IL—22對(duì)慢性丙型病毒性肝炎干擾素抗病毒治療療效的預(yù)測(cè)價(jià)值研究

楊智　陳澄　吳詩(shī)品

[摘要]目的 探討白細(xì)胞介素-22（IL-22）在慢性丙肝干擾素抗病毒治療療效預(yù)測(cè)中的價(jià)值。方法 選取2013年10月～2015年3月深圳市人民醫(yī)院感染內(nèi)科慢性丙型肝炎住院患者60例，均給予聚乙二醇干擾素α-2a聯(lián)合利巴韋林治療，同時(shí)選取38例正常健康獻(xiàn)血者作為參考，分別檢測(cè)正常健康者、慢性丙型肝炎患者抗病毒治療前、治療4周、12周、24周、48周和停藥后6個(gè)月的血清IL-10、IL-22和IL-28及mRNA水平，并同時(shí)檢測(cè)患者肝功能和HCV RNA含量。結(jié)果 經(jīng)過(guò)48周抗病毒治療后，60例慢性丙肝患者中完全應(yīng)答41例、部分應(yīng)答15例、無(wú)應(yīng)答4例。治療前患者血清中IL-10、IL-22、IL-28水平均顯著高于正常健康獻(xiàn)血者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與HCV病毒含量無(wú)顯著相關(guān)關(guān)系。經(jīng)過(guò)治療，完全應(yīng)答組患者血清IL-10、IL-22和IL-28水平逐漸降至并穩(wěn)定至正常水平，部分應(yīng)答組和無(wú)應(yīng)答組患者血清IL-10、IL-22和IL-28水平在一段時(shí)間內(nèi)降低，但又逐漸回升，IL-22較IL-10和IL-28回升更早。治療后不同時(shí)間IL-10、IL-22、IL-28 mRNA表達(dá)水平，與血清中IL-10、IL-22、IL-28水平變化情況一致。結(jié)論 IL-22能夠在早期有效預(yù)測(cè)慢性丙型病毒性肝炎干擾素抗病毒治療效果。

[關(guān)鍵詞]IL-22；慢性丙型病毒性肝炎；預(yù)測(cè)價(jià)值

[中圖分類(lèi)號(hào)]R575.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2095-0616（2016）11-13-05

全球約150萬(wàn)人感染HcV并轉(zhuǎn)為慢性，每年死于與Hcv感染相關(guān)疾病的患者大于35萬(wàn)人。HCV感染治療的基本目標(biāo)是獲得持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答，目前我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)治療方案是基于Peg-IFN聯(lián)合利巴韋林。在治療前及早期治療階段預(yù)測(cè)個(gè)體對(duì)治療應(yīng)答反應(yīng)十分重要，可增加治療的成功率，減少治療成本。IL-28B和IL-10與丙型肝炎患者的干擾素應(yīng)答相關(guān)。Zenewiez等研究表明，刀豆蛋白A誘導(dǎo)的急性肝炎中IL-22水平顯著提高，表現(xiàn)出肝細(xì)胞保護(hù)作用、組織修復(fù)能力等。目前針對(duì)IL-22在肝炎中的作用少有臨床研究報(bào)道。本研究應(yīng)用聚乙二醇干擾素α-2a聯(lián)合利巴韋林治療60例慢性丙肝患者，長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)患者血清中IL-10、IL-22、IL-28水平，旨在探討IL-22在慢性丙肝干擾素抗病毒治療療效預(yù)測(cè)中的價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年10月～2015年3月深圳市人民醫(yī)院感染內(nèi)科慢性丙型肝炎住院患者60例，年齡26～58歲，平均（42.7±13.7）歲；男39例，女21例。所有患者均根據(jù)2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》中“慢性丙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)”診斷為慢性丙型病毒性肝炎，患者納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）抗HCV陽(yáng)性；（2）血清HCV RNA陽(yáng)性；（3）無(wú)既往干擾素或免疫調(diào)節(jié)劑治療史；（4）無(wú)心、腦、腎等臟器嚴(yán)重疾病。患者排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡<18歲，或者超過(guò)60歲；（2）肝硬化；（3）感染其他病毒；（4）患有自身免疫系統(tǒng)疾??；（5）精神性疾病或妊娠；（6）血小板<50×10⁹/L，白細(xì)胞<3.0×10⁹/L。根據(jù)患者HCVRNA水平分為三組：低水平復(fù)制（<10⁶拷貝/mL），中等水平復(fù)制（10⁶～10s拷貝/mL），高水平復(fù)制（>108拷貝/mL），各組患者例數(shù)分別為17例，27例和16例，各組年齡、性別組成等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。正常健康獻(xiàn)血者38例，其中男24例，女14例；年齡27～57歲，平均（43.1±13.5）歲，肝功能各項(xiàng)指標(biāo)均在正常范圍，各種肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)均為陰性。

1.2治療方法

所有患者均接受聚乙二醇干擾素α-2a（Peg-IFNα-2a），聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療，Peg-IFN2α（派羅欣聚乙二醇干擾素α-2a注射液，135μg/0.5mL/支，上海羅氏制藥有限公司，J20120074）劑量為135μg/周，利巴韋林（利巴韋林片，50mg/片，上海信誼天平藥業(yè)有限公司，H10960156）使用劑量根據(jù)患者體重進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整（<75Kg：1000mg/d；≥75kg：1200mg/d），所有患者療程均為48周。

1.3標(biāo)本采集

清晨空腹采集正常健康者、慢性丙型肝炎患者抗病毒治療前、治療4周、12周、24周、48周和停藥后6個(gè)月血樣各1份，1h內(nèi)在低溫離心機(jī)中分離血清，置于一70℃超低溫冰箱保存?zhèn)錂z。

1.4檢測(cè)萬(wàn)法

1.4.1樣本采集 于清晨8～9時(shí)抽取患者空腹靜脈血5mL，4℃下3000rpm離心10min，將血清置于潔凈EP管中置于-20%冰箱保存，集中檢測(cè)IL-10、IL-22、IL-28、肝功能和HCV RNA含量。

1.4.2主要試劑、儀器 IL-10、IL-22和IL-28B定量檢測(cè)試劑盒采用固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），均由法國(guó)DIACLONE公司提供，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。肝功能采用BeckmanCoulter全自動(dòng)生化分析儀ACCESS和配套試劑檢測(cè)，HCV RNA定量試劑盒由凱杰（深圳）生物工程有限公司提供，采用熒光定量PCR檢測(cè)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀為美國(guó)ABI公司7500型PCR儀。

1.5療效判斷

完全應(yīng)答：對(duì)干擾素抗病毒治療完全應(yīng)答，即抗病毒治療48周停藥6個(gè)月后，通過(guò)PCR方法檢測(cè)HCV-RNA為陰性，ALT正常。部分應(yīng)答：經(jīng)過(guò)48周抗病毒治療，ALT與HCV-RNA有一項(xiàng)未轉(zhuǎn)陰。無(wú)應(yīng)答：經(jīng)過(guò)48周抗病毒治療，ALT仍表現(xiàn)為異常，HCV-RNA未轉(zhuǎn)陰。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其中計(jì)量資料以（x±s）的形式表示，并進(jìn)行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率[n（%）]的形式表示并進(jìn)行X²檢驗(yàn)，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，多組均數(shù)兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1治療效果分析

經(jīng)過(guò)48周Peg-IFNα-2a聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療后，60例慢性丙型病毒性肝炎患者中完全應(yīng)答41例（68.33%），部分應(yīng)答15例（25.00%），無(wú)應(yīng)答4例（6.67%）。治療過(guò)程中4例患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為6.67%。

2.2患者治療前血清IL-10、IL-22、IL-28水平比較

慢性丙型病毒性肝炎患者治療前及正常健康獻(xiàn)血者血清IL-10、IL-22、IL-28檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，可見(jiàn)慢性丙型病毒性肝炎患者血清中IL-10、IL-22、IL-28水平均顯著高于正常健康獻(xiàn)血者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；隨著HCV病毒含量的升高，血清中IL-10、IL-22、IL-28水平變化不顯著。IL-22水平比較，低、中、高水平復(fù)制組與正常健康獻(xiàn)血者組比較，q分別為5.589，6.807，5.322，P<0.05；IL-22水平比較，低、中、高水平復(fù)制組與正常健康獻(xiàn)血者組比較，q分別為37.745，36.827，32.484，P<0.05。見(jiàn)表1。

2.3治療后不同時(shí)間血清IL-10、IL-22、IL-28水平比較

完全應(yīng)答組的29例患者治療4、12、24、48周及停藥6個(gè)月后的血清IL-10、IL-22、IL-28水平均較治療前有所下降；部分應(yīng)答組23例患者IL-10在治療后4周到停藥6周呈下降趨勢(shì)，IL-28在治療4～48周呈下降趨勢(shì)，停藥后6個(gè)月時(shí)又有所升高；IL-22在治療后4～24周呈下降趨勢(shì)，自治療48周時(shí)開(kāi)始升高。無(wú)應(yīng)答組中IL-10治療后呈下降趨勢(shì)，停藥后6個(gè)月升高；IL-22和IL-28均在治療后呈下降趨勢(shì)，在治療48周時(shí)開(kāi)始升高。對(duì)三組患者在相同治療時(shí)期的三個(gè)指標(biāo)進(jìn)行兩兩比較，結(jié)果表明，在部分應(yīng)答和無(wú)應(yīng)答組中，IL-22較IL-10和IL-28更能較早反映抗病毒藥物的治療效果。自治療48周起，完全應(yīng)答組血清IL-22水平極顯著低于部分應(yīng)答組（治療48周q=4.933，P<0.01；停藥后6個(gè)月q=5.057，P<0.01）和無(wú)應(yīng)答組（治療48周q=2.791，P<0.01；停藥后6個(gè)月q=3.351，P<0.01）。見(jiàn)表2，圖1。

3討論

目前采用干擾素抗病毒是我國(guó)慢性丙型病毒性肝炎治療的主要方法，但干擾素治療效果受多種因素的影響，前已敘述過(guò)IL-28B和IL-10與丙型肝炎患者的干擾素應(yīng)答相關(guān)。盡管上述細(xì)胞因子與丙型肝炎患者對(duì)干擾素的應(yīng)答具有高度相關(guān)性，但仍有一部分患者由于基因型等因素的關(guān)系未能獲得有效的病毒應(yīng)答，因此有必要尋找更多對(duì)丙型肝炎抗病毒治療應(yīng)答有影響的細(xì)胞因子，評(píng)估其對(duì)抗病毒治療應(yīng)答率的影響價(jià)值，評(píng)估其是否可作為對(duì)治療應(yīng)答預(yù)測(cè)的協(xié)同因素。

IL-22主要來(lái)源于CD4⁺T細(xì)胞亞群和自然殺傷細(xì)胞，主要在IL-22敏感的組織中（如肝臟）發(fā)揮炎癥應(yīng)答調(diào)節(jié)作用、參與誘導(dǎo)抗凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖。因?yàn)镮L-22不僅同歸為IL-10家族，而且同IL-10擁有共同的受體鏈（IL-10R2），所以IL-22在關(guān)于丙型肝炎的研究中扮演著有趣的角色。IL-22基因位于與炎癥性疾病相關(guān)聯(lián)的染色體區(qū)域，由脂多糖誘導(dǎo)，在小鼠肝細(xì)胞中上調(diào)急性時(shí)相反應(yīng)物產(chǎn)生。與IL-10不同，盡管IL-22通過(guò)Th2細(xì)胞適當(dāng)抑制IL-4的產(chǎn)生，但并不抑制IL-10，L-1，IL-6，TNF和IFN-g的活性。因此，與IL-10不同，IL-22在免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中具有多效性的功能。此外，IL-10R2作為IL-10和IL-22共同的受體鏈，存在于兩者的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中。Hennig等通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明在丙型肝炎抗病毒治療時(shí)，患者IL-10RB基因變異影響對(duì)干擾素治療的應(yīng)答和病毒的清除；IL-22中兩處單核苷酸多肽性影響治療應(yīng)答和病毒清除：IL-22-rsl012356 T等位基因載體和IL-22-rsll79251 C等位基因載體。而Dambacher等實(shí)驗(yàn)表明在丙型病毒性肝炎患者肝細(xì)胞中IL-22表達(dá)上調(diào)，但與IFN-a不同，IL-22不直接調(diào)節(jié)抗病毒蛋白，因此對(duì)HCV的復(fù)制沒(méi)有影響。然而到目前為止，對(duì)IL-22保護(hù)作用的分子機(jī)制仍不清楚，在丙型病毒性肝炎中作用機(jī)制更是知之甚少。

本研究比較了血清IL-10、IL-22和IL-28對(duì)Peg-IFNα-2a聯(lián)合利巴韋林抗病毒效果的預(yù)測(cè)效果，結(jié)果表明治療前患者血清中IL-10、IL-22、IL-28水平均顯著高于正常健康獻(xiàn)血者（P<0.05），但與HCV病毒含量無(wú)顯著相關(guān)關(guān)系；與IL-10和IL-28相比，治療過(guò)程中IL-22變化（下降）更早、更顯著，在部分應(yīng)答和無(wú)應(yīng)答患者中，IL-22下降后回升也更早。體外研究發(fā)現(xiàn)，盡管慢性病毒性肝炎患者血清中IL-22水平顯著升高，但I(xiàn)L-22并不能抑制HCV的復(fù)制，因此不能通過(guò)增加IL-22來(lái)直接抑制病毒增加。IL-22可能是通過(guò)調(diào)控IFNs抗病毒效應(yīng)來(lái)間接影響病毒復(fù)制，如STAT3就是IL-22調(diào)控的重要下游信號(hào)，能夠調(diào)控IFN介導(dǎo)的信號(hào)通路。Park等研究表明，IL-22能夠?qū)垢螕p傷，并促進(jìn)肝細(xì)胞增殖，慢性病毒性肝炎患者IL-22水平升高可能是一種抗肝細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制。

綜上，IL-22能夠在早期有效預(yù)測(cè)慢性丙型病毒性肝炎干擾素抗病毒治療效果。在治療前及早期治療階段通過(guò)檢測(cè)IL-22在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)水平，以提前預(yù)測(cè)個(gè)體對(duì)治療應(yīng)答，增加治療的成功率；同時(shí)可使應(yīng)答不佳或無(wú)應(yīng)答的患者盡早終止治療，減少治療成本。在臨床上存在著極大的實(shí)用價(jià)值。