富血小板血漿凝膠聯(lián)合脂肪干細(xì)胞促進(jìn)大鼠創(chuàng)面修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究

金長鑫，吳　瓊，劉　燁，劉　波，劉　衛(wèi)，黃進(jìn)軍

?

·論著·

富血小板血漿凝膠聯(lián)合脂肪干細(xì)胞促進(jìn)大鼠創(chuàng)面修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究

金長鑫1，吳瓊2，劉燁3，劉波4，劉衛(wèi)5，黃進(jìn)軍3

目的探討富血小板血漿(PRP)凝膠聯(lián)合脂肪干細(xì)胞(ADSCs)對(duì)大鼠創(chuàng)面修復(fù)的影響，為其臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。方法體外分離、培養(yǎng)、鑒定大鼠ADSCs。取16只SD大鼠，制備大鼠自體PRP凝膠，采用自身對(duì)照的方法，每只實(shí)驗(yàn)大鼠背部制作4個(gè)1 cm2的正方形皮膚全層缺損創(chuàng)面，分為AP組、A組、P組、O組，分別給予ADSCs+PRP 處理、ADSCs處理、PRP處理以及空白對(duì)照處理，觀察術(shù)后各組創(chuàng)面愈合情況。并于術(shù)后3、5、7、14 d分別隨機(jī)處死4只實(shí)驗(yàn)大鼠，取創(chuàng)面組織，HE染色進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子(CD31)免疫組化分析各時(shí)間點(diǎn)新生血管化情況，天狼猩紅染色對(duì)Ⅰ型膠原含量和Ⅲ型膠原含量進(jìn)行檢測，并對(duì)創(chuàng)面組織的轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)表達(dá)情況進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測。結(jié)果大體觀察AP組和P組較A組和O組結(jié)痂快、創(chuàng)緣收縮也較快；微血管計(jì)數(shù)CD31細(xì)胞陽性表達(dá)率及I型膠原蛋白含量AP組、A組、P組均高于O組，且AP組與O組差異更為顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；創(chuàng)面愈合過程中，AP組創(chuàng)面組織的TGF-β1表達(dá)也明顯高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論ADSCs與PRP凝膠的應(yīng)用能加速新生血管化及增加膠原蛋白合成，可有效加速創(chuàng)面愈合。

脂肪干細(xì)胞；富血小板血漿凝膠；皮膚缺損；創(chuàng)面修復(fù)

戰(zhàn)傷是軍事醫(yī)學(xué)的重點(diǎn)研究對(duì)象，由于戰(zhàn)傷導(dǎo)致的皮膚與軟組織缺損，將直接影響戰(zhàn)斗力和戰(zhàn)士戰(zhàn)后的生活質(zhì)量，是亟待解決的課題之一。脂肪干細(xì)胞(ADSCs)可增加真皮細(xì)胞外基質(zhì)中膠原的合成，促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合[1]；富血小板血漿(PRP)在血管發(fā)生、組織修復(fù)和炎癥過程中也起重要作用，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。本實(shí)驗(yàn)研究通過建立皮膚全層缺損的動(dòng)物模型，觀察應(yīng)用ADSCs和富血小板血漿修復(fù)皮膚全層缺損后創(chuàng)面愈合、組織學(xué)變化，對(duì)創(chuàng)面組織的血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子(CD31)的表達(dá)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的表達(dá)以及I型膠原和Ⅲ型膠原含量進(jìn)行檢測。探討ADSCs和PRP促進(jìn)戰(zhàn)傷創(chuàng)面愈合的機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1主要試劑和設(shè)備DMEM/F12培養(yǎng)基，含EDTA0.25%胰蛋白酶(美國 Hyclone公司)，PBS緩沖液(美國 Hyclone公司)，DMEM溶液，一抗CD31(abcam，ab28364)，二抗Envision，anti-rabbit-HRP(DAKO，K4003)，DAB染色液(DAKO，K5007)，天狼猩紅染色混合液，TRE-Trizol(Invitrogen)， Primers(上海生工)，PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(TaKaRa)，SYBR Premix Ex Taq II(TaKaRa)，CO2培養(yǎng)箱(Heraeus，German)，拍照系統(tǒng)(Olympus，DP71)，高速冷凍離心機(jī)(SIGMA 3K15，德國SIGMA公司)，Real Time PCR儀(CFX96，美國Bio-Rad公司)等。

1.2方法

1.2.1SD大鼠ADSCs體外分離、培養(yǎng)與擴(kuò)增取4周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠,使用水合氯醛(7%，0.3 mL/100 g)腹腔注射麻醉,取兩側(cè)腹股溝脂肪墊組織,用PBS緩沖液反復(fù)漂洗去除組織中的小血管、外包膜和明顯的結(jié)締組織，剪碎至靡狀。0.2%一型膠原酶恒溫消化40～50 min。采用基礎(chǔ)培養(yǎng)液中和一型膠原酶后，以1500 r/min離心10 min(離心機(jī)半徑為15 cm)，棄雜質(zhì)及上清后，沉淀混懸后200目濾網(wǎng)過濾，再以1000 r/min離心5 min,棄上清，含10%FBS的DMEM/F12混懸細(xì)胞后，按細(xì)胞數(shù)1×104～2×104個(gè)/培養(yǎng)瓶接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶中加入3 mL全培，置入37 ℃，5%CO2及飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，48 h換液，后每3～4 d換液一次，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，原代細(xì)胞培養(yǎng)6～7 d后細(xì)胞融合達(dá)80%～90%時(shí)進(jìn)行傳代。細(xì)胞傳代時(shí)棄去原培養(yǎng)液,PBS洗滌1次,以去除血清,加入適量0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA進(jìn)行消化，在倒置顯微鏡下觀察見胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大,細(xì)胞變圓,立即加入適量完全培養(yǎng)基終止消化,用吸管反復(fù)輕柔吹打,將細(xì)胞吹打下來,1000 r/min離心5 min,含10%胎牛血清,1%青、鏈霉素原液的高糖DMEM培養(yǎng)基重懸沉積細(xì)胞,按1傳3的比例進(jìn)行傳代。當(dāng)傳代細(xì)胞生長接近單層匯合達(dá)到70%以上時(shí),可繼續(xù)傳代。

1.2.2ADSCs多能分化及流式細(xì)胞表面標(biāo)記物的鑒定取生長良好的第3代細(xì)胞消化后,以5×104/mL接種于放有玻片的6孔板中，分別加入成脂及成骨分化誘導(dǎo)液培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)分化，每3 d更換誘導(dǎo)培養(yǎng)基1次；成脂誘導(dǎo)分化組進(jìn)行誘導(dǎo)分化處理后2周行油紅O染色倒置顯微鏡下觀察，成骨誘導(dǎo)分化組進(jìn)行誘導(dǎo)分化處理后4 周后行茜素紅染色觀察鑒定。

1.2.3PRP凝膠的制備利用改良Cascade-Esforax法制備PRP[2-4]，用Ca2+激活制成PRP凝膠[5]。7%水合氯醛(0.3 ml/100 g)經(jīng)腹腔內(nèi)注射成功麻醉大鼠后，用裝有0.3 mL 4%枸櫞酸鈉抗凝劑的5 mL注射器連接硬膜外管進(jìn)行頸靜脈插管抽取大鼠靜脈血3 mL，將抽取的靜脈血等分兩份分別以1100g離心10 min，之后分別加入0.15 mL 50 mg/mL氯化鈣激活，靜置后，取出中間層的淡黃色凝膠，即PRP凝膠備用。

1.2.4大鼠皮膚軟組織缺損創(chuàng)面模型的構(gòu)建與分組造模前10 min將ADSCs自培養(yǎng)瓶中消化下來，以DMEM溶液混懸，制成ADSCs為3×106/mL的DMEM混懸液備用。大鼠在提取PRP后，在其背部正中脊柱兩側(cè)相距2 cm處，等距分別設(shè)計(jì)四個(gè)邊長為1 cm的方形創(chuàng)面，全背部用1%碘伏消毒3次后，沿標(biāo)記線全層切除皮膚，形成皮膚軟組織缺損創(chuàng)面，并用硅膠板對(duì)創(chuàng)面邊緣進(jìn)行固定，防止創(chuàng)面愈合早期過度收縮，同一只大鼠背部四個(gè)創(chuàng)面進(jìn)行隨機(jī)分組，AP組為ADSCs+PRP 處理組，A組為ADSCs處理組，P組為PRP處理組，O組為空白對(duì)照組。

1.2.5組織標(biāo)本的制備與處理術(shù)后3、5、7、14 d分別處死四只大鼠，取愈傷組織及其周圍部分組織，使用4%甲醛固定，脫梯度脫水、浸蠟、包埋后制成約5 μm厚的切片。使用HE染色對(duì)愈合后的創(chuàng)面組織進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。使用CD31免疫組化染色，衡量新生微血管密度?？梢暬炕裥秃廷笮湍z原蛋白的比例，使用天狼星紅染色，偏振光下觀察兩種膠原蛋白的比例。I型膠原纖維呈現(xiàn)紅色或黃色，Ⅲ型膠原蛋白呈現(xiàn)綠色。提取各時(shí)間點(diǎn)各組愈傷組織中的核糖核酸(RNA)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測其中TGF-β1的表達(dá)情況。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用單因素方差分析，各組間的兩兩比較采用Bonferroni法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1ADSCs體外誘導(dǎo)多向分化及流式細(xì)胞鑒定第3代細(xì)胞置于培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化2周后細(xì)胞體積增大，胞漿內(nèi)充滿圓形脂滴呈葡萄串狀，這時(shí)進(jìn)行油紅O染色陽性：圓形細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)亮紅色的顆粒，說明細(xì)胞可向脂肪細(xì)胞分化。成骨分化培養(yǎng)基內(nèi)誘導(dǎo)分化4周后，經(jīng)茜素紅染色陽性，可見紅色鈣結(jié)節(jié)，證明成骨誘導(dǎo)后細(xì)胞可向成骨細(xì)胞系分化。流式細(xì)胞分析顯示細(xì)胞表型為CD29、CD90陽性，CD34、CD45陰性，與ADSCs表型相符。見圖1、圖2。

圖1　A:ADSCs體外誘導(dǎo) ADSCs成脂誘導(dǎo)分化，2周后油紅O染色(×200)；B:ADSCs成骨誘導(dǎo)分化，4周后茜素紅染色(×200)

2.2大體觀察結(jié)果實(shí)驗(yàn)第3天，肉眼觀察下可見AP、P組表面可見覆蓋PRP凝膠處形成淡紅色血痂，且該兩組創(chuàng)面較A組、O組干燥； 實(shí)驗(yàn)第7天，肉眼觀察到創(chuàng)面大小、深度AP組

2.3組織學(xué)分析

2.3.1HE染色組織學(xué)分析觀察創(chuàng)面愈合后組織切片，AP組腺體樣結(jié)構(gòu)層次分明，新生血管較多，膠原纖維排列與正常皮膚組織類似；A組腺體樣結(jié)構(gòu)較多，新生血管較 AP組少，膠原纖維排列較AP組紊亂；P組新生毛細(xì)血管較多，腺體樣結(jié)構(gòu)較少，但其膠原纖維排列有序；O組新生血管形成，視野里被紊亂排列的膠原纖維填充，腺體樣組織較少。見圖3。

2.3.2CD31染色觀察微血管密度各組隨時(shí)間的遷移CD31陽性表達(dá)率呈上升趨勢，其中術(shù)后第14天，ADSCs+PRP組與其他3組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖4。

2.3.3膠原蛋白合成分析I型膠原蛋白，在天狼星紅染色過程中被染成紅色或黃色，是各組創(chuàng)面含量最為豐富的膠原蛋白。III型膠原蛋白(未成熟的膠原蛋白、被染成綠色)含量較少。結(jié)果顯示I型膠原含量在14 d內(nèi)隨時(shí)間的遷移而增加，其中3 d時(shí)，除A組與P組組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其余各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，即AP組I型膠原蛋白含量較其余三組高，A組、P組I型膠原蛋白含量均較O組高；5 d時(shí)，除A組與P組組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其余各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，即AP組I型膠原蛋白含量較其余三組高，A組、P組I型膠原蛋白含量均較O組高；7 d，AP組、A組、P組、O組各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，即I型膠原蛋白含量AP組>P組>A組>O組；14 d時(shí)，AP組、A組、P組、O組各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，即I型膠原蛋白含量AP組>A組>P組>O組。見圖5。

圖2　流式細(xì)胞表型鑒定：CD29、CD90陽性，CD34、CD45陰性

A:ADSCs+PRP組；B:PRP組；C:ADSCs組；D:空白對(duì)照組圖3　術(shù)后第14天，各組HE染色(×100)

O組:空白對(duì)照組；A組:ADSCs組；P組:PRP組；AP組:ADSCs+PRP組 圖4　各組各時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面組織的CD31染色(×100)

O組:空白對(duì)照組；A組:ADSCs組;P組:PRP組；AP組:ADSCs+PRP組圖5　各組各時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面組織的天狼猩紅染色(×100)

2.4TGF-β1含量的RT-PCR檢測結(jié)果各組TGF-β1的表達(dá)在術(shù)后第1周內(nèi)均呈上升趨勢， AP組、A組及P組的上升情況高于O組，其中AP組上升更為明顯；在術(shù)后第2周時(shí)TGF-β1的表達(dá)下降，AP組下降較為顯著，與O組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3　討　論

3.1PRP聯(lián)合ADSCs可有效促進(jìn)新生血管再生許多成熟組織中含有干細(xì)胞，用于組織損傷修復(fù)過程。自脂肪組織中分離干細(xì)胞已有十幾年，并且越來越多地用于臨床前和臨床模型，ADSCs可提供有效的血管生成生長因子,包括血管內(nèi)皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、肝細(xì)胞生長因子等，促進(jìn)病灶的新生血管化。大量實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)單一的生長因子不會(huì)促進(jìn)細(xì)胞增殖及細(xì)胞轉(zhuǎn)移，只有當(dāng)多種細(xì)胞因子結(jié)合在一起時(shí)才能發(fā)揮作用，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。而PRP是全血經(jīng)離心后得到的血小板濃縮物，被Ca2+激活后，可釋放大量生長因子，如血小板衍生生長因子(PDFG)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)和類胰島素生長因子1(IGF-1)等[6]。本實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，ADSCs聯(lián)合PRP凝膠使局部創(chuàng)面組織血管化的程度優(yōu)于單純ADSCs組及PRP組。這種差異在我們第2周的研究中更加明顯。值得注意的是，PRP凝膠對(duì)ADSCs在新生血管化方面起著協(xié)同作用，并且可能加強(qiáng)了ADSCs的增殖及對(duì)生長因子的分泌。

3.2PRP聯(lián)合ADSCs可增加膠原蛋白合成皮膚的強(qiáng)度及耐力主要與真皮中膠原蛋白的組成有關(guān)，通常起主要作用的是I型膠原蛋白(85%～95%)，其次是Ⅲ型膠原蛋白(10%～15%)。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)，ADSCs聯(lián)合PRP凝膠組I型膠原蛋白的含量較其他幾組明顯增加。這種差異在第2周時(shí)更為明顯，表明膠原蛋白再生已經(jīng)加速，并形成了高質(zhì)量的瘢痕。之前有研究可以解釋該結(jié)果的產(chǎn)生，ADSCs可通過TGF-β等細(xì)胞因子調(diào)控其旁分泌作用，從而加速成纖維細(xì)胞的遷移和增殖[7-8]。TGF-β是一種多功能蛋白質(zhì)，作用于細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞外基質(zhì)分泌，參與調(diào)控生物體免疫調(diào)節(jié)、血管形成、胚胎發(fā)育、創(chuàng)傷愈合骨的重建等生理過程。其中TGF-β1有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明它可以促進(jìn)傷口愈合和典型肉芽組織形成等[9-10]。亦有實(shí)驗(yàn)證明TGF-β1治療可以提高I、III型膠原mRNA的表達(dá)[11]。所以TGF-β1在治療傷口愈合方面有潛在的應(yīng)用前景。在本實(shí)驗(yàn)中可見在AP組、A組P組及O組TGF-β1的表達(dá)在術(shù)后第1周內(nèi)均呈上升趨勢，且AP組較其他各組增加尤為明顯，而在術(shù)后第 2周時(shí)表達(dá)下降，這一結(jié)果可能和TGF-β1在預(yù)防瘢痕方面有關(guān)。研究認(rèn)為TGF-β1這種細(xì)胞因子的過度表達(dá)可以致瘢痕形成，而在創(chuàng)面愈合后期適當(dāng)?shù)囊种瓶梢詼p少瘢痕的產(chǎn)生[12]。這種現(xiàn)象說明PRP聯(lián)合ADSCs可以通過改變TGF-β1的提前表達(dá)加速創(chuàng)面組織的愈合，同時(shí)后期表達(dá)的下降可以減少瘢痕組織的形成。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，聯(lián)合ADSCs與PRP凝膠的應(yīng)用能加速新生血管化及增加膠原蛋白合成，可有效加速創(chuàng)面愈合。未來的實(shí)驗(yàn)可側(cè)重于如何完整上皮化的研究，從而使這項(xiàng)技術(shù)早日應(yīng)用于臨床。

[1]楊愛珍,文獻(xiàn),張志敏,等.脂肪源性干細(xì)胞的臨床轉(zhuǎn)化研究[J].東南國防醫(yī)藥,2013,15(5):503-507.

[2]Anitua E, Andia I, Ardanza B, et al.Autologous platelets as a source of proteins for healing and tissue regeneration[J]. Thromb Haemost,2004,91(1):4-15.

[3]Azzena B, Mazzoleni F, Abatangelo G, et al. Autologous platelet-rich plasma as an adipocyte in vivo delivery system: case report[J]. Aesth Plast Surg, 2008,32(1):155-158.

[4]Anitua E. Plasma rich in growth factors: preliminary resultsof use in the preparation of future sites for implants[J]. Int J Oral Maxillofac Implants, 1999，14(4)：529-535.

[5]Cervelli V,Gentile P,Scioli MG,et al.Orlandi A application of platelet-rich plasma in plastic surgery: clinical and in vitro evaluation[J].Tissue Eng Part C Methods, 2009, 15(4): 625-634.

[6]Soffer E,Ouhayoun JP,Anagnostou F.Fibrin sealants and platelet preparations in bone and periodontal healing[J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod, 2003, 95(5): 521-528.

[7]Kim WS, Park BS, Sung JH, et al. Wound healing effect of adipose-derived stem cells: A critical role of secretory factors on human dermal fibroblasts[J]. J Dermatol Sci, 2007, 48(1): 15-24.

[8]Kim WS, Park BS, Park SH, et al. Antiwrinkle effect of adipose-derived stem cell: Activation of dermal fibroblast by secretory factors[J]. J Dermatol Sci, 2009, 53(2): 96-102.

[9]Hou Y,Mao Z,Wei X,et al.The roles of TGF-beta1 gene transfer on collagen formation during Achilles tendon healing[J].Biochem Biophys Res Commun,2009,383(2): 235-239.

[10]Hou Y,Mao Z,Wei X,et al.Effects of transforming growth factor-beta1 and vascular endothelial growth factor 165 gene transfer on Achilles tendon healing[J].Matrix Biol,2009,28(6): 324-335.

[11]Kashiwagi K,Mochizuki Y,Yasunaga Y,et al.Effects of transforming growth factor-β1 on the early stages of healing of the achilles tendon in a rat model[J].Scand J Plast Reconstr Surg Hand Surg,2004,38(4): 193-197.

[12]Chang J,Thunder R,Most D,et al.Studies in flexor tendon wound healing:neutralizing antibody to TGF-b1 increases postoperative range of motion[J].Plast Reconstr Surg,2000,105(1): 148-155.

(本文編輯：黃攸生；英文編輯：王建東)

Thereseach of platelet rich plasma gel combined with adipose-derived stem cells in repairing soft tissue wounds in rats

JIN Chang-xin1, WU Qiong2, LIU Ye3,LIUBo4,LIUWei5,HUANGJin-jun3.

1.DepartmentofPlasticSurgery,XijingHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an,Shanxi710032,China; 2.DepartmentofPlasticandReconstructiveSurgery,ZhujiangHospital,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong510282,China; 3.DepartmentofPlasticandAestheticSurgery, 4.DepartmentofInfectionDiseases, 5.DepartmentofGastroenterology, 105HospitalofPLA，Hefei,Anhui230031,China

ObjectiveTo explore the role of ADSCs and PRP in skin defect repairing, and to provide theoretical basis for clinical application. MethodsAdipose tissues from inguinalis fat pad of SD rats were harvested, isolated, cultured, and identified. 16 SD rats were taken, and autologous PRP gel was prepared. 4 square shaped full-thickness skin defect (a=1 cm2) was made on the rat back using self-control method. The wounds were divided into 4 groups randomly, of which group AP was treated with ADSCs and PRP; group A was treated with ADSCs; group P was treated with PRP and group O is blank control group. The wound healing process was observed. HE, sirius red, CD31 stain were observed at 3 d, 5 d,7 d, 14 d after surgery. TGF-beta 1 expression was detected by Rt-PCR in wound tissue. ResultsThe wound contraction of group AP and group P were faster than the group A and O; CD31 positive expression rate and content of type I collagen of microvascular counts in group A, group P and group AP were higher than that of O group. There was significant difference between group AP and group O (P<0.05). In the process of wound healing, the expression of TGF - beta 1 in wound tissue of group AP was significantly higher than the blank control group (P<0.05). ConclusionApplication of ADSCs comnined with PRP gel by means of accelerating new blood vessels and increasing collagen synthesis can effectively accelerate wound healing.

adipose stem cell; platelet-rich plasma gel; skin defects; wound healing

南京軍區(qū)醫(yī)藥科研項(xiàng)目(12MA033)

1. 710032陜西西安，第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院整形外科；2. 510280廣東廣州，南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院整形外科；3. 230031安徽合肥，解放軍105醫(yī)院整形美容外科，4. 感染科,5. 消化科

黃進(jìn)軍，E-mail: surgeonhuangjj@163.com

R641

A

10.3969/j.issn.1672-271X.2016.04.004

2016-02-23；

2016-05-04)

引用格式：金長鑫，吳瓊，劉燁，等.富血小板血漿凝膠聯(lián)合脂肪干細(xì)胞促進(jìn)大鼠創(chuàng)面修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[J].東南國防醫(yī)藥，2016,18(4):349-353.