EDTA-K2抗凝劑誘發(fā)血小板被吞噬導(dǎo)致計(jì)數(shù)減少的原因探討分析

李少輝，于瑩瑩，張玉春

（漯河醫(yī)專二附院檢驗(yàn)科，河南 漯河462300）

EDTA-K2抗凝劑誘發(fā)血小板被吞噬導(dǎo)致計(jì)數(shù)減少的原因探討分析

李少輝，于瑩瑩，張玉春

（漯河醫(yī)專二附院檢驗(yàn)科，河南 漯河462300）

目的 目的EDTA-K2引起血小板假性減少的原因。方法 利用Sysmex-1800i全自動血細(xì)胞分析儀對使用EDTAK2抗凝劑的血標(biāo)本進(jìn)行分析，血小板減少，立即進(jìn)行推片、瑞氏染色發(fā)現(xiàn)血小板出現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象及被中性粒細(xì)胞吞噬。同時(shí)針對同一病人使用枸櫞酸鈉抗凝管采血，血標(biāo)本進(jìn)行PLT檢測，并進(jìn)行比較。結(jié)果 EDTA-K2抗凝血測得PLT值有5例明顯低于正常范圍，枸櫞酸鈉抗凝血測得PLT值均在正常范圍內(nèi)。結(jié)論 EDTA-K2能促使某些人的PLT產(chǎn)生衛(wèi)星現(xiàn)象及被中性粒細(xì)胞吞噬而導(dǎo)致PLT假性減少。

EDTA-K2；枸櫞酸鈉；血小板假性減少；血小板衛(wèi)星現(xiàn)象及被中性粒細(xì)胞吞噬

乙二胺四乙酸（EDTA）能與血液中Ca2+結(jié)合成螯合物，而使Ca2+失去凝血作用，從而阻止血液凝固。EDTA-K2具有對血液標(biāo)本中的細(xì)胞形態(tài)和計(jì)數(shù)影響非常小等優(yōu)點(diǎn)，國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）1993年建議將EDTA-K2作為血常規(guī)檢驗(yàn)的抗凝劑。隨著全自動血細(xì)胞分析儀的推廣使用，EDTA-K2在臨床已廣泛使用，但有一小部分EDTA-K2抗凝血血小板減少，血涂片可見血小板圍繞中性粒細(xì)胞呈現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象及被中性粒細(xì)胞所吞噬，使血小板計(jì)數(shù)明顯低于實(shí)際數(shù)值，本科于2014 年1月-2015年12月，在血常規(guī)檢測中發(fā)現(xiàn)5例典型病例，現(xiàn)分析如下。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來源住院病人使用EDTA-K2抗凝劑的血標(biāo)本血小板減少，圖形分布異常5例。

1.2儀器與試劑Sysmex-1800i全自動血細(xì)胞分析儀及Sysmex公司配套試劑，湖南安信醫(yī)療高分子材料有限公司生產(chǎn)的真空采血管；上?？迫A公司生產(chǎn)的快速瑞氏染液。

1.3方法

1.3.1儀器法

1.3.2全血模式測定針對5位病人，分別用EDTA-K2抗凝管和枸櫞酸鈉抗凝管對同一病人在同一時(shí)間抽取靜脈血1～2ml并混勻，同時(shí)采病人手指血做血涂片?；靹蜢o置，分別對靜置30min內(nèi)，1h，2h的EDTA-K2抗凝血和枸櫞酸鈉抗凝血進(jìn)行測定，按儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程在Sysmex-1800i全自動血細(xì)胞分析儀全血模式測定，分別記錄PLT值。

1.3.3血涂片取靜置30min內(nèi)，1h，2h的EDTAK2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血制作血涂片，與手指末梢血涂片一起進(jìn)行瑞氏染色，在油鏡下觀察血小板形態(tài)。

2　結(jié)果

見表1、表2。

表1　5位住院病人不同時(shí)間內(nèi)血小板的結(jié)果（×109/L）

3　討論

從表1可以看出5例住院病人使用EDTA-K2抗凝，血小板計(jì)數(shù)偏低，儀器提示血小板異常分布，且隨著時(shí)間的延長，血小板計(jì)數(shù)呈現(xiàn)下降的趨勢。使用枸櫞酸鈉抗凝劑管復(fù)查，血小板計(jì)數(shù)基本都在正常范圍之內(nèi)，（由于枸櫞酸鈉與全血的比例大致在1：9，故血小板計(jì)數(shù)會較真實(shí)值稍偏低）直方圖大致正常，且隨時(shí)間的延長沒有明顯的變化趨勢?？紤]為“EDTA-K2依賴性血小板假性減少癥（EDTA-PTCP）”和“血小板衛(wèi)星現(xiàn)象”［1］血涂片瑞氏染色，如圖1所示，5位患者EDTA-K2抗凝的血涂片可見血小板圍繞中性粒細(xì)胞呈現(xiàn) “衛(wèi)星現(xiàn)象”，淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞胞體周圍未見血小板圍繞，部分血小板聚集，部分血小板散在分布。放置1h、2h 的EDTA-K2抗凝血涂片中，發(fā)現(xiàn)圍繞中性粒細(xì)胞的血小板增多，血小板開始被中性粒細(xì)胞吞噬，隨著時(shí)間的延長，被吞噬血小板的個(gè)數(shù)增加。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道抗凝時(shí)間越長、室內(nèi)溫度越低，血小板聚集呈衛(wèi)星現(xiàn)象越嚴(yán)重，PTCP的發(fā)生越頻繁［2］。5位患者的枸櫞酸鈉抗凝血及手指末梢血的涂片中，血小板散在分布，形態(tài)正常，數(shù)目較多，與血小板計(jì)數(shù)大致相符。EDTA-K2血涂片染色、枸櫞酸鈉血涂片染色與末梢血涂片染色比較見表2。血小板衛(wèi)星現(xiàn)象及被白細(xì)胞吞噬是一種實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，它在實(shí)驗(yàn)條件下才會出現(xiàn)，而不是一種生理或病理現(xiàn)象。EDTA-K2抗凝劑引起血小板衛(wèi)星現(xiàn)象及被白細(xì)胞吞噬，導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)假性降低，這種現(xiàn)象雖然少見，但遇到這種情況如果不予以糾正，及時(shí)和臨床溝通，極易導(dǎo)致誤診。實(shí)驗(yàn)室在這種情況下可以采用枸櫞酸鈉或肝素抗凝管進(jìn)行采血［3］，同時(shí)與臨床醫(yī)生及病人做好溝通，獲得患者配合，結(jié)合外周血涂片進(jìn)行分析，發(fā)放準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果。臨床上為提高PLT的準(zhǔn)確性，對血小板分布異常標(biāo)本應(yīng)使用核酸熒光染色法報(bào)告結(jié)果［4］。國外文獻(xiàn)報(bào)道卡那霉素可以分散粘附在中性粒細(xì)胞的血小板［5］另據(jù)最新研究，阿米卡星可作為處理EDTA依賴的假性血小板減少的一線方法在臨床普及［6，7］。

表2　5位住院病人不同時(shí)間內(nèi)血涂片染色結(jié)果

圖1　血涂片（瑞氏染色，油鏡×1000）

原因分析：⑴EDTA-K2可使血液發(fā)生免疫介導(dǎo)，產(chǎn)生冷抗血小板抗體，這種EDTA依賴的冷抗血小板自身抗體還能直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，同時(shí)這種與血小板結(jié)合后的自身抗Fc端又可于中性粒細(xì)胞膜上Fc受體結(jié)合，出現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象而導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)偏低［1］。⑵通過激活補(bǔ)體系統(tǒng)如C3裂解產(chǎn)物C3b附著血小板表面，與中性粒細(xì)胞C3b受體結(jié)合血小板被吞噬。而導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)偏低［8］。⑶白細(xì)胞與血小板間也可通過黏附蛋白分子相互作用。研究表明，靜止的血小板不能與中性粒細(xì)胞反應(yīng)，但經(jīng)凝血酶活化的血小板則以鈣依賴的方式和中性粒細(xì)胞反應(yīng)。Silverstein等報(bào)道凝血酶敏感蛋白（TSP）可以介導(dǎo)活化血小板與單核細(xì)胞的相互作用，因?yàn)榘准?xì)胞與活化血小板表面均具有TSP的受體，即GPIV（CD36）。最近的研究表明GMP-140也可以介導(dǎo)活化血小板與中性粒細(xì)胞的相互作用，抗CMP-140單抗或GMP-140蛋白顆粒能抑制這種反應(yīng)，GMP-140通過參與活化血小板與白細(xì)胞結(jié)合而導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)偏低［9］。⑷郭珊等認(rèn)為電阻抗法不能完全將血小板與類似大小的物質(zhì)，如紅細(xì)胞或白細(xì)胞碎片等區(qū)分開，致使血小板計(jì)數(shù)誤差大，采用EDTA-K2抗凝時(shí)，如采血后擱置，血小板會形成凝塊，聚集的血小板體積增大，會被當(dāng)做一個(gè)大血小板計(jì)數(shù)或者被誤計(jì)數(shù)為小紅細(xì)胞，使得血小板計(jì)數(shù)明顯減少［10］。由于EDTA-K2可引起血小板發(fā)生衛(wèi)星現(xiàn)象及被吞噬，導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)假性偏低，也可見于正常人，但多數(shù)情況下伴某些疾病，如癌癥、血管炎、自身免疫性疾?。ɡ钳彛?、套細(xì)胞淋巴瘤、肺心病、肝病及一些原因不明的疾病［11］。國外文獻(xiàn)報(bào)道一例泌尿系統(tǒng)感染的女性，發(fā)現(xiàn)血小板衛(wèi)星現(xiàn)象，直到患者治愈三周后血小板衛(wèi)星現(xiàn)象消失［12］。EDTA依賴的假性血小板減少也可以通過孕婦傳播給新生兒，引起新生兒短暫的假性血小板減少［13］。EDTA-PTCP和血小板衛(wèi)星現(xiàn)象雖然發(fā)生率不高，但應(yīng)加以重視，對于血小板減少而無出血癥狀的患者，一定要用不同方法進(jìn)行復(fù)查，以防誤診。

［1］宓慶梅，施巍宇，郝婉瑩，等.EDTA依賴假性血小板1例［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2004，27（8）：719-720.

［2］梁愛芬，何韶堅(jiān)，岑偉明，等.EDTA依賴性假性血小板減少癥2例報(bào)道［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012，30（2）：211-212.

［3］Salma de Carvalho Mourad，Irina Yoko Takihi，and Alex Freire Sandes.Platelet satellitism［J］.Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia［J］.2013，35（4）：293.

［4］劉非，梁綺華，姜志勇，等.血小板分布異常原因分析及對血小板計(jì)數(shù)的影響［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（6）：726-728.

［5］Sakurai S，Tanigawa T，Nakahara K，et al.Effects of kanamycin on platelet satellitism and leukocyte adhesion phenomena［J］.Rinsho Byori，1995，43（2）：142-148.

［6］常菁華，王劍飚.EDTA依賴性假性血小板減少的實(shí)驗(yàn)室解決思路［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，29（7）：733-737.

［7］宋延榮，張萍.阿米卡星在假性血小板減少中的作用分析［J］.實(shí)用醫(yī)技雜志，2015，22（4）：397-398.

［8］仝德勝，楊靜，沈國強(qiáng).抗凝劑EDTA導(dǎo)致血小板假性減少現(xiàn)象的分析［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2015，33（1）：102-103.

［9］毛維玉，霍梅，葉素丹.EDTA依懶的假性血小板減少的實(shí)驗(yàn)分析與對策［J］.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2014，22（5）：1345-1347.

［10］郭珊，古麗努爾.電阻抗法血細(xì)胞分析儀血小板計(jì)數(shù)錯(cuò)誤20例的原因分析［J］.中國社區(qū)醫(yī)師·醫(yī)學(xué)專業(yè)，2012，14（22）：299-300.

［11］Bobba RK，Doll DC.Platelet satellitism as a cause of spurious thrombocytopenia［J］.Blood，2012，119（18）：4100.

［12］Vidranski V，Laskaj R，Sikiric D，et al.Platelet satellitism in infectious disease［J］.Biochem Med（Zagreb），2015，25（2）：285-94.

［13］Ohno N，Kobayashi M，Hayakawa S，et al.Transient pseudothrombocytopenia in a neonate：transmission of a maternal EDTA-dependent anticoagulant［J］.Platelets，2012，23（5）：399-400.

R446.11+1，R558+.2

A

1674-1129（2016）04-0506-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.04.031

（2016-03-31；

2016-06-22）