抱莖獐牙菜體外抗氧化作用研究

馬占花

自由基是指可以單獨(dú)存在的一個(gè)或幾個(gè)不配對(duì)電子的分子和原子。自由基對(duì)生物膜和其他組織都有損傷作用，也會(huì)引起一系列的病理過(guò)程?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，衰老、癌癥、炎癥等疾病與體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和自由基有著直接關(guān)系?？寡趸瘎┠芤种聘鞣N物質(zhì)的氧化性變質(zhì)，能降低自由基連鎖反應(yīng)的效率，降低活潑自由基的濃度，如何通過(guò)抗氧化劑減少自由基的產(chǎn)生已成為研究熱點(diǎn)。有報(bào)道表明，某些天然植物具有明顯的抗氧化活性，因此，尋找天然抗氧化劑變成了研究重點(diǎn)。

抱莖獐牙菜（Swertia franchetiana H.Smith）系龍膽科（Gentianaceae）獐牙菜屬（Swertia.L）植物，主要分布于青藏高原和云貴高原，是一種一年生草本植物，為常用藏藥，藏名“蒂達(dá)”，俗稱“藏茵陳”，全草入藥，具有清熱解毒，舒肝利膽之功效，主治各種肝膽疾病[3]。獐牙菜屬的植物主要含有環(huán)烯醚萜類、三萜類、黃酮類等成分，而黃酮類化合物具有消炎，改善微循環(huán)、抑菌、抗肝炎病毒、抗腫瘤等生理功能，該物質(zhì)具有一定的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。本文通過(guò)測(cè)定抱莖獐牙菜的總黃酮含量，測(cè)定其體外對(duì)DPPH自由基清除作用，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用抱莖獐牙菜提供一定的理論依據(jù)。

材料

原料。抱莖獐牙菜，采于西寧市西山。

儀器。分光光度計(jì)（UV-9100）：北京瑞利分析儀器公司；電子天平：上海方瑞儀器有限公司；恒溫水浴鍋：北京醫(yī)療設(shè)備總廠。

試劑。①蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。用電子天平精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5mg置于10ml容量瓶中，用70%乙醇溶解并定容，搖勻，得到0.5mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。②DPPH母液。準(zhǔn)確稱取50mgDPPH，用無(wú)水乙醇溶解并定容于250ml容量瓶中，DPPH濃度為0.5mmol/l，避光保存。0.2mmol/lDPPH溶液：取0.5mmol/lDPPH母液40ml，用無(wú)水乙醇定容至100ml容量瓶。③其它試劑。70%的乙醇，5%亞硝酸鈉溶液，10%硝酸鋁溶液，5%氫氧化鈉溶液，雙蒸水，無(wú)水乙醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，分析純）。

方法

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。精確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00ml，0.40ml，0.80ml，1.20ml，1.60ml，2.00ml分別置于10ml容量瓶中，加水至2.4ml，加入5%亞硝酸鈉溶液0.4ml，搖勻，放置6分鐘；加入10%硝酸鋁溶液0.4ml搖勻，放置6分鐘；加入5%氫氧化鈉溶液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘。以試劑空白作為參比溶液。用1cm比色皿，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，得到橫坐標(biāo)濃度Y與縱坐標(biāo)吸光度X的標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程：Y=0.8277X-0.0242（相關(guān)系數(shù)r=0.9921）

提取物的制備。①醇提物的制備。將干燥的樣品在研缽中研碎，精確稱取樣品5.0g，置于100ml容量瓶中，加入70%乙醇30ml，浸泡24h，封口水浴加熱30分鐘，用紗布過(guò)濾，在70℃下將其濃縮至10ml，濃度為500mg/ml。將濃度為500mg/ml的黃酮提取液稀釋10倍，待用。②水提物的制備。稱取粉碎后的樣品5g加入50ml蒸餾水，沸水浴煎煮1h，用紗布過(guò)濾，傾出濾液后重復(fù)提取一次，合并2次煎煮的過(guò)濾清液，將其濃縮至10ml，得到黃酮提取液濃度為500mg/ml。將濃度為500mg/ml的黃酮提取液稀釋10倍，待用。

總黃酮含量的測(cè)定。吸取稀釋后的黃酮提取液5份各1.00ml置于10ml容量瓶中，加水至2.4ml，加入5%亞硝酸鈉溶液0.4ml，搖勻，放置6分鐘；加入10%硝酸鋁溶液0.4ml搖勻，放置6分鐘；加入5%氫氧化鈉溶液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘。測(cè)吸光度值，用回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量。

對(duì)DPPH自由基清除率的測(cè)定。取植物提取液1ml，0.5mmol/l的DPPH溶液0.25ml先后加入同一具塞試管中，搖勻，在黑暗中37℃放置20分鐘，以甲醇為空白在517nm測(cè)定其吸光度Ai。取0.25ml0.5mmol/l的DPPH溶液與1ml甲醇混合搖勻，在黑暗中37℃放置20分鐘，以甲醇為空白在517nm測(cè)定其吸光度Ao。取植物提取液1ml與0.25ml甲醇混合，搖勻，在黑暗中37℃放置20分鐘，以甲醇為空白在517nm測(cè)定其吸光度Aj。根據(jù)下列公式計(jì)算出提取液對(duì)DPPH的抑制率，即DPPH自由基清除率：K%=[1-（Ai-Aj）/A0]×100%。

數(shù)據(jù)處理。所得數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

結(jié)果

總黃酮含量的測(cè)定。抱莖獐牙菜不同提取物總黃酮含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1

由表1結(jié)果可知，抱莖獐牙菜水提和醇提取物中均有大量黃酮類化合物的存在，而水提取物總黃酮含量顯著高于與醇提取物。

對(duì)DPPH清除率的測(cè)定結(jié)果。抱莖獐牙菜不同提取物對(duì)DPPH清除率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1

由表2可知，抱莖獐牙菜不同提取物對(duì)DPPH自由基有明顯的清除作用，而水提物比醇提物抗氧化作用好，和表1說(shuō)明，抱莖獐牙菜中黃酮類化合物含量越高，抗氧化作用越明顯。

結(jié)論

通過(guò)測(cè)定抱莖獐牙菜中總黃酮的含量，水提的和醇提的總黃酮含量具有明顯的差異。而且水提和醇提的總黃酮的抗氧化活性也有明顯的差異。抱莖獐牙菜的藥理作用很多，總黃酮含量也較高，其抗氧化作用較好，這種抗氧化作用可以阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發(fā)生。黃酮類化合物具有消炎，改善微循環(huán)、抑菌、抗肝炎病毒、抗腫瘤等生理功能，還可以抑制炎性生物酶的滲出，可以增進(jìn)傷口愈合和止痛，該物質(zhì)具有一定的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值，從這些可知，對(duì)抱莖獐牙菜的抗氧化作用的研究具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。

（作者單位：青海省食品檢驗(yàn)檢測(cè)院）