氣相質(zhì)譜法測定瘦肉中的克倫特羅

羅杰鴻 鄧建文

克倫特羅，又名瘦肉精，是一種對動物具有促進(jìn)生長，減少脂肪含量的興奮劑類物質(zhì)，曾經(jīng)廣泛應(yīng)用于生豬的飼養(yǎng)。然而由于克倫特羅易在動物組織形成殘留，當(dāng)人們食用后，就會發(fā)生中毒，所以我國已禁止作為生長促進(jìn)劑使用。但由于其經(jīng)濟(jì)效益，非法使用克倫特羅的現(xiàn)象依然存在，因此，建立有效的克倫特羅檢測方法具有重要意義。

氣相質(zhì)譜法測定克倫特羅的方法比較多，例如GB/T 5009.192-2003，但有些方法步驟多，繁瑣，在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，我們改進(jìn)了克倫特羅的測定方法。

材料與方法

試劑與儀器?？藗愄亓_標(biāo)準(zhǔn)品購自德國Dr.E。N，O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMSCl）購自sigma，材料為市場常見的瘦肉。正己烷，乙酸乙酯等為色譜純，高氯酸，氫氧化鈉等為分析純。氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀。

色譜條件。色譜柱：HP-5MS，30 m x 0.25 mm x 0.25μm；進(jìn)樣口溫度：240oC；進(jìn)樣量：1μL，不分流；柱溫程序：70oC保持1min，以18oC/min速度升至200oC，以5oC/min的速度再升至245oC，再以25oC/min升至280oC并保持2min。EI源：電子轟擊能量：70eV；離子源溫度：200oC；接口溫度：285oC；溶劑延遲：12min；EI源檢測特征峰：86、187、243、262。

分析過程

提取。稱取10.0 g瘦肉，用20mL 0.1mol/L高氯酸溶液，勻漿后，超聲萃取20min，取出置于80oC水浴中加熱30min。取出冷卻后離心15min。倒出上清液，沉淀用5mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗滌，再離心。合并高氯酸溶液后，加入10mL正己烷，震蕩，分層后棄掉正己烷，用10mL正己烷重復(fù)萃取油脂一次。用1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)水相的PH至9.5左右，加入8g氯化鈉，混勻后加入10mL乙酸乙酯，渦旋振蕩提取20min。提取完畢后，用吸管小心將上層有機(jī)相轉(zhuǎn)至離心管中，再加入10mL乙酸乙酯，重復(fù)渦旋振蕩提取2次，合并乙酸乙酯，在50～60oC的砂鍋中用氮?dú)獯抵粮?。此步驟如果凈化不完全，可進(jìn)行進(jìn)一步凈化。

凈化。用1mL 0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（PH=6.0）充分溶解殘留物，經(jīng)針筒式微孔過濾膜過濾，洗滌三次后完全轉(zhuǎn)移到5mL離心管中，并用0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液定容至刻度。

依次用10mL乙醇、3mL水、0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（PH=6.0）、3mL水沖洗弱陽離子交換柱，取適量提取液至弱陽離子交換柱上，棄去流出液，分別用4mL水和4mL乙醇沖洗柱子，棄去流出液，用6mL乙醇+濃氨水沖洗柱子，收集流出液，用氮?dú)獯抵粮伞?/p>

衍生。往氮?dú)獯蹈傻臍埩粑镏屑尤?0ul N，O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMSCl）衍生試劑，蓋緊塞子，在渦旋混合器上混勻2min，置于75oC的恒溫加熱器中衍生90min。冷卻至室溫，氮吹至干后，加入1000ul甲苯，充分混勻后進(jìn)行氣相進(jìn)樣。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備。用甲醇配備濃度范圍為2μg/L，10μg/L，20μg/L，40μg/L，80μg/L，100μg/L，200μg/L的克倫特羅甲醇溶液，往不同離心管里各取500ul克倫特羅的甲醇溶液，用氮?dú)獯抵粮珊蠹尤?0ul BSTFA/TMSCl衍生試劑，蓋緊塞子，在渦旋混合器上混勻2min，置于75oC的恒溫加熱器中衍生90min。冷卻至室溫，氮吹至干后，加入1000ul甲苯，充分混勻后進(jìn)行氣相進(jìn)樣。

結(jié)果與討論

氣相色譜-質(zhì)譜分析?？藗愄亓_用BSTFA衍生生成三甲基硅烷化衍生物，質(zhì)荷比為86的碎片峰為基峰。典型的色譜峰見下圖。

市場上的瘦肉中克倫特羅的測定。取市場上的瘦肉進(jìn)行加標(biāo)回收率測定，回收率達(dá)到73%以上，儀器檢出限能夠達(dá)到2μg/L，滿足測定要求。

（作者單位：羅杰鴻 廣州京誠檢測有限公司；鄧建文 廣東檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心）