治的血小板減少癥患兒200例作為觀察組，同期選擇在我院進行體檢的健康兒童200例作為對照組，兩組都取新鮮骨髓樣本，都進行骨髓象檢測和Tfh淋巴細胞檢測。結果 觀察組骨髓的胞體、核形、染色質、胞質、巨核細胞等情況與對照組對比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。觀察組與對照組骨髓的CD4+CXCR5+IL-21+/ CD4+CXCR5+細胞比例分別為（58.21±6.44）%和（14.28±4.44）%，觀察組明顯高于對照組（P＜0.05）。結論 血小板減少癥患者的骨髓檢測能夠有效反應骨髓象與Tfh細胞異常情況，從而有利于疾病的判斷，有很好的應用價值。

血小板減少癥；骨髓象；Tfh細胞；檢測意義

血小板減少癥是兒科出血性疾病中最常見的原因，多為獲得性的自身免疫性疾病，臨床主要表現(xiàn)為外周的血小板減少。血小板減少癥的具體發(fā)病機制還不太明確，其中T細胞亞群功能異常和比例失常是導致血小板減少癥的發(fā)病的重要因素，已有研究表明血小板減少癥患者存在Th1/Th2比值異常、Thl7細胞數(shù)量和功能因子的升高等輔助性T

細胞的異常，同時也存在髓系細胞分化、造血功能衰竭、成熟異常等表現(xiàn)，此外再生障礙性貧血及骨髓增生異常綜合征大多合并血小板減少［1-2］。當前對于血小板減少癥的臨床診斷方法比較多見，但是都存在一定的缺陷。隨著醫(yī)學技術的發(fā)展，骨髓檢測得到了廣泛應用。本文具體探討了血小板減少癥患者的骨髓檢測方法與價值，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：2014年1月至2016年1月選擇在我院進行診治的血小板減少癥患兒200例作為觀察組，經(jīng)臨床血涂片、骨髓涂片、骨髓切片確診，臨床主要表現(xiàn)為面色蒼白、頭暈乏力、肝脾腫大、發(fā)熱等，其中男103例，女97例；年齡6～10歲，平均年齡（7.44±1.24）歲。同期選擇在我院進行體檢的健康人200例作為對照組，其中男101歲，女91例；年齡6～9歲，平均年齡（7.23±0.98）歲。研究方案經(jīng)過我院委員會批準，本研究中的所有對象均簽署知情同意書。

1.2骨髓象檢測：所有患兒都進行骨髓象檢測，骨髓穿刺前禁止用藥，骨髓避免稀釋，嚴格按照操作規(guī)程，瑞氏染色后在顯微鏡下在低倍鏡觀察有核細胞增生程度，選擇涂片滿意的樣本在切換油鏡后觀察各系細胞形態(tài)。

1.3Tfh淋巴細胞檢測：兩組都進行骨髓Tfh淋巴細胞的流式細胞術檢測，兩組都取新鮮肝素抗凝骨髓液各50 μL，實驗管加入CXCR5-APC、鼠抗人CD4-FITC單抗各10 μL。對照管加入鼠抗人CD4-FITC、IgG-APC同型對照各10 μL，4 ℃避光孵育30 min，紅細胞裂解液溶血8 min后，1500 rpm/min離心5 min，棄上清，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌并固定、400目濾網(wǎng)過濾，流式細胞儀檢測CD4+CXCR5+IL-21、CD4+CXCR5+細胞含量，并進行比例分析。

1.4統(tǒng)計學方法：選擇SPSS14.0軟件進行分析，計數(shù)數(shù)據(jù)選擇百分比表示，對比采用卡方分析，而計量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差表示，對比采用t檢驗，P＜0.05代表差異顯著。

2　結 果

2.1骨髓象形態(tài)對比：經(jīng)過觀察，觀察組骨髓的胞體、核形、染色質、胞質、巨核細胞等情況與對照組對比差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。見表1。

表1　兩組骨髓象形態(tài)對比（n）

2.2CD4+CXCR5+IL-21+/CD4+CXCR5+細胞比例對比：經(jīng)過觀察，觀察組與對照組骨髓的CD4+CXCR5+IL-21+/CD4+CXCR5+細胞比例分別為（58.21±6.44）%和（14.28±4.44）%，觀察組明顯高于對照組（P ＜0.05）。見表2。

表2　兩組CD4+CXCR5+IL-21+/CD4+CXCR5+細胞比例對比（%，±s）

表2　兩組CD4+CXCR5+IL-21+/CD4+CXCR5+細胞比例對比（%，±s）

組別　例數(shù)　Tfh淋巴細胞比例觀察組　200　58.21±6.44對照組　200　14.28±4.44 P ＜0.05

3　討 論

免疫性血小板減少癥是一種常見的自身免疫性疾病，患兒在臨床上主要表現(xiàn)為出血與外周血的血小板減少等，其發(fā)病原因可能是骨髓巨核細胞生成血小板的數(shù)量減少或外周血小板破壞增多所致。血小板減少癥在早期起病緩慢，進展緩慢，約半數(shù)病例無明顯自覺癥狀；隨著病情的發(fā)展，癥狀輕重取決于貧血、白細胞減少和血小板減少的程度［3］。

目前診斷血小板減少癥主要依賴血象、細胞遺傳學、骨髓細胞形態(tài)學、分子遺傳學、骨髓病理等方法，不過血小板減少癥的發(fā)生發(fā)展與多種機制共同介導，導致患兒其骨髓象與臨床表現(xiàn)的檢測結果也并不全部相同。相關研究表明確診血小板減少癥患者，僅需與臨床表現(xiàn)相符合，并除外血小板與其他的血象異常，就能夠將其診斷［4］。本研究顯示觀察組骨髓的胞體、核形、染色質、胞質、巨核細胞等情況與對照組對比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其中觀察組病例中以紅系病態(tài)造血多見，髓中有核細胞增生大多為活躍或明顯活躍，外周血大多全血細胞減少，骨髓紅系可見幼紅細胞比例的增高或減低，粒系易見核漿發(fā)育失衡、環(huán)形核；核形異常包括淋巴樣小巨核細胞、多核、巨核細胞、小圓核及大單圓核小巨核細胞等。

血小板減少癥是一種免疫介導的血小板過度破壞所致的出血性疾病，B細胞產(chǎn)生自身抗體結合血小板引起其破壞是血小板減少癥發(fā)病的主要原因之一。高表達趨化因子受體5（CXCR5）的CD4+T細胞也被稱為Tfh細胞，在自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。在淋巴組織中經(jīng)抗原刺激后，CXCR5+CIM+T細胞數(shù)量明顯高于其他類型效應T細胞。IL-21是Tfh細胞執(zhí)行效應功能的主要細胞因子，狼瘡樣表現(xiàn)患兒CD4+CXCR5+T細胞的數(shù)量的增加和IL-21表達增強有關［5-6］。本研究顯示觀察組與對照組骨髓的CD4+CXCR5+IL-21+/CD4+CXCR5+細胞比例分別為（58.21±6.44）%和（14.28±4.44）%，觀察組明顯高于對照組，也表明血小板減少癥可涉及Tfh細胞表達的異常。

總之，血小板減少癥患者的骨髓檢測能夠有效反應骨髓象與Tfh細胞異常情況，從而有利于進行疾病判斷，有很好的應用價值。

［1］ 伍星，瞿文，王珺，等.免疫性血小板減少癥125例臨床分析［J］.中國實驗血液學雜志，2011，19（2）:450-454.

［2］ 陳紅，黃玉柱，楊惠泉，等.兒童原發(fā)性免疫性血小板減少癥的臨床分析［J］.中國實用醫(yī)刊，2015，42（11）:67-69.

［3］ 趙麗丹，喬琳，徐東，等.骨髓巨核細胞數(shù)目對系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并嚴重血小板減少癥患者免疫治療反應的預測價值［J］.中華風濕病學雜志，2015，7（23）:455-459.

［4］ Pinto AK，Brien JD，Lam CY，et al.Defining New Therapeutics Using a More Immunocompetent Mouse Model of Antibody-Enhanced Dengue Virus Infection［J］.MBio，2015，6（5）:1316-1315.

［5］ Brandt S，Krauel K，Jaax M，et al.Polyphosphates form antigenic complexes with platelet factor 4 （PF4） and enhance PF4-binding to bacteria［J］.Thromb Haemost，2015，114（6）:1189-1198.

［6］ 唐海平，譚建國.原發(fā)免疫性血小板減少癥患者外周血Th17和Th22及其細胞因子關系研究［J］.海南醫(yī)學院學報，2016，22（2）:144-146.

R558.2

B

1671-8194（2016）22-0091-02