延胡索內(nèi)生真菌的分離鑒定及產(chǎn)功能酶菌株的初步篩選

馬韋韋，　鄧百萬,2，　陳文強(qiáng),2

(1.陜西理工大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院， 陜西 漢中 723000；2.陜西省食藥用菌工程技術(shù)研究中心， 陜西 漢中 723000)

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延胡索內(nèi)生真菌的分離鑒定及產(chǎn)功能酶菌株的初步篩選

馬韋韋1，鄧百萬1,2，陳文強(qiáng)1,2

(1.陜西理工大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院， 陜西 漢中 723000；2.陜西省食藥用菌工程技術(shù)研究中心， 陜西 漢中 723000)

采用純培養(yǎng)分離方式獲得純化延胡索內(nèi)生真菌菌株，通過形態(tài)學(xué)特征、ITS rDNA序列分析對(duì)分離菌株進(jìn)行鑒定，利用6種培養(yǎng)基篩選出代謝產(chǎn)功能酶菌株。分離獲得312株內(nèi)生真菌，可歸類于9個(gè)屬，其中鐮刀菌屬是優(yōu)勢(shì)類群。對(duì)已測(cè)序的30株內(nèi)生真菌產(chǎn)酶活性研究表明20株試驗(yàn)菌株產(chǎn)纖溶酶，18株產(chǎn)復(fù)合酶，16株產(chǎn)堿性蛋白酶，10株產(chǎn)接觸酶，1株產(chǎn)纖維素酶；其中4株內(nèi)生真菌可代謝產(chǎn)生4種不同功能酶，為代謝產(chǎn)多酶系菌株。延胡索內(nèi)生真菌的分離鑒定及產(chǎn)功能酶菌株的篩選不僅豐富了內(nèi)生真菌資源，而且也為獲得新穎結(jié)構(gòu)化合物提供理論基礎(chǔ)。

延胡索；內(nèi)生真菌；分離鑒定；功能酶

延胡索(Corydalisyanhusuo)又名延胡、玄胡索、元胡索等，罌粟科、紫堇屬多年生草本植物，塊莖球形，花瓣紫紅色，蒴果圓柱形，兩端漸狹，夏季開花，性味辛、苦、溫，入肝、胃經(jīng)，有活血、散瘀、理氣、止痛功效[1]。

植物內(nèi)生真菌(Endophyte fungi)是指在某一時(shí)期生活在植物各種組織和器官的細(xì)胞間或細(xì)胞內(nèi)，但對(duì)宿主植物組織不引起明顯病害癥狀的、與宿主植物建立和諧關(guān)系的一類真菌[2]。植物與內(nèi)生真菌之間是互惠共生關(guān)系，一方面植物為內(nèi)生真菌提供光合產(chǎn)物和礦物；另一方面內(nèi)生真菌的代謝物能刺激植物的生長發(fā)育，提高宿主植物對(duì)生物脅迫和非生物脅迫的抵抗能力[3]。植物內(nèi)生真菌早已成為當(dāng)代微生物資源研究的熱點(diǎn)[4]。相關(guān)研究表明內(nèi)生真菌可代謝產(chǎn)生一些具有抗癌、抑菌、抗氧化等生物活性物質(zhì)，以及酶活性物質(zhì)[5]。另有研究發(fā)現(xiàn)植物內(nèi)生真菌生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的優(yōu)勢(shì)可消除植物資源生產(chǎn)周期長、產(chǎn)量低、不可再生的限制[6]。目前，關(guān)于其應(yīng)用的研究主要集中在活性物質(zhì)生產(chǎn)、經(jīng)濟(jì)作物種植、環(huán)境保護(hù)、衛(wèi)生保健等方面[7]，對(duì)于內(nèi)生真菌產(chǎn)酶活性方面的研究甚少。植物內(nèi)生真菌的系統(tǒng)研究，不僅有助于豐富內(nèi)生真菌資源，而且有助于拓展我國尚處于基礎(chǔ)階段內(nèi)生真菌應(yīng)用的研究，保護(hù)野生植物資源[8-9]。近年來，森林砍伐，生態(tài)環(huán)境遭到破壞，使野生延胡索的棲息地逐漸縮小，其賴以生存的條件正逐漸喪失[10]。野生延胡索資源的急劇減少也意味著內(nèi)生真菌資源將會(huì)大量消失。

本研究以野生延胡索為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)其內(nèi)生真菌進(jìn)行分離鑒定，并以內(nèi)生真菌生物活性和功能酶的初步篩選為主要研究內(nèi)容，為開發(fā)利用其潛在價(jià)值奠定理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1樣品采集

2014年8月采自陜西城固野生延胡索全株，取其塊莖，晾干后放入密封袋內(nèi)4 ℃低溫冷藏備用。

1.1.2培養(yǎng)基

(1)分離培養(yǎng)基：綜合馬鈴薯培養(yǎng)基(g/L)：馬鈴薯200.0，葡萄糖20.0，MgSO4·7H2O 3.0，KH2PO45.0，維生素B1 0.01，瓊脂20.0，pH自然。

(2)產(chǎn)功能酶篩選培養(yǎng)基：

①纖溶酶篩選培養(yǎng)基[11](g/L)：麥芽糖15.0，酪蛋白10.0，NaCl 15.0，瓊脂20.0，pH 7.2～7.4。

②接觸酶篩選培養(yǎng)基[12](g/L)：馬鈴薯200.0，葡萄糖20.0，MgSO4·7H2O 3.0，KH2PO45.0，維生素B1 0.01，瓊脂20.0，pH自然，滅菌后冷卻至50 ℃，加入過氧化氫溶液至濃度為5.0 mmol/L。

③羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)培養(yǎng)基(g/L)[13]：CMC-Na 10.0，MgSO4·7H2O 0.5，KH2PO41.0，Na2HPO41.0，蛋白胨10.0，酵母浸粉5.0，pH 7.2～7.4。染色液：1.0mol/L剛果紅溶液；脫色液：1.0 mol/L NaCl溶液。

④殼聚糖酶篩選培養(yǎng)基[14](g/L)：水溶性殼聚糖10.0，(NH4)2SO45.0，酵母提取物1.0，K2HPO4·3H2O 20.0，MgSO4·7H2O 1.0，NaCl 5.0，瓊脂20.0，pH 6.5。

⑤堿性蛋白酶篩選培養(yǎng)基[15-17](g/L)：蛋白胨10.0，葡萄糖1.0，CaCl20.1，酪氨酸0.1，酪素5.0，瓊脂22.0，pH 8.5～9.0。

⑥復(fù)合酶篩選培養(yǎng)基[18](g/L)：NaNO33.0，KCl 0.5，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01，K2HPO41.0，MgSO4·H2O 0.5，蔗糖30.0，干酪素10.0，瓊脂15.0，pH 6.0～6.5。

1.1.3試劑與儀器

DNA marker(DL2000)、2×Taq PCR Mix，上海生工；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光和熒光凝膠成像系統(tǒng)(Alliance 4.7)，英國UVItec公司；PCR擴(kuò)增儀(Mycycler)，美國Bio-Rad；高級(jí)研究顯微鏡(E600)，日本Nikon公司，移液器，游標(biāo)卡尺，解剖刀等。

1.2方法

1.2.1菌株分離保藏

采集無霉變野生延胡索塊莖自來水沖洗干凈晾干，進(jìn)行表面消毒(75%酒精漂洗30 s，無菌水洗4次；10% NaClO溶液漂洗3 min，無菌水沖洗4次；重復(fù)第一步操作)，移液器吸取200 μL最后一次洗滌水涂布到綜合馬鈴薯培養(yǎng)基平板上，28 ℃培養(yǎng)7 d，觀察是否有菌落長出，以檢測(cè)消毒效果是否徹底。

用無菌濾紙吸干延胡索塊莖表面水分后，將其切成1 mm×5 mm×5 mm的組織塊，每3塊做一次重復(fù)接種到綜合馬鈴薯培養(yǎng)基平板上。每隔8 h觀察菌落形態(tài)變化，應(yīng)用組織分離法，根據(jù)菌落形態(tài)、顏色、生長速度對(duì)延胡索內(nèi)生真菌進(jìn)行分離，直至獲得單一純化菌株，保藏到PDA斜面，4 ℃保藏備用。

1.2.2內(nèi)生真菌分類鑒定及系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建

利用綜合馬鈴薯培養(yǎng)基進(jìn)行菌株活化復(fù)壯，28 ℃倒置培養(yǎng)4～5 d，觀察菌絲顏色、菌落大小、菌落邊緣、基質(zhì)顏色等特征。應(yīng)用插片法，經(jīng)乳酸石炭酸棉蘭染色后，在顯微鏡下觀察菌絲有無橫隔、孢子形態(tài)、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)特征等微觀特征，進(jìn)行初步形態(tài)學(xué)鑒定。

選取培養(yǎng)4～5 d的菌株，應(yīng)用CTAB法[19]提取基因組總DNA。選用ITS1、ITS4引物，通過PCR擴(kuò)增rDNA ITS基因片段。PCR擴(kuò)增體系為25 μL體系：2×PCR Mix試劑15.0 μL、引物(10 μmol/L)各1.0 μL、無菌超純水10.0 μL、模板3.0 μL。PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件：95 ℃，4 min；94 ℃，1 min；55 ℃，40 s；72 ℃，1 min，33個(gè)循環(huán)；72 ℃，10 min；4 ℃，60 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，樣品送交上海生工生物科技有限公司進(jìn)行正向測(cè)序。

測(cè)序所得菌株18S rDNA ITS序列提交到GeneBank進(jìn)行BLAST比對(duì)，確定與測(cè)序菌株親緣關(guān)系最近的種屬，并選取同源性最高的菌株，應(yīng)用Mega 6.06軟件進(jìn)行ClustalW比對(duì)分析，參考張麗娜等[20]的鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.3產(chǎn)功能酶菌株的初步篩選

采用透明圈法，應(yīng)用纖溶酶、纖維素酶、堿性蛋白酶、復(fù)合酶、接觸酶、殼聚糖酶培養(yǎng)基篩選代謝產(chǎn)功能酶菌株。每個(gè)培養(yǎng)基平板接種兩塊大小相同的活化菌塊，每個(gè)菌株做3次平行對(duì)照，28 ℃培養(yǎng)24 h。分別測(cè)量記錄透明圈直徑與菌落直徑，計(jì)算兩者差值D。

2　結(jié)果與分析

2.1表面消毒效果檢測(cè)

采用1.2.1菌株分離保藏中所述表面消毒方法，表面消毒效果檢測(cè)結(jié)果如表1所示。

表1　表面消毒效果檢測(cè)

注：*表示難以計(jì)數(shù)；+++表示10個(gè)菌落以上；++表示5—10個(gè)菌落；+表示

5個(gè)菌落以內(nèi)；-表示無菌落。

表1結(jié)果顯示，隨著消毒時(shí)間的延長或消毒劑濃度的增加，消毒效果越明顯；使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.0%、5.0% NaClO溶液消毒，接種最后一次洗滌水，結(jié)果顯示雜菌落數(shù)量均在5個(gè)以上，對(duì)消除野生延胡索表面附生菌的效果不佳；當(dāng)NaClO溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.0%時(shí)間延長到3.0 min時(shí)，無雜菌長出，為最佳消毒方法。

2.2延胡索內(nèi)生真菌的分離及鑒定

對(duì)30株不同形態(tài)菌株顯微觀察結(jié)果顯示，野生延胡索內(nèi)生真菌菌絲體發(fā)達(dá)，多分枝，多為深色菌絲，其中22株內(nèi)生真菌具有隔菌絲，11株內(nèi)生真菌產(chǎn)有隔分生孢子，分生孢子座多呈球狀。結(jié)合18S rDNA ITS序列分析可知30株野生延胡索內(nèi)生真菌中半知菌類(Deuteromycetes)20株，約占66.67%，子囊菌綱(Ascomycetes)5株，約占16.67%，接合菌綱(Zygomycetes)2株，約占6.67%，異擔(dān)子菌綱(Heterobasidiomycees)、糞球殼綱(Sordariomycetes)、座囊菌綱(Dothideomycetes)各1株，分別約占3.33%。具體形態(tài)特征見表2。

2.3基于18S rDNA ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育分析

野生延胡索內(nèi)生真菌ITS序列與NCBI數(shù)據(jù)庫已知ITS序列同源性均在99%～100%之間，可以歸類于子囊菌門、擔(dān)子菌門、接合菌門、半知菌類中的9個(gè)屬。其中鐮刀菌屬(Fusarium)為優(yōu)勢(shì)類群，約占73.68%，其次為曲霉屬(Aspergillus)約占7.69%，赤殼屬(Nectria)、毛霉屬(Mucor)、木耳屬(Auricularia)、青霉屬(Penicillium)、鏈格孢屬(Alternaria)、根霉屬(Rhizopus)、散囊菌屬(Eurotiomycetes)均約占2.66%。系統(tǒng)發(fā)育樹中可見編號(hào)為YH-65(KP903486)、YH-132(KP903496)、YH-135(KP903498)的延胡索內(nèi)生真菌分屬于木耳屬、根霉屬、毛霉屬，處于相同分類地位，具有高度同源性；同時(shí)可見YH-102(KP995447)、YH-214(KP903538)共同形成一個(gè)較大的分支，顯示了高度同源性；此外，YH-203(KP903533)、YH-215(KP903539)可歸類于子囊菌綱，又分別與Eurotiomycetessp.TC50a、Aspergillusflavus聚在一枝，表明高等真菌進(jìn)化地位越高，同源性差異越明顯。系統(tǒng)發(fā)育樹見圖1。

2.4延胡索內(nèi)生真菌產(chǎn)酶活性研究

野生延胡索內(nèi)生真菌多數(shù)具有良好的代謝產(chǎn)酶活性，部分菌株具有代謝產(chǎn)多酶系特性，篩選到的功能酶有纖溶酶、纖維素酶、堿性蛋白酶、復(fù)合酶、接觸酶，研究中未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)殼聚糖酶菌株。30株研究菌株有20株代謝產(chǎn)纖溶酶，分別各有1株菌株可歸類于根霉屬、赤殼屬、散囊菌屬，2株曲霉屬內(nèi)生真菌，15株鐮刀菌屬內(nèi)生真菌；18株代謝產(chǎn)復(fù)合酶的內(nèi)生真菌包括1株木耳屬內(nèi)生真菌，1株赤殼屬內(nèi)生真菌，2株曲霉屬內(nèi)生真菌，14株是鐮刀菌屬內(nèi)生真菌；產(chǎn)堿性蛋白酶菌株有16株，其中1株曲霉屬內(nèi)生真菌，1株根霉屬內(nèi)生真菌，14株鐮刀菌屬內(nèi)生真菌；10株代謝產(chǎn)接觸酶，鏈格孢屬、毛霉屬、曲霉屬各有1株，7株屬于鐮刀菌屬；1株青霉屬內(nèi)生真菌在纖維素酶初篩中出現(xiàn)明顯透明圈。編號(hào)為YH-159、YH-206、YH-214、YH-217的鐮刀菌屬真菌(Fusarium)代謝產(chǎn)多酶系，篩選結(jié)果顯示均可產(chǎn)4種不同的功能酶。30株野生延胡索內(nèi)生真菌產(chǎn)酶活性篩選結(jié)果見表3。

注：發(fā)育樹節(jié)點(diǎn)數(shù)值表示Brootstrap值，括號(hào)中為各菌種的GeneBank登錄號(hào)，線段0.05表示序列差異的分支長度。圖1　基于野生延胡索30株內(nèi)生真菌rDNA ITS序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹

表3　產(chǎn)功能酶菌株透明圈測(cè)量數(shù)值

注：+表示0

表示15

3　討　論

本研究共分離獲得野生延胡索內(nèi)生真菌312株，經(jīng)形態(tài)學(xué)特征和18S rDNA-ITS序列分析，可歸類為9個(gè)屬，每個(gè)屬產(chǎn)功能酶情況各不相同。代謝產(chǎn)功能酶菌株篩選結(jié)果表明，野生延胡索內(nèi)生真菌具有優(yōu)良的產(chǎn)酶特性。高占爭(zhēng)等[21]的報(bào)道顯示國內(nèi)外對(duì)纖溶酶的研究多集中于霉菌、枯草芽孢桿菌等，研究發(fā)現(xiàn)鐮刀菌屬植物內(nèi)生真菌也代謝產(chǎn)纖溶酶。曲霉屬、青霉屬真菌[22]是研究纖維素酶的熱點(diǎn)，野生延胡索內(nèi)生真菌中簡青霉(Penicilliumasturianum)代謝產(chǎn)纖維素酶活性較強(qiáng)。王棟等[23]研究米曲霉可產(chǎn)中性蛋白酶，此次分離到的米曲霉具有較高代謝產(chǎn)堿性蛋白酶活性，同曲霉屬另一株曲霉在初篩中顯示出更高的堿性蛋白酶活力。國內(nèi)對(duì)根霉產(chǎn)蛋白酶的報(bào)道多集中于酸性蛋白酶[24]，野生延胡索根霉分離株可代謝產(chǎn)堿性蛋白酶，并且多數(shù)鐮刀菌屬內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)堿性蛋白酶。復(fù)合酶是與單一酶相對(duì)的概念，是工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛的催化劑，陳國參等[25]研究發(fā)現(xiàn)一株代謝產(chǎn)復(fù)合酶黑曲霉菌株，這種酶也是野生延胡索鐮刀菌屬內(nèi)生真菌所產(chǎn)主要功能酶之一，此前國內(nèi)尚無關(guān)于植物內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)復(fù)合酶的報(bào)道。筆者實(shí)驗(yàn)中改進(jìn)了張?jiān)鱿榈萚12]的研究方法，篩選出鐮刀菌屬內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)接觸酶的菌株。

綜上所述，筆者應(yīng)用組織分離方法，結(jié)合形態(tài)學(xué)和ITS rDNA序列分析將30株研究菌株歸類到9個(gè)屬，接下來將進(jìn)一步開展野生延胡索內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物研究，以期能夠早日實(shí)現(xiàn)野生延胡索內(nèi)生真菌潛在價(jià)值的應(yīng)用。

[1]張宏達(dá),黃云暉,繆汝槐,等.種子植物系統(tǒng)學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2006:172.

[2]STIERLE A,STROBELG,STIERLE D.Waxol and taxane production by Taxom yces andreanae,an endophytic fungus of Pacific yew[J].Science,1993,260:214-216.

[3]任安芝,高玉葆.植物內(nèi)生真菌——一類應(yīng)用前景廣闊的資源微生物[J].微生物學(xué)通報(bào),2001,28(6):90-93.

[4]王志偉,紀(jì)燕玲,陳永敢，等.禾本科植物內(nèi)生真菌資源及其物種多樣性[J].生態(tài)學(xué)報(bào),2010,30(17):4771-4781.

[5]曾培源,吳錦忠.國外植物內(nèi)生真菌活性物質(zhì)的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2010,22(11):9-13.

[6]孫奎.藥用植物內(nèi)生真菌的研究進(jìn)展[J].青海農(nóng)林科技,2010(1):26-28.

[7]徐玲玲,單慶紅,郭斌.植物內(nèi)生菌研究進(jìn)展及應(yīng)用展望[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(13):5641-5643.

[8]STROBEL G,DAISY B.Bioprospecting for microbial endophytes and their natural products[J].Microbiology and Molecular Biology Reviews,2003,67(4):491-502.

[9]姚玉秀,魏希穎.藥用植物內(nèi)生真菌生物活性及其活性成分研究[J].藥物生物技術(shù),2011,18(2):185-188.

[10]許翔鴻,余國奠,王崢濤.野生延胡索種質(zhì)資源現(xiàn)狀及其質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].中國中藥雜志,2004,29(5):399-401.

[11]劉彩萍.產(chǎn)纖溶酶菌DC-YJ11的篩選鑒定,混合發(fā)酵優(yōu)化及纖溶酶的分離純化[D].廣州:華南理工大學(xué),2011.

[12]張?jiān)鱿?王偉,郝建華,等.產(chǎn)過氧化氫酶菌株CE-1的篩選與鑒定[J].海洋科學(xué),2010,34(11):54-58.

[13]王賢豐,單洪偉,張家松,等.從海水環(huán)境分離篩選甘蔗渣纖維素降解菌[J].微生物學(xué)通報(bào),2015,42(6):981-989.

[14]王艷君,卓少玲,陳盛,等.產(chǎn)殼聚糖酶菌株的篩選、鑒定及酶學(xué)特性分析[J].微生物學(xué)通報(bào),2012,39(12):1734-1745.

[15]黃繼翔.產(chǎn)堿性蛋白酶芽孢桿菌的鑒定[J].微生物學(xué)通報(bào),2011,38(2):157-163.

[16]梅承芳.產(chǎn)堿性蛋白酶菌株VibriometschnikoviiDL 33-51[D].青島:中國海洋大學(xué),2004.

[17]張劍,趙雷敏,康林霞.堿性蛋白酶活力分析方法研究[J].日用化學(xué)工業(yè),2012,42(3):192-195.

[18]曲佳,劉開輝,丁小維,等.南海局部海洋沉積物中真菌多樣性及產(chǎn)酶活性[J].微生物學(xué)報(bào),2014,54(5):552-562.

[19]陳鋒菊,李百元,楊冰,等.一種經(jīng)濟(jì)快速提取絲狀真菌基因組DNA的方法[J].生命科學(xué)研究,2010,14(2):122-124.

[20]張麗娜,榮昌鶴,何遠(yuǎn),等.常用系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建算法和軟件鳥瞰[J].動(dòng)物學(xué)研究,2013,34(6):640-650.

[21]高占爭(zhēng).微生物產(chǎn)纖溶酶的研究[D].無錫:江南大學(xué),2006.

[22]麥國琴,許曉萍,余翠媚,等.產(chǎn)木聚糖酶和纖維素酶真菌的酶學(xué)性質(zhì)分析[J].食品研究與開發(fā),2011,32(9):179-183.

[23]王棟,馮杰,鄭志永,等.醬油發(fā)酵用2種米曲霉中性蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)比較[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2012,31(5):473-485.

[24]張美香.根霉源酸性蛋白酶的初步研究[D].鄭州:河南工業(yè)大學(xué),2011.

[25]陳國參,劉德海,解復(fù)紅,等.一株產(chǎn)復(fù)合酶真菌菌株的篩選、鑒定及發(fā)酵產(chǎn)酶研究[J].中國釀造,2012,31(9):70-74.

[責(zé)任編輯：張存鳳]

Preliminary screening of endophyte fungi with functional enzyme activity inCorydalisyanhusuo

MA Wei-wei1,DENG Bai-wan1,2,CHEN Wen-qiang1,2

(1.School of Bioscience and Engineering, Shaanxi Sci-Tech University, Hanzhong 723000, China;2.Engineering Technology Research Center of Edible and Medicinal Fungi in Shaanxi Province,Hanzhong 723000,China)

The isolation and identification of endophyte fungi inCorydalisyanhusuo, preliminary screening of strains functional enzyme activity. Strains were isolated by pure culture method and classified on the basis of morphological characters and 18S rDNA gene sequence analysis. The total number of isolates was 312. Morphology and ITS sequence analysis classified these stains into 9 genera, of which the dominant population wasFusarium. Research on functional enzyme activity displayed 20 strains with fibrinolytic enzyme activity, 18 strains with compound enzyme activity, 16 strains with alkaline protease activity, 10 strains with catalase activity, 1 strains with cellulase activity, but no strains with chitosanase activity. It was worthy to say 4 strains with 4 kinds of different functional enzyme activity were high efficient enzyme production strains. The isolation and identification of endophytic fungi withinCorydalisyanhusuo, screening of strains enzyme activity did not only enrich the resources of endophyte fungi, but also provided basis for mining novel stunctional compound.

Corydalisyanhusuo;endophyte fungi;isolation and identification;functional enzyme

1673-2944(2016)04-0065-08

2016-03-17

2016-06-13

陜西省“13115”科技創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目(2008ZDGC-04)

馬韋韋(1989—)，女，山東省鄒平縣人，陜西理工大學(xué)碩士研究生，主要研究方向?yàn)槲⑸锓N質(zhì)資源的保護(hù)與開發(fā)利用；[通信作者]鄧百萬(1963—)，男，陜西省眉縣人，陜西理工大學(xué)教授，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向?yàn)槲⑸锓N質(zhì)資源的保護(hù)與開發(fā)利用；陳文強(qiáng)(1956—)，男，陜西省洋縣人，陜西理工大學(xué)教授，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向?yàn)槲⑸镔Y源的保護(hù)與利用。

Q949.32

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