CS5100全自動(dòng)凝血分析儀性能驗(yàn)證

張敏，呂潔，吳乾波

（1、浙江省立同德醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310012；2、中國(guó)人民解放軍第一一七醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310004；3、浙江省血液中心獻(xiàn)服二科，浙江 杭州310005）

CS5100全自動(dòng)凝血分析儀性能驗(yàn)證

張敏1，呂潔2，吳乾波3

（1、浙江省立同德醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310012；2、中國(guó)人民解放軍第一一七醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310004；3、浙江省血液中心獻(xiàn)服二科，浙江 杭州310005）

目的 驗(yàn)證Sysmex CS5100全自動(dòng)凝血儀的系統(tǒng)性能，確定該檢測(cè)系統(tǒng)是否穩(wěn)定、準(zhǔn)確、可靠。方法 從變異系數(shù)（CV）、準(zhǔn)確度、檢測(cè)限、線性范圍、攜帶污染率、干擾試驗(yàn)等方面對(duì)Sysmex CS5100系統(tǒng)性能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 驗(yàn)證精密度最大CV為8.6%；驗(yàn)證準(zhǔn)確度最大偏倚為7.12%；Fg線性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Fg線性范圍為1.032～5.878，相關(guān)系數(shù)為r為0.9999；攜帶污染率最大值為-2.49%；血紅蛋白小于或等于4.83g/L；甘油三酯小于或等于5.64mmol/L；總膽紅素小于或等于322μmol/L時(shí)，偏離值小于或等于10%，驗(yàn)證全部通過(guò)。結(jié)論 Sysmex CS5100凝血分析儀檢測(cè)精密度好，準(zhǔn)確度高，檢測(cè)范圍寬，攜帶污染率低，抗干擾能力強(qiáng)，能夠較好的滿足實(shí)驗(yàn)室對(duì)于凝血功能檢測(cè)的需求。

性能驗(yàn)證；Sysmex CS5100；檢測(cè)系統(tǒng)

凝血功能測(cè)試通常包括PT、APTT、TT、Fg和D-二聚體等項(xiàng)目，根據(jù)這些檢測(cè)項(xiàng)目，醫(yī)生可以判斷病人凝血、出血狀況，繼而再根據(jù)病人病情進(jìn)展來(lái)決定下一步診治方案，例如對(duì)于創(chuàng)傷性大出血病人進(jìn)行大量輸血時(shí)，醫(yī)生需要及時(shí)監(jiān)測(cè)患者凝血功能，來(lái)科學(xué)配比血漿與濃縮紅細(xì)胞［1］，所以凝血檢查對(duì)于醫(yī)生的診治有著重要指導(dǎo)意義。隨著科技水平的不斷提高，醫(yī)院檢驗(yàn)科越來(lái)越多的檢測(cè)項(xiàng)目都可以通過(guò)自動(dòng)化的設(shè)備來(lái)完成，自動(dòng)化設(shè)備有著檢測(cè)快速、結(jié)果穩(wěn)定、標(biāo)本用量少等許多優(yōu)點(diǎn)，但是，由于檢測(cè)設(shè)備屬于一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)，可能存在著一定的系統(tǒng)誤差，所以ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的認(rèn)可準(zhǔn)則》對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)室儀器性能評(píng)估做出了明確要求：儀器安裝后或每次維修后，必須對(duì)儀器的技術(shù)性能進(jìn)行評(píng)估。Sysmex CS5100凝血分析儀是一部集凝固法、發(fā)色底物法和免疫法于一體，采用透射光加百分比測(cè)定原理的全自動(dòng)凝血儀。為保證檢驗(yàn)質(zhì)量，我們對(duì)該儀器進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)價(jià)，包括變異系數(shù)（CV）、準(zhǔn)確度、線性范圍、攜帶污染率、干擾試驗(yàn)等指標(biāo)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑Sysmex CS5100全自動(dòng)凝血儀。CS5100全自動(dòng)凝血儀使用廠家配套試劑及質(zhì)控品：包括PT試劑（批號(hào)546833），APTT試劑（批號(hào)557161A），TT試劑 （批號(hào)44695），F(xiàn)g試劑 （批號(hào)547225），質(zhì)控品（批號(hào)528155，548248E）；高濃度樣本及低濃度樣本均來(lái)自解放軍第一一七醫(yī)院，按需由健康體檢標(biāo)本與患者標(biāo)本制備而成；干擾物：用血常規(guī)管采集靜脈血3ml，1500r/min離心5min，棄去上層血漿，留下紅細(xì)胞層，加入蒸餾水后充分混勻，待紅細(xì)胞完全破壞后上機(jī)測(cè)血紅蛋白濃度，待用；收集臨床上乳糜血清3ml，上機(jī)測(cè)量甘油三酯，放干凈容器內(nèi)，充分混勻密封后放置于-80℃冰箱保存待用；收集臨床上黃疸血清3ml，上機(jī)測(cè)量總膽紅素，放干凈容器內(nèi)，充分混勻密封后放置于-80℃冰箱保存待用［2］。

1.2方法

1.2.1精密度驗(yàn)證⑴批內(nèi)精密度：根據(jù)CLSI EP15-A文件［3］，取2個(gè)水平的標(biāo)本，同一批次盡可能短時(shí)間內(nèi)連續(xù)重復(fù)測(cè)定20次，記錄每次PT、APTT、TT和Fg測(cè)定結(jié)果，計(jì)算CV和SD（要求CV值低于廠商規(guī)定）。⑵批間精密度：參照CLSI EP5-A文件［4，5］，選取正常（Control-1）、異常（Control-2）質(zhì)控品。每日每批次測(cè)2遍，早晚各1遍，連續(xù)5d，記錄每次PT、APTT、TT和Fg測(cè)定結(jié)果，計(jì)算CV 和SD（要求CV值低于廠商規(guī)定）。

1.2.2準(zhǔn)確度驗(yàn)證取2個(gè)水平質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)定，記錄PT、APTT、TT和Fg結(jié)果，每個(gè)標(biāo)本測(cè)3次，與參考值進(jìn)行比較，計(jì)算偏倚。

1.2.3FIB可報(bào)告范圍驗(yàn)證選取一份Fg濃度接近預(yù)期上限的高濃度血漿（H），用儀器自帶的緩沖液按照如下比例進(jìn)行稀釋：1：0（0倍）、1：1（2倍）、1：3（4倍）、1：7（8倍）、1：15（16倍）、1：31（32倍），每個(gè)濃度測(cè)3次，將均值與理論值進(jìn)行比較得出R，R在0.8到1.2之間的最大稀釋度為Fg可報(bào)告范圍。

1.2.4Fg線性驗(yàn)證選取一份接近預(yù)期上限的高濃度血漿樣本（H），分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例稀釋，每個(gè)濃度測(cè)3次，計(jì)算均值，求得回歸方程Y=aX+b，驗(yàn)證線性范圍。

1.2.5攜帶污染驗(yàn)證使用制備的PT、APTT、TT、Fg高值和低值血漿，按以下方法驗(yàn)證：⑴高值樣本污染：將低值樣本（N）置1和3位置，高值樣本（A）置于2位置，每個(gè)樣本測(cè)3次，記錄結(jié)果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。計(jì)算：k1=［N4-均值（N1，N2，N3）］/均值（N1，N2，N3）；⑵低值樣本污染：將高值樣本（A）置1和3位置，低值樣本（N）置于2位置，每個(gè)樣本測(cè)3次，記錄結(jié)果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。計(jì)算：k2=［A4-均值（A1，A2，A3）］/均值（A1，A2，A3），測(cè)定結(jié)果應(yīng)符合廠家要求（≤10%）［6］。

1.2.6干擾試驗(yàn)驗(yàn)證在正常混合血漿中加入干擾物（血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯），分別測(cè)定PT、APTT、Fg、TT，每個(gè)樣本測(cè)2次計(jì)算均值，以原混合血漿為對(duì)照，并計(jì)算偏離值，得出偏離值控制在10%以內(nèi)的最大干擾物濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Office 2010及SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件。

2　結(jié)果

2.1精密度驗(yàn)證批內(nèi)、批間驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表1，CV值均低于10%，驗(yàn)證通過(guò)。

2.2準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果在質(zhì)控品標(biāo)識(shí)可控范圍內(nèi)，見(jiàn)表2。

表1　精密度驗(yàn)證結(jié)果

表2　準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果

2.3可報(bào)告范圍將標(biāo)本按2、4、6、8、16倍稀釋，每個(gè)濃度測(cè)定3次得均值，再用均值除以理論值得R值，求R在0.8～1.2之間的最大稀釋倍數(shù)，再用最大稀釋倍數(shù)乘以高濃度樣品值得到的最高值即為最大可報(bào)告范圍［7］。

2.4線性驗(yàn)證各濃度的Fg測(cè)定值和標(biāo)準(zhǔn)值之間具有良好的線性關(guān)系，r值為0.9999，＞0.975，a值為0.9989，在所要求的1±0.05范圍內(nèi)，線性范圍1.032～5.878g/L，見(jiàn)圖1。

2.5攜帶污染驗(yàn)證高值樣本對(duì)低值樣本的污染和低值樣本對(duì)高值樣本的污染的攜帶污染率均在±10%范圍內(nèi)，驗(yàn)證通過(guò)，結(jié)果見(jiàn)表4。

圖1　線性驗(yàn)證

2.6干擾試驗(yàn)驗(yàn)證當(dāng)干擾物在以下濃度：血紅蛋白小于或等于4.83g/L；甘油三酯小于或等于5.64 mmol/L；總膽紅素小于或等于322μmol/L時(shí)，偏離值小于或等于10%，驗(yàn)證通過(guò)。

3　討論

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展和對(duì)質(zhì)量要求的提高，人們開(kāi)始認(rèn)識(shí)和關(guān)注檢測(cè)系統(tǒng)的重要性，并且市場(chǎng)上充斥著各種各樣品牌的設(shè)備，使得用戶對(duì)于不同種類設(shè)備性能無(wú)法完全了解，所以，國(guó)內(nèi)出現(xiàn)越來(lái)越多關(guān)于凝血儀性能評(píng)價(jià)的報(bào)道［8-11］。SysmexCS5100全自動(dòng)凝血儀無(wú)疑有著優(yōu)秀的檢測(cè)能力，相比其前幾代產(chǎn)品，其檢測(cè)速度、多項(xiàng)目綜合處理能力不斷提高，可監(jiān)測(cè)樣本溶血、黃疸及乳糜情況，自動(dòng)調(diào)整波長(zhǎng)，具備自動(dòng)再檢、自動(dòng)連鎖篩選及凝血因子抑制物分析等功能。然而，在投入使用前，由于是新使用的檢測(cè)系統(tǒng)，盡管儀器廠商在裝機(jī)時(shí)已經(jīng)提供了儀器性能的初步參數(shù)，但因?yàn)楦鲗?shí)驗(yàn)室之間存在各種差異，在使用前必須對(duì)儀器重新進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。這是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的一個(gè)重要措施，也是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的要求。

表3　不同稀釋度樣品Fg結(jié)果

表4　攜帶污染驗(yàn)證結(jié)果（%）

在我們的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，Sysmex CS5100檢測(cè)系統(tǒng)在檢測(cè)PT、APTT、TT和Fg時(shí)，批內(nèi)不精密度≤5%，批間不精密度≤10%，均小于廠家參數(shù)，可以認(rèn)為該系統(tǒng)具有較好穩(wěn)定性，檢測(cè)重復(fù)性良好；使用兩個(gè)固定值質(zhì)控檢測(cè)準(zhǔn)確度，將3次檢測(cè)求得的平均結(jié)果與靶值相比，F(xiàn)g在兩個(gè)水平質(zhì)控物測(cè)定中，偏倚均在±5%以內(nèi)，PT、APTT、TT偏倚均在± 10%內(nèi)，可以認(rèn)為系統(tǒng)準(zhǔn)確性高；Fg可報(bào)告范圍驗(yàn)證中，將標(biāo)本稀釋16倍時(shí)為Fg檢測(cè)限，我們得出其檢測(cè)限為0.3g/L；Fg濃度在1.032～5.878g/L范圍內(nèi)時(shí)，期望值與測(cè)定值差異極小，線性關(guān)系良好，能夠滿足大部分標(biāo)本的檢測(cè)范圍；另外，干擾實(shí)驗(yàn)反映了該系統(tǒng)對(duì)于血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯的抗干擾能力較強(qiáng)，反映出儀器確實(shí)能夠自動(dòng)監(jiān)測(cè)異常樣本，通過(guò)自動(dòng)調(diào)整波長(zhǎng)的方式降低了樣本要求，這不僅較好的保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，也減少了我們工作人員重新采樣的次數(shù)。

所以，通過(guò)我們的性能驗(yàn)證，可以認(rèn)為Sysmex CS5100全自動(dòng)凝血儀不僅達(dá)到了臨床檢驗(yàn)需求，也符合標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理要求。當(dāng)然，另一方面來(lái)說(shuō)，操作人員的因素對(duì)于儀器運(yùn)行狀態(tài)也有著較大影響，我們?cè)谄綍r(shí)的檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)注意：樣本是否達(dá)到要求，嚴(yán)重溶血、黃疸、脂血對(duì)于結(jié)果會(huì)產(chǎn)生較大影響；采集是否足量，抗凝劑的稀釋作用會(huì)造成PT、APTT結(jié)果異常；必須保證所有標(biāo)本盡快離心、檢測(cè)，使結(jié)果更可信；與臨床醫(yī)生保持溝通，提醒其知曉部分藥物對(duì)結(jié)果造成的干擾；嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作，每日進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，定期參加室間質(zhì)評(píng)，定期進(jìn)行校正、保養(yǎng)及維護(hù)［12］，這樣才可以保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

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R446.11+1

A

1674-1129（2016）04-0482-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.04.022

吳乾波，E-mail：dick2349@sina.com

（2016-02-24；

2016-04-28）