399株醫(yī)院真菌感染的分布特點及耐藥性分析

徐新民　李　敏　李瑞紅　張　燕　陸　瑤　王慧珠

(首都醫(yī)科大學附屬北京地壇醫(yī)院檢驗科，北京 100015)

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· 檢驗醫(yī)學與臨床 ·

399株醫(yī)院真菌感染的分布特點及耐藥性分析

徐新民李敏李瑞紅張燕陸瑤王慧珠*

(首都醫(yī)科大學附屬北京地壇醫(yī)院檢驗科，北京 100015)

目的了解本院臨床常見真菌的種類及常用抗真菌藥物的耐藥情況，為臨床合理使用抗真菌藥物提供依據。方法對2014年1月至2015年12月臨床采集的標本進行真菌分離培養(yǎng)，采用科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基及API 20C AUX酵母菌鑒定試劑盒進行真菌鑒定，ATB Fungus 3藥敏試劑盒進行藥敏試驗，統計分析菌種的構成及其對5種抗真菌藥物的敏感率。結果共收集培養(yǎng)得到399株真菌，標本類型以尿液為主，念珠菌中以白色假絲酵母菌為主，共188株，占47.1%；絲狀真菌中以煙曲霉菌為主，共25株，占6.3%。白色念珠菌對抗真菌藥物的敏感性較好，大部分在95%以上，但光滑念珠菌對唑類藥物敏感性相對較低，對氟康唑的敏感性只有65.1%。曲霉菌對兩性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑均有著較高的敏感性。結論醫(yī)院真菌感染以白色念珠菌為主，兩性霉素B和5-氟胞嘧啶對其有較高的抗菌活性；光滑念珠菌對唑類藥物有較高的耐藥性，臨床應根據藥敏結果合理使用抗真菌藥物。

醫(yī)院真菌；藥物敏感試驗；菌群分布

近幾年，醫(yī)院內真菌感染的發(fā)病率逐年增高[1]，尤其針對免疫力低下患者。隨著大量廣譜抗菌藥物以及免疫抑制劑的使用，條件致病性真菌感染已成為醫(yī)院感染的重要因素[2]。現對首都醫(yī)科大學附屬北京地壇醫(yī)院近兩年真菌感染的分布特點以及藥敏結果進行分析，為臨床早期診斷及合理用藥提供科學依據。

1　材料與方法

1.1標本來源

2014年1月至2015年12月住院及門診患者送檢的痰、尿液、咽拭子、血液、腦脊液、膽汁、胸腹水、肺泡灌洗液及各種分泌物等不同類型標本中分離出的399株酵母樣真菌及絲狀真菌。

1.2儀器和試劑

法國生物梅里埃公司的血瓊脂平板、沙保羅瓊脂培養(yǎng)基、API 20 C AUX酵母菌鑒定試劑盒、ATB Fungus 3藥敏試劑條和E-Test試劑條?？片敿物@色培養(yǎng)基和棉蘭染色液為自制。

1.3分離和鑒定

將臨床送檢標本嚴格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[3]進行，培養(yǎng)后挑取可疑菌落進行革蘭染色，鏡檢見到酵母樣真菌孢子后，挑取單個菌落接種于科瑪嘉顯色培養(yǎng)基，通過呈現出的不同顏色確定菌種類型。對于顯色不明顯的菌種用API 20 C AUX酵母菌鑒定試劑條進一步鑒定。絲狀真菌的鑒定主要根據菌體形態(tài)特征，主要包括菌落形態(tài)和鏡下形態(tài)。

1.4藥敏試驗

將分離出的酵母樣真菌制備成2.0麥氏單位的菌懸液，取其20 μL加入到ATB F2培養(yǎng)液中，混勻后取135 μL加入 ATB Fungus 3藥敏試劑條中每個凹狀的藥敏孔中，置于35 ℃溫箱中，24 h或48 h判讀結果，判讀標準按照說明書進行。絲狀真菌采用E-Test藥敏試紙條法。所有藥敏結果根據美國臨床和實驗室標準協會(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI) M27-A3和ATB Fungus 3建立的折點判讀，將受試菌分為敏感、中介或者耐藥。

1.5質量控制

質控菌株為白色念珠菌 ATCC 64500，由國家衛(wèi)生和計劃生育委員會臨床檢驗中心提供。

2　結果

2.1真菌在臨床科室的分布及構成比

真菌檢出率占前5位的臨床科室分別為重癥監(jiān)護室(intensive care unit， ICU) (107株，26.82%)、感染一科(87株，21.80%)、呼吸科(37株，9.27%)、感染二科(24株，6.02%)和內五科(18株，4.51%)。

2.2真菌菌株的標本來源及構成

標本類型以尿液和痰液為主，共檢出399株真菌，包括酵母樣真菌371株(92.3%)和絲狀真菌28株(7.0%)，其中白色念珠菌檢出最多，共188株，占47.1%。各菌株的標本來源及構成詳見表1。

2.3藥敏試驗結果

對399株真菌中主要的5種真菌進行藥敏分析，結果顯示，白色念珠菌對抗真菌藥物的敏感性大部分在95%以上，光滑念珠菌對唑類藥物敏感性相對較低，尤其對氟康唑，敏感性只有65.1%， 對5-氟胞嘧啶和兩性霉素B敏感性較好，分別為94.1%和98.2%。5-氟胞嘧啶對新型隱球菌和熱帶念珠菌的敏感性均為100%。曲霉菌對兩性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑的敏感性約為90%,詳見表2。

表1　399株真菌感染的標本來源及真菌構成

CSF： cerebrospinal fluid； BALF： bronchoalveolar lavage fluid.

表2　主要真菌對5種抗真菌藥物的敏感率

ND:no definition.

3　討論

真菌廣泛存在于人體皮膚黏膜、呼吸道、腸道等處，屬于條件致病菌，當機體免疫力下降或者抗生素過度使用導致菌群失調時就會致病。研究[4-5]顯示呼吸道真菌感染在各種深部真菌感染中居于首位，并且以酵母樣真菌為主。

本院真菌送檢科室最多的是ICU、感染科和呼吸科，占57%左右。另外，399株真菌中以念珠菌(371株，93.0%)為主，最主要的是白色念珠菌(188株，47.1%)，與國內研究[4-6]基本一致，其次為光滑念珠菌(56株，15.0%)和新型隱球菌(50株，12.5%)，新型隱球菌檢出率高于其他醫(yī)院[5]，這可能與本院艾滋病患者較多有關。從病原菌的來源來看，以尿液最多，共149株，占37.3%，其次為痰液和腦脊液。值得注意的是，除了腦脊液標本中以新型隱球菌為主外，其他所有標本類型中，均以白色念珠菌為主。這可能與該菌對宿主細胞黏附性較強有關，并且白色念珠菌廣泛分布于自然界，通常不致病，但當機體免疫力下降或長期使用廣譜抗菌藥物、激素、免疫抑制劑、化學藥物治療等時，易引起白色念珠菌的繼發(fā)感染。光滑念珠菌為人體的一種腐生菌，可致泌尿生殖道感染，本研究從尿液中分離的也最多[7]。有報道[8]顯示其會引起心臟、肺的深部感染，偶可致敗血癥、骨髓炎，是新生兒的條件致病菌。但近年來光滑念珠菌的耐藥性有遞增的趨勢，Pfaller等[9]曾對念珠菌進行了全球最大規(guī)模的藥敏實驗，結果顯示，光滑念珠菌對不同的抗真菌藥物均存在不同程度的廣泛耐藥情況，對氟康唑耐藥最為嚴重，總體來看，光滑念珠菌對藥物的耐藥性與年齡呈負相關。新型隱球菌通常經呼吸道侵入體內，再經血液傳播至中樞神經系統，也經常侵犯肺、皮膚、骨骼等，機體免疫力低下者，如實體器官移植者、艾滋病患者都存在高風險的隱球菌感染[10-11]，并且有著較高的感染病死率。除了酵母樣真菌外， 筆者還分離出了28株絲狀真菌，包括煙曲霉菌25株(6.3%)， 黃曲霉菌2株(0.51%)和黑曲菌1株(0.25%)。

本研究的藥敏結果顯示，除了光滑念珠菌對唑類藥物敏感性相對較低外，大部分念珠菌對抗真菌藥物敏感性較好，均在90%以上。由于試劑盒中兩性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑對新型隱球菌無判讀標準，因此，筆者也未統計這3種藥物對新型隱球菌的敏感性。筆者采用E-TEST的方法對絲狀真菌(主要是曲霉菌)進行藥敏試驗，結果顯示，曲霉菌對兩性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑的敏感性約為90%。兩性霉素B是治療深部真菌感染的首選藥物, 但因其不良反應大而受到限制[12]。5-氟胞嘧啶和唑類藥物不良反應輕, 對多種深部真菌感染有明顯抑制作用, 但5-氟胞嘧啶很少單獨用藥, 一般與兩性霉素B 聯合應用。對于抗真菌治療藥物的選擇，還應該考慮感染部位，同樣的抗真菌藥物在不同的感染部位可能有效的抗菌濃度也不同，如氟康唑在尿液穿透率大約90%，而在眼組織穿透率只有大約28%～75%[13-14]，因此，應根據患者的生理、病理、免疫等狀態(tài)合理用藥。

總之，真菌感染已成為院內感染的重要因素[15]，雖然藥物敏感現狀仍算良好，但為得到及時有效的治療和避免資源的浪費，仍應重視真菌病原學檢查及藥物敏感性的監(jiān)測，以指導臨床合理使用抗真菌藥物。

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編輯陳瑞芳

Fungal pathogens distribution and drug resistance of 399 stains fungi isolated in a hospital

Xu Xinmin， Li Min， Li Ruihong， Zhang Yan， Lu Yao， Wang Huizhu*

(DepartmentofClinicalLaboratory，BeijingDitanHospital，CapitalMedicalUniversity，Beijing100015，China)

ObjectiveTo understand common fungal species and antifungal drug resistance in our hospital and to provide important evidences for rational use of antifungal agents in clinical practice. MethodsWe performed fungal culture for clinically collected specimens from January 2014 to December 2015, and used CHROMagar Candida chromogenic medium and API 20C AUX yeast identification kit to identify fungal species. ATB Fungus 3 susceptibility kits were used to test drug susceptibility. At last, we counted the composition of fungal species and sensitive rates of 5 kinds of antifungal drugs. ResultsWe obtained a total of 399 strains of fungi. Urine was the main sample of clinical specimen and Candida albicans were the main strain (188 strains, accounting for 47.1%) in Candida. In filamentous fungi, Aspergillus fumigatus were the main strain (25 stains, accounting for 6.3%). The sensitivity of Candida albicans to antifungal drugs was more than 95%, but the sensitivity of Candida glabrata to azole was relatively low and only 65.1% for fluconazole. Aspergillus had a high sensitivity to amphotericin B, itraconazole and voriconazole. ConclusionCandida albicans was the main hospital fungal infection and amphotericin B and 5-flucytosine had high antifungal activity against this fungus. Candida glabrata had a higher resistance to azoles and clinically reasonable use of antifungal drugs according to the results of drug susceptibility is very important.

hospital fungi； drug susceptibility test； pathogens distribution

北京市優(yōu)秀人才培養(yǎng)資助(2014000021469G235)。This study was supported by Beijing Municipal Foundation for the Excellent Talents(2014000021469G235).

10.3969/j.issn.1006-7795.2016.04.017]

R 379

2016-04-30)

*Corresponding author， E-mail：whz660527@sina.com

網絡出版時間：2016-07-2021∶12網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20160714.2112.016.html