超聲提取法測定大別山區(qū)金櫻子多糖的含量*

周恩紅，李　峰

(皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，安徽　六安　237005)

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超聲提取法測定大別山區(qū)金櫻子多糖的含量*

周恩紅，李峰

(皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，安徽六安237005)

采用超聲波法設(shè)計(jì)其正交試驗(yàn)，以大別山區(qū)金櫻子多糖的含量檢測為指標(biāo),在超聲溫度80 ℃，大別山金櫻子原料液比1:20，超聲功率180 W，超聲時間20 min條件下，測得金櫻子多糖的平均含量為30.56%，與實(shí)驗(yàn)中最佳條件下測定值基本一致。通過探討其回收和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)效果，進(jìn)一步說明此方法準(zhǔn)確度較高、重現(xiàn)性較好。

大別山金櫻子；超聲法；正交試驗(yàn)；多糖測定

大別山地處鄂豫皖三省交界處，是全國藥源寶庫之一，據(jù)《大別山藥物志》等相關(guān)文獻(xiàn)記載，整個大別山地區(qū)分布的藥用物種共有1413種，而金櫻子在大別山區(qū)更是常見。著名的《本草綱目》中有著這樣的記載:金櫻子，性酸，澀，平，無毒；主治脾瀉下痢，止水便利，澀精氣；久服，令人耐寒輕身，補(bǔ)血益精，有奇效[1]?，F(xiàn)代有研究表明,金櫻子中含有豐富的多糖、黃酮等物質(zhì)，通過藥理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)金櫻子中的多糖具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用[2～4],具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值,因此運(yùn)用簡便有效的方法提取金櫻子中多糖具有重要意義。本研究將超聲波運(yùn)用于金櫻子中多糖的提取,通過閱讀相關(guān)文獻(xiàn)找出單個因素對提取效果的影響,再將其進(jìn)行正交試驗(yàn)確定最佳的實(shí)驗(yàn)條件，為大別山區(qū)金櫻子資源開發(fā)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　實(shí)　驗(yàn)

1.1材料、試劑

金櫻子，購于大別山區(qū)藥材市場，經(jīng)藥學(xué)系中藥專業(yè)教師鑒定為金櫻子果實(shí)。

實(shí)驗(yàn)中所用的苯酚、濃硫酸、葡萄糖、乙醚、乙醇等試劑均為分析純。

1.2主要儀器

755B紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限公司；KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司。

1.3原料處理及檢測方法

1.3.1原料處理

將金櫻子干燥后粉碎過40目篩，制成干粉放入棕色試劑瓶中備用。

1.3.2檢測方法

1.3.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配置濃度為0.01 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：采用文獻(xiàn)[5]中苯酚-濃硫酸法，準(zhǔn)確移取葡糖糖標(biāo)液0.5，1.5，3，4.5，6，7.5 mL分別置于25 mL帶塞子試管中標(biāo)上1、2、3、4、5、6號, 然后在各編號試管中,加入2.5 mL5%苯酚溶液,充分震蕩,然后再加入10 mL的濃硫酸,搖勻蓋上塞子,放置30 min后備用。選用3號標(biāo)準(zhǔn)溶液在400～600 nm波長處測定其吸收率, 通過光譜曲線確定在490 nm條件下測定1、2、3、4、5、6號標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度。

1.3.2.2超聲波法的正交試驗(yàn)

表1　超聲波法的正交試驗(yàn)

1.3.2.3回收實(shí)驗(yàn)

為了判斷分析過程是否存在系統(tǒng)誤差，本實(shí)驗(yàn)選擇同樣3組金櫻子樣品，分別向樣品加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)。

1.3.2.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

為了說明我們選擇的方法簡單、易操作、穩(wěn)定好，本實(shí)驗(yàn)選擇同樣的金櫻子樣品，分別在讓6組12名2014級藥學(xué)系藥物分析專業(yè)學(xué)生按照最佳條件進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。

2　結(jié)果與討論

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

以配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度c(mg/mL)為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，從圖1中可以看出在490 nm處，運(yùn)用苯酚-濃硫酸法測定的葡萄糖含量線性范圍較寬，方法準(zhǔn)確可行，其回歸方程為A=10.6c-13.4。

圖1　葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2超聲法正交試驗(yàn)的結(jié)果

采用超聲提取法進(jìn)行正交試驗(yàn)，從表2中的數(shù)據(jù)可以直觀的看出，本研究所選擇的4個影響因素對金櫻子多糖含量的測定效果為B>A>C>D。其中料液比(B)和反應(yīng)溫度(A)影響最為明顯，金櫻子多糖提取率都在20 mg/mL以上，超聲功率(C)和超聲時間(D)對樣品中多糖的提取影響稍小，一般在20 mg/mL以下。綜合這4種因素的影響，本實(shí)驗(yàn)選擇最佳組合為：A3B1C3D2。故本實(shí)驗(yàn)測定大別山金櫻子多糖含量選取在超聲溫度80 ℃，料液比1:20，超聲功率180 W，超聲時間20 min下進(jìn)行，提取率最高。

表2　超聲提取法正交試驗(yàn)及金櫻子多糖含量

2.3超聲法回收實(shí)驗(yàn)的結(jié)果

將3組相同的樣品編上編號1、2、3分別在超聲溫度80 ℃，料液比1:20，超聲功率180 W，超聲時間20 min下依照本實(shí)驗(yàn)中多糖含量測定方法進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)。從表3可以看出，樣品中大別山金櫻子多糖的初始含量分別為30.57%、30.55%、30.58%，與上面正交試驗(yàn)序號7基本一致，然后向樣品中分別加入初始量的0.5、1.0、1.5倍后再測定其樣品中回收的總糖量分別達(dá)到47.50%、64.29%、74.74%，計(jì)算出回收率103.6%、105.2%、97.8%，從1、2、3號樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值2.5%、2.7%、2.6%可以看出非常接近，因此，我們有理由認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)無明顯系統(tǒng)誤差，方法可行，結(jié)果可靠。

表3　超聲法回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4超聲法穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果

在2014級藥物分析專業(yè)學(xué)生中抽取12名學(xué)生，將其分均為6組，再將金櫻子樣品分配給各小組，然后依照本實(shí)驗(yàn)中最佳的條件進(jìn)行多糖含量的測定，結(jié)果見表4。從表4的數(shù)據(jù)中明顯反應(yīng)出，6組學(xué)生進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分別測定的金櫻子多糖含量為30.53%、30.61%、30.55%、30.57%、30.54%、30.56%，6組值之間相差甚小且都與正交試驗(yàn)第7組接近，再計(jì)算此方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.32%，因此，進(jìn)一步說明本實(shí)驗(yàn)得出在超聲溫度80 ℃，料液比1:20，超聲功率180 W，超聲時間20 min下進(jìn)行金櫻子多糖含量測定，方法穩(wěn)定，結(jié)果可信。

表4　超聲法穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3　結(jié)　論

本實(shí)驗(yàn)旨在發(fā)展經(jīng)濟(jì)普適的金櫻子多糖提取工藝，在查閱相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，以大別山區(qū)常見的藥材金櫻子為樣本，通過選用超聲波法設(shè)計(jì)其正交試驗(yàn)，以最終樣品中多糖的含量為檢測指標(biāo),篩選出最佳的工藝條件：超聲溫度80℃，大別山金櫻子原料液比1:20，超聲功率180 W，超聲時間20 min。在此提取條件下,測得大別山區(qū)金櫻子多糖的平均含量為30.56%。通過其回收和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證了采用超聲波法，在最佳的提取條件下，測定大別山金櫻子多糖的含量，具有簡便、易操作、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度較高的特點(diǎn)，為大別山區(qū)藥材的開發(fā)利用提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

[1]李時珍.本草綱目(下冊)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1978:2096-2097.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[3]趙云濤,國興明,李付振.金櫻子多糖的抗氧化作用[J].生物學(xué)雜志，2003，20(2):23-24.

[4]劉曉紅,肖凱軍.金櫻子粗多糖的脫蛋白研究[J].食品科技,2007(1):102-104.

[5]文全泰，潘廷啟，顏?zhàn)娴?等.正交設(shè)計(jì)優(yōu)化金櫻子多糖的酶提取工藝研究[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012(4):465-467.

[6]王建安,苑光輝，李艷芝,等.超聲法提取金葉女貞果實(shí)中多糖工藝的研究[J].南京師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2012,35(4):73-76．

Content of Polysaccharides from Rosa laevigata Michx by Ultrasonic Extraction Method*

ZHOUEn-hong,LIFeng

(West Anhui Health Vocational College, Anhui Lu’an 237005，China)

In order to detection the content of polysaccharide form the fructus of Rosa laevigata Michx in the dabie mountain area, the orthogonal experiment should be designed by ultrasound method. The average content was 30.56% of the polysaccharide from Rosa laevigata Michx, under the determination conditions of 80 ℃, the ratio of liquid raw material about 1:20, with ultrasonic power of 180 W, ultrasonic time of 20 min. The result was closed with the best possible experimental conditions. Therefore, by discussing the recovery and stability of the experiment effect, the result showed that this method was high accuracy and good reproducibility.

fructus rosae laevigatae of dabie mountains; ultrasonic method; orthogonal experiment; determination of polysaccharide

安徽省教育廳自然科學(xué)研究一般項(xiàng)目(KJ2011B203)；安徽省2015年度高校自然科學(xué)研究基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No:KJ2015A427)；2016年度安徽省自然科學(xué)研究一般項(xiàng)目(KJ2016B02)。

周恩紅(1983-)，女，講師，主要從事環(huán)境分析及藥物分析。

O656.3

A

1001-9677(2016)07-0067-03