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    山東泰安春秋季節(jié)大棚番茄根內(nèi)根結(jié)線蟲的發(fā)育及動態(tài)

    2016-09-14 01:08:57吳海燕王振華
    植物保護 2016年4期
    關(guān)鍵詞:金豐盛世線蟲

    何 瓊, 吳海燕*, 王振華

    (1. 廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 南寧 530004; 2. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院, 泰安 271018)

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    山東泰安春秋季節(jié)大棚番茄根內(nèi)根結(jié)線蟲的發(fā)育及動態(tài)

    何瓊1,吳海燕1*,王振華2

    (1. 廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 南寧530004; 2. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院, 泰安271018)

    于2008年秋季和2009年春季對‘毛粉’和‘金豐盛世’2個番茄品種采用網(wǎng)袋法收集根系,酸性品紅-次氯酸鈉法染色,體視顯微鏡下檢測,記錄根內(nèi)各齡期根結(jié)線蟲數(shù)量和形成的根結(jié)數(shù)。結(jié)果表明,單位鮮根重線蟲數(shù)量在2008年溫度低時,隨番茄生長有下降趨勢,2009年春季溫度升高時則上升,2個供試品種單位鮮根重線蟲數(shù)無顯著差異(P>0.05);2008年秋季J2到J3,J3到J4的發(fā)育時間均長于2009年,根部形成根結(jié)的數(shù)量變化趨勢相同;當土壤平均溫度為15℃時,根結(jié)線蟲在番茄根內(nèi)完成第1個世代需32 d,25℃時為24 d。

    根結(jié)線蟲;溫度;發(fā)育;動態(tài);番茄

    根結(jié)線蟲(Meloidogynespp.)是一類重要的植物寄生線蟲,常造成嚴重的經(jīng)濟損失。近年來隨著番茄保護地面積的擴大,根結(jié)線蟲病成為番茄的主要病害,呈逐年上升趨勢。據(jù)調(diào)查,山東壽光市80%的蔬菜大棚內(nèi)有根結(jié)線蟲發(fā)生,瓜類、茄果類蔬菜受害嚴重,產(chǎn)量損失可達30%~50%,已成為當前設(shè)施蔬菜生產(chǎn)的一大障礙[1]。根結(jié)線蟲可引起真菌和細菌的復(fù)合侵染,誘發(fā)植物病害。國內(nèi)外在根結(jié)線蟲病的防治方面有較多的研究報道[2-5]。根結(jié)線蟲在陜西一年發(fā)生4~5代[6],湖北一年5代[7],河南一年4代[8]??追灿竦萚9]的研究表明,根結(jié)線蟲在山東煙草種植區(qū)一年有2次侵染高峰,南方根結(jié)線蟲在紅麻根內(nèi)一年完成4代[10]。已有研究表明,掌握土壤中根結(jié)線蟲數(shù)量動態(tài)變化是了解根結(jié)線蟲病及評價防治效果的基礎(chǔ)[11],但未見有關(guān)根結(jié)線蟲在番茄根部的發(fā)育及動態(tài)研究的報道。本研究選擇兩個不同時期,以番茄內(nèi)根結(jié)線蟲為研究對象,利用網(wǎng)袋法收集根系,酸性品紅-次氯酸鈉法染色,體視顯微鏡檢測并記錄根內(nèi)各齡期線蟲數(shù)量以及根部形成的根結(jié)數(shù)量,明確根結(jié)線蟲的發(fā)育特點和規(guī)律,進而明確用藥時間,減少藥劑使用量,增加防治效果。

    1 材料與方法

    1.1試驗地概況

    試驗在山東省泰安市山東農(nóng)業(yè)大學(xué)溫室大棚內(nèi)進行。分別于2008年秋季(10月)和2009年春季(5月)對‘毛粉’(MF)和‘金豐盛世’(JFSS)2個供試品種根內(nèi)根結(jié)線蟲的發(fā)育進程及動態(tài)進行監(jiān)測。2008年土壤中線蟲2齡幼蟲和卵的群體密度分別為1 189.0條/100 mL和238.2個/100 mL;2009年分別為102.4條/100 mL和28個/100 mL。

    1.2試驗設(shè)計與取樣方法

    根據(jù)蘇崇森[12]的研究結(jié)果設(shè)計尼龍網(wǎng)袋,網(wǎng)孔直徑0.18 mm,網(wǎng)袋直徑15 cm,網(wǎng)袋高30 cm。為確保根系采集的完整性,將病土混合均勻裝入網(wǎng)袋,大棚地面開30 cm溝,將裝有病土的網(wǎng)袋嵌入溝內(nèi),周圍覆蓋土壤。育秧缽內(nèi)育苗,出苗后1個月移栽到網(wǎng)袋中,待番茄苗長勢穩(wěn)定后取樣。2008年于10月19日移栽,10月24日第1次取樣,此后每隔4 d取樣1次,12月8日最后1次取樣,共取樣12次。2009年于5月13日移栽,5月18日第1次取樣,此后每隔4 d取樣1次,7月1日最后1次取樣,共取樣12次。試驗地正常除草管理,不施肥打藥。取樣時隨機選3株長勢相似的番茄植株,完整取出尼龍網(wǎng)袋,帶回實驗室備用。

    1.3土壤溫度和含水量測定

    用曲管式地溫計測定5 cm和10 cm土層的溫度,分別于8:00、14:00和18:00讀取,每4 d測定1次,每次選取5~8個點進行測定,取平均值作為各時間點的溫度值,然后取3個時間點溫度值的平均值作為各土層的溫度。利用便攜式TDR (Campbell Scientific Australia Pty. Ltd.)于每次取樣時分別測定3個取樣點的12 cm和20 cm土層的含水量,然后取平均值。

    1.4番茄根內(nèi)根結(jié)線蟲及根結(jié)數(shù)的統(tǒng)計

    將完整的番茄根系沖洗干凈,統(tǒng)計根結(jié)的數(shù)量,稱量番茄的鮮根重,參照劉維志[13]的方法進行根部線蟲染色。在體視顯微鏡(Motic SMZ-168)下檢查根內(nèi)2齡幼蟲(J2)、3齡幼蟲(J3)、4齡幼蟲(J4)和成熟雌蟲的數(shù)量,再折算成單位鮮根重線蟲數(shù)(number of nematodes per gram fresh root,Np),單位為條/g鮮根。采用DPS 3.01軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1試驗期間土壤溫濕度變化

    2008年試驗期間5、10 cm 土層土壤平均溫度分別為15.7和15.3℃,受氣溫影響,變化幅度分別為11.8~19.3℃ (5 cm)、12.5~17.4℃ (10 cm)。溫室從11月15日開始供暖,移栽后24 d土壤溫度逐漸上升。2009年土壤溫度較2008年高,試驗期間5 cm和10 cm土層平均溫度分別為25.9和25.2℃,土層溫度相對穩(wěn)定,變幅分別為22.7~28.2℃ (5 cm)和22.7~27℃(10 cm)(圖1)。

    試驗期間,12 cm的土壤濕度為17.33%~23.67%(2008年)和14.67%~24.67%(2009年);20 cm的濕度分別為20.67%~35%(2008年)和19.67%~30.33%(2009年)(圖2),由于人為定期澆灌,兩年試驗期間土壤濕度無明顯變化。

    圖1 2008年和2009年試驗期間土壤5 cm和10 cm的平均溫度Fig.1 Mean temperature at 5 and 10 cm soil layer after transplanting in 2008 and 2009

    圖2 2008年和2009年試驗期間土壤12 cm和20 cm土壤的濕度Fig.2 Soil moisture at 12 and 20 cm soil depth after transplanting in 2008 and 2009

    2.2番茄移栽后根內(nèi)根結(jié)線蟲總數(shù)的動態(tài)變化

    兩年試驗表明,番茄移栽后,根結(jié)線蟲2齡幼蟲即開始快速侵入根系。2008年,由于土壤溫度較低,隨移栽后天數(shù)增加,2個供試番茄品種單位鮮根重線蟲數(shù)逐漸減少。根內(nèi)線蟲數(shù)量最多出現(xiàn)在移栽后8 d,‘毛粉’和‘金豐盛世’的線蟲數(shù)分別為662.6條/g鮮根和789.9條/g鮮根,隨后逐漸下降。2009年土壤平均溫度較高,侵入根內(nèi)的線蟲數(shù)量平緩上升。番茄移栽后,單位鮮根重線蟲數(shù)隨著時間的增加,呈現(xiàn)上升的趨勢,但整個試驗期間侵入線蟲數(shù)量較少,明顯小于2008年,其中‘毛粉’根內(nèi)的線蟲數(shù)于移栽后44 d達到最大值,為71.10條/g鮮根,‘金豐盛世’于移栽后36 d達到最大值,為66.97條/g鮮根(圖3)。

    圖3 2008年和2009年番茄移栽后根內(nèi)線蟲數(shù)量動態(tài)Fig.3 Dynamics of the number of total juveniles of Meloidogyne sp. per gram of fresh root after transplanting in 2008 and 2009

    2.3番茄移栽后根內(nèi)根結(jié)線蟲的發(fā)育特點和進程

    試驗結(jié)果顯示,兩年試驗溫度條件下,根結(jié)線蟲均能侵入移栽后的2個供試品種根內(nèi)并順利發(fā)育,移栽后4 d均可檢測到J2(表1)。試驗期間,番茄根內(nèi)的線蟲均以J2為優(yōu)勢蟲態(tài),2個品種根內(nèi)不同齡期線蟲動態(tài)無明顯差異,且溫度對線蟲發(fā)育的影響較大。從各齡期線蟲所占比例可知,初次侵染的線蟲數(shù)量較大,線蟲在根內(nèi)發(fā)育的同時,還不斷有J2侵入。2008年試驗表明(圖4a),在移栽后48 d內(nèi),2個番茄品種‘毛粉’和‘金豐盛世’根內(nèi)J2所占比例分別為74.7%~100%和77.3%~100%,而J3和J4比例較小,‘毛粉’和‘金豐盛世’J3所占比例分別為5.6%~21.2%和2.9%~18.7%;J4比例分別為4.0%~8.9%和3.8%~12.1%,J3和J4的高峰分別出現(xiàn)在移栽后28 d和32 d。2009年根內(nèi)各蟲態(tài)百分比的變化趨勢明顯不同于2008年(圖4b),J2的比例有下降的趨勢,J3和J4有上升的趨勢,‘毛粉’和‘金豐盛世’根內(nèi)J2比例分別為41.8%~100%和45.3%~100%;J3比例分別為9.4%~46.0%和12.5%~40.6%;J4比例分別為4.14%~30.67%和5.32%~29.5%,J3和J4占的比例明顯高于2008年。另外,圖3顯示移栽后48 d內(nèi)單位鮮重根內(nèi)的線蟲數(shù)量是增加的,說明J3和J4幼蟲的比例增加受溫度的影響較大。

    2008年,J3和J4分別在移栽后12 d和28 d被檢測到,J2到J3約需8 d,J3到J4約需16 d。2009年檢測到J3和J4的時間均提前,移栽后20 d可檢測到J4,J2發(fā)育到J3,以及J3到J4所需要的時間縮短為4 d和8 d。成熟雌蟲比2008年提前8 d檢測到(2008年在移栽后32 d,2009年在移栽后24 d),2008年平均土溫為15℃,根結(jié)線蟲在番茄根內(nèi)完成第一個世代約32 d,2009年平均土溫為25℃,根結(jié)線蟲完成第一個世代約24 d(表1)。

    表1 番茄移栽后最早檢測到各齡期根結(jié)線蟲的時間

    圖4 2008年和2009年番茄移苗后根結(jié)線蟲J2、J3和J4在根內(nèi)的分布動態(tài)Fig.4 Distribution dynamics of root-knot nematode J2, J3 and J4 in the root after tomato transplanting in 2008 and 2009

    2.4番茄根部根結(jié)數(shù)量的動態(tài)變化

    2個品種移栽后48 d內(nèi)根部形成根結(jié)數(shù)的變化趨勢如圖5所示。2008年根結(jié)數(shù)量顯著高于2009年(P<0.05),但根結(jié)數(shù)量的變化趨勢一致??梢钥闯?兩年試驗分別在移栽后20~28 d之間(2008年)和24~28 d之間(2009年)有一個根結(jié)增加的停滯期,在此前期和后期根結(jié)數(shù)量均增加較快。最后1次檢測結(jié)果表明,2008年‘毛粉’和‘金豐盛世’的根結(jié)數(shù)量分別為366.0個和410.7個;2009年兩者分別為238.7個和219.0個。根結(jié)數(shù)量(y)與移栽后天數(shù)(x)之間的關(guān)系可用多項式y(tǒng)=ax3+bx2+cx+d擬合。2008年‘毛粉’和‘金豐盛世’的多項式分別為y=0.718 3x3-13.299x2+95.688x-76.38(R2=0.941 4)和y=-0.413 5x3+9.073 8x2-32.078x+28.633(R2=0.974 3);2009年‘毛粉’和‘金豐盛世’的擬合式分別為y=-0.413 5x3+9.073 8x2-32.078x+28.633(R2=0.974 3)和y=-0.431 2x3+9.809 3x2-40.687x+40.714 (R2=0.974 3)。

    圖5 2008年和2009年番茄根部根結(jié)數(shù)量的動態(tài)變化Fig.5 Dynamics of the root knot number in tomato roots in 2008 and 2009

    3 討論

    溫室條件下對根結(jié)線蟲在番茄根內(nèi)的發(fā)育及動態(tài)進行監(jiān)測,結(jié)果表明,移栽后48 d內(nèi)番茄根內(nèi)單位鮮根重線蟲數(shù)量因試驗條件不同而表現(xiàn)出差異。2008年在土壤平均溫度15.7℃(5 cm)和15.3℃(10 cm),濕度為17.33%~23.67%(12 cm),20.67%~35%(20 cm)條件下,初始群體密度較大,根內(nèi)線蟲密度總體呈下降趨勢;2009年在土壤平均溫度25.9℃(5 cm)和25.2℃(10 cm),濕度為14.67%~24.67%(12 cm),19.67%~30.33%(20 cm)條件下,根內(nèi)線蟲密度有上升趨勢。溫度是影響線蟲生長發(fā)育的重要因素,根結(jié)線蟲生長溫度范圍8~32℃,最適溫度25~30℃[14-17];其發(fā)育的低溫閾值為9℃,高溫閾值為28℃,超出這個溫度閾值,發(fā)育明顯遲緩。此外其他因素,如濕度、光照及寄主的狀況(包括年齡和營養(yǎng))也影響根結(jié)線蟲的發(fā)育,而且在不同發(fā)育階段起著不同的作用[18]。本研究結(jié)果說明,在山東省,在溫度較低的條件下,溫室土壤中的根結(jié)線蟲可正常侵染,雖然線蟲的發(fā)育受阻,但仍會導(dǎo)致番茄根系形成較多的根結(jié),對根系造成傷害。溫度適宜的情況下,土壤中卵的孵化、幼蟲的侵染及在根內(nèi)的發(fā)育均較快。

    兩年試驗均在番茄移栽后4 d的根內(nèi)檢測到線蟲,2008年單位重量鮮根內(nèi)線蟲數(shù)明顯大于2009年,但2個品種之間單位鮮根重線蟲數(shù)沒有顯著差異(P>0.05)。對本研究中2009年番茄根內(nèi)單位鮮根重線蟲數(shù)量較2008年少的原因分析如下:①移栽前土壤中根結(jié)線蟲密度不同,2008年試驗時土壤中大量的根結(jié)線蟲已經(jīng)侵入番茄根部,造成土壤里線蟲量降低,2009年未重新接種,土壤中線蟲的群體密度顯著低于2008年。因此,2009年番茄根內(nèi)單位鮮根重線蟲數(shù)量比2008年番茄根內(nèi)線蟲數(shù)量少,說明在適宜的范圍內(nèi),接種量越大線蟲侵染量也越大[19]。同時研究結(jié)果表明,在實際生產(chǎn)中可以利用休棚期間種植感病番茄,并于移栽后40~50 d拔除,能顯著降低土壤中根結(jié)線蟲的群體密度。②根據(jù)前人的研究結(jié)果,孵化后21 d的幼蟲,只有19%侵入寄主植物,而剛剛孵化的幼蟲有71%侵入寄主植物[8]。2009年移栽前的土壤溫度適合根結(jié)線蟲卵的孵化,當移栽時這部分孵出的2齡幼蟲侵染能力已下降。③2009年的溫度(22~24℃)適宜番茄生長,移栽后4 d時‘毛粉’和‘金豐盛世’根系的單株鮮根重分別為0.67 g和0.65 g,而2008年番茄長勢較弱,分別為0.34 g和0.24 g,利于線蟲的侵染。

    線蟲能在一個較寬的溫度范圍內(nèi)繁殖,但溫度對于根結(jié)線蟲的發(fā)育影響較大[20-22],在低溫條件下根結(jié)線蟲J3和J4發(fā)育緩慢[23]。本研究中2008年J2發(fā)育成J3,以及J3發(fā)育成J4的時間均比2009年長,且2008年移栽后32 d檢測到成熟雌蟲,2009年則提前8 d,在移栽后24 d檢測到。兩年試驗表明,從線蟲的侵染、發(fā)育上看,普通品種‘毛粉’和耐病品種‘金豐盛世’有相似的動態(tài)變化,兩者之間沒有顯著差異,但 ‘金豐盛世’根內(nèi)線蟲的總數(shù)及根結(jié)數(shù)量均小于‘毛粉’。

    目前有關(guān)根結(jié)線蟲發(fā)生規(guī)律的報道,多從環(huán)境條件[24-25]或植物抗性[26-28]等方面加以描述。而關(guān)于根內(nèi)根結(jié)線蟲發(fā)育進程及動態(tài)的系統(tǒng)研究未見報道。一方面線蟲能否成功發(fā)育及發(fā)育速度可用于評價作物品種對線蟲的抗性;另一方面研究線蟲在根內(nèi)的發(fā)育動態(tài),明確線蟲的發(fā)育進程及生活史可為生產(chǎn)上防控該病提供重要的生物學(xué)信息。根據(jù)線蟲生活史中敏感蟲態(tài)發(fā)生時間確定用藥時期,避免不必要的多次施藥,提高農(nóng)藥的使用效率,達到減藥增效的目的,減少農(nóng)藥污染,節(jié)約成本。

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    [27]Ho J Y, Weide R, Ma H M, et al. The root-knot nematode resistance gene (Mi) in tomato: construction of a molecular linkage map and identification of dominant cDNA markers in resistant genotypes [J].Plant Journal, 1992, 2(6):971-982.

    [28]Brito J A, Stanley J D, Kaur R, et al. Effects of theMi-1, N and tabasco genes on infection and reproduction ofMeloidogynemayaguensison tomato and pepper genotypes [J].Journal of Nematology, 2007, 39(4): 327-332.

    (責任編輯:楊明麗)

    Development and dynamics of root-knot nematode in tomato root under greenhouse in spring and autumn season

    He Qiong1,Wu Haiyan1,Wang Zhenhua2

    (1. Agricultural College of Guangxi University, Nanning530004, China;2. College of Plant Protection, Shandong Agricultural University, Tai’an271018, China)

    The tomato roots of cultivar ‘Maofen’ and ‘Jinfengshengshi’ were collected with mesh bag method in 2008 autumn and 2009 spring, the nematodes in root were stained by the method of acid fuchsin-NaClO, and the number of nematodes (including juveniles at different stage) and root galls were recorded using stereomicroscope. The results in two years indicated that the number of nematodes per gram fresh root was decreased with the growth of tomato under lower temperature in 2008 and increased under higher temperature in 2009. There was no significant difference in the number of nematodes per gram fresh root between two tested cultivars (P>0.05). The development time from J2to J3and J3to J4was longer in 2008 than that in 2009. The number of root galls in 2008 and 2009 showed the similar curve within 48 days after transplanting. Under this experimental condition, at the average soil temperature of 15℃, the first generation of root-knot nematode lasted for 32 days after transplanting, and for 24 days at the average soil temperature of 25℃.

    root-knot nematode;temperature;development;dynamics;tomato

    2015-08-21

    2015-10-10

    公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201503114);國家自然科學(xué)基金(31460464);廣西自然科學(xué)基金(2014GXNSFAA118123)

    E-mail: wuhy@gxu.edu.cn

    S 436.412

    A

    10.3969/j.issn.0529-1542.2016.04.031

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