牛源犬新孢子蟲對(duì)BABL/c孕鼠胎盤激素和細(xì)胞因子調(diào)節(jié)功能的影響

賈立軍，馬　莉，2，張守發(fā)，李男禮，趙　鵬，李積旭

(1.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，延吉 133000；2.遼寧省凌海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，凌海 121200)

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牛源犬新孢子蟲對(duì)BABL/c孕鼠胎盤激素和細(xì)胞因子調(diào)節(jié)功能的影響

賈立軍1，馬莉1，2，張守發(fā)1，李男禮1，趙鵬1，李積旭1

(1.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，延吉 133000；2.遼寧省凌海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，凌海 121200)

旨在探討牛源犬新孢子蟲對(duì)孕鼠胎盤激素和細(xì)胞因子調(diào)節(jié)功能的影響。以牛源犬新孢子蟲BABL/c孕鼠感染模型為研究對(duì)象，同時(shí)設(shè)置正常對(duì)照組孕鼠，在攻蟲第12、14、16、18天分批處死孕鼠，采集孕鼠血清，制備孕鼠胎盤細(xì)胞懸液，采用ELISA方法對(duì)牛源犬新孢子蟲感染孕鼠血清中CRH、CG、PRL及E3等胎盤激素水平，以及孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中IFN-γ、IL-4及TGF-β等細(xì)胞因子水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組孕鼠比較，牛源犬新孢子蟲感染孕鼠模型隨攻蟲時(shí)間的增加，在孕鼠血清中，CRH水平在第12天時(shí)顯著升高(P<0.05)，在第18天時(shí)顯著下降(P<0.01)；CG水平在第12天時(shí)顯著下降(P<0.01)，在第16天時(shí)顯著升高(P<0.05)；PRL水平在第18天時(shí)顯著下降(P<0.05)；E3水平在第12天時(shí)顯著升高(P<0.05)，第16天時(shí)顯著下降(P<0.05)。在孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中，IFN-γ水平在第18天時(shí)顯著升高(P<0.05)；IL-4水平在第12天時(shí)顯著升高(P<0.05)；TGF-β水平在第12天時(shí)顯著升高(P<0.05)。結(jié)果表明牛源犬新孢子蟲感染導(dǎo)致孕鼠胎盤激素和細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)功能失衡，嚴(yán)重影響胎盤血流、胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及胎兒生長(zhǎng)發(fā)育，將導(dǎo)致不良妊娠的發(fā)生。

犬新孢子蟲；BABL/c孕鼠；胎盤；激素；細(xì)胞因子

犬新孢子蟲(Neosporacaninum)是寄生于牛、羊、犬等多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的一種原蟲。犬新孢子蟲主要引起母畜流產(chǎn)、死胎或新生兒運(yùn)動(dòng)障礙和神經(jīng)系統(tǒng)疾病[1-3]。新孢子蟲病可垂直傳播，對(duì)牛的危害極為嚴(yán)重，已成為危害養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展的主要因素之一[4-7]。M.P.Reichel等統(tǒng)計(jì)顯示，全球每年因犬新孢子蟲感染或流產(chǎn)所造成的經(jīng)濟(jì)損失最高達(dá)23.8億美元[8]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)犬新孢子蟲的研究雖然取得了一定進(jìn)展，但犬新孢子蟲引起孕畜流產(chǎn)、死胎的致病作用還不明確，尤其是犬新孢子蟲對(duì)胎盤的損傷作用尚不清楚。胎盤是母體妊娠期的多功能器官，在母體與胎兒之間起著非常重要的作用，承擔(dān)著母胎之間的氣體交換、營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)、新陳代謝及疾病防御等功能[9-10]。胎盤分泌的激素和細(xì)胞因子在妊娠期中的作用極其重要。胎盤分泌多種激素類物質(zhì)，以此維持母體的正常妊娠、胎盤和胎兒生長(zhǎng)發(fā)育及母胎之間物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等[11-13]；胎盤分泌的細(xì)胞因子一方面可以促進(jìn)胎盤生長(zhǎng)，另一方面又可以抑制胎盤生長(zhǎng)[14]。胎盤功能失調(diào)必將影響胎兒的正常發(fā)育和健康生長(zhǎng)。因此，作者以牛源犬新孢子蟲孕鼠感染模型為研究對(duì)象，對(duì)影響胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、胎盤血流及胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的激素和細(xì)胞因子等水平進(jìn)行檢測(cè)，以期為犬新孢子蟲致病作用的研究奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1主要試劑和蟲株

組織DNA提取試劑盒、凝膠回收試劑盒、DNA Marker、ExTaq酶等均購(gòu)自寶生物工程大連有限公司；CRH、CG、PRL、E3等胎盤激素檢測(cè)試劑盒，IFN-γ、IL-4、TGF-β等細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自美國(guó)ADI公司；其他常規(guī)試劑為進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)分析純產(chǎn)品。牛源犬新孢子蟲延邊株由延邊大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離、保存[15]；Vero細(xì)胞由延邊大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、保存。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與處理

BALB/c小鼠購(gòu)自延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，隨機(jī)選取8周齡、雌性、體重20 g左右BALB/c小鼠80只。分為牛源犬新孢子蟲孕鼠感染模型組，同時(shí)設(shè)立正常孕鼠對(duì)照組，每組40只。于攻蟲第12、14、16、18天分批處死孕鼠，每批10只，采集孕鼠血液，分離血清；同時(shí)分離胎鼠胎盤，制備胎盤組織細(xì)胞懸液。

1.3孕鼠血清中胎盤激素水平檢測(cè)

按不同時(shí)間將模型組和對(duì)照組收集的孕鼠血清樣本，分別按照CRH、CG、PRL及E3試劑盒說明進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)檢測(cè)樣品的OD值計(jì)算對(duì)應(yīng)樣品的濃度。

1.4孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中細(xì)胞因子水平檢測(cè)

按不同天數(shù)將模型組和對(duì)照組制備的孕鼠胎盤細(xì)胞懸液，分別按照IFN-γ、IL-4及TGF-β試劑盒說明進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)檢測(cè)樣品的OD值計(jì)算對(duì)應(yīng)樣品的濃度。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

2　結(jié)　果

2.1牛源犬新孢子蟲孕鼠感染模型胎盤中蟲體DNA檢測(cè)

BALB/c小鼠接種牛源犬新孢子蟲速殖子后，孕鼠先后出現(xiàn)被毛逆立、共濟(jì)失調(diào)等臨床癥狀，接種蟲體第12、14、16、18天時(shí)，在胎盤組織中均檢測(cè)到了犬新孢子蟲Nc5基因684bp目的條帶(圖1)，經(jīng)測(cè)序與GenBank中(AF061249)相似性為100%。經(jīng)對(duì)染蟲孕鼠的整體評(píng)估，確定孕鼠感染模型符合試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

M.DL2000 DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1.Nc5基因陽(yáng)性對(duì)照；2.接種蟲體第12天；3.接種蟲體第14天；4.接種蟲體第16天；5.接種蟲體第18天；6.PCR水對(duì)照M.DL2000 DNA molecular weight marker；1.Positive control of Nc5 gene；2.The 12th day after infection；3.The 14th day after infection；4.The 16th day after infection；5.The 18th day after infection；6.Negative control圖1　接種蟲體不同天數(shù)孕鼠胎盤Nc5基因檢測(cè)結(jié)果Fig.1　Nc5 gene was measured in placenta of pregnant mice after indicated days after infection

2.2影響胎盤血流指標(biāo)CRH的檢測(cè)

影響胎盤血流指標(biāo)的CRH檢測(cè)結(jié)果表明，隨孕期或攻蟲時(shí)間的增加，對(duì)照組孕鼠CRH濃度持續(xù)上調(diào)，而模型組孕鼠CRH濃度持續(xù)下調(diào)，二者變化方向相反。模型組與對(duì)照組比較，在第12天時(shí)，孕鼠血清中CRH水平差異顯著(P<0.05)，在第18天時(shí)CRH水平差異極顯著(P<0.01)(表1)。

2.3影響胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)指標(biāo)CG、PRL、E3的檢測(cè)

影響胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)指標(biāo)CG檢測(cè)結(jié)果表明，隨孕期或攻蟲時(shí)間的增加，對(duì)照組孕鼠CG濃度先下調(diào)再上調(diào)，而模型組孕鼠CG濃度持續(xù)上調(diào)。模型組與對(duì)照組比較，在第12天時(shí)孕鼠血清中CG水平差異極顯著(P<0.01)；在第16天時(shí)孕鼠血清中CG水平差異顯著(P<0.05)(表2)。

ng·mL-1

與對(duì)照組相比較，*.表示差異顯著(P<0.05)；**.差異極顯著(P<0.01)。下表同

Compared with control，*.Significant difference(P<0.05)；**.Significant difference(P<0.01).The same as below

ng·mL-1

影響胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)指標(biāo)PRL檢測(cè)結(jié)果表明，隨孕期或攻蟲時(shí)間的增加，對(duì)照組和模型組孕鼠PRL水平均出現(xiàn)先下調(diào)后上調(diào)現(xiàn)象，但模型組PRL整體水平較對(duì)照組低。模型組與對(duì)照組比較，在第18天時(shí)孕鼠血清中PRL水平差異顯著(P<0.05)(表3)。

ng·mL-1

影響胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)指標(biāo)E3檢測(cè)結(jié)果表明，隨孕期或攻蟲時(shí)間的增加，對(duì)照組和模型組孕鼠E3水平均呈現(xiàn)上下波動(dòng)變化，但模型組孕鼠E3水平波動(dòng)變化明顯。模型組與對(duì)照組比較，在第12、16天時(shí)孕鼠血清中E3水平差異顯著(P<0.05)(表4)。

pg·dL-1

2.4孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中IFN-γ濃度變化

通過對(duì)IFN-γ檢測(cè)結(jié)果顯示，隨孕期或攻蟲時(shí)間的增加，對(duì)照組和模型組孕鼠IFN-γ水平均出現(xiàn)先上調(diào)后下調(diào)現(xiàn)象，但模型組孕鼠IFN-γ整體水平高于對(duì)照組。模型組與對(duì)照組比較，在第18天時(shí)孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中IFN-γ水平差異顯著(P<0.05)(表5)。

ng·L-1

2.5孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中IL-4濃度變化

通過對(duì)IL-4檢測(cè)結(jié)果顯示，隨孕期或攻蟲時(shí)間的增加，對(duì)照組孕鼠IL-4水平處于平衡狀態(tài)，而模型組孕鼠IL-4濃度先下調(diào)后上調(diào)，且模型組孕鼠IL-4整體水平高于對(duì)照組。模型組與對(duì)照組比較，在第12天時(shí)孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中IL-4水平差異顯著(P<0.05)(表6)。

pg·mL-1

2.6孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中TGF-β濃度變化

通過對(duì)TGF-β檢測(cè)結(jié)果顯示，隨孕期或攻蟲時(shí)間的增加，對(duì)照組孕鼠TGF-β水平先上調(diào)后下調(diào)，而模型組孕鼠TGF-β水平持續(xù)上調(diào)。模型組與對(duì)照組比較，在第12天時(shí)孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中TGF-β水平差異顯著(P<0.05)(表7)。

pg·mL-1

3　討　論

胎盤是妊娠期一個(gè)暫時(shí)的多功能器官，在妊娠期間胎盤分泌激素的作用極為重要。CRH、CG、PRL、E3等均為胎盤分泌的激素，胎盤激素的合成與釋放，直接影響著母體妊娠、胎兒生長(zhǎng)發(fā)育、母胎之間的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、胎盤細(xì)胞的增殖分化等。促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)是肽類激素，妊娠期間胎盤合成CRH可作用于妊娠期子宮，產(chǎn)生重要的旁分泌和自分泌功能，有利于妊娠期的免疫耐受和保護(hù)胚泡植入。CRH重要的生理功能是擴(kuò)張?zhí)ケP血管，對(duì)保障母體與胎兒之間的血流灌注、胎兒新陳代謝、緩解胎兒缺氧應(yīng)激等方面具有生理性代償?shù)谋Ｗo(hù)作用。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨攻蟲時(shí)間的增加模型組孕鼠CRH濃度持續(xù)下調(diào)，與對(duì)照組變化方向相反，在第18天時(shí)CRH水平與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)?？赡苁怯捎谂Ｔ慈骆咦酉x入侵胎盤細(xì)胞后，隨著蟲體入侵時(shí)間的延長(zhǎng)，造成胎盤細(xì)胞損傷愈加嚴(yán)重，提示胎兒在此階段可能出現(xiàn)缺血缺氧狀態(tài)，期間可能損傷血管細(xì)胞和胎盤細(xì)胞。

絨毛膜促性腺激素(CG)是由胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的糖蛋白類激素，妊娠期間在血漿和尿液中含量較高；CG可調(diào)節(jié)類前列腺素和固醇激素的合成，CG還具有免疫抑制作用；血漿中CG含量變化可預(yù)測(cè)和診斷妊娠高血壓綜合征、流產(chǎn)、胎兒缺氧、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩等多種妊娠不良結(jié)局[16-17]。胎盤催乳素(PRL)是由胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞合成釋放的蛋白激素，PRL可促進(jìn)胎盤細(xì)胞的分化增殖、胎兒的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝和能量代謝等；若胎盤催乳素分泌異常，可導(dǎo)致不良妊娠。妊娠期血清中雌三醇(E3)主要由胎盤合成，妊娠期間，雌三醇在母體血漿中的含量變化能反應(yīng)胎兒與胎盤功能，雌三醇含量減少，可導(dǎo)致胎兒畸形或胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩等癥狀。

CG、PRL、E3均是影響胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)功能的重要激素。本試驗(yàn)中模型組孕鼠隨攻蟲時(shí)間的增加，與對(duì)照組比較，模型組孕鼠CG濃度持續(xù)上調(diào)，在第12天時(shí)CG水平差異極顯著(P<0.01)，在第16天時(shí)CG水平差異顯著(P<0.05)，提示CG濃度的持續(xù)上調(diào)，極可能導(dǎo)致孕鼠發(fā)生流產(chǎn)、死胎、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩現(xiàn)象的發(fā)生。模型組孕鼠PRL水平先下調(diào)后上調(diào)，與對(duì)照組比較，整體水平顯著降低，在第18天時(shí)PRL水平差異顯著(P<0.05)，提示蟲體入侵造成胎盤病理性損傷，導(dǎo)致胎盤功能減退，嚴(yán)重影響胎兒的能量代謝和對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝取，可能導(dǎo)致胎兒在宮內(nèi)出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)不良或發(fā)育遲緩等現(xiàn)象。模型組孕鼠E3水平波動(dòng)變化明顯，與對(duì)照組比較，在第12、16天時(shí)E3水平差異顯著(P<0.05)，提示產(chǎn)前E3含量顯著變化，可導(dǎo)致胎兒畸形或胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩等現(xiàn)象。

細(xì)胞因子與妊娠之間有著密切的關(guān)系，正常妊娠情況下，胎盤分泌IFN-γ、IL-4及TGF-β等多種細(xì)胞因子。A.Rosbottom等研究表明，細(xì)胞因子在犬新孢子蟲感染過程中具有一定作用，可能與胎兒的死亡有關(guān)[11]；I.C.López-Pérez等研究表明，在犬新孢子蟲感染的孕鼠脾中IFN-γ、IL-10的增加和孕鼠胎盤中IL-4的表達(dá)，可能提高犬新孢子蟲經(jīng)胎盤傳播給胎兒的概率[18]；S.Almería等研究證實(shí)，在犬新孢子蟲感染母畜的胎盤組織中，細(xì)胞因子IFN-γ表達(dá)上調(diào)和TGF-β的表達(dá)下調(diào)有利于胎兒存活，表明細(xì)胞因子對(duì)犬新孢子蟲的胎盤傳播具有重要作用[19]。本試驗(yàn)中模型組孕鼠隨攻蟲時(shí)間的增加，在孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中，IFN-γ和IL-4整體水平均顯著高于對(duì)照組，這可能是導(dǎo)致犬新孢子蟲垂直傳播的主要因素；而模型組TGF-β水平持續(xù)上調(diào)，將不利于胎兒存活，可能是導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎的重要因素。

4　結(jié)　論

牛源犬新孢子蟲感染孕鼠后，胎盤激素CRH水平的持續(xù)下調(diào)，將影響母體與胎兒之間的血流灌注，導(dǎo)致胎兒出現(xiàn)缺血缺氧狀態(tài)；胎盤激素CG、PRL及E3調(diào)解功能失衡，是胎盤組織病理?yè)p傷和滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡增加的病理生理基礎(chǔ)，將導(dǎo)致不良妊娠的發(fā)生；細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4及TGF-β水平上調(diào)，將提高蟲體垂直傳播的概率，嚴(yán)重影響胎兒正常生長(zhǎng)發(fā)育。

[1]DUBEY J P，CARPENTER J L，SPEER C A，et al.Newly recognized falal protozoan disease of dogs[J].JAmVetMedAssoc，1988，192(9)：1269-1285.

[2]KLAUCK V，MACHADO G，PAZINATO R，et al.Relation between Neospora caninum and abortion in dairy cows：Risk factors and pathogenesis of disease[J].MicrobPathog，2016，92：46-49.

[3]WILSON D J，ORSEL K，WADDINGTON J，et al.Neospora caninum is the leading cause of bovine fetal loss in British Columbia，Canada[J].VetParasitol，2016，218：46-51.

[4]賈立軍，于龍政，張守發(fā).表達(dá)牛源犬新孢子蟲NcSRS2基因重組腺病毒的構(gòu)建及免疫原性分析[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，43(3)：446-452.

JIA L J，YU L Z，ZHANG S F.Construction of a recombinant adenovirus expressing NcSRS2 protein of bovineNeosporacaninumand immunogenicity analysis of the protein[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica，2012，43(3)：446-452.(in Chinese)

[5]鄒世穎，何倩妮，王小蕾，等.我國(guó)北方六省市牛新孢子蟲病血清學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2012，48(2)：54-55.

ZOU S Y，HE Q N，WANG X L，et al.Serological investigation of Neosporosis in six provinces，northern China[J].ChineseJournalofVeterinaryMedicine，2012，48(2)：54-55.(in Chinese)

[6]李坤，高建峰，韓照清，等.西藏部分地區(qū)黃牛新孢子蟲流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)奶牛，2014(14)：57-58.

LI K，GAO J F，HAN Z Q，et al.Survey on seroprevalence of neospora caninum infection in cattle of Tibet[J].ChinaDairyCattle，2014(14)：57-58.(in Chinese)

[7]HAO P，YANG N，CUI X，et al.First isolation of Neospora caninum from blood of a naturally infected adult dairy cow in Beijing，China[J].JParasitol，2014，100(6)：812-816.

[8]REICHEL M P，ALEJANDRA AYANEGUI-ALCéRRECA M，GONDIM L F，et al.What is the global economic impact of Neospora caninum in cattle-The billion dollar question[J].IntJParasitol，2013，43(2)：133-142.

[9]饒華祥，侯玉英.剛地弓形蟲感染致胎盤損傷作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2008，3(4)：318-320.

RAO H X，HOU Y Y.The research progress on lesion in placenta induced byToxoplasmagondiiinfection[J].JournalofPathogenBiology，2008，3(4)：318-320.(in Chinese)

[10]趙晉英，侯玉英，李艷偉，等.孕中期弓形蟲感染對(duì)孕鼠血清孕酮及雌三醇含量的影響[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2008，3(6)：425-427.

ZHAO J Y，HOU Y Y，LI Y W，et al.The decrease of the progesterone and estriol of pregnant mice infected withToxoplasmagondii[J].JournalofPathogenBiology，2008，3(6)：425-427.(in Chinese)

[11]ROSBOTTOM A，GIBNEY E H，GUY C S，et al.Upregulation of cytokines is detected in the placentas of cattle infected with Neospora caninum and is more marked early in gestation when fetal death is observed[J].InfectImmun，2008，76(6)：2352-2361.

[12]岳慧萍，饒華祥，侯玉英，等.弓形蟲感染對(duì)妊娠中期孕鼠血清中胎盤激素含量的影響[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2009，4(10)：763-766.

YUE H P，RAO H X，HOU Y Y，et al.Effects of serum of placental hormones in BALB/c mice infected withToxoplasmagondiiduring the second trimester[J].JournalofPathogenBiology，2009，4(10)：763-766.(in Chinese)

[13]張慧芳，侯玉英，岳慧萍，等.孕鼠弓形蟲感染對(duì)胎盤激素水平的影響[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2012，7(1)：26-29.

ZHANG H F，HOU Y Y，YUE H P， et al.Effects ofToxoplasmagondiiinfection on placenta hormones in pregnant BALB/c mice[J].JournalofPathogenBiology，2012，7(1)：26-29.(in Chinese)

[14]郭保平，徐明龍，胡進(jìn)，等.DHEA誘導(dǎo)雌性大鼠PCOS模型早期性器官及其相關(guān)激素變化的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，46(8)：1348-1355.

GUO B P，XU M L，HU J，et al.Studies on changes of sexual organs and their related hormones during the early phase in dehydroepiandrosterone-induced female rat polycystic ovarian syndrome model[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica，2015，46(8)：1348-1355.(in Chinese)

[15]JIA L J，ZHANG S F，LIU M M，et al.Isolation，identification，and pathogenicity of neospora caninum China Yanbian strain[J].IranJParasitol，2014，9(3)：394-401.

[16]ESTERMAN A，F(xiàn)INLAY T H，DANCIS J.The effect of hypoxia on term trophoblast：hormone synthesis and release[J].Placenta，1996，17(4)：217-222.

[17]ALSAT E，WYPLOSZ P，MALASSINé A，et al.Hypoxia impairs cell fusion and differentiation process in human cytotrophoblast，invitro[J].JCellPhysiol，1996，168(2)：346-353.

(編輯白永平)

Imbalance of Placental Hormones and Cytokines Regulation in Pregnant BALB/c Mice Infected by BovineNeosporacaninum

JIA Li-jun1，MA Li1，2，ZHANG Shou-fa1，LI Nan-li1，ZHAO Peng1，LI Ji-xu1

(1.DepartmentofVeterinaryMedicine，AgriculturecollegeofYanbianUniversity，Yanji133002，China；2.Animaldiseasepreventionandcontrolcenter，Linghai121200，China)

To invest the affection on regulating function of pregnant BALB/c mice placental hormones and cytokines caused by bovineNeosporacaninum，in present study，we established the pregnant BALB/c mice model infected with bovineNeosporacaninum，and pregnant BALB/c mice non-infected as negative control group.For collecting serum，mice of each group were sacrificed on the 12th，14th，16th，18th day after infection.The placental hormones CRH，CG，PRL and E3 in serum，and cytokines IFN-γ，IL-4 and TGF-β in placental cell suspension from pregnant mice were detected using ELISA method.Compared with control group，the results showed that CRH levels in pregnant BALB/c mice serum was significantly increased (P<0.05) on the 12th day and decreased significantly (P<0.01) on the 18th day after infection；while GC levels was decreased significantly (P<0.01) on the 12th day and increased significantly (P<0.05) on the 16th day；PRL levels was decreased significantly (P<0.05) on the 18th day；E3 levels was significantly increased (P<0.05) on the 12th day and decreased significantly (P<0.05) on the 16th day.At the same time，IFN-γ levels in pregnant BALB/c mice placental cell suspension was increased significantly (P<0.05) on the 18th day；while IL-4 and TGF-β levels were both increased significantly (P<0.05) on the 12th day.These results indicated that infection by bovineNeosporacaninumin pregnant mice would lead to imbalance of placental hormones and cytokines regulative function and seriously affect placental blood flow，placenta mass transport，fetal growth and development.All these will lead to adverse pregnancy outcomes.

bovineNeosporacaninum；pregnant BALB/c mice；placenta；hormone；cytokines

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.08.021

2016-03-25

賈立軍(1978-)，男，吉林鎮(zhèn)賚人，副教授，博士，主要從事分子免疫學(xué)研究，E-mail：ljjia@ybu.edu.cn

S852.723

A

0366-6964(2016)08-1689-07

資金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(31160501；31360605)；吉林省重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(20140204078NY)；吉林省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(吉教科合字[2015]第 1 號(hào))；吉林省自然科學(xué)基金(20160101201JC)