仙茅配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

謝鳴坤　鄭智慧　梁華倫　徐萬(wàn)幫

（1　廣東省中醫(yī)院藥劑科，廣州　510120；2 廣東省食品藥品檢驗(yàn)所，廣州　510120）

仙茅配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

謝鳴坤1鄭智慧1梁華倫1徐萬(wàn)幫2*

（1廣東省中醫(yī)院藥劑科，廣州510120；2 廣東省食品藥品檢驗(yàn)所，廣州510120）

目的 建立仙茅配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 運(yùn)用薄層色譜法，以仙茅苷為對(duì)照，建立仙茅配方顆粒的薄層鑒別方法。采用高效液相色譜法建立仙茅配方顆粒仙茅苷的含量測(cè)定方法。結(jié)果 薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。高效液相色譜法測(cè)定仙茅苷在0.1404～2.808 μg/ml的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.9998），加樣回收率在97.3%～103.4%，RSD為1.9%（n=6）。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于仙茅配方顆粒的質(zhì)量控制方法。

仙茅配方顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法

中藥配方顆粒是指運(yùn)用現(xiàn)代藥物加工工藝對(duì)傳統(tǒng)中藥材的關(guān)鍵成分進(jìn)行提取、分離以及濃縮，干燥后將有效成分制成顆粒狀，可供使用者直接沖服的顆粒［1］。中藥配方顆粒在保持原有藥物功效及作用的前提下，實(shí)現(xiàn)了藥物便捷使用、順利服用和高效作用，因此，臨床應(yīng)用日益廣泛［2-4］?；诖?，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局為了加強(qiáng)對(duì)中藥配方顆粒的管理，引導(dǎo)該產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，在2015年12月24日頒布了《中藥配方顆粒管理辦法》［5］，在該辦法實(shí)施后，相信中藥配方顆粒將迎來(lái)跨越式的發(fā)展。

仙茅為石蒜科多年生草本植物仙茅的干燥根莖［6］。其味辛，性熱、有毒。具有消散癰腫、補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛寒濕、益精血等功效。常用于癰疽腫痛、腎陽(yáng)不足、陽(yáng)痿精冷、筋骨酸軟、腰膝冷痹、陽(yáng)虛冷瀉等癥［7］。仙茅的應(yīng)用極為廣泛，是常用中藥材之一，本文參照《中國(guó)藥典》仙茅項(xiàng)下的要求，對(duì)仙茅配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，旨在為仙茅配方顆粒的質(zhì)量控制提供技術(shù)支撐。

1　儀器和試劑

1.1儀器 儀器薄層色譜自動(dòng)點(diǎn)樣儀 （CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER4）、薄層自動(dòng)成像儀 （CAMAG REPROSTAR 3），預(yù)制硅膠G薄層板，購(gòu)于Merck公司、青島海洋化工廠分廠、煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所及國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其它試劑均為分析純。高效液相色譜儀:Aglient 1260，SHIMADZU（LC-20AT）；色譜柱:資生堂 MGⅡ（5 μm，150 mm×4.6 mm），phenomenex luna100A（5 μm，150 mm×4.6 mm）。電子天平:Sartorius-CP225D，超聲波清洗儀: E-ELMA （TI-H15 MF3）。

1.2試劑 仙茅苷對(duì)照品，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所 （供含量測(cè)定用，編號(hào)110771-201105，含量為89.2%）、仙茅配方顆粒 （自編1，2，3）；仙茅配方顆粒陰性（仙茅配方顆粒輔料麥芽糊精組成）；乙腈為色譜純；水為實(shí)驗(yàn)室自制高純水，其余試劑均為分析純。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1薄層鑒別 參照《中國(guó)藥典》2010年版一部94頁(yè)仙茅【鑒別】項(xiàng)下的方法，稍微修訂，在此基礎(chǔ)上制定了以仙茅苷對(duì)照品為對(duì)照的仙茅配方顆粒的薄層色譜鑒別方法，具體操作如下:取本品適量，研細(xì)，取0.5 g，加乙醇20 ml，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? ml使溶解，取上清液作為供試品溶液。另取仙茅苷對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10∶1∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%鐵氰化鉀溶液-2%三氯化鐵溶液（1∶1）的混合溶液。

2.2檢查項(xiàng) 水分、溶化性、粒度、浸出物（按熱浸法，以乙醇為溶劑，進(jìn)行提?。┑葏⒄罩袊?guó)藥典2010年版一部附錄有關(guān)顆粒劑項(xiàng)下執(zhí)行。

2.3含量測(cè)定 參照《中國(guó)藥典》2010年版一部94頁(yè)仙茅含量測(cè)定方法，制定仙茅配方顆粒中仙茅苷的含量測(cè)定方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，認(rèn)為該方法基本可行。

2.3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液（21∶79）流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為285 nm。理論板數(shù)按仙茅苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備 將仙茅苷置五氧化二磷真空干燥箱中，室溫干燥過(guò)夜。取仙茅苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，搖勻，備用。

2.3.3供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率200 W，頻率50 kHz）30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液、搖勻備用。

2.3.4陰性溶液的制備 取陰性樣品適量，研細(xì)，取約1 g，同2.2.3，制備陰性溶液

3　結(jié)果與討論

3.1薄層鑒別 參照2.1的實(shí)驗(yàn)步驟，在展開(kāi)缸中飽和15 min后，在室溫條件下展開(kāi)（T=25℃，RH=68%），當(dāng)展開(kāi)至約9 cm時(shí)取出，晾干，噴以2%鐵氰化鉀溶液-2%三氯化鐵溶液（1∶1）的混合溶液。此時(shí)，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)，色譜圖如下，見(jiàn)圖1。

圖1　仙茅配方顆粒薄層鑒別色譜圖

由圖1可知，薄層色譜展開(kāi)斑點(diǎn)分離度較好，Rf在0.3～0.8之間，陰性對(duì)照無(wú)干擾，因此，方法可行。

同時(shí)，由于該方法直接沿用《中國(guó)藥典》 （一部）2010年版94頁(yè)所記載方法，因此只對(duì)其適應(yīng)性做考察，不再做方法學(xué)驗(yàn)證。

3.2仙茅配方顆粒檢查

3.2.1水分 按照《中國(guó)藥典》2010年版附錄IXH水分測(cè)定項(xiàng)中烘干法測(cè)定。取仙茅配方顆粒（自編1），平行2份，測(cè)得平均含水量為3.6%，符合2010版藥典一部中關(guān)于顆粒劑的要求。

3.2.2溶化性 取仙茅配方顆粒一包，加熱水200 mL攪拌5 min，觀察到顆粒全部溶化，無(wú)焦屑等異物，說(shuō)明該顆粒的溶化性符合要求。

3.2.3粒度 按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄XI B粒度測(cè)定第二法，取仙茅配方顆粒30 g，稱定質(zhì)量，置規(guī)定的藥篩中，保持水平狀態(tài)過(guò)篩，左右往返，篩動(dòng)3 min，不能通過(guò)一號(hào)篩和能通過(guò)五號(hào)篩的顆粒為1.93 g（不超過(guò)巧%）。

3.2.4浸出物 參照《中國(guó)藥典》附錄要求，采用乙醇為溶劑，用熱浸法，測(cè)得三份浸出物的數(shù)據(jù)如下

表1　仙茅配方顆粒浸出物

從表1可以看出，所得三批仙茅苷的浸出物的平均值均接近30%，比仙茅藥材的浸出物高。

3.3仙茅苷含量測(cè)定

3.3.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（專屬性試驗(yàn)）參照《中國(guó)藥典》2010年版一部94頁(yè)仙茅含量測(cè)定方法和2.3的實(shí)驗(yàn)步驟，取供試品，對(duì)照品和陰性溶液各10滋l注入液相色譜儀，記錄色譜圖。如圖2、3、4。

圖2　仙茅苷對(duì)照品圖譜

圖3　仙茅配方顆粒（自編3）圖譜

圖4　仙茅陰性對(duì)照?qǐng)D譜

從圖2～3可以看出，仙茅苷和樣品 （自編3）中其它相鄰組分色譜峰可達(dá)到基線分離，仙茅苷與相鄰色譜峰的分離度大于1.5，按仙茅苷峰計(jì)算，此時(shí)理論板數(shù)為11771，大于3000，符合《中國(guó)藥典》所規(guī)定的要求。

3.2.2提取方法的考察 取經(jīng)粉碎后的本品約1.0 g（自編1），采取超聲、冷浸、回流不同提取方式，按2.3.3的處理方式，分別提取60 min。精密吸取各供試液10滋l，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，得峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　不同提取方法的比較結(jié)果表

從表2可以看出，三種提取方式結(jié)果相差不大，但冷浸方式相對(duì)含量偏低，可能與冷浸過(guò)程中提取不完全有關(guān)，回流提取操作相對(duì)繁瑣且能耗較大，而超聲簡(jiǎn)便、迅速且無(wú)污染損失小，因此采用超聲提取方法。

3.2.3提取時(shí)間的考察 取經(jīng)粉碎后本品1.0 g（自編1），精密稱定，照2.3.3的處理方式，超聲不同時(shí)間。精密吸取各供試液10滋l，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，得峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　不同提取時(shí)間的比較結(jié)果表

從表3可以看出，超聲30 min后，仙茅苷的有效成分基本提取完畢，因此，本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)選擇超聲30 min為提取時(shí)間。

3.2.4提取溶劑的考察 取經(jīng)粉碎后本品1.0 g（自編1），精密稱定，照2.3.3的處理方式，分別精密加入70%的甲醇、乙醇和甲醇20 ml，并分別用相應(yīng)的溶液補(bǔ)足減失重量。精密吸取各供試液10滋l，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，得峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　不同提取溶劑的比較結(jié)果表

從表4可以看出不同溶劑提取結(jié)果基本一致，但在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)乙醇提取的樣品雜質(zhì)峰相對(duì)較多，可能與仙茅中其他成分易溶于乙醇的物理性質(zhì)有關(guān)，故本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用甲醇作為仙茅配方顆粒的提取溶劑。

3.2.5線性關(guān)系考察 分別精密吸取仙茅苷系列對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以仙茅苷的峰面積值（y）為縱坐標(biāo)，以仙茅苷的進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)，計(jì)算得回歸方程為y=556.8x+7.0876，r2= 0.9998，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5　峰面積積分值與進(jìn)樣濃度的關(guān)系

從表5可知，仙茅苷進(jìn)樣量在0.10029～2.00571 mg/ ml范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

3.2.6精密度 精密吸取仙茅苷對(duì)照品溶液（（1.00286 mg/m）l10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定仙茅苷峰面積積分值，計(jì)算RSD，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6　精密度試驗(yàn)結(jié)果

從表6可以看出，采用上述方法，測(cè)定仙茅苷的峰面積，精密度良好，RSD為0.95%，小于2.0%，符合《中國(guó)藥典》的要求。

3.2.7中間精密度的考察 為了考察不同操作人員在上述實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，本實(shí)驗(yàn)分別由本實(shí)驗(yàn)室2名實(shí)驗(yàn)人員分別取樣（自編1）1份，按2.3的操作。分別在安捷倫1260高效液相色譜儀和島津LC-20AT上測(cè)定仙茅苷峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)下表7。

表7　中間精密度試驗(yàn)結(jié)果

從表7可以看出，該方法在不同實(shí)驗(yàn)者和不同儀器上測(cè)試結(jié)果穩(wěn)定，可靠，說(shuō)明該方法的中間精密度良好。

3.2.8日間精密度（穩(wěn)定性試驗(yàn)）為了考察取同一批號(hào)樣品（自編1），將供試品溶液放冰箱保存，每隔一段時(shí)間進(jìn)樣一次，共測(cè)定48 h，分別進(jìn)樣10μl，測(cè)定樣品中仙茅苷峰面積積分值，計(jì)算RSD，結(jié)果見(jiàn)表8。

表8　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表

從表8可以看出，仙茅苷在冰箱中保存，48 h內(nèi)基本穩(wěn)定，所測(cè)得峰面積大小值的RSD為0.97%，能滿足質(zhì)量控制的基本要求，不過(guò)，盡管仙茅苷在冰箱中保存比較穩(wěn)定，仍建議大家在較短時(shí)間內(nèi)盡快完成測(cè)試，以防其他因素引起仙茅苷的降解而導(dǎo)致不必要的誤差。

3.2.9重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)（自編1）仙茅配方顆粒，平行進(jìn)樣6次，記錄仙茅苷峰面積積分值，計(jì)算含量，計(jì)算RSD，結(jié)果見(jiàn)表9。

表9　重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果表

從表9可以看出，儀器精密度良好，所測(cè)得的重復(fù)性良好，該批號(hào)仙茅配方顆粒中仙茅苷的平均含量為1.37 mg/g，其中RSD為0.5%。

3.2.10回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品（自編1，含量為1.37 mg/g）0.5 g，精密稱定，共6份，精密稱定，分別精密加入仙茅苷對(duì)照品溶液（0.10029 mg/m）l7 ml，按正文供試品溶液制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率，RSD，結(jié)果見(jiàn)表10。

表10　仙茅苷配方顆?；厥章试囼?yàn)

從表10可以看出，采用該方法所得平均回收率在97.3%～103.4%之間，RSD為1.9%，樣品回收率良好。

3.2.11樣品測(cè)定 取樣品3批，每批約1.0 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制成供試液，分別進(jìn)樣10 μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算仙茅苷含量，結(jié)果見(jiàn)表11。

表11　樣品測(cè)定結(jié)果

從表11可以看出，3批仙茅配方顆粒中仙茅苷的含量基本相近，所測(cè)試同一批號(hào)的2份樣品結(jié)果接近。

4　結(jié)論

通過(guò)對(duì)上述實(shí)驗(yàn)可知，仙茅配方顆粒是通過(guò)對(duì)仙茅藥材進(jìn)行提取后，經(jīng)多方面處理，加入麥芽糊精所制得的新劑型，具有攜帶方便，使用便利等諸多優(yōu)點(diǎn)，其主要成分上和原材料基本一致。

在本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究中，考察了薄層色譜，各檢查項(xiàng)，同時(shí)建立了高效液相色譜法測(cè)定仙茅配方顆粒中仙茅苷含量的測(cè)定方法，通過(guò)方法學(xué)考察，方法可行，結(jié)果準(zhǔn)確，可以為仙茅配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供技術(shù)支撐，但是，在本實(shí)驗(yàn)中所涉及的樣品批次偏少，無(wú)法制定合理的限度標(biāo)準(zhǔn)。因此，在實(shí)際大規(guī)模生產(chǎn)中，有必要多積累數(shù)據(jù)，建立合理的限度標(biāo)準(zhǔn)，以期到達(dá)合理的質(zhì)量控制。

［1］陳昭，畢曉黎，邱宏聰，等.中藥配方顆粒劑質(zhì)量控制研究現(xiàn)狀及展望［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2013，22（20）:11-13.

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［3］王金鳳，張欽德.中藥配方顆粒藥效學(xué)研究進(jìn)展［J］中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2013，20（8）:110-112.

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［5］國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于征求《中藥配方顆粒管理辦法（征求意見(jiàn)稿）》意見(jiàn)的公告（2015年第283號(hào)）http://www.sda.gov.cn/WS01/CL1037/ 140101.html

［6］楊婉梅，楊永紅.中國(guó)藥用植物仙茅開(kāi)發(fā)利用綜述［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2015（8）:110.

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Study on the Quality Standard of Rhizoma Curculigin is Formula Granule

XIE Mingkun1，ZHENG Zhihui1，LIANG Hualun1，XU Wanbang2
（1.Department of Pharmacy，Guangdong Provincial Hospital of TCM，Guangzhou 510120，China；2.Guangdong Institute of Drug Control，Guangzhou 510120，China）

Objective To establish a quality standard of Rhizoma curculiginis f ormula granule（RCFG）.Methods A TLC identification method was established，and curculigoside by HPLC of RCFG was determined.Results TLC were clear，and the spots of the samples were in the same position as the control samples.High performance liquid chromatography was used to determine curculigoside.The linear relationship from 0.1404 to 2.808 μg/ml is good（r=0.9999）.The average recovery rate was 100.40%，and RSD was 0.78% （n=6）.Conclusion The method is simple，accurate and reproducible，and can be used for the quality control method of Rhizoma Curculigini.

Rhizoma Curculigini formula granule；quality standard；TLC；HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.13.060

1672-2779（2016）-13-0130-05

wbxu@163.com

（本文編輯:李海燕 本文校對(duì):黃桂紅2016-04-15）