婦癢消洗劑薄層鑒別及咖啡酸的含量測定

付瑋辰 韓德強(qiáng) 杜宏韋 白秀云

（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·哈爾濱 150036）

婦癢消洗劑薄層鑒別及咖啡酸的含量測定

付瑋辰 韓德強(qiáng) 杜宏韋 白秀云*

（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·哈爾濱 150036）

目的：建立婦癢消洗劑中主要藥味的薄層鑒別及含量測定方法，以提高制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC法對婦癢消洗劑中蛇床子、關(guān)黃柏進(jìn)行了定性鑒別研究；采用HPLC法測定制劑中咖啡酸的含量，選用：Kromasil ODS C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液（1%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.9）-甲醇（15∶85）為流動相，流速1.0mL·min-1，檢測波長：323 nm。結(jié)果：TLC法可鑒別出蛇床子、關(guān)黃柏的特征斑點(diǎn)，且專屬性強(qiáng)，分離度好；咖啡酸在0.3464～1.7320μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9996），平均回收率為99.75%，RSD=1.01%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，可用于婦癢消洗劑的質(zhì)量控制。

TLC HPLC 蛇床子 關(guān)黃柏 咖啡酸

婦癢消洗劑是我院長期使用的一種醫(yī)院制劑，是由蛇床子、苦參、關(guān)黃柏、蒲公英等9味中藥組成的純中藥制劑，具有清熱燥濕，殺蟲止癢。主治濕熱下注型陰癢，帶下量多、色黃異味等癥。用于各種原因所致的外陰瘙癢、各種陰道炎、滴蟲性、霉菌性、非特異性陰道炎。經(jīng)過多年的臨床實(shí)踐驗證其療效確切，深受廣大患者的歡迎。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有針對苦參的薄層鑒別，為有效控制該制劑的質(zhì)量，我們對其進(jìn)行進(jìn)一步的質(zhì)量研究，制定了針對蛇床子、關(guān)黃柏的薄層色譜鑒別方法。并采用HPLC法對蒲公英中咖啡酸進(jìn)行了含量測定，結(jié)果表明所建方法重現(xiàn)性好，簡便、可行，可作為付瑋辰醫(yī)藥高級工程師制劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

P680HPLC高效液相色譜（美國戴安公司）、ZF型三用紫外分析儀（上海市安亭電子儀器廠）、BT205S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）

1.2 試藥

咖啡酸對照品（110885-200102）、鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-200911）、關(guān)黃柏對照藥材（批號：120937-200506）。均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純（迪馬公司），其他試劑均為分析純，水為自制超純水；婦癢消洗劑由黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 蛇床子的薄層鑒別 取本品15ml，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，用飽和碳酸鈉溶液洗滌2次，每次5ml，分取乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺蛇床子的陰性對照樣品同法制成陰性對照溶液，取蛇床子素對照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述供試品溶液、陰性對照溶液各10μl、對照品溶液2～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-正已烷（3：3：2）[1]為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對照無相同斑點(diǎn)。

2.1.2 關(guān)黃柏的專屬性鑒別 取本品8ml，蒸干，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至3ml，作為供試品溶液。另取缺關(guān)黃柏的陰性對照樣品同法制成陰性對照溶液，取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。再取關(guān)黃柏對照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取供試品溶液、陰性對照溶液各4～8μl、對照品溶液及對照藥材溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液（6：3：1.5：1.5：0.5）為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對照無相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 Kromasil ODS C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液（1%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.9）-甲醇（15∶85）為流動相，流速1.0mL·min-1，檢測波長：323nm，柱溫：30℃[2]。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取咖啡酸對照品4.33mg，置50mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL中含咖啡酸0.0866mg）。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密量取本品10ml，置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方比例稱取各藥材飲片按其制備工藝制成的缺蒲公英陰性樣品制劑，再按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.2.5 專屬性試驗 取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀中，按上述色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果陰性樣品溶液色譜圖在咖啡酸對照品溶液色譜相應(yīng)的保留時間處未見吸收峰，說明陰性無干擾。

2.2.6 線性關(guān)系考察 將2.2.2項下的對照品溶液配置成濃度分別為17.32、34.64、51.96、69.28、86.60μg·mL-1，各吸取20μL注入液相色譜儀測定，以咖啡酸進(jìn)樣量的自然對數(shù)（X）為橫坐標(biāo)，峰面積的自然對數(shù)（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=1.8457X+3.8359，r=0.9996。結(jié)果表明，咖啡酸進(jìn)樣量在0.3464～1.7320μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度試驗 精密吸取濃度為51.96μg·mL-1咖啡酸對照品溶液20μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積積分值，計算RSD為0.79%（n=6）。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一批樣品，按2.2.3項下的方法配制供試品溶液，并在2.2.1所述的色譜條件下，分別于0、2、4、6、8、24h各吸取20μL注入液相色譜儀，記錄峰面積積分值，計算RSD為0.81%（n=6）。結(jié)果表明供試品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 重復(fù)性試驗 取同一批樣品，分別精密稱取6份，按2.2.3項下的方法配制供試品溶液，并在2.2.1所述的色譜條件下測定含量，結(jié)果均值為0.2103mg·ml-1，RSD為0.57%（n=6）。

2.2.10 加樣回收率試驗 取已知含量的同批樣品6份，每份2ml，置25ml量瓶中，分別精密加入咖啡酸對照品，照2.2.3項下的方法配制供試品溶液，并在2.2.1所述的色譜條件下測定含量，結(jié)果見表1。

表1 婦癢消洗劑中咖啡酸的加樣回收率試驗

2.2.11 樣品測定 照樣品含量測定方法分別測定了3批（130501、130502、130503）婦癢消洗劑的含量，結(jié)果3批樣品含咖啡酸分別為25.23，24.89，25.14mg/瓶，根據(jù)測定結(jié)果，暫定本品每瓶含蒲公英以咖啡酸計，不得低于23mg。

3 討論

咖啡酸的含量測定參考了多個文獻(xiàn)方法[3]、[4]及藥典方法[5]，但與雜質(zhì)峰均未達(dá)到較好分離，結(jié)果均不理想，最終選擇甲醇-磷酸二氫鈉溶液（pH值為3.9）（15∶85），流速：1.0mL/min，分離效果良好，咖啡酸重復(fù)性好，回收率高，可用于婦癢消洗劑的質(zhì)量控制。且陰性無干擾，專屬性較強(qiáng)，方法可行。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部，北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：295-296.

[2] 索銀科，王永平.HPLC測定退熱解毒注射液中綠原酸和咖啡酸含量[J].中成藥，2010，32（4）：695-696

[3] 袁敏，張貞麗.淋必通顆粒提取工藝的實(shí)驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2011,22（9）：2250-2252.

[4] 宋宇紅，王盛.高效液相色譜法測定蒲公英注射液中咖啡酸含量［J］.安徽醫(yī)藥，2012，16(11):1596-1597.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部，北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：331.

（2016-07-26 收稿）

* 通訊作者