Beckman Coulter Access DXI800與Cobas e411兩種化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)檢測血清總β-HCG結(jié)果的比對分析

秦雪君，安敏芝，李揚宇，毛起官，林青福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗科，福建福州　350009

Beckman Coulter Access DXI800與Cobas e411兩種化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)檢測血清總β-HCG結(jié)果的比對分析

秦雪君，安敏芝，李揚宇，毛起官，林青
福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗科，福建福州350009

目的 通過比較同一實驗室2臺不同化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)（貝克曼DXI800直接化學(xué)發(fā)光、Cobas e411電化學(xué)發(fā)光）測定血清總β-HCG的結(jié)果，探討2種方法檢測β-HCG的是否具有可比性，為不同儀器測定實驗結(jié)果互認(rèn)提供依據(jù)。方法Beckman Coulter Access DXI800使用美國伯樂公司提供的質(zhì)控品Biorad低值、中值，Cobas e411采用羅氏原裝質(zhì)控品低值、中值分別對兩臺儀器進(jìn)行日常室內(nèi)質(zhì)控，保證結(jié)果均在控。在此基礎(chǔ)上，選取不同濃度常規(guī)血清標(biāo)本40份先在Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)進(jìn)行檢測，再用Cobas e411電化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測。選擇貝克曼DXI800化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)作為參考儀器進(jìn)行數(shù)據(jù)比對。所有檢測結(jié)果均在2 h內(nèi)完成。結(jié)果2種檢測系統(tǒng)對不同濃度的質(zhì)控品檢測總β-HCG的結(jié)果日間CV及總CV均小于15%的日間CV允許范圍。40個不同濃度的β-HCG在兩個檢測系統(tǒng)上的檢驗結(jié)果進(jìn)行配對t檢驗的結(jié)果P值為0.563＞0.05，結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)性分析顯示相關(guān)系數(shù)r2為0.9936＞0.95，符合美國臨床化學(xué)實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會EP9-A2文件的要求，滿足實驗要求。結(jié)論 通過比對實驗，可以看出兩種檢測系統(tǒng)對總β-HCG檢測結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性和一致性，避免了結(jié)果差異給臨床診斷帶來的困擾，可以同時發(fā)布檢測結(jié)果。

化學(xué)發(fā)光；β-HCG；比對分析

［Abstract］Objective To Compare two different chemiluminescene assays（Beckman Coulter Access DXI800 and Cobas e411）for the detection of human serum total β-chorionic gonadotropin（β-HCG）and discuss they are comparable between the two different ECL assays,in order to provide evidence for mutual accredit between different assay systems.Methods Biorad low and median value QC were used for Beckman Coulter Access DXI800 and Roche original low and median value QC were used for Cobas e411 daily,guaranteed all the results were in control.On this basis,40 different serum sampleswere compared of β-HCG by Beckman Coulter Access DXI800（candidate method）and Cobas e411（reference method）,all data were tested in 2 hours.Results The different QC daily CV and total CV for β-HCG tested by two analyzers were less than 15%of the day CV allows the scope of.Data of 40 different concentrations of β-HCG in two test systems were paired by t test,showed no significant difference（P=0.563＞0.05）.Correlation analysis showed the coefficient r2was 0.9936＞0.975, in line with the requirements of the EP9-A2 file of the American clinical chemistry laboratory standardization committee, which met the requirements of the experiment.Conclusion As results,two kinds of detection system for β-HCG test results had good accuracy and correlation,avoided the trouble of clinical diagnosis caused by the differences as two results were acceptable.

［Key Words］Chemiluminescene；Human Serum Total β-Chorionic gonadotropin；Comparison

人體絨毛膜促性腺激素 （HCG）是一種糖蛋白激素，一旦妊娠即可從血循環(huán)中檢測出。HCG測定在臨床中主要用于正常妊娠、異位妊娠、先兆流產(chǎn)、葡萄胎及絨毛膜癌的監(jiān)測、治療及預(yù)后隨訪［1］。HCG在血液中有多種存在形式，除包括一分子α-亞基和一分子β-亞基的完整HCG分子外，還有其他幾種不同形式的HCG分子，如糖基化HCG分子、缺刻HCG分子、β-亞基C末端肽缺失HCG分子、游離β-亞單位、游離α-亞單位等［2］。目前已知的HCG分子上有16個抗原決定簇了，其中5個在α-亞基上，7個在β-亞基上，4個抗原決定簇是結(jié)合依賴性的，另外還有4個抗原決定簇只有在游離β-亞基上才能檢出［3］。針對HCG分子的檢測，不同實驗室有不同的檢測系統(tǒng)，有針對血清中所有的HCG分子，或只是檢測全HCG分子，或針對游離的β-亞基。目前，發(fā)展較快，應(yīng)用較廣的檢測方法是針對總β-亞基（β-HCG）的化學(xué)發(fā)光法［4］。由于其方法穩(wěn)定，快速，準(zhǔn)確而受到各大醫(yī)院的歡迎。筆者所在醫(yī)院目前有2套不同化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng) （Beckman Coulter Access DXI800直接化學(xué)發(fā)光、Cobas e411電化學(xué)發(fā)光）測定血清總β-HCG。兩套系統(tǒng)均為磁性技術(shù)，但前者為直接化學(xué)發(fā)光，后者為電化學(xué)發(fā)光。為了保證兩臺儀器對血清總β-HCG檢測結(jié)果的一致性，作者對2臺儀器的血清總β-HCG檢測結(jié)果進(jìn)行了比對實驗分析，以確保同一實驗室兩套檢測系統(tǒng)結(jié)果的可靠性，避免結(jié)果差異給臨床診斷帶來的困擾。

1　資料與方法

1.1一般資料

隨機(jī)收集該院40例患者的新鮮血清標(biāo)本，年齡（25～80歲），無溶血，黃疸，按照項目檢測要求保存。其血清β-HCG濃度盡可能均勻分布在檢測范圍內(nèi)（0～1 000 U/L）。其中有17%的標(biāo)本血清β-HCG濃度超過試劑盒的檢測范圍。

1.2儀器與試劑

一臺Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光免疫檢測儀（購于2010年）用于免疫常規(guī)項目檢驗，一臺Cobas e411電化學(xué)發(fā)光免疫檢測儀（購于2012年）用于急診檢驗。2臺儀器檢測試劑均為廠家提供的配套試劑，校準(zhǔn)品。

1.3方法

1.3.1實驗原理以Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光測定為參比方法 （X），Cobas e411電化學(xué)發(fā)光測定為待評方法 （Y），儀器檢測原理均為雙抗體夾心法。Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光測定以兔抗βHCG-堿性磷酸酶結(jié)合物和包被著山羊抗小鼠IgG-小鼠單克隆抗βHCG復(fù)合物的順磁性微粒及血清HCG形成夾心復(fù)合物，借磁場結(jié)合，通過化學(xué)發(fā)光底物L(fēng)umin-Phos 530發(fā)光檢測。Cobas e411以生物素化的抗HCG、釕標(biāo)記的抗HCG與血清HCG形成夾心復(fù)合物，借生物素與鏈霉素親和素包被的微粒子結(jié)合，通過電極加壓后發(fā)光。

1.3.2實驗標(biāo)本測定實驗前按儀器說明書對儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)和保養(yǎng)、校準(zhǔn)和質(zhì)控，然后測定標(biāo)本。實驗期間每天的低、中質(zhì)控值在控才能進(jìn)行樣本測定，每天隨機(jī)收集2～10份新鮮血清，2 h內(nèi)在2臺儀器上完成檢測。

1.3.3數(shù)據(jù)離群值篩查按照EP9-A2文件進(jìn)行方法間離群值篩查，通過測定方法間測定值間的均值，均值間的差值，超過均值的4倍為離群值，若離群值＞1應(yīng)調(diào)查標(biāo)本。

1.3.4兩臺儀器相關(guān)性分析按照EP9-A2文件進(jìn)行可信度判斷，根據(jù)比對數(shù)據(jù)得出回歸方程及相關(guān)系數(shù)r2，并用相關(guān)系數(shù)r2做粗略判斷，若r2≥0.95則認(rèn)為X取值范圍合適，直線回歸統(tǒng)計的斜率和截距可靠，兩檢測系統(tǒng)結(jié)果間具有良好相關(guān)性。

1.3.5兩種系統(tǒng)給定濃度水平檢測結(jié)果偏倚評估根據(jù)臨床要求，將給定的3個預(yù)定水平濃度Xc低值（5 IU/L）、中值（500 IU/L）、高值（1000 IU/L）代入回歸方程，計算待評方法（Y）與參比方法（X）之間的系統(tǒng)誤差（SE）和相對偏倚（SE%）。SE=lYc-Xcl，SE%=（SE/Xc）×100%。本文設(shè)定的β-HCG TEa為20%，以SE＜1/2 TEa為臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，則認(rèn)為兩種系統(tǒng)間的檢測結(jié)果具有可比性。

1.4統(tǒng)計方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行秩和檢驗及相關(guān)性分析。

2　結(jié)果

2.1精密度比較

表1　兩臺儀器測定總β-HCG的精密度比較（IU/L）

2.2方法間離群值檢測

2種檢測系統(tǒng)的數(shù)據(jù)經(jīng)過分析，無離群值。

2.3比對實驗

2臺儀器分別檢測40份血清樣本總β-HCG檢測結(jié)果呈非正態(tài)分布，對此進(jìn)行秩和檢驗，結(jié)果顯示P值為0.563（＞0.05），兩臺儀器的結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.4相關(guān)性分析

2種檢測系統(tǒng)的相關(guān)分析見圖1，相關(guān)系數(shù)r2= 0.9936＞0.95，截距a=0.799，斜率b=0.909，回歸方程y= 0.909x+0.799。說明回歸統(tǒng)計的斜率和截距可靠，可以用此評估兩種檢測系統(tǒng)間的系統(tǒng)偏倚。

圖1　兩臺儀器測定結(jié)果均值散點圖

2.5結(jié)果偏倚評估

總β-HCG在Cobas e411檢測系統(tǒng)上的3個濃度水平以Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光測定為參比方法的SE和SE%，均＜1/2 TEa。見表2。

表2　兩種檢測系統(tǒng)的偏倚評估

3　討論

醫(yī)學(xué)檢驗結(jié)果的互認(rèn)是檢驗醫(yī)學(xué)發(fā)展的需要，而報告互認(rèn)的基礎(chǔ)則是同一檢測項目在不同檢測系統(tǒng)得出的結(jié)果是否具有可比性。近年來，隨著自動化儀器的大量使用，同一實驗室經(jīng)常有2套不同的檢測系統(tǒng)。該院擁有Beckman Coulter Access DXI800與Cobas e411 2種化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)，2套檢測系統(tǒng)由于反應(yīng)體系不同，反應(yīng)池差異有統(tǒng)計學(xué)意義，因此如何減少誤差，保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，實現(xiàn)結(jié)果之間的可比性，是檢驗工作的重點。比對實驗是實現(xiàn)準(zhǔn)確度溯源和檢驗結(jié)果可比性的重要途徑［5-6］。為了使各檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果達(dá)到一致，需要進(jìn)行系統(tǒng)間結(jié)果的比對及偏倚評估，不同檢測系統(tǒng)間的比對結(jié)果超過預(yù)期偏倚時，分析原因后進(jìn)行校正，確保檢測結(jié)果一致，檢驗報告正確發(fā)出，便于臨床結(jié)果解釋。

血清β-HCG在臨床應(yīng)用廣泛，對于先兆流產(chǎn)，輸卵管妊娠及妊娠滋養(yǎng)層疾病有重要意義。為保證我科兩套檢測系統(tǒng)測量結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，此次實驗對血清β-HCG這一檢測項目進(jìn)行了比對實驗。該研究參考了美國CLSI EP9-A2文件［7］，使用病人樣本進(jìn)行方法比對，這樣可以減少基質(zhì)效應(yīng)。由于室間質(zhì)評、室內(nèi)質(zhì)控品的制備與血清樣本制備過程不同，參與室間質(zhì)評、室內(nèi)質(zhì)控品的樣本進(jìn)行質(zhì)量控制時，無法評估患者分析前的各步驟，即標(biāo)本采集、傳遞及處理等對測定結(jié)果的影響［8］。因此使用臨床新鮮血清比對能更加準(zhǔn)確反映測定結(jié)果偏倚的真實情況。

該院Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)參加了2015年衛(wèi)生部臨床檢驗中心全國腫瘤標(biāo)志物室間質(zhì)評，成績優(yōu)秀，結(jié)果可靠，故以該系統(tǒng)為參考系統(tǒng)。實驗室對標(biāo)本的檢測，通常每份樣本只做一次檢驗就發(fā)出報告，這要求檢測系統(tǒng)檢出的結(jié)果必須有良好的重現(xiàn)性。精密度是檢測重現(xiàn)性的指標(biāo),因此，對檢測系統(tǒng)進(jìn)行精密度驗證是必需的，最基本的要求［9-10］。該實驗室2臺儀器低值、高值2個批號的質(zhì)控物測定β-HCG結(jié)果日間及總CV均＜15%，表明兩套檢測系統(tǒng)的精密度較好，檢測結(jié)果可靠。本次比對實驗的結(jié)果表明：2臺儀器的檢測對β-HCG的測量結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義，相關(guān)性良好。該文參照澳大利亞室間質(zhì)評的評價標(biāo)準(zhǔn)［5］的允許總誤差（TEa）：hCG≤20 mU/mL,允許總誤差為±4 mU/mL；hCG＞20 mU/mL,允許總誤差為20%設(shè)置了SE%＜1/2 TEa為可接受標(biāo)準(zhǔn)。在評價低、中、高濃度水平的β-HCG的預(yù)期偏差均在可接受范圍內(nèi)，待評方法的偏倚是可接受的。但是在β-HCG高于試劑盒的直接檢測上限1 000 IU/L，兩套系統(tǒng)的檢測結(jié)果出現(xiàn)較大偏差。在該研究的40組比對數(shù)據(jù)中有6組比對數(shù)據(jù)值＞1 000 IU/L，偏差從5.88%～23.6%不等，其中有3組比對數(shù)據(jù)出現(xiàn)較大偏差（＞10%），分別為15.58% （DXI：49 874 IU/L，E411：42 102 IU/L），19.9%（DXI：5 688 IU/L，E411：4 552 IU/L），23.6%（DXI：10 428 IU/L，E411：7 966 IU/L）。分析其原因，可能由于2套系統(tǒng)在檢測大于1 000 IU/L的β-HCG時都采用稀釋模式，檢測系統(tǒng)存在不同程度的差異，另外由于儀器部件損耗造成的儀器狀態(tài)問題，反應(yīng)系統(tǒng)的差異也會給檢測帶來誤差，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)一定的偏差。這可能是由于兩套系統(tǒng)在檢測大于1 000 IU/L的β-HCG時超出試劑盒上限范圍，都采用稀釋模式，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)一定的偏差。以上研究表明2種檢測系統(tǒng)的系統(tǒng)偏差在可接受范圍內(nèi)，與參比系統(tǒng)具有可比性，可以同時發(fā)布檢測結(jié)果，避免了結(jié)果差異給臨床診斷帶來的困擾。

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The Comparative Analysis for the Detection of Human Serum Total βchorionic Gonadotropin between Beckman Coulter Access DXI800 and Cobas e411

QIN Xue-jun，AN Min-zhi，LI Yang-yu，MAO Qi-guan，LIN Qing
Department of Clinical Laboratory,FuJian University of Traditional Chinese Medicine Laboratory,Fuzhou,Fujian Province, 350009 China

R446.6

A

1674-0742（2016）08（b）－0033-04

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.23.033

秦雪君（1984.1-），女，湖南永州人，碩士，檢驗技師，研究方向：臨床生化。

林青（1969.4-），女，福建南平人，主任技師，研究方向：臨床生化，E-mail：371038389@qq.com。

2016-05-16）