丹參毛狀根和丹參藥材HPLC指紋圖譜的比較研究

黃志成，任加惠，沈麗紅，金雯芳，金江淼，倪春紅，楊東風(fēng)，梁宗鎖,b

(浙江理工大學(xué),a.生命科學(xué)學(xué)院; b.浙江省植物次生代謝調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310018)

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丹參毛狀根和丹參藥材HPLC指紋圖譜的比較研究

黃志成a，任加惠a，沈麗紅a，金雯芳a，金江淼a，倪春紅a，楊東風(fēng)a，梁宗鎖a,b

(浙江理工大學(xué),a.生命科學(xué)學(xué)院; b.浙江省植物次生代謝調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310018)

為了分析丹參毛狀根和丹參原藥材之間有效成分的差異，探討丹參毛狀根作為丹參藥材使用的可行性，利用不同誘導(dǎo)處理后的丹參毛狀根的HPLC指紋圖譜進(jìn)行研究。結(jié)果表明：ABA處理后的丹參毛狀根有效成分提高了1.3倍，但與藥材指紋圖譜相似性較差，相似性系數(shù)僅為0.30，僅可以作為單一有效成分的提取原料；與原藥材相比，MJ處理的丹參毛狀根有效成分將近提高了15倍，指紋圖譜相似性也較高，相似性系數(shù)達(dá)到0.96。因此，MJ處理的毛狀根具有作為丹參藥材使用的可行性。

丹參毛狀根；誘導(dǎo)子；HPLC指紋圖譜；相似性

0　引　言

丹參(SalviamiltiorrhizaBunge)作為一種傳統(tǒng)的大宗藥材，是唇形科鼠尾草屬的多年生草本植物。丹參的主要次生代謝物包含兩大類：即水溶性化合物(迷迭香酸、丹酚酸B和丹參素等)和脂溶性化合物(丹參酮ⅡA、隱丹參酮和二氫丹參酮等)[1-2]。在臨床應(yīng)用上，丹參對(duì)于心肌梗塞和腦血管疾病等具有一定的治療功效[3]。

目前，對(duì)于丹參有效成分的藥理作用研究及其開發(fā)的不斷深入，丹參作為制備各種藥物產(chǎn)品的需求日益增加。由于丹參原藥材含有效成分低，生長周期長，再加上丹參品種的嚴(yán)重退化、產(chǎn)量降低、占用大量耕種資源等問題，從而導(dǎo)致丹參不能作為一種大規(guī)模使用的藥用植物，而通過基因工程的方法是提高丹參有效成分生產(chǎn)的一種可靠有效的途徑[4]。毛狀根是由發(fā)根農(nóng)桿菌侵染植物后，誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)小的、多分支的毛狀物，具有生長速度快、穩(wěn)定性好、培養(yǎng)方便等優(yōu)點(diǎn)[5]。近年來，許多研究者對(duì)多種藥用植物的毛狀根培養(yǎng)進(jìn)行了研究，付春祥等[6]對(duì)新疆雪蓮根段外植體毛狀根系的研究中發(fā)現(xiàn)，黃酮的含量是尋常的8.6倍；龔玉蓮等[7]以少花龍葵(Solanmumphoteinocarpum)無菌葉片誘導(dǎo)毛狀根，檢測發(fā)現(xiàn)其中粗總糖苷生物堿含量為對(duì)照(少花龍葵無菌苗的根)的31倍，其中皂苷含量甚至達(dá)到了對(duì)照的107倍。因此，將毛狀根培養(yǎng)技術(shù)運(yùn)用于丹參藥材培養(yǎng)，很大程度上解決了丹參生長周期長的問題，并且通過不同誘導(dǎo)子的誘導(dǎo)還可以進(jìn)一步有效地提高有效成分的積累。陶如等[8]利用毛狀根培養(yǎng)白花丹參，并采用真菌進(jìn)行誘導(dǎo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹酚酸B和丹參素的產(chǎn)量得到有效提高。張順倉等[9]研究顯示，茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MJ)能夠抑制丹參毛狀根的生長，而總體上對(duì)于酚酸類以及丹參酮類成分含量的積累均表現(xiàn)出較強(qiáng)的促進(jìn)效果；酵母提取物(yeast extract, YE)作為一種重要的生長物質(zhì)使毛狀根的干重顯著提高，證明其可以有效地促進(jìn)丹參毛狀根的生長，并且有研究顯示對(duì)于丹參酮積累的效果較為顯著[10-11]。Cheng等[12]利用銀離子(Ag+)等誘導(dǎo)丹參毛狀根，發(fā)現(xiàn)丹參酮的積累得到明顯的提升；同樣，Ag+對(duì)于酚酸類成分積累也具有促進(jìn)作用，用不同濃度的Ag+誘導(dǎo)毛狀根，結(jié)果顯示低濃度的Ag+能夠有效提高總酚酸量[13]。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)植物處于逆境脅迫時(shí)，脫落酸(abscisic acid, ABA)不僅可以誘導(dǎo)植物的防衛(wèi)基因表達(dá)，還能夠促進(jìn)相關(guān)活性成分的生物合成，例如吲哚生物堿，羥基肉桂酸等活性成分[14-15]。外源性茉莉酸類化合物同樣能夠有效促進(jìn)植物有效成分的快速積累，刺激次生代謝產(chǎn)物的生物合成[16]。然而丹參毛狀根是否可以替代傳統(tǒng)的丹參原藥材、其品質(zhì)如何，目前尚未清楚，而中藥指紋圖譜是評(píng)價(jià)中藥材品質(zhì)一致性的有效手段，但有關(guān)毛狀根與藥材指紋圖譜的相似性尚未有報(bào)道。因此，本文分別通過添加ABA、MJ、YE和Ag+處理丹參毛狀根，比較經(jīng)誘導(dǎo)處理后丹參毛狀根與丹參藥材指紋圖譜的相似性，探討丹參毛狀根作為丹參藥材使用的可行性。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

本實(shí)驗(yàn)選用的材料為該實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的丹參毛狀根。

1.2毛狀根培養(yǎng)

本實(shí)驗(yàn)選用含有30 g/L蔗糖的6,7-V培養(yǎng)基培養(yǎng)作為基礎(chǔ)培基，pH為5.8，使用前利用高壓滅菌鍋，121 ℃，滅菌30 min。在超凈臺(tái)中，稱取0.2 g生長旺盛的丹參毛狀根，然后將毛狀根接種到裝有50 mL液體6,7-V培養(yǎng)基的錐形瓶中，再放入恒溫?fù)u床中，110 r/min，25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)18 d。

1.3誘導(dǎo)子的配制和處理

稱取適量YE溶于雙蒸水，加入適量無水乙醇至終濃度達(dá)到80%，室溫下靜置，棄去上清液，將獲得的沉淀重新用雙蒸水溶解，加入適量無水乙醇至終濃度達(dá)到60%。靜置，棄上清，用200 mL雙蒸水溶解所得的粘性沉淀物，溶液利用高壓滅菌鍋，121 ℃，滅菌30 min，即得到酵母提取物母液；ABA、MJ分別溶于蒸餾水和乙醇中，過0.22 μm濾膜，制成母液備用。AgNO3和Na2S2O3以摩爾比1∶4的比例混合，溶于蒸餾水中，過0.22 μm 濾膜，制成銀離子母液備用。

分別向培養(yǎng)18 d的毛狀根中加入不同誘導(dǎo)子(YE 100 μM，Ag+30 μM，MJ 100 μM，ABA 50 μM)，繼續(xù)培養(yǎng)，6 d后收集丹參毛狀根，利用蒸餾水清洗3遍，濾紙吸干，50 ℃干燥至恒重。

YE購自上海生工生物工程股份有限公司，ABA和MJ購自美國Sigma-Aldrich公司，硝酸銀購自上海三愛思試劑有限公司，硫代硫酸鈉購自杭州蕭山化學(xué)試劑廠。

1.4丹參有效次生代謝成分的提取

利用研缽分別將烘干的丹參毛狀根和丹參藥材磨碎，過0.45 mm的篩子，然后準(zhǔn)確的稱取0.10 g樣品粉末后溶于2 mL 70%甲醇提取液中，反復(fù)均勻搖晃，提取液經(jīng)超聲提取45 min，將提取液取出后，靜止冷卻，再通過離心機(jī)，12 000 r/min離心10 min，小心吸取上清溶液過0.45 μm微孔濾膜，4 ℃冰箱儲(chǔ)存。

1.5丹參有效成分測定與HPLC指紋圖譜

丹酚酸B和丹參酮IIA標(biāo)準(zhǔn)樣品全部來源中國食品藥品鑒定所，準(zhǔn)確的稱取適量的標(biāo)準(zhǔn)品溶于過0.45 μm微孔濾膜的甲醇溶液中。利用甲醇溶液，分別將配置好的丹酚酸B和丹參酮IIA標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，進(jìn)一步稀釋成一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液。通過高效液相色譜對(duì)溶液進(jìn)行檢測，進(jìn)樣量為10 μL，測定并獲得峰面積積分值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為橫坐標(biāo)，以有效成分的峰面積為縱坐標(biāo)。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的回歸方程分別為：丹酚酸B：y=5×10-8x+0.0042，R2=0.9997；丹參酮IIA：y=10-8x-0.0002，R2=1。

實(shí)驗(yàn)采用的二元高效液相色譜儀為Waters 1525，檢測器為Waters 2996，檢測中所用的色譜柱為Waters SunFire C18。丹參有效成分檢測中采用的流動(dòng)相是乙腈和水，通過流動(dòng)相梯度洗脫。儀器參數(shù)設(shè)置：波長為270 nm，色譜柱溫度為30 ℃，流速為1 mL/min，樣品上樣量為10 μL。實(shí)驗(yàn)檢測程序：0～5 min，40 %乙腈，60%水；5～20 min，60 %乙腈，40%水；20～23 min，60 %乙腈，40%水；23～25 min，80 %乙腈，20%水；25 min，100 %乙腈[17]。

2　結(jié)　果

2.1誘導(dǎo)子對(duì)丹參毛狀根生長變化的影響

分別通過四種不同誘導(dǎo)子處理后，丹參毛狀根生長情況如圖1所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，四種不同的誘導(dǎo)子對(duì)丹參毛狀根的生長均有不同程度的促進(jìn)作用，其中ABA處理后毛狀根干重增加了63.6%，而鮮重的變化并不顯著；加入YE誘導(dǎo)后的丹參毛狀根，毛狀根的鮮重與干重都有明顯的提高，分別增加了69.1%、45.4%；Ag+處理的效果與YE相似，鮮重與干重均有顯著的增長，分別提高了52.7%、44.4%；然而，MJ誘導(dǎo)處理對(duì)丹參毛狀根生長變化的作用不明顯。

圖1　四種不同誘導(dǎo)子對(duì)丹參毛狀根生長變化的影響

2.2丹酚酸B與丹參酮ⅡA的含量比較

經(jīng)過4種不同誘導(dǎo)子處理后，丹參毛狀根以及原藥材中丹酚酸B以及丹參酮IIA的含量，如圖2所示。與對(duì)照組相比，ABA誘導(dǎo)后，丹參毛狀根中丹酚酸B含量增加了1.3倍；YE處理后，丹酚酸B的含量與對(duì)照相比只提升了28 %；MJ處理后丹酚酸B含量變化最為顯著，增加了15.0倍；Ag+處理后的丹酚酸含量卻降低了。然而四種誘導(dǎo)子對(duì)于丹參酮IIA含量積累的效果均不明顯。與丹參藥材(YC)相比，丹參毛狀根中丹酚酸B與丹參酮IIA的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于丹參藥材中的含量，丹酚酸B的差距尤為顯著，除MJ誘導(dǎo)處理(丹酚酸B含量約為丹參藥材中含量的1/5)外，其余各組含量約為丹參藥材中含量的1/50。

圖2　丹參藥材與毛狀根中兩種丹參成分的含量

2.3HPLC指紋圖譜分析

2.3.1共有峰的選擇

用高效液相色譜儀測定MJ誘導(dǎo)丹參毛狀根后的色譜圖及三維光譜圖，由于峰具有一定的時(shí)間漂移特性，因此對(duì)于不同誘導(dǎo)子處理的丹參毛狀根以及丹參藥材的色譜圖和三維光譜圖，通過比較色譜圖中指紋峰保留時(shí)間以及光譜圖中的波長和強(qiáng)度，確定了13個(gè)共有指紋峰，如圖3所示，圖4為丹參藥材HPLC指紋圖譜。其中，保留時(shí)間33.47 min為丹酚酸B的指紋峰；保留時(shí)間85.62 min為丹參酮IIA的指紋峰，其所有對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間以及共有峰相對(duì)峰面積如表1所示。

圖3　丹參毛狀根HPLC指紋圖譜

圖4　丹參藥材HPLC指紋圖譜

峰號(hào)保留時(shí)間/minCKABAYEMJAg+YC113.6830.264.050.490.540.570.17224.2170.902.371.327.422.811.40333.4670.982.621.5816.350.416.33456.8170.720.610.910.660.630.06558.9670.470.490.630.470.310.02663.0331.161.581.421.091.130.11764.4670.852.271.571.301.590.10866.5670.450.290.490.410.340.06971.8500.772.820.780.911.240.241075.0332.151.221.841.981.670.221177.8331.060.601.000.820.780.271281.1330.770.350.680.710.770.261385.617111111相似性系數(shù)0.090.300.390.96-0.101.00

2.3.2相似性系數(shù)的分析

不同誘導(dǎo)子處理的丹參毛狀根及丹參藥材的相似性比較如表1所示。本實(shí)驗(yàn)選擇丹參酮IIA的指紋峰為參照峰(即保留時(shí)間為85.62 min的峰)，計(jì)算相似性系數(shù)。由表1可以看出，不添加任何誘導(dǎo)子的丹參毛狀根與丹參藥材的相似性非常低，僅為0.09；添加Ag+后的丹參毛狀根，與藥材的相似性系數(shù)為負(fù)值，表明兩者相似度非常低，盡管ABA和YE處理均能夠提高毛狀根與藥材指紋圖譜的相似性，但相似性系數(shù)均低于0.9，不能作為丹參藥材使用。茉莉酸甲酯處理后，毛狀根與藥材指紋圖譜相似性最高，達(dá)到0.96，高于《中藥注射劑指紋圖譜研究技術(shù)指南》中0.9的要求，具有作為丹參藥材使用的可行性。

3　討　論

自1907年首次發(fā)現(xiàn)毛狀根可以由發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)產(chǎn)生，毛狀根的研究就被廣泛的關(guān)注，相比較植物傳統(tǒng)的組織培養(yǎng)技術(shù)，毛狀根培養(yǎng)具有諸多優(yōu)勢，如有生長周期短、遺傳穩(wěn)定性好等，具有非常大的應(yīng)用前景和發(fā)展空間。毛狀根作為一種有效的培養(yǎng)方式，可以長期保持物種的優(yōu)良性狀，已經(jīng)被越來越多的研究所采用，并且可以用來獲取植物的次生代謝產(chǎn)物。目前已有超過百種的藥用植物誘導(dǎo)出毛狀根，主要是雙子葉植物，其中對(duì)于數(shù)十種藥材毛狀根的培養(yǎng)條件、誘導(dǎo)機(jī)理以及有效成分積累都進(jìn)行了有系統(tǒng)的研究[18-20]。

為了能夠有效地解決丹參資源缺乏的狀況，研究者成功從胚細(xì)胞中誘導(dǎo)出毛狀根，并且從丹參毛狀根中獲得丹參酮類和酚酸類兩類有效成分。然而由于丹參毛狀根中有效成分含量較低，因此，近年來有關(guān)毛狀根及其誘導(dǎo)方面的研究遍成為了國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，ABA作為植物一種信號(hào)分子，在植物生長過程中，能夠有效的促進(jìn)酚酸類及丹參酮類物質(zhì)含量的積累[20-22]，幫助植株應(yīng)對(duì)逆境脅迫。此外，微生物對(duì)于毛狀根有效成分同樣有促進(jìn)作用，Ming等[23]研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)生真菌可以促進(jìn)丹參毛狀根的生長和丹參酮含量的積累。

然而，毛狀根培養(yǎng)研究的時(shí)間還較短，仍處于發(fā)展階段，還有許多問題需要進(jìn)一步解決，尤其是品質(zhì)等問題。中藥指紋圖譜技術(shù)是現(xiàn)今在國際中被公認(rèn)的控制中藥質(zhì)量的質(zhì)控模式，是一種比較綜合并可量化的鑒定手段，它主要是以中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究為基礎(chǔ)的，一般多用于中藥材以及中藥生物制品質(zhì)量可靠性、優(yōu)劣性和穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)[24]。雖然毛狀根是一種快速、有效的培養(yǎng)方式，然而，毛狀根中有效成分的品質(zhì)如何，與原藥材中有效成分的比較如何，毛狀根是否可以作為模型研究藥材，甚至是否可以代替原藥材用于研究或生產(chǎn)，這些都還尚不清楚。此外，目前有關(guān)毛狀根與中藥材指紋圖譜的相似性的研究尚未有報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)利用四種不同誘導(dǎo)子處理丹參毛狀根，通過指紋圖譜分析誘導(dǎo)后毛狀根與丹參藥材的相似性，探討丹參毛狀根替代丹參藥材使用的可能性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MJ處理后的毛狀根雖然干重和鮮重沒有明顯的增加，但其丹酚酸B的含量有較大幅度的提高，且變化最為顯著，增加了15.0倍；ABA處理后干重明顯增加，丹酚酸B的含量相較于MJ增加幅度小，增加了1.3倍。經(jīng)HPLC指紋圖譜數(shù)據(jù)分析處理后發(fā)現(xiàn)，不添加任何誘導(dǎo)子的丹參毛狀根與丹參藥材的相似性非常低，添加YE、ABA誘導(dǎo)子后，與丹參藥材比較相似性分別為0.39、0.30，低于0.9，不能作為丹參藥材使用。而MJ處理后，丹參毛狀根與藥材的指紋圖譜相似性達(dá)到了0.96，已經(jīng)高于《中藥注射劑指紋圖譜研究技術(shù)指南》中0.9的規(guī)定，已經(jīng)具有了作為丹參藥材使用的可行性。

本文首次對(duì)丹參毛狀根中次生代謝產(chǎn)物的品質(zhì)進(jìn)行研究，通過指紋圖譜比較毛狀根與藥材的相似性，為探究丹參毛狀根作為研究模型以及生產(chǎn)原料提供基礎(chǔ)，同時(shí)對(duì)于緩解丹參資源匱乏，提升次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)的工業(yè)化發(fā)展，以及促進(jìn)丹參產(chǎn)業(yè)發(fā)展等都具有非常重要的意義。

[1] ZHOU L, BONDY S C, JIAN L, et al. Tanshinone IIA attenuates the cerebral ischemic injury-induced increase in levels of GFAP and of caspases-3 and -8 [J]. Neuroscience, 2015, 288: 105-11.

[2] ZHOU G J, WANG W, XIE X M, et al. Post-harvest induced production of salvianolic acids and significant promotion of antioxidant properties in roots ofSalviamiltiorrhiza(Danshen) [J]. Molecules, 2014, 19(6): 7207-7222.

[3] BI H C, ZUO Z, CHEN X, et al. Preclinical factors affecting the pharmacokinetic behaviour of tanshinone IIA, an investigational new drug isolated fromSalviamiltiorrhizafor the treatment of ischaemic heart diseases [J]. Xenobiotica, 2008, 38(2): 185-222.

[4] 談榮慧, 張金家, 趙淑娟. 丹參毛狀根的誘導(dǎo)及培養(yǎng)條件的優(yōu)化 [J]. 中國中藥雜志, 2014, 39(16): 3048-3053.

[5] XIAO Y, GAO S, DI P, et al. Methyl jasmonate dramatically enhances the accumulation of phenolic acids inSalviamiltiorrhizahairy root cultures [J]. Physiol Plant, 2009, 137(1): 1-9.

[6] 付春祥, 金治平, 楊睿, 等. 新疆雪蓮毛狀根的誘導(dǎo)及其植株再生體系的建立 [J]. 生物工程學(xué)報(bào), 2004, 20(3): 366-371.

[7] 龔玉蓮, 施和平, 李玲, 等. 少花龍葵毛狀根的誘導(dǎo)和次生代謝物的產(chǎn)生 [J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào), 2002, 10(1): 58-62.

[8] 陶如, 馮蕾, 趙法興, 等. 白花丹參毛狀根誘導(dǎo)體系的建立與其內(nèi)生真菌提高毛狀根中丹酚酸含量的研究 [J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2015, 26(6): 1469-1473.

[9] 張順倉, 劉巖, 沈雙, 等. 誘導(dǎo)子對(duì)丹參毛狀根酚酸類和丹參酮類成分積累的影響 [J]. 中國中藥雜志, 2011, 36(10): 1269-1274.

[10] 晏瓊, 胡宗定, 吳建勇. 生物和非生物誘導(dǎo)子對(duì)丹參毛狀根培養(yǎng)生產(chǎn)丹參酮的影響 [J]. 中草藥, 2006, 37(2): 262-265.

[11] SHI M, LUO X, JU G, et al. Increased accumulation of the cardio-cerebrovascular disease treatment drug tanshinone inSalviamiltiorrhizahairy roots by the enzymes 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase and 1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate reductoisomerase [J]. Functional & Integrative Genomics, 2014, 14(3): 603-615.

[12] CHENG Q, HE Y, LI G, et al. Effects of combined elicitors on tanshinone metabolic profiling and smCPS expression inSalviamiltiorrhizahairy root cultures [J]. Molecules, 2013, 18(7): 7473-7485.

[13] XING B C, YANG D F, Guo W L, et al. Ag+as a more effective elicitor for production of tanshinones than phenolic acids inSalviamiltiorrhizahairy roots [J]. Molecules, 2015, 20(1): 309-324.

[14] ZHAO J, DAVIS L C, Verpoorte R. Elicitor signal transduction leading to production of plant secondary metabolites [J]. Biotechnol Adv, 2005, 23(4): 283-333.

[15] HAO G P, JI H W, LI Y L, et al. Exogenous ABA and polyamines enhanced salvianolic acids contents in hairy root cultures ofSalviamiltiorrhizaBge. f.alba [J]. Plant Omics, 2012, 5(5): 446-452.

[16] HAO X L, SHI M, CUI L J, et al. Effects of methyl jasmonate and salicylic acid on tanshinone production and biosynthetic gene expression in transgenicSalviamiltiorrhizahairy roots [J]. Biotechnology and Applied Biochemistry, 2015, 62(1): 24-31.

[17] 楊東風(fēng). 丹參酮生物合成調(diào)控機(jī)理及丹參與絨毛鼠尾草cDNA-AFLP分析研究 [D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué), 2012.

[18] 余曉暉, 陳紅剛, 趙磊, 等. 當(dāng)歸毛狀根的誘導(dǎo)及其遺傳穩(wěn)定性研究 [J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2015, 26(7): 1757-1759.

[19] 劉連旺, 張永清, 李先恩. 藥用植物毛狀根研究進(jìn)展 [J]. 山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 27(3): 288-291.

[20] 李文龍, 王媛媛, 張芳芳, 等. 藥用植物毛狀根技術(shù)的研究 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015, 43(3): 44-46.

[21] 崔北米, 梁宗鎖, 劉巖, 等. ABA及其生物合成抑制劑對(duì)丹參毛狀根酚酸類成分和關(guān)鍵酶的影響 [J]. 中國中藥雜志, 2012, 36(6): 754-759.

[22] LIANG Z, MA Y, XU T, et al. Effects of abscisic acid, gibberellin, ethylene and their interactions on production of phenolic acids inSalviamiltiorrhizabunge hairy roots [J]. Plos One, 2013, 8(9): e72806.

[23] MING Q L, SU C Y, ZHENG C J, et al. Elicitors from the endophytic fungus Trichoderma atroviride promoteSalviamiltiorrhizahairy root growth and tanshinone biosynthesis [J]. J Exp Bot, 2013, 64(18): 5687-5694.

[24] 陳林偉, 秦昆明, 徐雪松, 等. 中藥指紋圖譜數(shù)據(jù)庫的研究現(xiàn)狀及展望 [J]. 中草藥, 2014, 45(21): 3041-3047.

(責(zé)任編輯： 許惠兒)

Comparative Study on HPLC Fingerprints ofSalviaMiltiorrhizaHairy Roots andSalviaMiltiorrhiza

HUANGZhichenga,RENJiahuia,SHENLihonga,JINWenfanga,JINJiangmiaoa,NIChunhonga,YANGDongfenga,LIANGZongsuoa,b

(a.College of Life Science; b.Key Laboratory of Plant Secondary Metabolism Regulation of Zhejiang Province, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China)

To analyze effective component differences ofS.miltiorrhizahairy roots andS.miltiorrhizaand explore the feasibility ofS.miltiorrhizahairy roots asS.miltiorrhiza, HPLC Fingerprints ofS.miltiorrhizahairy roots with different induction treatments were investigated. The results indicated that the effective components ofS.miltiorrhizahairy roots with ABA treatment were increased by 1.3 folds. However, the fingerprinting similarity between hairy foots andS.miltiorrhizaraw material was poor and the similarity coefficient was only 0.30, so it could only be used as an extractive raw material of a single effective component. Under MJ treatment, the effective component of hairy roots was almost increased by 15 folds when compared with the raw material. The fingerprinting similarity was high and similarity coefficient reached to 0.96. Therefore, hairy roots treated by MJ has the feasibility to be used asS.miltiorrhizamaterial.

Salviamiltiorrhizahairy root; elicitors; HPLC fingerprints; similarity

10.3969/j.issn.1673-3851.2016.05.021

2015-09-21

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81373908，81403033)，浙江省科技廳公益性技術(shù)應(yīng)用研究計(jì)劃項(xiàng)目(2014C32108)

黃志成(1990-)，男，浙江東陽人，碩士研究生，主要從事藥用植物和中藥資源開發(fā)研究。

梁宗鎖，E-mail：liangzs@ms.iswc.ac.cn

R282.5

A

1673- 3851 (2016) 03- 0444- 06 引用頁碼： 050703