腦水腫干濕重法的測(cè)定條件分析*

李羽中瑤，岳志偉，劉 麗，黃金賀，冷麗娜，司道文

腦水腫干濕重法的測(cè)定條件分析*

李羽中瑤1，岳志偉2，劉 麗1，黃金賀1，冷麗娜1，司道文3△

（1.華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2013級(jí)臨床本科生 ，2.2013級(jí)碩士研究生 ，3.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院解剖學(xué)教研室 ，河北省慢性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ，唐山市慢性病臨床基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ，唐山063000）

目的:分析干濕重法測(cè)定腦水腫的溫度條件和時(shí)間條件 ，探討優(yōu)化測(cè)量方案。方法:健康SD大鼠隨機(jī)分為3組（n= 4）:取腦組織稱其濕重 ，分別連續(xù)烘烤16 h，用于不同溫度條件下60°C、90°C、110°C的干濕重法腦水腫測(cè)定 ，檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)腦組織重量變化以及重量差值變化情況。結(jié)果:在不同溫度下 ，隨著時(shí)間的延長 ，腦組織重量逐漸減輕；溫度在110°C條件下 ，9 h兩次稱量干重之差小于0.0002 g，已經(jīng)烘烤至恒重 ；90°C溫度條件下12 h至恒重 ；60°C溫度條件下15.5 h至恒重。結(jié)論 :干濕重法測(cè)量腦水腫的優(yōu)化方案為110°C 9 h、90°C 12 h、60°C 15.5 h，為腦水腫的測(cè)定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

腦水腫；干濕重法；測(cè)定條件 ；大鼠

【DOI】10.13459/j.cnki.cjap.2016.03.025

腦水腫是繼發(fā)于多種腦疾病的最終病理現(xiàn)象，是形成腦疝而致死的主要因素，多年來一直是腦科學(xué)研究的熱點(diǎn)［1］。腦水腫的測(cè)量方法主要有干濕重法、微比重法和電阻抗法等。微比重法是用煤油-溴苯梯度測(cè)量腦水腫，Kuroiwa等認(rèn)為該方法操作較為繁瑣，現(xiàn)在使用較少［2］；電阻抗法是近年發(fā)展起來的無損傷檢測(cè)技術(shù)，用于腦損傷患者檢測(cè)［3］，主要應(yīng)用于臨床；干濕重法目前實(shí)驗(yàn)室主要采用經(jīng)典方法［4-6］，將待測(cè)樣本放入烤箱，在一定溫度下烘烤一段時(shí)間，通過測(cè)量濕重和干重，利用Elliot公式“腦含水量（%）=（濕重 -干重）/濕重×100%”來計(jì)算腦組織含水量。

但是，干濕重法測(cè)量腦水腫的具體方法卻存在很大差異，對(duì)烤箱的溫度和烘烤的時(shí)間報(bào)道不一，例如Shahrokhi N、Gilmer LK以及其他學(xué)者［4-6］所用的時(shí)間和溫度各不相同 ，烤箱溫度的設(shè)置從60℃到110℃不等、時(shí)間為24 h至72 h不等，缺乏系統(tǒng)的研究和報(bào)道。鑒于腦水腫是實(shí)驗(yàn)室極為常用檢測(cè)指標(biāo)，而且測(cè)定的條件不盡相同，因此本研究通過檢測(cè)不同溫度條件下、不同時(shí)間點(diǎn)連續(xù)測(cè)量腦組織重量變化情況，分析不同溫度下水含量丟失的速率，闡明溫度和時(shí)間最優(yōu)化方案，為腦水腫的測(cè)量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組

健康成年SD大鼠12只，由華北理工大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，體重200～250 g，標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料飼養(yǎng)，自由進(jìn)食水，室溫控制在22℃～25℃；經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后 ，隨機(jī)分為3組（n =4），分別用于不同溫度條件下60℃、90℃、110℃的干濕重法腦水腫測(cè)定。

1.2 腦水腫測(cè)定

用10%的水合氯醛按照大鼠體重0.3ml/100 g進(jìn)行腹腔麻醉 ，斷頭處死 ，開顱取腦，快速剝離全腦，用濾紙吸盡腦表面的血漬后，在大鼠頂葉處取皮質(zhì)約0.2 g組織塊［6］，置于已烤干并稱質(zhì)量的錫紙上，用精密電子分析天平（精確度0.0001 g，F(xiàn)A2004型，上海精科天平廠）測(cè)其濕重，然后分別放入60℃、90℃、110℃電熱恒溫干燥箱（GRX-20A型，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），每隔30min稱重，連續(xù)烘烤16 h至恒重（兩次干重之差小于0.0002g），對(duì)每一溫度條件下各個(gè)時(shí)間點(diǎn)腦組織重量變化做好記錄。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

記錄各個(gè)溫度下組織塊在各時(shí)間點(diǎn)重量變化數(shù)值，并計(jì)算出每次稱重和前一次稱重的重量差值；分析水含量丟失速率和不同溫度下烘烤的最佳時(shí)間。

2 結(jié)果

在不同溫度、不同烘烤時(shí)間條件下，組織塊標(biāo)化為0.2 g后重量變化情況見表1。在不同溫度下，隨著時(shí)間的延長，重量逐漸減輕。溫度在110℃條件下，9 h兩次稱量干重之差小于0.0002 g，已經(jīng)烘烤至恒重；同理，90℃溫度條件下，12 h至恒重；60℃溫度條件下，15.5 h至恒重。

Tab.1 Change ofweightand differenceofbrain tissueon different temperature ateach time point（g，±s，n=4）

Tab.1 Change ofweightand differenceofbrain tissueon different temperature ateach time point（g，±s，n=4）

Time（h）　110℃　90℃　60℃00∶00　0.2000　0.2000　0.2000 00∶30　0.1202　0.1558　0.1739 01∶00　0.0872　0.1201　0.1535 01∶30　0.0684　0.0998　0.1387 02∶00　0.0579　0.0756　0.1220 02∶30　0.0504　0.0668　0.1119 03∶00　0.0496　0.0605　0.1054 03∶30　0.0488　0.0553　0.0994 04∶00　0.0482　0.0522　0.0940 04∶30　0.0476　0.0507　0.0892 05∶00　0.0471　0.0499　0.0847 05∶30　0.0467　0.0493　0.0804 06∶00　0.0463　0.0488　0.0764 06∶30　0.0459　0.0483　0.0725 07∶00　0.0455　0.0479　0.0689 07∶30　0.0452　0.0475　0.0655 08∶00　0.0449　0.0471　0.0623 08∶30　0.0446　0.0468　0.0600 09∶00　0.0446　0.0465　0.0580 09∶30　-　0.0462　0.0561 10∶00　-　0.0459　0.0544 10∶30　-　0.0456　0.0528 11∶00　-　0.0454　0.0512 11∶30　-　0.0453　0.0498 12∶00　-　0.0453　0.0486 12∶30　-　-　0.0476 13∶00　-　-　0.0470 13∶30　-　-　0.0466 14∶00　-　-　0.0463 14∶30　-　-　0.0460 15∶00　-　-　0.0459 15∶30　-　-　0.0459

3 討論

干濕重法測(cè)量腦水腫是目前實(shí)驗(yàn)室采用的主要方法。濕重是將生物樣品取出后稱得的重量，干重是指生物體除了水分以外其他組成物質(zhì)的重量，包括無機(jī)鹽和各種有機(jī)物。測(cè)量時(shí)將樣品放于一定溫度的恒溫烘箱中，放置一段時(shí)間后烘干至恒重，再通過公式計(jì)算樣品含水率 ，是目前腦水腫測(cè)量的常用方法［4-6］。微比重法是取待測(cè)腦組織放入煤油-溴苯梯度柱可測(cè)得腦組織的比重，由于腦組織水分增加時(shí)腦比重降低，通過計(jì)算腦組織比重可得出腦組織水含量。電阻抗法是通過測(cè)量大腦半球的電阻抗之差，來反映腦水腫變化，是在臨床應(yīng)用的無損傷檢測(cè)技術(shù)，可以動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)和反映腦水腫的演變過程，是近年來才發(fā)展起來主要應(yīng)用于臨床患者腦水腫的無創(chuàng)傷監(jiān)測(cè)［3］。微比重法與干濕重法相比，操作較為繁瑣 ，已經(jīng)較少使用［2］。由于腦水腫在顱腦損傷和其他腦部疾病中具有重要意義［7］，因此本研究對(duì)干濕重法測(cè)量腦水腫方法做了進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在不同溫度下至干重所用的最短時(shí)間不同 ，110℃溫度條件下至少需要9 h達(dá)到恒重 ，90℃溫度條件下至少需要12 h達(dá)到恒重，60℃溫度條件下至少需要15.5 h達(dá)到恒重。從表1可以看出 ，通過前后相鄰兩次稱重重量變化情況可以反映出水含量丟失的速率，失水速率的整體趨勢(shì)是先快后慢；單位時(shí)間內(nèi)失水速率是溫度越高水分丟失越快，兩次稱重差值趨近于0所用的時(shí)間越短，反之亦然。因此，在干濕重法腦水腫測(cè)定時(shí)，可以根據(jù)不同溫度和需要的最短時(shí)間進(jìn)行選擇，為腦水腫的測(cè)量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以提高檢測(cè)效率。

［1］涂 悅，楊細(xì)平，商崇智.醒腦靜對(duì)顱腦創(chuàng)傷的保護(hù)作用［J］.中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2014，30（3）:230-232.

［2］Kuroiwa T，Nagaoka T，UekiM，et al.Correlationsbetween the apparent diffusion coefficient，water content，and ultrastructure after induction of vasogenic brain edema in cats［J］. JNeurosurg，1999，90（3）:499-503.

［3］何蘭英，王 健，張 蓓，等.無創(chuàng)腦電阻抗測(cè)定在腦梗死患者腦水腫監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志 ，2010，90（43）:3063-3067.

［4］ShahrokhiN，Haddad MK，Joukar S，et al.Neuroprotective antioxidant effect of sex steroid hormones in traumatic brain injury［J］.Pak JPharm Sci，2012，25（1）:219-225.

［5］Gilmer LK，Roberts KN，Scheff SW.Efficacy of progesterone following amoderate unilateral cortical contusion injury［J］.J Neurotrauma，2008，25（6）:593-602.

［6］馬 駿.低氧預(yù)處理對(duì)大鼠腦損傷后神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分和腦水腫的影響［D］.長春，吉林大學(xué):2008.

［7］苗笑梅，程世翔，楊 震，等.十二井穴刺絡(luò)放血聯(lián)合亞低溫治療對(duì)顱腦創(chuàng)傷急性期大鼠腦水腫的影響［J］.中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 ，2015，31（3）:249-253.

bain edema；dry-wetweightmethod；measurement conditions

R651.1

A

1000-6834（2016）03-282-02

華北理工大學(xué)2015年大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（X2015139）

2015-05-25

2016-02-26

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