血清AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌中的診斷價值

徐恩君，陳秋莉，李 濤，郝 麗，肖春紅，徐元宏，周 敏，徐勝前

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血清AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌中的診斷價值

徐恩君1，陳秋莉1，李 濤1，郝 麗1，肖春紅1，徐元宏1，周 敏2，徐勝前3

目的 探討甲胎蛋白（AFP）、甲胎蛋白異質(zhì)體（AFPL3）以及AFP-L3比率在原發(fā)性肝癌（HCC）中的診斷價值。方法 選取患者共354例，原發(fā)性肝癌（HCC）110例，良性肝病（BLD）244例（其中肝炎 94例，肝硬化126例，肝良性腫瘤24例），采用親和吸附離心管分離AFP-L3，用電化學發(fā)光法測定AFP和AFP-L3含量，計算AFP-L3比率。結果110例HCC患者中，有32例AFP＜20 ng/ml，30例AFP 20～200 ng/ml，48例AFP＞200 ng/ml；244例BLD患者中，196 例AFP＜20 ng/ml。HCC組 AFP、AFP-L3和AFP-L3比率明顯高于BLD組（P＜0.01）。AFP、AFP-L3和AFP-L3比率ROC曲線下面積（AUC）分別是0.809、0.819、0.800，而聯(lián)合3種指標檢測的AUC是0.829（P＜0.01）。AFP-L3比率的Cut-off值在5%、10%和15%時，診斷的靈敏度分別是59.1%、50.9%和40.9%，特異度分別是86.1%、94.7%和98.4%。結論 AFP和AFP-L3聯(lián)合檢測對HCC的診斷效能大于單獨檢測AFP。AFP-L3比率的最佳Cut-off值是5%。

原發(fā)性肝癌；甲胎蛋白；甲胎蛋白異質(zhì)體

網(wǎng)絡出版時間：2016-6-6 13：52：32 網(wǎng)絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160606.1352.068.html

原發(fā)性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居第五位，病死率位居第三位［1］。甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）雖作為HCC的診斷以及療效觀察指標，但在部分良性肝病、消化系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)的部分惡性腫瘤中也升高，部分肝癌患者始終保持AFP低濃度陽性，故其敏感性和特異性不夠理想。研究［2］表明根據(jù)不同肝細胞組織分泌的AFP糖鏈結構不同，AFP分為AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3，其中AFP-L1主要由良性病變的肝細胞產(chǎn)生，AFP-L2主要來自孕婦，而AFPL3為肝癌細胞特異性產(chǎn)生，對HCC的診斷有很高的敏感度和特異度。美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）2005年批準 AFP-L3檢測用于肝癌預警，并把診斷肝癌的陽性閾值定為10%，我國衛(wèi)計委也于2011年推薦AFP-L3作為HCC診斷的特異性指標［3］。該研究擬通過檢測HCC患者中的AFP含量以及AFP-L3比率，探討AFP和AFP-L3單獨和聯(lián)合檢測在HCC診斷中的價值。

1　材料與方法

1.1病例資料 選取安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院2014年11月～2015年7月住院患者共354例血清，HCC 110例，其中男92例，女18例，年齡19～89 （55.0±12.7）歲；良性肝?。╞enign liver disease，BLD）244例（肝炎94例，肝硬化126例，肝良性腫瘤24例），其中男 176例，女68例，年齡17～90 （49.6±14.1）歲。疾病診斷符合2000年中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯(lián)合修訂的“病毒性肝炎防治方案”［4］及中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司組織并由全國腫瘤防治辦公室與中國抗癌協(xié)會合編的“新編常見惡性腫瘤診治規(guī)范”中的診斷標準［5］。

1.2主要試劑及儀器 甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP-L3）親和吸附離心管（北京熱景生物技術有限公司）；羅氏Cobas E601全自動電化學發(fā)光免疫分析儀（瑞士羅氏診斷公司）。

1.3測定方法 患者晨起抽取靜脈血3～4 ml，3 500 r/min離心5 min，取血清備用。AFP-L3的分離采用親和吸附離心管法，管中預裝有親和介質(zhì)，該親和介質(zhì)能特異性結合AFP-L3。取待測患者血清嚴格按照試劑盒說明書操作，吸取血清400 μl加入600 μl清洗液中，混勻。將親和吸附離心管的上部離心管裝入離心外管中，3 000 r/min離心20 s去除保護液，吸取稀釋后的血清600 μl加入到上部離心管中，室溫靜置10 min；加入清洗液1.2 ml，3 000 r/ min離心20 s，棄上清液。加入600 μl洗脫液，3 000 r/min離心20 s，收集離心柱外管中的液體，獲得含AFP-L3的樣本，然后用電化學發(fā)光法檢測總的AFP和AFP-L3的含量，計算AFP-L3占AFP總量的百分比。

1.4統(tǒng)計學處理 應用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析。各組標本檢測數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布，用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）［M（P25～P75）］表示，采用非參數(shù)檢驗，組間比較采用 Mann-Whitney U檢驗；率的比較采用χ2檢驗；Logistic回歸分析用于各種預測值以及聯(lián)合檢測ROC曲線下面積（AUC）的計算。以雙側P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1HCC組與BLD組AFP結果分布 HCC組患者平均年齡顯著高于BLD組，并且男性比例明顯高于BLD組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。110 例HCC患者中有32例（29.1%）患者AFP＜20 ng/ ml，而在244例BLD患者中有11例（4.5%）患者AFP＞200 ng/ml。具體HCC組與BLD組AFP結果分布情況見表1。

表1HCC組與BLD組AFP結果分布

2.2HCC組與BLD組實驗室檢查指標的比較HCC組血清谷草轉氨酶（aspartate transaminase，AST）表達水平明顯高于BLD組，而白蛋白卻顯著低于BLD組（P＜0.01）。谷丙轉氨酶（alanine transaminase，ALT）、血小板計數(shù)、總蛋白和凝血酶原時間國際化比率（international normalized ratio ofprothrombin time，PT-INR）在兩組間差異無統(tǒng)計學意義。HCC組患者血清 AFP、AFP-L3和 AFP-L3比率的表達水平明顯高于BLD組（U=5 118、4 857、5 370，P＜0.01）。HCC組與BLD組實驗室檢查指標的比較見表2。

圖1　HCC組和BLD組AFP總體水平的比較

2.3不同AFP表達水平組之間AFP-L3以及AFP-L3比率的比較 HCC組AFP總體水平高于BLD組（P＜0.01）。見圖1。在AFP＜20 ng/ml的患者中，HCC組的AFP-L3和AFP-L3比率明顯高于BLD組（U=2 414、2 254，P＜0.01）。在AFP 20～200 ng/ml的患者中，HCC組AFP-L3的表達水平高于BLD組（U=387.5，P=0.035），AFP-L3比率的表達水平顯著高于 BLD組（U=296，P=0.001）。在AFP＞200 ng/ml的患者中，HCC組AFP-L3的表達水平明顯高于BLD組（U=124，P=0.006），AFP-L3比率也顯著高于BLD組（U=151，P= 0.027）。見圖2、3。

表　2 HCC組與BLD組實驗室檢查指標的比較［M（P25～P75）］

圖2　不同AFP表達水平亞組之間AFP-L3的比較

圖3　不同AFP表達水平亞組之間AFP-L3比率的比較

2.4AFP和AFP-L3單獨檢測及聯(lián)合檢測對HCC診斷效能的比較 由ROC曲線分析得出，AFP、AFP-L3和AFP-L3比率ROC曲線下面積［AUC （95%CI）］分別是0.80（0.757～0.862）、0.819 （0.766～0.872）、0.800（0.744～0.856），而聯(lián)合3種指標檢測的ROC曲線面積［AUC（95%CI）］是0.829（0.776～0.881），P值均小于0.01；3種指標聯(lián)合檢測的診斷效能大于每種指標單獨檢測的診斷效能（圖4）。每種指標單獨檢測以及聯(lián)合檢測在不同Cut-off值下對HCC診斷效能的比較見表3。AFP、AFP-L3和AFP-L3比率單獨檢測對HCC的總有效率分別是77.40%、77.68%和81.64%，而3種指標聯(lián)合檢測對HCC診斷的總有效率是82.77%（表4）。

圖4　AFP、AFP-L3和 AFP-L3比率鑒別診斷HCC的 ROC曲線分析

3　討論

HCC是一種惡性程度高、進展快，預后差的惡性腫瘤，AFP作為篩查和診斷HCC最常用的血清腫瘤標志物已被臨床廣泛認可，但AFP用于診斷早期HCC的假陰性率達到40%以上，進展期HCC的AFP假陰性率也達到15%～20%［6］，容易造成臨床誤診或是漏診。本研究110例HCC患者中有29.1%患者AFP＜20 ng/ml，27.3%患者AFP在20 ～200 ng/ml；而244例BLD患者中有15.2%患者AFP在20～200 ng/ml，4.5%患者AFP＞200 ng/ml，說明AFP對HCC的診斷缺乏有效的靈敏度和特異性，這與文獻［6-8］報道相符，所以本研究以AFP不同表達水平（AFP＜20 ng/ml、AFP 20～200 ng/ml 和AFP＞200 ng/ml）分為3個亞組，分別單獨和聯(lián)合檢測AFP和AFP-L3對HCC的診斷價值。

表3　3種指標不同Cut-off值對HCC診斷效能的比較

表4　血清AFP與AFP-L3聯(lián)合檢測對HCC的診斷價值（%）

本研究HCC組患者血清總體AFP、AFP-L3和AFP-L3比率的表達水平明顯高于BLD組，提示AFP和AFP-L3對肝癌的診斷有重要意義。AFP-L3和AFP-L3比率在不同亞組間的表達，HCC組均顯著性高于BLD組，AFP低中度升高時，AFP-L3以及AFP-L3比率已明顯升高，升高幅度遠高于AFP；HCC患者的AFP-L3和AFP-L3比率多集中在高值區(qū)，而BLD患者多集中在低值區(qū)，二者重疊較少，有利于早期HCC和BLD的鑒別診斷。AFP-L3的濃度與AFP相關，受AFP的假陽性和假陰性影響較大，而AFP-L3比率與AFP無相關性，可以作為HCC診斷的一種獨立預測指標。本研究顯示AFP、AFPL3和AFP-L3比率聯(lián)合檢測的ROC曲線面積（AUC）是0.829，總有效率是82.77%，顯著高于各種指標單獨檢測的診斷效能，所以臨床上應該建立有效的多指標、多參數(shù)聯(lián)合檢測模型以提高對HCC診斷的準確性。

關于AFP和AFP-L3比率對HCC診斷的最佳Cut-off值一直存在爭議，不同實驗研究證實AFP診斷HCC的最佳Cut-off值為20 ng/ml［9］、108.5 ng/ ml［10］或400 ng/ml［11］。早期文獻［9］報道AFP-L3比率對HCC診斷的Cut-off值為10%，近年來更多學者認為AFP-L3比率的Cut-off值應該是在 5% ～10%［12-13］。本研究顯示AFP的Cut-off值在20、200 和400 ng/ml時，診斷的靈敏度分別是70.9%、43.6%、36.2%，特異度分別是80.1%、95.5%、97.1%；AFP-L3比率的Cut-off值在5%、10%、15%時，診斷的靈敏度分別是59.1%、50.9%、40.9%，特異度分別是86.1%、94.7%、98.4%。為了提高診斷早期HCC的準確性，本研究數(shù)據(jù)提示 AFP-L3比率對HCC的最佳Cut-off值是5%。

當然，本研究存在局限，部分標本的檢測指標超出儀器的檢測范圍，在數(shù)據(jù)處理時會造成偏差。在AFP＜20 ng/ml時，AFP-L3比率在HCC和BLD兩組間沒有差別，但是數(shù)據(jù)統(tǒng)計差異有統(tǒng)計學意義的，可能是因為這個亞組中，多數(shù)標本的AFP-L3濃度低于檢測下限，AFP-L3比率直接視為陰性，所以臨床上應該提高檢測的靈敏度，尤其是提高對AFP＜20 ng/ml的低水平升高患者診斷的準確性。本研究初診HCC的病例較少，缺乏隨機的相關短期隨訪研究，因此進一步收集大量臨床數(shù)據(jù)，并研究AFP-L3對治療后HCC患者存活率的影響，可以得出更有價值的結論。

綜上所述，AFP-L3作為診斷HCC的一個新的腫瘤標志物，聯(lián)合AFP檢測可以有效的彌補AFP單獨檢測的不足，再結合臨床影像學和病理學診斷方法，可以提高對HCC診斷的準確性。

［1］Siegel R，Naishadham D，Jemal A.Cancer statistics，2013［J］. CA Cancer J Clin，2013，63（1）：11-30.

［2］Yamamoto K，Imamura H，Matsuyama Y，et al.AFP，AFP-L3，DCP，and GP73 as markers for monitoring treatment response and recurrence and as surrogate markers ofclinicopathological variables of HCC［J］.J Gastroenterol，2010，45（12）：1272-82.

［3］中華人民共和國衛(wèi)生部（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)［2011］121號）.原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2011年版）［J］.臨床腫瘤學雜志，2011，16 （10）：929-46.

［4］中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會和肝病學分會.病毒性肝炎防治方案［J］.中華肝臟病雜志，2000，8（6）：324-9.

［5］中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會.原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標準［J］.中華肝臟病雜志，2001，9（6）：324.

［6］李潤青，姜菲菲，趙秀英，等.Logistic回歸及ROC曲線綜合評價AFP、AFU、VEGF聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值［J］.北京醫(yī)學，2010，32（12）：961-4.

［7］Bae J S，Park S J，Park K B，et al.Acute exacerbation of hepatitis in liver cirrhosis with very high levels of alpha-fetoprotein but no occurrence of hepatocellular carcinoma［J］.Korean J Intern Med， 2005，20（1）：80-5.

［8］Chu C W，Hwang S J，Luo J C，et al.Clinical，virologic，and pathologic significance of elevated serum alpha-fetoprotein levels in patients with chronic hepatitis C［J］.J Clin Gastroenterol，2001，32 （3）：240-4.

［9］Durazo F A，Blatt L M，Corey W G，et al.Des-gamma-carboxyprothrombin，alpha-fetoprotein and AFP-L3 in patients with chronic hepatitis，cirrhosis andhepatocellular carcinoma［J］.J Gastroenterol Hepatol，2008，23（10）：1541-8.

［10］趙運勝，王 猛，李軍良，等.血清高爾基體蛋自73、異常凝血酶原、磷脂酞基醇蛋自聚糖-3和甲胎蛋自聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的早期診斷價值研究［J］.中國全科醫(yī)學，2012，15（11）：3730-3.

［11］戴亞新，張時良，襲 豪，等.肝癌和肝病患者血清甲胎蛋自異質(zhì)體的檢測及臨床意義［J］.中國實驗診斷學，2013，17 （2）：296-8.

［12］Lim T S，Kim do Y，Han K H，et al.Combined use of AFP，PIVKA-II，and AFP-L3 as tumor markers enhances diagnostic accuracy for hepatocellular carcinoma in cirrhotic patients［J］.Scand J Gastroenterol，2016，51（3）：344-3.

［13］Hu B，Tian X，Sun J，et al.Evaluation of individual and combined applications of serum biomarkers for diagnosis of hepatocellular carcinoma：a meta-analysis［J］.Int J Mol Sci，2013，14（12）：23559-80.

Diagnosis value of AFP and AFP-L3 combined detection in hepatocellular carcinoma

Xu Enjun，Chen Qiuli，Li Tao，et al
（Dept of Clinical Laboratory，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230022）

Objective To explore the diagnostic value of alpha fetoprotein（AFP），alpha fetoprotein L3（AFP-L3）and ratio of AFP-L3 to AFP in hepatocellular carcinoma（HCC）.Methods In 354 patients，110 patients with hepatocellular carcinoma（HCC）and 244 patients with benign liver disease（BLD）（including 94 patients with hepatitis，126 patients with liver cirrhosis and 24 patients with benign liver tumors）.AFP and AFP-L3 which was separated by affinity adsorption centrifugal tube were measured by electrochemiluminescence immunoassays，following calculation ratio of AFP-L3 to AFP.Results In 110 patients with HCC，the patients of AFP＜20 ng/ml，AFP 20～200 ng/ml and AFP＞200 ng/ml were 32 cases，30 cases and 48 cases respectively.In 244 patients with BLD，the patients of AFP＜20 ng/ml were 196 cases.Levels of AFP，AFP-L3 and ratio of AFP-L3 to AFP in patients with HCC were significantly higher than that in patients with BLD（P＜0.01）.According to ROC curve，areas under the curve（AUC）of AFP，AFP-L3 and ratio of AFP-L3 to AFP were 0.809，0.819 and 0.800 respectively，and AUC of combination three markers was 0.829（P＜0.01）.When the cut-off values of ratio of AFP-L3 to AFP were 5%，10%or 15%，the sensitivities were 59.1%，50.9%or 40.9%，and the specificities were 86.1%，94.7% or 98.4%.Conclusion Diagnostic value of combination AFP and AFP-L3 is higher than AFP in diagnosis of hepatocellular carcinoma.The best cut-off value of ratio of AFP-L3 to AFP is 5%.

hepatocellular carcinoma；alpha fetoprotein；alpha fetoprotein L3

R 735.7

A

1000-1492（2016）07-1066-05

2016-04-14接收

國家自然科學基金（編號：30801088、81201488、81571572）；衛(wèi)生部應用研究項目“高通量ELISA檢測系統(tǒng)化、標準化系列研究”（編號：28-1-50）

安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院1檢驗科、2ICU、3風濕免疫科，合肥 230022

徐恩君，男，碩士研究生；李 濤，男，副教授，副主任技師，碩士生導師，責任作者，E-mail：limedical1974@126.com