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    催產(chǎn)激素對(duì)尼羅羅非魚人工繁殖效果的研究

    2016-09-08 04:52:56魏繼海趙永華岳蒙蒙趙金良
    漁業(yè)研究 2016年1期
    關(guān)鍵詞:尼羅催產(chǎn)卵子

    魏繼海,趙永華,王 燕,岳蒙蒙,趙金良

    (上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 201306)

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    催產(chǎn)激素對(duì)尼羅羅非魚人工繁殖效果的研究

    魏繼海,趙永華,王燕,岳蒙蒙,趙金良*

    (上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 201306)

    根據(jù)催產(chǎn)激素注射后前期血清類固醇激素的水平變化,篩選了尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)最佳催產(chǎn)激素組合。為了進(jìn)一步驗(yàn)證該催產(chǎn)激素組合的生產(chǎn)效果,在尼羅羅非魚繁殖生產(chǎn)期間進(jìn)行人工催產(chǎn)試驗(yàn),觀察催產(chǎn)后144h內(nèi)實(shí)際含卵雌魚比例與催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間,并從卵子形態(tài)變化方面觀察催產(chǎn)效應(yīng)。結(jié)果顯示:水溫21~29℃時(shí),催產(chǎn)試驗(yàn)組平均獲產(chǎn)率為57.5%,對(duì)照組平均獲產(chǎn)率為27.5%,試驗(yàn)組的平均獲產(chǎn)率顯著高于對(duì)照組(P<0.05);試驗(yàn)組含卵時(shí)間集中在72h內(nèi),對(duì)照組含卵時(shí)間比較分散;催產(chǎn)后72h,試驗(yàn)組50%雌魚卵子發(fā)育達(dá)到成熟期,對(duì)照組僅30%。試驗(yàn)結(jié)果為尼羅羅非魚全人工繁殖生產(chǎn)提供了參考依據(jù)。

    尼羅羅非魚;人工催產(chǎn);催產(chǎn)激素;獲產(chǎn)率

    尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)原產(chǎn)于非洲,具有生長(zhǎng)快、養(yǎng)殖周期短、群體繁殖能力高、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn),目前已成為我國重要的淡水養(yǎng)殖魚類之一[1]。尼羅羅非魚是一年多次產(chǎn)卵型魚類,性腺發(fā)育非同步性,自然繁殖容易[2],但人工繁殖比較困難,主要是很難獲得成熟卵,這也影響了羅非魚相關(guān)研究工作的深入開展[3-4]。目前,國內(nèi)外對(duì)羅非魚催產(chǎn)激素種類研究較少[5-7],李建平等[8]對(duì)奧利亞羅非魚(O.aureus)進(jìn)行了人工繁殖試驗(yàn),催產(chǎn)激素為DOM和LRH-A2,雌魚催產(chǎn)劑量為4mg/kgDOM+6ug/kgLRH-A2時(shí),獲產(chǎn)率為62.5%。李瑞偉等[9]對(duì)吉富羅非魚(O.niloticus)進(jìn)行了人工催產(chǎn)試驗(yàn),認(rèn)為3 000IU/kgHCG+15ug/kgLRH-A2+9mg/kgDOM的催產(chǎn)效果最佳,獲產(chǎn)率達(dá)66%左右。Fernandes等[10]比較了幾種單一催產(chǎn)激素(PE、HCG、GnRH)對(duì)尼羅羅非魚卵母細(xì)胞成熟與排卵效果,發(fā)現(xiàn)HCG誘導(dǎo)效果最佳,劑量為1 000~5 000IU/kg時(shí),均能產(chǎn)生有效誘導(dǎo)。在此基礎(chǔ)上,本試驗(yàn)室根據(jù)催產(chǎn)后血清類固醇激素(GnRH、GTH、E2、P)水平變化特征,篩選了尼羅羅非魚的最佳催產(chǎn)激素組合及劑量[11],并在尼羅羅非魚繁殖生產(chǎn)期開展催產(chǎn)激素注射試驗(yàn),評(píng)估混合催產(chǎn)激素對(duì)尼羅羅非魚繁殖產(chǎn)卵的影響,驗(yàn)證其實(shí)際生產(chǎn)效果,以期為尼羅羅非魚人工繁殖技術(shù)與應(yīng)用積累資料。

    1 材料與方法

    1.1試驗(yàn)材料

    尼羅羅非魚親魚取自上海海洋大學(xué)羅非魚種質(zhì)資源試驗(yàn)站,1齡,體重為140~300g。催產(chǎn)時(shí)間為2015年5月30日—7月19日,每隔15天左右進(jìn)行一次催產(chǎn)試驗(yàn),共進(jìn)行4次。催產(chǎn)前,通過擠卵、精子觀察法,挑選性腺發(fā)育較好的雌、雄魚各20尾,按雌雄比1:1分別放養(yǎng)在兩個(gè)2m×2m×1.5m網(wǎng)箱中,每個(gè)網(wǎng)箱10組親魚。試驗(yàn)期間水溫為21~29℃,pH為6.3~7.6,日投餌量為魚體重的5%左右。促黃體素釋放激素A2(LRH-A2)、絨毛膜促性腺激素(HCG)、地歐酮(DOM)均購自于寧波第二激素廠。

    1.2試驗(yàn)方法

    1.2.1獲產(chǎn)率試驗(yàn)

    試驗(yàn)分成試驗(yàn)組和對(duì)照組,采用一次注射法,胸鰭基部注射;試驗(yàn)組注射催產(chǎn)激素劑量為9mg/kgDOM+15ug/kgLRH-A2+3 000IU/kgHCG,每尾雌魚的注射量控制在1mL左右,雄魚不注射;對(duì)照組注射相同劑量的生理鹽水。催產(chǎn)后72h第一次檢測(cè)含卵雌魚個(gè)數(shù),之后每隔24h檢測(cè)1次,144h為最后一次檢測(cè)。

    1.2.2卵子形態(tài)發(fā)育觀察

    7月20日,挑選雌魚10尾進(jìn)行催產(chǎn),另挑選10尾作為對(duì)照組注射相同劑量的生理鹽水,試驗(yàn)組和對(duì)照組均無雄魚。催產(chǎn)前(0h)及催產(chǎn)后72h,每隔24 小時(shí)用人工方法擠出少量卵子保存于0.7%生理鹽水中,用OLYMPUS-SZX7解剖鏡觀察拍照。

    2 結(jié)果與分析

    2.1催產(chǎn)效果

    從5月30日到7月19日進(jìn)行的4個(gè)批次催產(chǎn)結(jié)果見表1。試驗(yàn)組4次催產(chǎn)后的雌魚獲產(chǎn)率分別為60%、60%、60%、50%,對(duì)照組獲產(chǎn)率為30%、20%、30%、30%。試驗(yàn)組平均獲產(chǎn)率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。試驗(yàn)組產(chǎn)卵時(shí)間多在72h內(nèi)完成,對(duì)照組產(chǎn)卵時(shí)間、范圍較分散。

    表1 激素催產(chǎn)后尼羅羅非魚雌魚含卵尾數(shù)

    2.2卵子的質(zhì)量鑒別

    催產(chǎn)前、后通過人工擠卵獲得的卵子形態(tài)見圖1。未成熟卵子表面有少量血絲,卵黃較為明顯、充滿,長(zhǎng)徑為1.7~2.4mm,短徑為0.5~1.8mm;成熟卵子呈鴨梨形、黃褐色,卵黃顆粒大而飽滿,長(zhǎng)徑為1.8~2.7mm,短徑為0.6~1.8mm;過熟卵子呈橢圓形,或不規(guī)則,卵黃顆粒液化,卵徑減小,動(dòng)、植物極兩端變白,表層布滿黑色斑點(diǎn),輕碰卵子即破裂。

    催產(chǎn)后各時(shí)間點(diǎn)成熟雌魚情況見表2。催產(chǎn)后72h時(shí),試驗(yàn)組有4尾雌魚卵子發(fā)育成熟或過熟,對(duì)照組有2尾雌魚成熟或過熟。催產(chǎn)后96h,對(duì)照組有1尾雌魚成熟。催產(chǎn)后120h,試驗(yàn)組有1尾雌魚成熟;144h,試驗(yàn)組、對(duì)照組均無成熟期雌魚。

    注:①未成熟卵,②成熟卵,③過熟卵。

    Notes:①immatureeggs,②matureeggs,③overripeeggs.

    表2 催產(chǎn)后各時(shí)間點(diǎn)尼羅羅非魚成熟發(fā)育

    3 討論

    早期開展的魚類人工繁殖研究試驗(yàn)中,多數(shù)學(xué)者使用單一人工催產(chǎn)激素進(jìn)行人工催產(chǎn)試驗(yàn)研究,如鯉魚垂體[12]、HCG[13]、GnRH以及GnRHa[14]。由于羅非魚性腺發(fā)育的特殊性,對(duì)人工催產(chǎn)激素具有不敏感性,單一催產(chǎn)激素、低劑量均對(duì)羅非魚人工繁殖未能產(chǎn)生明顯效果。本研究利用前期篩選出的催產(chǎn)激素種類及劑量9mg/kgDOM+15ug/kgLRH-A2+3 000IU/kgHCG,在實(shí)際生產(chǎn)中對(duì)尼羅羅非魚進(jìn)行了催產(chǎn)試驗(yàn),試驗(yàn)組平均獲產(chǎn)率達(dá)57.5%,對(duì)照組平均獲產(chǎn)率27.5%;試驗(yàn)組含卵時(shí)間集中在72h內(nèi)完成,對(duì)照組含卵時(shí)間無明顯集中時(shí)間,說明DOM+LRH-A2+HCG激素組合對(duì)尼羅羅非魚產(chǎn)卵產(chǎn)生了較明顯的影響,能有效提高尼羅羅非魚獲產(chǎn)率。尼羅羅非魚屬于一年多次產(chǎn)卵型魚類,性腺發(fā)育不同步,催產(chǎn)效率明顯低于同步產(chǎn)卵型魚類,而且效應(yīng)時(shí)間也大于同步產(chǎn)卵型魚類,如“四大家魚”等獲產(chǎn)率都能達(dá)到90%以上,效應(yīng)時(shí)間一般在10~28h之間。本試驗(yàn)中,催產(chǎn)組的實(shí)際獲產(chǎn)率也低于之前的奧利亞羅非魚、吉富羅非魚催產(chǎn)試驗(yàn)結(jié)果[8-9],奧利亞羅非魚催產(chǎn)親本體重為150~750g,實(shí)際年齡組為1~3齡,吉富羅非魚人工催產(chǎn)試驗(yàn)中水溫條件達(dá)27~30℃,因此,羅非魚人工催產(chǎn)時(shí)間效率還受種間差異、親魚年齡、性腺發(fā)育、試驗(yàn)水溫等因素的共同影響。

    催產(chǎn)前的卵子表面有少量血絲,卵黃幾乎充滿細(xì)胞質(zhì),屬于未成熟期。催產(chǎn)后,卵子呈鴨梨狀,卵黃充滿整個(gè)細(xì)胞質(zhì),卵徑達(dá)到最大,為卵細(xì)胞的成熟期[15]。隨時(shí)間推移,部分卵細(xì)胞動(dòng)、植物極開始變白,卵徑減小,處于過熟期;之后,卵子呈不規(guī)則形狀、白色,卵黃開始液化,表層出現(xiàn)黑色斑點(diǎn)。本試驗(yàn)中,催產(chǎn)后72h,試驗(yàn)組40%的雌魚達(dá)到或超過成熟期,對(duì)照組20%雌魚達(dá)到或超過成熟期;催產(chǎn)后96~120h,試驗(yàn)組、對(duì)照組各有10%雌魚發(fā)育成熟,這與實(shí)際催產(chǎn)試驗(yàn)中雌魚含卵比例與含卵時(shí)間的結(jié)果基本一致,從卵子形態(tài)發(fā)育角度驗(yàn)證了催產(chǎn)試驗(yàn)效果。

    由于尼羅羅非魚個(gè)體性腺發(fā)育不同步性,催產(chǎn)前,應(yīng)對(duì)雌魚進(jìn)行嚴(yán)格挑選,這也是催產(chǎn)試驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。催產(chǎn)過程中,要輕拿輕放,防止親魚受強(qiáng)烈刺激后產(chǎn)生較大應(yīng)激反應(yīng),影響催產(chǎn)效果。

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    Artificial propagation of Oreochromis niloticus by hormone combination injection

    WEI Jihai,ZHAO Yonghua,WANG Yan,YUE Mengmeng,ZHAO Jinliang*

    (LaboratoryofFreshwaterFisheriesGermplasmResources,MinistryofAgriculture,ShanghaiOceanUniversity,Shanghai201306,China)

    InordertoverifythepracticaleffectonartificialpropagationofOreochromis niloticusbyhormonecombinationinjection,thespawningrateandoxytocineffecttimewereinvestigatedwithin144hafterhormonesinjectioninbreedingseason.Meantime,morphologyoftheeggssqueezedfromtheinjectedfemaleswasobserved.Resultsshowed,underwatertemperatureof21~29℃,thespawningratewas57.5%intheexperimentalgroup,andmostlyhappenedwithin72hafterinjection,whilethespawningratewas27.5%inthecontrolwithairregularspawningtime.At72hafterinjectionofhormones,50%femaleintheexperimentalgroupreachedmaturity,incomparisonwith30%incontrolgroup.Theseresultsshowedthathormonescombinationinjectioncouldeffectivelyimprovethespawningrate,whichprovidedsomebaseforartificialpropagationofNiletilapia.

    Oreochromis niloticus;artificialpropagation;oxytocin;spawningrate

    2015-11-25

    國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)資金(CARS-49);水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心(ZF1206).

    魏繼海(1990-),男,碩士研究生,從事水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究.E-mail:962000203@qq.com

    趙金良(1969-),男,教授,從事水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究.E-mail:jlzhao@shou.edu.cn

    S917.4

    A

    1006-5601(2016)01-0036-05

    魏繼海,趙永華,王燕,等.催產(chǎn)激素對(duì)尼羅羅非魚人工繁殖效果的研究[J].漁業(yè)研究,2016,38(1):36-40.

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