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    甘肅紋黨參指紋圖譜研究*

    2016-09-07 11:19:12常紅星
    甘肅科技 2016年11期
    關(guān)鍵詞:黨參甘肅指紋

    常紅星,竇 霞

    (1.甘肅省武威市第二人民醫(yī)院,甘肅 武威 733000;2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,甘肅 蘭州 730000)

    甘肅紋黨參指紋圖譜研究*

    常紅星1,竇霞2

    (1.甘肅省武威市第二人民醫(yī)院,甘肅武威733000;2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,甘肅蘭州730000)

    研究紋黨參的指紋圖譜。應(yīng)用高效液相色譜法。通過指紋圖譜的分析研究,可以作為黨參質(zhì)量控制的方法。

    黨參;紋黨參;指紋圖譜

    黨參為桔??浦参顲odonopsis pilosula(Franch)Nann.f。具有補(bǔ)中益氣,健脾益肺的功能,用于脾肺虛弱,氣短心悸,食少便溏,虛喘咳嗽,內(nèi)熱消渴[1]。黨參的商品有西黨、東黨、潞黨、條黨及白條黨(紋黨)。

    指紋圖譜技術(shù)自20世紀(jì)70年代出現(xiàn)發(fā)展至今,已經(jīng)得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展,目前由最初的研究階段進(jìn)入到實(shí)際應(yīng)用階段。并且,這項(xiàng)技術(shù)從總體上對(duì)中藥的質(zhì)量控制起到了推動(dòng)作用。中藥指紋圖譜由于其能夠從整體上來表征中藥的內(nèi)在特征,目前被國際上公認(rèn)為控制天然藥物質(zhì)量的有效手段之一[2],為真正實(shí)現(xiàn)中藥走向世界提供了極為有利的質(zhì)量保證。

    我們用高效液相色譜法對(duì)甘肅產(chǎn)紋黨參進(jìn)行了指紋圖譜研究該研究結(jié)果對(duì)紋黨參道地性研究也具有重要意義。

    1 儀器與試藥

    1.1實(shí)驗(yàn)儀器

    LC-20AD高效液相色譜儀 (日本島津公司):SPD-M20D二極管陣列檢測(cè)器;BP210S電子分析天平(Sarlorius公司);SK7200H超聲波清洗器(上??茖?dǎo)超聲儀器有限公司);IECMicromax離心機(jī) (美國ThermoElectron公司)。

    1.2實(shí)驗(yàn)材料

    黨參,產(chǎn)于甘肅渭源縣,由蘭州市冠蘭中藥飲片廠提供,經(jīng)楊錫倉主任中藥師鑒定為來源于桔??频狞h參;黨參炔苷對(duì)照品:(批號(hào):110796-200514,購買自中國生物制品藥品檢定所)。乙腈(色譜純),水(超純水),其余試劑均為分析純。

    2 色譜條件及檢測(cè)波長的選擇

    2.1色譜條件

    用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 (色譜柱:Thermo Hypersil Gold-C18:150×4.6mm,5μm);流速為1mL?min-1;以乙腈為流動(dòng)相A,水為流動(dòng)相B,洗脫程序見表1:

    表1 色譜條件

    2.2檢測(cè)波長選擇

    黨參中主要成分黨參炔苷最大吸收波長為268nm。[3]為全面反映樣品中的主要成分,經(jīng)218 nm、230nm、245nm、275nm、300nm五個(gè)波長測(cè)定指紋圖譜的比較分析(如圖1~6所示),由于在268nm波長的指紋圖譜中,較好地體現(xiàn)各主要峰,且各峰分離度好,基線較平穩(wěn),故確定268nm波長下為黨參指紋圖譜的檢測(cè)波長。

    圖1 218nm波長所測(cè)指紋圖譜

    圖2 230nm波長所測(cè)指紋圖譜

    圖3 245nm波長所測(cè)指紋圖譜

    圖4 268nm波長所測(cè)指紋圖譜

    圖5 285nm波長所測(cè)指紋圖譜

    圖6 300nm波長所測(cè)指紋圖譜

    2.3指紋圖譜系統(tǒng)適應(yīng)性及延長時(shí)間檢測(cè),如圖7~10所示。

    圖7 黨參炔苷參照物指紋圖譜

    圖9 空白溶劑指紋圖譜

    圖10 延長時(shí)間120分鐘指紋圖譜

    2.3.1參照物溶液的制備

    取黨參炔苷對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1mL含50μg的對(duì)照品溶液,即得[4]。

    2.3.2供試品溶液的制備

    取紋黨參約0.25g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25mL,超聲30min,過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液,即得。(因含量測(cè)定研究中考察過本品供試品制備方法,故本研究中不再重復(fù)。)

    2.3.3精密度試驗(yàn)

    取紋黨參,按上述供試品溶液的制備方法制備供試品,連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定。結(jié)果表明,各供試品溶液中共有峰的保留時(shí)間及各主要峰 (占總峰面積5%以上)的峰面積基本保持一致(RSD<3%),以第1次進(jìn)樣所得指紋圖譜做為對(duì)照?qǐng)D譜計(jì)算相似度,結(jié)果相似度均不小于0.95,符合指紋圖譜的相關(guān)技術(shù)要求。表明該方法精密度良好。

    2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)考察

    取紋黨參,按正文中供試品溶液制備方法制備供試品溶液,每隔3h測(cè)定一次指紋圖譜,共測(cè)6次,以0h所得指紋圖譜為對(duì)照,計(jì)算相似度,各指紋圖譜相似度結(jié)果均不小于0.99,符合指紋圖譜相關(guān)技術(shù)要求(應(yīng)不小于0.95)。表明供試品溶液15h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)

    取紋黨參,按正文中供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,同法制備供試品溶液6份,依法測(cè)定,計(jì)算相似度,相似度結(jié)果均不小于0.99,符合指紋圖譜的技術(shù)要求(不小于0.95),說明本方法重復(fù)性良好。

    2.3.610批紋黨參的測(cè)定及對(duì)照指紋圖譜的獲得

    取10批紋黨參樣品,按正文中供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液,依法測(cè)定,計(jì)算相似度,用相似度軟件以這10批樣品指紋圖譜為基礎(chǔ)獲得“共有模式”作為黨參對(duì)照指紋圖譜,如圖11~12所。

    圖11 10批紋黨參指紋圖譜共有模式

    圖12 10批紋黨參指紋圖譜共有模式

    根據(jù)10批紋黨參指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜計(jì)算相似度,根據(jù)多批次數(shù)據(jù)積累,確定紋黨參指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜經(jīng)相似度軟件計(jì)算,相似度應(yīng)不低于0.80。

    3 討論

    本試驗(yàn)過程中,為全面反映紋黨參的指紋特征,分別選用不同波長檢測(cè)樣品,經(jīng)過在218nm、230 nm、245nm、275nm、300nm五個(gè)波長所測(cè)定指紋圖譜的比較,發(fā)現(xiàn)218nm及230nm基線較差,300nm波長下峰較少,而且峰面積非常小,245nm及275nm基線較平穩(wěn),峰較多,但是相比較,268nm波長下的峰面積較大,能夠較好地體現(xiàn)樣品各主要峰,且各峰分離度好,基線較平穩(wěn),故最終確定268nm波長為黨參指紋圖譜的檢測(cè)波長。

    通過以上各項(xiàng)試驗(yàn),指紋圖譜的分析,作為紋黨參主要鑒別手段,可以為紋黨參質(zhì)量控制提供依據(jù)[5]。

    [1] 封士蘭,胡芳弟,劉欣,等.HPLC研究甘肅產(chǎn)白條黨參指紋圖譜[J].中成藥,2005(07)745-748.

    [2] 邵建強(qiáng).中藥指紋圖譜的研究進(jìn)展[J].中草藥,2009(06)994-997.

    [3] 竇霞,甘肅黨參超微粉的制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].南京:中醫(yī)藥大學(xué),2014(學(xué)位論文).

    [4] 孫永成,竇霞,尚強(qiáng),等,桂枝茯苓膠囊(精制)多成分指紋圖譜的研究[J].世界科學(xué)技術(shù)(中醫(yī)藥現(xiàn)代化),2010,12 (2):294-297.

    [5] 武果桃,賀東昌,張李俊,劉紅霞,任杰,孟冬霞.中藥黨參的HPLC指紋圖譜研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2009(05)54-56.

    p632+.8

    2014年度甘肅中醫(yī)學(xué)院中青年科研基金(ZQ2014-31)。

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