血清IL-1與G-CSF在胎膜早破亞臨床羊膜腔感染診斷中的臨床意義*

李雪蓮，羅永紅，汪 洋，田正華，李 霞，初曉麗（廣州醫(yī)科大學附屬深圳沙井醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東深圳518104）

·論 著·

血清IL-1與G-CSF在胎膜早破亞臨床羊膜腔感染診斷中的臨床意義*

李雪蓮，羅永紅，汪 洋，田正華，李 霞，初曉麗
（廣州醫(yī)科大學附屬深圳沙井醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東深圳518104）

目的 探討血清白介素-1（IL-1）與粒細胞集落刺激因子（G-CSF）在胎膜早破（PROM）及組織學絨毛膜羊膜炎（HCA）早期診斷中的臨床意義。方法 選擇2011年7～12月在該院產(chǎn)科住院分娩的無癥狀足月PROM孕婦36例（研究組）與正常妊娠分娩孕婦50例（對照組）作為研究對象；采用免疫組化法檢測產(chǎn)后胎膜破口邊緣處胎膜組織，確定有無HCA。將胎膜組織病理檢測有HCA的孕婦作為HCA組，無HCA的為非HCA組，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定不同組別研究對象中血清IL-1及G-CSF的表達水平，并進行對比分析。結果 （1）研究組孕婦中HCA的發(fā)生率［63.89%（23/36）］高于對照組［4.00%（2/50）］，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；（2）研究組孕婦血清IL-1及G-CSF水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；（3）HCA組孕婦血清IL-1及G-CSF水平明顯高于非HCA組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論血清IL-1及G-CSF水平升高在PROM合并HCA方面具有一定的臨床意義，聯(lián)合檢測有利于早期預測及診斷。

白細胞介素1； 粒細胞集落刺激因子； 胎膜早破； 絨毛膜羊膜炎

胎膜早破（premature ruptuer of membrenes，PROM）是指發(fā)生在臨產(chǎn)前的胎膜破裂，是產(chǎn)科臨床上常見的產(chǎn)前并發(fā)癥之一，可引起早產(chǎn)、臍帶脫垂、胎兒宮內(nèi)窘迫等。而絨毛膜羊膜炎是指羊水、胎盤胎膜及子宮等的感染，是PROM的重要并發(fā)癥，是自發(fā)性早產(chǎn)的重要危險因素之一，會增加新生兒疾病發(fā)生率和病死率，也可引起宮內(nèi)感染、產(chǎn)褥感染、敗血癥及圍生兒死亡等嚴重并發(fā)癥。但PROM在亞臨床感染時無明顯臨床癥狀與體征，由于對亞臨床羊膜腔感染孕婦臨床上也無相對應的檢查指標，因此不易被發(fā)現(xiàn)，難以在早期診斷。本研究通過檢測PROM孕婦血液中血清白介素-1（IL-1）和粒細胞集落刺激因子（G-CSF）的表達，探討其在PROM合并亞臨床羊膜腔感染早期診斷的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年7～12月在本院產(chǎn)科住院分娩的無癥狀足月PROM孕婦36例作為研究組，平均年齡（24.76±4.12）歲，平均孕周（37.45±2.05）周；同期選擇足月正常妊娠孕婦50例作為對照組，平均年齡（25.86± 3.34）歲，平均孕周（38.93±2.78）周。兩組孕婦均為單胎頭位。兩組孕婦的年齡、孕周及孕產(chǎn)次等比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。兩組孕婦取靜脈血前均未使用抗生素及激素類藥物，產(chǎn)前無創(chuàng)傷性交史及陰道炎癥病史，無產(chǎn)科并發(fā)癥，且均為陰道分娩。

1.2 方法

1.2.1 診斷標準 PROM診斷標準參考文獻［1］，并經(jīng)以下檢查確診：（1）陰道宮頸消毒后，在窺器直視下手觸宮底見有羊水流出；（2）pH值呈堿性；（3）陰道后穹隆液涂片檢查見胎脂、胎毛或胎兒上皮細胞。

1.2.2 組織學絨毛膜羊膜炎（HCA）的病理診斷 鏡下絨毛膜板及羊膜被中性粒細胞浸潤，胎盤絨毛膜板晦暗［2］。

1.2.3 標本采集 兩組孕婦均于產(chǎn)前抽取肘靜脈血5mL，置于非抗凝試管中，于30min內(nèi)離心（3000r/min，15min），分離血清置于-70℃冰箱保存。兩組均于產(chǎn)后取近破口處約4 cm×4 cm大小胎膜組織，給予生理鹽水洗去表面羊水與血跡，迅速以10%甲醛溶液固定24 h，送病理檢查，作為羊膜腔感染的依據(jù)。

1.2.4 檢測方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）-雙抗體夾心法檢測IL-1及G-CSF水平，IL-1定量試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司，G-CSF定量試劑盒購自天象人生物科技有限公司。試劑均為進口分裝，嚴格按照說明書操作。將10%甲醛溶液固定的胎膜組織，常規(guī)石蠟包埋，切片，經(jīng)脫蠟、蘇木精-伊紅染色、脫水、透明、封固后在高倍顯微鏡下檢測，組織學觀察有無HCA。由專人采用雙盲法閱片。采用免疫組織化學法檢測產(chǎn)后胎膜破口邊緣處胎膜，確定有無HCA，將胎膜組織病理檢測有HCA的孕婦作為HCA組，無HCA的作為非HCA組。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，采用獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料以率或構成比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 研究組與對照組孕婦病理結果比較 研究組孕婦中出現(xiàn)HCA23例（陽性率為63.89%），對照組2例（陽性率為4.00%），兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 研究組與對照組孕婦血清IL-1與G-CSF水平比較 研究組孕婦血清IL-1與G-CSF水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 研究組與對照組孕婦血清IL-1與G-CSF水平比較（±s，pg/mL）

表1 研究組與對照組孕婦血清IL-1與G-CSF水平比較（±s，pg/mL）

注：-表示無此項。

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2.3 HCA組與非HCA組孕婦血清IL-1與G-CSF水平比較 HCA組孕婦血清IL-1與G-CSF水平明顯高于非HCA組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 HCA組與非HCA組孕婦血清IL-1與G-CSF水平比較（±s，pg/mL）

表2 HCA組與非HCA組孕婦血清IL-1與G-CSF水平比較（±s，pg/mL）

注：-表示無此項。

組別HCA組非HCA組n IL-1 G-CSF 123.34±35.78 87.56±34.32 4.65 ＜0.05 25 61 tP--168.23±25.86 86.32±35.10 15.25 ＜0.05

3 討 論

孕周大于20周而小于37周的孕婦為未足月PROM，其發(fā)生率為2.0%～3.5%，孕周滿37周后為無癥狀足月PROM，其發(fā)生率為10.0%［3］。PROM多由于孕晚期感染、胎膜本身病變、宮內(nèi)壓力增高等原因造成。PROM可使孕婦及胎兒的感染率與圍生兒的病死率顯著升高［4-5］。當PROM合并亞臨床羊膜腔感染時，多數(shù)孕婦無明顯臨床癥狀與體征，而僅在病理上表現(xiàn)為HCA。因此，如何對無癥狀PROM孕婦進行檢測，目前還沒有相應的指標。從20世紀50年代起，對PROM病因的研究從未停止。但是PROM的發(fā)病機制至今仍未完全明確。從最初單純的機械學研究，到對胎膜本身結構、細胞因子、感染等因素的研究［6-9］，有研究認為PROM是由多種因素引起并相互作用的結果［10］，大量研究認為，感染是PROM的一個重要因素，且感染與PROM互為因果［11-12］。目前，感染性細胞因子IL-1和G-CSF與PROM及亞臨床羊膜腔感染中的作用日益受到重視。

IL-1是單核細胞產(chǎn)生的多肽，相對分子質量為17×103，具有激素樣的多功能調節(jié)因子，包括IL-1α和IL-1β 2個亞單位，主要是由活化的單核和（或）巨噬細胞合成與分泌，刺激中性粒細胞釋放炎癥蛋白和炎癥介質，直接參與炎癥發(fā)生過程，對炎性反應的時間較其他相關IL早，且特異性高。IL-1還可增強自然殺傷細胞的殺傷活性，促進胸腺細胞、T細胞的活化、增殖和分化，促進多種免疫分子的基因表達：如G-CSF、GM-CSF及c-fos、c-myc等原癌基因的表達。刺激單核細胞與巨噬細胞產(chǎn)生IL-6和TNF，并通過單核細胞和巨噬細胞產(chǎn)生IL-8介導對中性粒細胞的趨化作用。細胞因子如巨噬細胞激活因子、CSF等都對IL-1的產(chǎn)生具有增強作用，可以直接影響單核-巨噬細胞IL-1的分泌。國外學者Pucher等［13］與Bitner等［14］的研究表明，孕晚期羊水中IL-1β水平升高，有發(fā)生PROM及早產(chǎn)的風險；羊水中IL-1β水平每增加1個單位，早產(chǎn)及PROM的發(fā)生率增加7.2倍。機體感染后產(chǎn)生的代謝物產(chǎn)生應答，刺激巨噬細胞與單核細胞分泌IL-1，而IL-1可以經(jīng)過胎盤與胎膜進入母體血液中，使得母體IL-1增加。張閣［15］的研究發(fā)現(xiàn)，PROM組孕婦的血清IL-1水平明顯比胎膜未破組高。呂發(fā)輝等［16］研究顯示，PROM合并HCA孕婦血清IL-1水平較單純PROM孕婦高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。本研究結果顯示，與對照組比較，孕婦血清中IL-1水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；病理學檢查發(fā)現(xiàn)，HCA組孕婦的血清IL-1水平明顯高于非HCA組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；研究組孕婦中HCA的發(fā)生率［63.89% （23/36）］高于對照組［4.00%（2/50）］，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），表明亞臨床羊膜腔感染與PROM密切相關。

G-CSF是含有174個氨基酸的糖蛋白，在體內(nèi)，許多細胞均能產(chǎn)生G-CSF，如單核細胞、內(nèi)皮細胞等。G-CSF可以調節(jié)粒系祖細胞的增殖、分化及成熟，以維持血液循環(huán)中白細胞數(shù)量的相對平衡。內(nèi)毒素、TNF-α和干擾素-γ可活化單核細胞及巨噬細胞產(chǎn)生 G-CSF。IL-1、TNF-α等被認為是誘導G-CSF生成的重要物質，而G-CSF又可調控TNF、IL-1等促炎性細胞因子的釋放而發(fā)揮抗感染作用。G-CSF在抗感染的非特異性細胞免疫過程中起重要作用，其廣泛存在于血液循環(huán)及組織中。正常狀態(tài)下，機體內(nèi)的G-CSF表達水平較低，當發(fā)生感染時，機體會做出迅速反應，產(chǎn)生大量G-CSF，增加周圍血液循環(huán)中粒細胞數(shù)量并增強其功能，使孕婦G-CSF表達水平快速增高至正常水平的1 000倍以上；炎癥、全身性疾病得到控制后，G-CSF水平逐步恢復正常［17］。據(jù)報道，在多種感染中均可以檢測到G-CSF水平的增高［18］。Andrews等［19］發(fā)現(xiàn)，HCA孕婦僅在亞臨床感染期間就可以檢測到炎性細胞因子G-CSF的活性。有研究認為臍血中G-CSF可早期預測亞臨床的新生兒感染［17］。Stallmach等［20］通過檢測PROM組及正常妊娠孕婦分娩后臍血中G-CSF水平發(fā)現(xiàn)，合并HCA孕婦的臍血中G-CSF水平升高。國內(nèi)白艷艷等［21］研究結果表明，正常妊娠分娩組孕婦血清G-CSF的水平顯著低于PROM組，非HCA組孕婦的血清G-CSF水平均明顯低于HCA組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。由此認為，G-CSF含量可作為宮內(nèi)感染的一項早期預測指標。本研究結果顯示，研究組孕婦血清G-CSF水平高于對照組，HCA組血清G-CSF水平較非HCA組升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），與以往的研究結果相似［17-21］。

綜上所述，當PROM孕婦合并HCA時，IL-1、G-CSF在一定程度上共同參與了PROM及絨毛膜羊膜炎的發(fā)生，相互作用，且在PROM及亞臨床羊膜腔感染中發(fā)揮重要作用。IL-1、G-CSF在孕婦血清中的表達水平，可作為PROM發(fā)生后羊膜腔出現(xiàn)感染的早期診斷及預測指標，以便及時采取措施，降低母嬰并發(fā)癥的發(fā)生率。

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Clinical significance of serum levels of IL-1 and G-CSF in diagnosis of premature rupture of membranes with subclinical amniotic cavity infection*

Li Xuelian，Luo Yonghong，Wang Yang，Tian Zhenghua，Li Xia，Chu Xiaoli
（Department of Obstetrics and Gynecology，Affiliated Shajing Hospital of Guangzhou Medical University，Shenzhen，Guangdong 518104，China）

Objective To investigate the clinical significance of serum interleukin-1（IL-1）and granulocyte colony-stimulating factor（G-CSF）in premature rupture of membrane（PROM）and histological chorioamnionitis（HCA）.Methods A total of 36 full term pregnant women with PROM and without symptoms in our hospital from July to December 2011 were selected as the research group and 50 cases of pregnant women with normal delivery were selected as the control group；the immunohistochemical method was adopted to simultaneously examine the embryonic membrane at the edge of fetal membrane rupture for determining HCA.The pregnant women with HCA by fetal membrane histopathological examination were taken as the HCA group and non-HCA as the non-HCA group.The levels of IL-1 and G-CSF were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.Results （1）The HCA occurrence rate in the research group was 63.89%（23/36），which was higher than 4.00%（2/50）in the control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）；（2）the levels of serum IL-1 and G-CSF in the research group were higherthan those in the control group with statistical difference（P＜0.05）；（3）the levels of IL-1 and G-CSF in the HCA group were higher than those in the non-HCA group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion The increase of IL-1 and G-CSF levels has certain clinical significance in the aspect of PROM complicating HCA，and their combined detection is conducive to early prediction and diagnosis.

Interleukin-1；Granulocytecolony-stimulatingfactor； Fetalmembranes，prematurerupture； Chorioamnionitis

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.16.002

A

1009-5519（2016）16-2456-03

深圳市寶安區(qū)科技局項目（20110490）。

李雪蓮（1973-），碩士研究生，副主任醫(yī)師，主要從事婦產(chǎn)科臨床工作。

2016-05-11）