國內(nèi)子宮肌瘤動物模型造模方法近況研究※

呂明圣　王瑢?！堃妭ァW波（北京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，北京　100029）

國內(nèi)子宮肌瘤動物模型造模方法近況研究※

呂明圣王瑢睿張見偉湯軼波*
（北京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，北京100029）

目的 搜集文獻(xiàn)，從實驗動物、造模方式、具體使用藥物及頻率、造模時間等角度比較，從中選擇出最優(yōu)化的子宮肌瘤造模方法。方法 以CNKI為檢索工具，檢索國內(nèi)2011—2015年全文中包含“子宮肌瘤”“造?！被颉白訉m肌瘤”“模型”的期刊文章，篩選到相關(guān)文章44篇（4篇為綜述），對以上文章進(jìn)行資料匯總比較。結(jié)論 實驗動物多選用SD大鼠，造模方式多采用雌孕激素雙模法，雌激素選用苯甲酸雌二醇或己烯雌酚（常用劑量0.02mg/只，3次/周，給藥16周），孕激素選用黃體酮（常用劑量1 mg/只，1次/周，給藥4周），給藥方式多為肌注。

子宮肌瘤；動物模型；綜述；癥瘕

子宮肌瘤是女性生殖器官最常見的良性腫瘤，好發(fā)于育齡女性，其發(fā)病原因至今仍不明確，可能與女性體內(nèi)的性激素 （雌激素、孕激素）水平高有一定相關(guān)性［1］。目前對子宮肌瘤的治療以手術(shù)切除為根治方法，但對于不符合手術(shù)條件或有生育需求的患者，藥物控制仍為首選。為了明確子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)制及篩選有效治療藥物，常需借助動物模型。本研究以CNKI為檢索工具，檢索國內(nèi)2011—2015年全文中包含“子宮肌瘤”“造?！被颉白訉m肌瘤”“模型”的期刊文章，經(jīng)過篩選得到相關(guān)文章44篇 （4篇為綜述［2-5］）。筆者對以上相關(guān)文章中動物模型的造模方法等情況進(jìn)行比較匯總，以期學(xué)界同行共同探討研究。

1　實驗動物的選取

除去綜述外的40例報道，共有25例采用SD大鼠造模 （62.5%），8例采用豚鼠，6例采用Wistar大鼠，此外還有人采用CB-17Scid小鼠 （1例）。采用SD大鼠造模的25例報道中，大鼠體重分布在180～220 g的最多 （56%）。其余實驗動物高頻體重分布區(qū)間詳見表1。

表1　不同實驗動物高頻體重分布區(qū)間　?。╣）

2　造模方法

40例報道中有3例為造模方式的優(yōu)化比較研究。賈志玲等［6］以外源性激素雙模法建立模型，分空白對照組，高頻率注射組 （每天肌注乙烯雌酚0.04 mg/只及黃體酮1.0 mg/只），中頻率注射組 （每天肌注乙烯雌酚0.04 mg/只，每周3次肌注黃體酮1.0 mg/只），低頻率注射組 （隔日肌注乙烯雌酚0.04 mg/只，每周1次肌注黃體酮1.0 mg/只），連續(xù)給藥5周，得出結(jié)論中頻率注射組造模效果較好。王占利等［7］將大鼠分為短期對照組、短期模型組、長期對照組、長期模型組，對照組和模型組除注射試劑不同外無其他差異。短期模型組腹腔注射苯甲酸雌二醇0.5 μg/（g·d），連續(xù)25 d后改為腹腔注射黃體酮4 μg/（g·d），連續(xù)5 d；長期模型組每周3次肌注苯甲酸雌二醇0.5 μg/g，12周后加每周兩次肌注黃體酮5 μg/g，連續(xù)4周，最終得出結(jié)論長期模型組效果更佳。陳海剛等［8］從給藥量和給藥周期進(jìn)行分組研究，實驗分200 μg模型組 （每周2次肌注雌二醇200 μg/只）；300 μg模型組 （每周2次肌注雌二醇300 μg/只）及正常對照組，并于實驗8周及10周分別處死大鼠以觀察造模情況，結(jié)果顯示低劑量組與高劑量組平均肌瘤形成率相近，無統(tǒng)計學(xué)差異，但高劑量組大鼠死亡時間均早于低劑量組；給藥8周與10周肌瘤形成率亦無統(tǒng)計學(xué)差異。綜上，低劑量8周給藥造模效果更佳。

除此之外的37例報道，大抵選用以下三種造模方式：雌激素誘導(dǎo)單模法 （2例），雌孕激素誘導(dǎo)雙模法（25例），去勢加激素誘導(dǎo)法 （9例），此外還有以異種移植人體子宮肌瘤細(xì)胞加雌孕激素誘導(dǎo)的方法造模，術(shù)后第4周處死動物，其子宮形態(tài)及病理切片均提示造模成功［9］。

雌激素的選擇以苯甲酸雌二醇及己烯雌酚為主，給藥方式多取大鼠腿部肌肉注射 （61%），也有報道采用皮下注射（20%）、腹腔注射（11%）和灌胃（8%）的方式。常用劑量為0.2 mg/只，但對于長期給藥造模的大鼠，給藥量應(yīng)隨其體重變化而調(diào)整，常選劑量為0.05 mg/100 g，詳見表2。給藥頻率以3次/周及隔日給藥居多，詳見表3。給藥時間多為16周及20周，詳見表4。

孕激素的選擇以黃體酮為主，也有個別案例選用安宮黃體酮 （2例）［10-11］。與雌激素相同，肌肉注射給藥占多數(shù)。常選劑量為1 mg/只 （詳見表5），給藥頻率以2次/周和1次/周居多 （詳見表6），給藥時間多為4周 （詳見表7）。

此外，在雌孕激素誘導(dǎo)雙模法造模的25例中，23例雌孕激素給藥時間重疊；去勢加激素法的9例中，8例采用摘除卵巢并術(shù)后皮下注射雌激素的方式造模，1例采用摘除卵巢加術(shù)后肌注雌孕激素的方式造模［12］。

3　討論

子宮肌瘤是婦科常見病，近年來對此病的關(guān)注度呈上升趨勢。在動物實驗中，如何成功有效的構(gòu)建子宮肌瘤模型是最基礎(chǔ)也是最重要的。筆者在對資料匯總比較的過程中也發(fā)現(xiàn)了一些問題值得共同探討：

（1）實驗方法的描述欠詳細(xì)

在筆者搜集的40篇文獻(xiàn)中，有7篇未能詳細(xì)描述給藥周期，9篇未能描述給藥頻率，1篇未能準(zhǔn)確描述藥物濃度，這給后續(xù)研究者的重復(fù)試驗造成了一定困擾。此外在描述給藥頻率時，應(yīng)明確每周注射藥物的具體時間，而不應(yīng)僅僅以3次/周或隔日給藥模糊處理。在描述藥物名稱時更應(yīng)嚴(yán)謹(jǐn)，避免將己烯雌酚誤寫作乙烯雌酚或已烯雌酚。

（2）探討何種造模方式更佳的文章較少

20世紀(jì)80年代，F(xiàn)ujii等［13］發(fā)現(xiàn)雌孕激素共同作用下可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生多發(fā)性結(jié)節(jié)，近年來學(xué)界多采用此類辦法構(gòu)建子宮肌瘤模型，但對具體給藥方法的討論較少。筆者在搜集近五年資料時發(fā)現(xiàn)，不同學(xué)者采用的造模方法相差較大，僅孕激素的給藥時間就有13種，這給相關(guān)研究者在選擇造模方式上造成一定困惑。賈志玲［6］、王占利［7］、陳海剛［8］分別從給藥頻率、給藥時間和給藥濃度的角度實驗探究更佳的造模方法，獲得一些成果，希望能有更多此類研究。

表2　雌激素給藥劑量

表3　雌激素給藥頻率

表4　雌激素給藥時間

表5　孕激素給藥劑量

表6　孕激素給藥頻率

表7　孕激素給藥時間

（3）基于數(shù)據(jù)的最佳激素誘導(dǎo)動物子宮肌瘤造模方法

筆者通過對文獻(xiàn)資料的匯總比較，認(rèn)為以下造模方法可供參考：動物選用體重180～220 g的SD大鼠，給藥方式采用雌孕激素雙模法，每周3次肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液，用藥劑量為0.02 mg/只，給藥16周；在第13周起每周加用一次肌肉注射黃體酮注射液，用藥劑量為1 mg/只，給藥4周。實驗者可在第17周取材，判斷造模是否成功。

除本文提到的激素誘導(dǎo)法、去勢加激素誘導(dǎo)法、異種移植子宮肌瘤細(xì)胞法之外，子宮肌瘤的造模方式還有很多，如自發(fā)性子宮肌瘤動物模型、免疫缺陷動物移植性子宮肌瘤模型等［14-15］，但國內(nèi)報道較少。

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Recent Review of Establishing Animal Mod of Hysteromyoma in China

LYU Mingsheng，WANG Rongrui，ZHANG Jianwei，TANG Yibo*
（School of the First Clinical Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Objective To choose the optimal model of establishing hysteromyoma animal mode by collecting and comparing the literatures which include experimental animal，the way of modeling，specific drugs，the frequency and modeling time.Methods Collecting articles including"hysteromyoma""establishing model"or"hysteromyoma""modeling"from 2011 to 2015 in China by CNKI，through screening，44 related articles were selected（4 of them are overview），and these elements mentioned above from the related articles were compared.Conclusion Sprauge Dawley rats are widely used as the experimental animal，the most common way of modeling is a dual model of estrogen and progestin，estradiol benzoate or diethylstilbestrol is widely used as the estrogen（the usual dose:0.02mg for one rat，3 times a week，16 weeks），progesterone is widely used as the progestin（the usual dose:1mg for one rat，1 time a week，4 weeks），and intramuscular injection is widely used as the administration pathway.

hysteromyoma；animal experiment；review；zhengjia

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.16.063

1672-2779（2016）-16-0146-03

??張文娟 本文校對：閆麗強(qiáng)

2016-03-08）

北京市大學(xué)生科學(xué)研究與創(chuàng)業(yè)行動計劃項目（No：BJGJ1406）

souptyb@163.com