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    N rf2/ARE通路介導(dǎo)右美托咪定減輕肢體缺血/再灌注損傷中的作用*

    2016-09-15 06:56:58袁培根薛彬彬趙喜越包財(cái)盈林麗娜
    關(guān)鍵詞:腓腸肌骨骼肌咪定

    袁培根,薛彬彬,林 碧,趙喜越,周 森,胡 一,包財(cái)盈,林麗娜

    N rf2/ARE通路介導(dǎo)右美托咪定減輕肢體缺血/再灌注損傷中的作用*

    袁培根,薛彬彬,林 碧,趙喜越,周 森,胡 一,包財(cái)盈,林麗娜△

    (溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 ,浙江 溫州325000)

    目的:觀察Nrf2/ARE通路在右美托咪定(DEX)預(yù)處理減輕大鼠肢體缺血/再灌注損傷中的作用。方法: 28只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組(n=7):假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(I/R組)、I/R+右美托咪定預(yù)處理組(DEX組)、I/R+DEX+阿替美唑組(Atip組)。Atip組在麻醉后腹腔一次性給予Atip(250μg/kg)和DEX(25μg/ kg),Sham組和I/R組在麻醉后腹腔給予相應(yīng)體積生理鹽水 ,DEX組給予相應(yīng)體積DEX和生理鹽水,30min后單側(cè)股部切口,無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉股動(dòng)脈,側(cè)支循環(huán)用橡皮筋以恒定張力結(jié)扎,缺血3 h后去除動(dòng)脈夾及橡皮筋,開放2 h后,取大鼠血清測(cè)乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK);取部分腓腸肌,測(cè)量丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及Western blot檢測(cè)胞核核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)、胞漿HO-1蛋白 ;免疫組化檢測(cè)胞核Nrf2、胞漿HO-1蛋白和光鏡觀察骨骼肌形態(tài);同時(shí)切取少量腓腸肌進(jìn)行濕干比檢測(cè)。結(jié)果:與Sham組相比,I/R組濕干比、MDA、LDH、CK、Nrf2、HO-1蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.05),SOD活性顯著降低(P<0.05);與I/R組相比 ,DEX組濕干比、MDA、LDH、CK明顯降低(P<0.05),SOD、Nrf2、HO-1蛋白表達(dá)顯著增多(P<0.05);與DEX組相比,Atip恰能扭轉(zhuǎn)DEX的這種作用,Atip組各指標(biāo)與DEX組有顯著差異(P<0.05)。結(jié)論:Nrf2蛋白存在于大鼠的骨骼肌中并且DEX可以通過α2受體上調(diào)核內(nèi)Nrf2水平,使Nrf2下游的HO-1保護(hù)蛋白增多,起到抗氧化的作用。

    缺血/再灌注損傷;氧化應(yīng)激;核因子E2相關(guān)因子2;右美托咪定;大鼠

    【DOI】10.13459/j.cnki.cjap.2016.03.016

    肢體缺血再灌注損傷(leg ischemia/reperfusion, LI/R)在臨床上比較常見,如腹主動(dòng)脈手術(shù)、斷肢再植、遠(yuǎn)端血管重建術(shù)以及長時(shí)間應(yīng)用止血帶等都會(huì)造成一定程度的LI/R[1,2]。眾所周知,恢復(fù)缺血組織的血流灌注是必要的措施,然而隨后產(chǎn)生的這種再灌注損傷不容忽視[3]。因此,尋找有效的治療手段來預(yù)防或減輕缺血再灌注損傷具有重要意義。

    右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)是一種新型的高選擇性α2受體激動(dòng)藥,除在抗交感和鎮(zhèn)靜方面的優(yōu)勢(shì)外 ,近年已有報(bào)道證實(shí)在心[4]、腎[5]、肺[6]等重要器官的缺血再灌注損傷中具有保護(hù)作用。并且DEX對(duì)心[7]和腎[8]的保護(hù)作用與Nrf2/ARE通路有著密切的關(guān)系 ,雖然Nrf2自身無抗氧化的作用[9],但Nrf2可以啟動(dòng)抗氧化因子來調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激反應(yīng)(oxidative stress response,ROS)從而達(dá)到器官保護(hù)的作用。阿替美唑(atipamezole,Atip)為α2受體的拮抗劑,能夠阻斷DEX通過α2發(fā)揮作用,使DEX的藥理作用消失、來驗(yàn)證DEX與α2受體的關(guān)系。因此,我們建立缺血再灌注模型,驗(yàn)證DEX減輕LI/R的作用是通過Nrf2/ARE通路發(fā)揮效能的。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    健康成年雄性SD大鼠28只,SPF級(jí),體重280 ~320 g,由溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

    1.2 主要儀器及試劑

    低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀(Thermo公司);垂直電泳系統(tǒng)(BIO-RAD);顯微鏡(日本Olympus);免疫組化試劑盒(福州邁新生物科技有限公司);肌酸激酶(creatine kinase,CK)試劑盒、乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)試劑盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)試劑盒(南京建成生物工程研究所);胞漿胞核蛋白提取試劑盒(普利萊基因技術(shù)有限公司);小鼠抗大鼠Nrf2單克隆抗體、兔抗大鼠HO-1單克隆抗體、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔二抗IgG、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗小鼠二抗 IgG(英國Abcam公司);核內(nèi)參 TBP和胞漿內(nèi)參 β-action、(Bioworld Technology,Inc);BCA Protein Assay Kit (Thermo公司);右美托咪定注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)。

    1.3 動(dòng)物模型的建立與分組

    實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為四組(n=7):假手術(shù)組(Sham組)、肢體缺血再灌注組(I/R組)、I/R+右美托咪定預(yù)處理組(DEX組)、I/R+右美托咪定+阿替美唑預(yù)處理組(Atip組)。Atip組:缺血前30 min同時(shí)腹腔注射阿替美唑(250μg/kg)和右美托咪定(25μg/kg);其它3組在相同時(shí)間點(diǎn)給予相應(yīng)DEX或者相應(yīng)體積生理鹽水。取SPF級(jí)大鼠稱重,25%的烏拉坦和10%的水合氯醛1∶1混合液5ml/kg腹腔注射麻醉,待大鼠眼睫毛反射和刺激下肢反射消失后,右下肢股部切口分離股動(dòng)、靜脈,用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉,穿過動(dòng)靜脈用橡皮筋以恒定張力環(huán)扎該側(cè)肢體,Sham組僅行股動(dòng)靜脈分離術(shù)不夾閉。觀察到大鼠該側(cè)肢體由紅潤色變成暗紫色,說明缺血成功,夾閉3 h后松開動(dòng)脈夾及橡皮筋恢復(fù)血供,開放2 h后將大鼠取血致死并迅速取骨骼肌留作檢測(cè)。

    1.4 腓腸肌濕/干重比值(W/D)測(cè)定

    切取腓腸肌,即刻稱取濕重,然后置于55℃恒溫干燥箱中至恒重即為干重,用濕重與干重的比值來反應(yīng)腓腸肌的水腫程度。

    1.5 HE染色觀察骨骼肌形態(tài)

    腓腸肌置于10%多聚甲醛中固定24 h,常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋、切片,蘇木精-伊紅(hematoxylineosin staining,HE)染色,光鏡下觀察腓腸肌組織形態(tài)變化。

    1.6 骨骼肌MDA/SOD檢測(cè)

    準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量體積比加入9倍的生理鹽水制成10%的組織勻漿,2 500 r/min,離心10 min,取上清并分成2份待測(cè),其中用于SOD檢測(cè)的一份再用生理鹽水稀釋20倍,取樣50μl測(cè)定。

    1.7 血清LDH、CK檢測(cè)

    將大鼠血漿37℃水浴5min后,3 000 r/min、4℃離心后取上清,按照試劑盒說明書檢測(cè)。

    1.8 Western blot檢測(cè)腓腸肌Nrf2和HO-1的蛋白表達(dá)

    依照試劑盒說明書分別提取胞漿和胞核蛋白,用BCA法測(cè)定各自濃度。蛋白在10%SDS-PAGE中室溫電泳分離,Nrf2(300 mA、70 min)、HO-1(300 mA、50min)濕轉(zhuǎn)至PVDF膜上,5%脫脂奶粉室溫封閉2 h,分別加Nrf2(稀釋度1∶2 000)、HO-1(稀釋度1 ∶500)、β-action(稀釋度1∶5 000)和TBP(稀釋度1∶500)一抗,4℃孵育過夜,TBST洗膜3次,每次10 min,加入生物素標(biāo)記的相應(yīng)二抗室溫孵育1 h,TBST洗膜3次,每次10 min,ECL化學(xué)發(fā)光法覆蓋條帶,暗室中顯影、定影,將膠片沖洗后晾干。膠片掃描后,用Image J測(cè)定各目的條帶的吸光度(A)值,并以目的蛋白和相應(yīng)內(nèi)參的吸光度值比值表示目的條帶相對(duì)強(qiáng)度。

    1.9 免疫組化檢測(cè)腓腸肌Nrf2和HO-1的蛋白含量表達(dá)

    石蠟切片常規(guī)脫蠟水化,3%H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶,抗原修復(fù),血清封閉,滴加Nrf2和HO-1一抗及酶標(biāo)記二抗,孵育,DAB顯色,蘇木素輕度復(fù)染,脫水透明封片。顯微鏡下觀察陽性顯色為棕黃色。陰性對(duì)照以PBS代替一抗。每只動(dòng)物各選2張切片分析,隨機(jī)選取互不重疊視野5個(gè),在400倍顯微鏡下觀察拍照。胞漿HO-1蛋白應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0軟件進(jìn)行光密度量化分析;胞核Nrf2蛋白進(jìn)行陽性細(xì)胞評(píng)分:陽性細(xì)胞數(shù)<5%為0分;陽性細(xì)胞數(shù)5%~25%為1分;陽性細(xì)胞數(shù)26%~50% 為2分;陽性細(xì)胞數(shù)51%~75%為3分;陽性細(xì)胞數(shù)>75%為4分。

    1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 20統(tǒng)計(jì)軟件處理,計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。組間比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA),方差齊則采用LSD法進(jìn)行兩兩比較,方差不齊者采用Dunnet't檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果

    2.1 各組骨骼肌濕/干重的比值

    Sham組濕干重比值較?。慌cSham組比較,I/R組骨骼肌濕干重比值明顯升高(P<0.05);與I/R組比較,DEX組濕干重比值降低(P<0.05);與DEX組比較,Atip組濕干重比值升高(P<0.05,表1)。

    2.2 各組腓腸肌形態(tài)變化

    骨骼肌橫切面觀察到:Sham組,肌纖維呈多邊形結(jié)構(gòu)規(guī)則排列,未見細(xì)胞腫脹,間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常,血管周圍未見明顯炎癥細(xì)胞滲出;與Sham組比較,I/ R、Atip組,細(xì)胞排列不規(guī)則,染色明顯變淡、界限不清晰,細(xì)胞腫脹明顯,間質(zhì)見彌散的紅細(xì)胞,血管周圍可見大量炎癥細(xì)胞浸潤,該兩組未見明顯差異;DEX組,細(xì)胞排列欠規(guī)則,細(xì)胞染色稍有變淡、界限欠清晰,間質(zhì)偶見紅細(xì)胞,血管周圍有少量炎性細(xì)胞浸潤,但與I/R組相比有明顯好轉(zhuǎn)(圖1)。

    Fig.1 Pathological changes in skeletalmuscle cells(HE×400)A:Sham group;B:I/R group;C:DEX group;D:Atip group;I/R:Ischemia/reperfusion;DEX:Dexmedetomidine;Atip:Atipamezole

    2.3 各組大鼠骨骼肌MDA結(jié)果

    與Sham組比較,I/R組MDA水平明顯升高(P <0.05);與I/R組比較,DEX組MDA水平顯著降低(P<0.05);與DEX組比較,Atip組MDA水平升高(P<0.05,表1)。

    2.4 各組大鼠骨骼肌SOD結(jié)果

    與Sham組比較,I/R組SOD活力明顯降低(P <0.05);與I/R組比較,DEX組SOD活力顯著升高(P<0.05);與DEX組比較,Atip組SOD活力降低(P<0.05,表1)。

    Tab.1 Wet/dry ratio,MDA and SOD of skeletalmuscle(±s,n =7)

    Tab.1 Wet/dry ratio,MDA and SOD of skeletalmuscle(±s,n =7)

    I/R:Ischemia/reperfusion;DEX:Dexmedetomidine;Atip: Atipamezole;W/D:Wet/dry;MDA:Malondialdehyde;SOD:Superoxide dismutase*P<0.05 vs sham group;#P<0.05 vs I/R group;ΔP<0.05 vs DEX group

    Group W/D MDA(nmol/mg·prot)SOD(U/mg·prot)Δ Sham 4.33±0.42 5.47±0.88 234.82±16.48 I/R 5.27±0.38* 9.22±0.93* 136.00±14.52*DEX 4.63±0.40# 6.25±1.55# 185.05±11.26#Atip 5.31±0.69Δ 9.04±0.35Δ 144.18±11.67

    2.5 各組血清LDH、CK的變化

    與Sham組比較,I/R組LDH、CK水平顯著升高(P<0.05);與I/R組比較,DEX組LDH、CK水平明顯降低(P<0.05);與DEX組比較,Atip組LDH、CK水平升高(P<0.05,表2)。

    Tab.2 Change of LDH and CK of serum(±s,n =7)

    Tab.2 Change of LDH and CK of serum(±s,n =7)

    I/R:Ischemia/reperfusion;DEX:Dexmedetomidine;Atip: Atipamezole;LDH:Lactic dehydrogenase;CK:Creatine kinase*P<0.05 vs sham group;#P<0.05 vs I/R group;ΔP<0.05 vs DEX group

    ?

    2.6 WB檢測(cè)骨骼肌Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)

    Sham組胞核Nrf2、胞漿HO-1電泳條帶吸光度(A)值與內(nèi)參TBP、β-actin電泳條帶吸光度(A)值的比值較?。慌cSham組比較,I/R組胞核Nrf2、胞漿HO-1吸光度(A)值與內(nèi)參吸光度(A)值的比值升高(P<0.05);與I/R組比較,DEX組胞核Nrf2、胞漿HO-1吸光度(A)值與內(nèi)參吸光度(A)值的比值顯著升高(P<0.05);與DEX組比較,Atip組胞核Nrf2、胞漿HO-1吸光度(A)值與內(nèi)參吸光度(A)值的比值明顯降低(P<0.05,圖2、圖3)。

    2.7 免疫組化檢測(cè)骨骼肌Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)

    免疫組化光鏡下顯示:Sham組Nrf2及HO-1蛋白呈低表達(dá);與Sham組相比,I/R組Nrf2及HO-1蛋白表達(dá)明顯增多(P<0.05);與I/R組比較,DEX組兩蛋白的表達(dá)量進(jìn)一步增多(P<0.05);與DEX組相比,Atip組兩蛋白表達(dá)量明顯降低(P<0.05,表3,圖4、圖5,見彩圖頁Ⅴ)。

    Fig.2 Protein expression of Nrf2 in the skeletalmuscle(±s,n =7)I/R:Ischemia/reperfusion;DEX:Dexmedetomidine;Atip: Atipamezole;Nrf2:NF-E2-related factor-2*P<0.05 vs sham group;#P<0.05 vs I/R group;ΔP<0.05 vs DEX group

    Fig.3 Protein expression of HO-1 in the skeletalmuscle(±s,n=7)I/R:Ischemia/reperfusion;DEX:Dexmedetomidine;Atip: Atipamezole;HO-1:*P<0.05 vs sham group;#P<0.05 vs I/R group;ΔP<0.05 vs DEX group

    3 討論

    本實(shí)驗(yàn)通過常用阻斷血管的方法成功制作了LI/R模型,進(jìn)一步證實(shí)了DEX對(duì)LI/R有保護(hù)作用,這也與前人的研究相一致[10,11]。研究發(fā)現(xiàn),在LI/R中,DEX可以通過α2受體上調(diào)核內(nèi)Nrf2水平,啟動(dòng)下游相關(guān)基因的表達(dá)起到保護(hù)作用,減輕肢體缺血再灌注所造成的損傷。

    Tab.3 Nrf2、HO-1 expression in different groups detected by IHC-P

    LI/R是臨床診療中不可忽視的問題,越來越多的證據(jù)證實(shí)到氧化應(yīng)激(ROS)反應(yīng)在缺血再灌注損傷中具有重要作用。ROS發(fā)生時(shí),氧及其衍生的自由基具有極強(qiáng)的化學(xué)活性[12],它通過與細(xì)胞膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng),使細(xì)胞的完整性及選擇離子通透性功能遭到破壞,還可通過與膜的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)改變膜的結(jié)合酶、受體和離子的脂質(zhì)微環(huán)境,引起細(xì)胞內(nèi)鈣超載,導(dǎo)致破壞,最終會(huì)出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化物的主要終代謝產(chǎn)物MDA蓄積,骨骼肌細(xì)胞中釋放出大量CK、LDH、SOD水平降低。

    近年研究顯示Keapl/Nrf2/ARE/HO-1通路是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化及細(xì)胞毒防御機(jī)制之一,Nrf2是細(xì)胞調(diào)節(jié)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子[13]。通過上調(diào)此信號(hào)通路可誘導(dǎo)多種抗氧化酶及解毒酶,加速酶促反應(yīng),提高谷胱甘肽及超氧化物歧化酶等抗氧化物質(zhì)的表達(dá)水平,清除自由基等氧化物質(zhì),維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原水平狀態(tài),發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。靜息情況下Nrf2定位于細(xì)胞質(zhì)中,其半衰期相對(duì)較短,在細(xì)胞質(zhì)中與肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Keapl結(jié)合,當(dāng)受到來源于活性氧或親核劑的信號(hào)攻擊后,Nrf2從Keapl-Nrf2復(fù)合物中解離,Nrf2的半衰期明顯延長,然后穩(wěn)定狀態(tài)的Nrf2轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核,啟動(dòng)ARE調(diào)控的II相解毒酶及抗氧化酶基因表達(dá),如血紅素加氧酶(HO-1)、過氧化氫酶(CAT)等[14],從而達(dá)到抗氧化的作用。主要有三條信號(hào)傳導(dǎo)通路參與氧化應(yīng)激狀態(tài)下ARE介導(dǎo)的基因表達(dá):蛋白激酶C(PKC)途徑;促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途徑;磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)途徑。有研究報(bào)道,PI3k/Akt-aPKC-Nrf2通路可以上調(diào)大鼠氣道上皮細(xì)胞的有利蛋白的表達(dá)[15],對(duì)于DEX與該通路的聯(lián)系似乎也與PI3k/Akt途徑相關(guān),GU等[8]證實(shí)經(jīng)DEX處理后,在培養(yǎng)的腎細(xì)胞中磷酸化的p-Akt表達(dá)增加,這種作用能夠明顯被α2受體阻滯劑(Atip)所逆轉(zhuǎn),Atip可以阻滯DEX通過α2受體發(fā)揮作用,這就意味著DEX通過α2受體來激活PI3k/Akt通路。有文獻(xiàn)指出DEX對(duì)心肌缺血再灌注損傷也有保護(hù)作用,這也與其通過α2受體激活PI3k/Akt通路有關(guān)[7]。PI3k/ Akt通路在I/R中一般都會(huì)被激活,但不足以達(dá)到器官保護(hù)的作用。所以我們可以相信DEX通過該通路確實(shí)對(duì)I/R損傷發(fā)揮了一定的保護(hù)作用,而該通路恰是參與ARE介導(dǎo)基因表達(dá)的通路之一。同時(shí)我們通過檢測(cè)也發(fā)現(xiàn),與Sham相比,I/R組Nrf2的核內(nèi)水平以及HO-1表達(dá)增多,這說明機(jī)體自身可通過該通路來抵御ROS;而與I/R組相比,DEX組Nrf2核內(nèi)表達(dá)顯著增多,同時(shí)下游HO-1蛋白的表達(dá)量也明顯增多,這說明在骨骼肌中,DEX確實(shí)可以上調(diào)Nrf2的核內(nèi)表達(dá),有利于下游有利基因HO-1等的表達(dá)。而與此同時(shí)DEX的這種上調(diào)作用會(huì)被Atip所拮抗,Atip組與DEX組相比有顯著性差異,這也說明了DEX是通過α2受體來發(fā)揮作用的,但其發(fā)揮作用是否通過PI3k/Akt調(diào)控ARE介導(dǎo)基因的表達(dá)我們并未證實(shí)。如果是這樣,從α2到Akt的磷酸化具體機(jī)制目前也不是十分清楚。但該研究足以證實(shí)我們的假設(shè),DEX可以通過α2受體調(diào)控Nrf2/ ARE通路,使ARE介導(dǎo)的基因表達(dá)增加,達(dá)到抗氧化應(yīng)激的作用。

    綜上所述,我們的研究再次證實(shí)了DEX對(duì)肢體缺血再灌注損傷有保護(hù)作用,同時(shí)也第一次發(fā)現(xiàn),DEX對(duì)LI/R的這種保護(hù)作用是通過α2受體上調(diào)Nrf2核內(nèi)表達(dá)啟動(dòng)有利基因達(dá)到保護(hù)作用的。本研究可以指導(dǎo)DEX在肢體等相關(guān)手術(shù)中的應(yīng)用。

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    Nrf2/ARE pathway mediates the reducing effect of Dexmedetom idine on ischem ia/reperfusion injury in skeletalmuscle

    YUAN Pei-gen,XUEBin-bin,LIN Bi,ZHAO Xi-yue,ZHOU Sen,HU Yi,BAOCai-ying,LIN Li-na△
    (The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou 325000,China)

    【ABSTRACT】Objective:To explore the role of Nrf2/ARE pathway in skeletalmuscle ischemia/reperfusion(I/R)injury preconditioning by dexmedetomidine(DEX).Methods:Twenty-eight SD ratswere randomly divided into sham-operated(Sham group)、I/R group、I/R+DEX (DEX group)and I/R+DEX+Atipamezole(Atip group).In the Atip group,Atip(250μg/kg)and DEX(25μg/kg)were injected together after anesthesia;In the Sham and I/R groups,the homologous salinewas also injected at the same time;In the DEX group,the homologous DEX and salinewere coinjected.After30minutes,the hind limb ischemiawas induced by clamping the common femoralartery and ligaturing collateral circulation.After 3 h of ischemia,the clamp and tourniquetwere removed and the rats underwent 2 h of reperfusion.Wemeasured plasma concentrations of lactate dehydrogenase(LDH)and creatine kinase(CK).The gastrocnemiusmusclewas harvested and immediately stored at-80℃for the assessmentofmalondialdehyde(MDA)、superoxide dismutase(SOD)and Nrf2/HO-1 protein detected byWestern blot. The other sectionmusclewas stored in triformol for immunohistochemical and HE staining.Thewet/drywas also immediately detecting.Results:The levelsofwet/dry、MDA、LDH、CK、Nrf2 and HO-1werehigher(P<0.05)while the levelof SODwas lower(P<0.05)in the I/R group than those in sham group.The levels ofwet/dry、MDA、LDH、CK were significantly lower(P<0.05)yet the levels of SOD and Nrf2/ HO-1 were significantly higher(P<0.05)in DEX group than those in I/R group.However,Atip reversed the effectof DEX in Atip group,each of indicators had significant changes compared with those in the DEX group(P<0.05).Conclusion:Nrf2 protein was expressed in skeletalmuscle of rat and DEX could promote its level in nucleus byα-adrenergic receptor.The down-stream products of Nrf2 have the effect of antioxidant.

    ischemia/reperfusion injury; oxidative stress; NF-E2-related factor-2; dexmedetomidine; rat

    R364

    A

    1000-6834(2016)03-250-05

    溫州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(Y20140561)

    2015-07-13

    2015-11-10

    Tel:0577-88069790;E-mail:wzlinlina@163.com

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